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国际分析化学杂志》上
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国际分析化学杂志》上/2017年/文章

研究文章|开放获取

体积 2017年 |文章的ID 5178729 | https://doi.org/10.1155/2017/5178729

Maria del Mar孔特雷拉斯误Bribi, Ana Maria Gomez-Caravaca胡里奥Galvez,安东尼奥Segura-Carretero, ”生物碱的分析Fumaria capreolata通过分析平台基于气相色谱和液相色谱的断字Quadrupole-Time-of-Flight质谱分析”,国际分析化学杂志》上, 卷。2017年, 文章的ID5178729, 16 页面, 2017年。 https://doi.org/10.1155/2017/5178729

生物碱的分析Fumaria capreolata通过分析平台基于气相色谱和液相色谱的断字Quadrupole-Time-of-Flight质谱分析

Maria del Mar孔特雷拉斯,1,2 误Bribi,3,4 安娜玛利亚Gomez-Caravaca,2 胡里奥Galvez,3 和 安东尼奥Segura-Carretero1,2

1研究和开发功能性食品中心(CIDAF),生物区建筑、健康科学技术公园,加拉卡斯del Conocimiento s / n, 18016年格拉纳达,西班牙

2分析化学、科学教师,格拉纳达大学Avda。Fuentenueva s / n, 18071年格拉纳达,西班牙

3CIBER-EHD、药理学、肠易激综合症。格拉纳达,生物医学研究中心(CIBM),格拉纳达大学加拉卡斯del Conocimiento s / n,于是就知会18016格拉纳达,西班牙

4Laboratoire德生物技术植物Ethnobotanique,将des自然科学de la et de la Vie,大学德贝贾亚06000贝贾亚,阿尔及利亚

学术编辑器:穆罕默德Abdel-Rehim
收到了 2017年4月29日(
接受 2017年7月02
发表 2017年11月28日

文摘

两个分析平台,气相色谱法(GC)耦合quadrupole-time-of-flight (QTOF)质谱(MS)和反相超高液相色谱(UHPLC)耦合到二极管阵列(爸爸)和QTOF检测,是为了研究生物碱的应用Fumaria capreolata。这些质量分析仪的使用使初步识别生物碱通过匹配精确的分子质量信号和建议公式与之前报道在图书馆和数据库。此外,证实了所提出的结构通过研究他们的分裂模式通过两个平台。这样,8和异喹啉生物碱,并使用GC-QTOF-MS RP-UHPLC-DAD-QTOF-MS 26日分别和他们属于以下子类:protoberberine, protopine, aporphine, benzophenanthridine, spirobenzylisoquinoline,对该类。丰富morphinandienone,此外,后者选择分析方法来确定在280 nm protopine的浓度(9.6±0.7毫克/克),一个潜在的活性化合物的提取。总之,尽管气相分析的常用这种类型的植物化学物质,RP-UHPLC-DAD-QTOF-MS提供必要的补充信息。这种分析方法可以申请phytopharmaceuticals包含的质量控制Fumaria提取目前在市场上找到。

1。介绍

在议会的“阴谋”,西班牙小说家马蒂尔德Asensi提到的使用Fumaria自然治疗黑死病(1]。这一事实自属不是远离小说Fumaria(罂粟科Fumarioideae)一直被用于传统医学(2]。上面这个属由46个世界上物种广泛,生长在麦田,平原,和低山在欧洲,中东,南亚,等等3]。的生物活性Fumaria种虫害与关键化合物如异喹啉生物碱的存在(4]。事实上,生物碱,其中包括上述类型,最近复习是有效治疗肠道炎症损伤的动物模型(5]。有趣的是,最近的研究表明低毒性Fumaria capreolata生物碱提取(白色ramping-fumatory)在体外和在活的有机体内(2),以及他们在小鼠结肠炎肠抗炎作用[6)和antinociceptive活动(7]。

异喹啉生物碱来自氨基酸酪氨酸,转换后,4-dihydroxyphenylethylamine(多巴胺)和4-hydroxyphenylacetaldehyde充当中介分子(8]。这种类型的生物碱被薄层色谱特征(9),气相色谱法(GC)耦合到火焰离子化检测器(FID) [10)和质谱(MS) (11- - - - - -14),以及液相色谱(LC)耦合的UV / Vis、二极管阵列检测(爸爸)15)和质谱(MS) (16]。在气相的情况下,可用标准质谱数据图书馆的描述几个植物化学的类,但它不是完整的生物碱的比较与其他植物化学物质和解释他们的相对贫穷的挥发17]。质,有努力产生光谱库使用不同的分析仪女士和碰撞能量由于缺乏一致性,标准化、再现性与gc - MS或核磁共振光谱(18]。MassBank (http://www.massbank.jp/)和Metlin (https://metlin.scripps.edu/)公共存储库串联质谱数据的例子。

最近的研究证明了混合质量分析器的潜力quadrupole-time-of-flight (QTOF)数以百计的天然植物代谢物的分析。这种类型的质量分析器提供了出色的选择性和质量精度在宽动态范围和阐发未知化合物的分子式。它还执行串联女士,这是有用的初步结构说明(19- - - - - -21当信息在数据库中是有限的。因此,本研究的目的是探索潜在的GC和LC耦合QTOF质量分析器的分析异喹啉生物碱f . capreolata。这种植物被选中由于上述生物属性。此外,我们所知,没有任何文献报道完成的比较这两个分析平台的定性描述这种类型的植物化学物质。

2。实验

2.1。生物碱的提取做准备

天线的部分f . capreolata收集从贝贾亚区(阿尔及利亚)2012年5月,当他们在开花和果实设定阶段。植物被f . Maiza-Benabdesselam博士身份验证(实验室的植物生物技术和人类植物学,贝贾亚大学阿尔及利亚)和凭证标本存放(参考FC015数量)。天线部分的植物在烤箱干40°C隔夜和地面。总之,之前描述的粉末样本提取(2,7)与甲醇和二氯甲烷承担原油中提取的生物碱。分析,生物碱的提取(10毫克)溶解在甲醇(1毫升)(美国ThermoFisher沃尔瑟姆,MA) 0.20和过滤μm注射器过滤器的聚四氟乙烯(13毫米)(ThermoFisher)。

2.2。分析GC-QTOF-MS

分析进行了使用安捷伦科技(美国帕洛阿尔托,CA)气相色谱(GC)系统7890 b (G3440B)耦合到一个7200准确质量quadrupole-time-of-flight Q-TOF质谱仪。建立了毛细管柱:HP-5MS(5%苯95%二甲聚硅氧烷,30米×0.250毫米证件;0.25μ米膜厚度)。列温度最初在200°C 1分钟,25°C /分钟增加到250°C,然后举行250°C 31分钟。最后,斜坡10°C /分钟被应用到310°C和维持5分钟。总运行45分钟。氦流量为1.2毫升/分钟。注射程序包括注射器的顺序清洗步骤和样本抽取步骤移除小气泡。注射是1μL使用一个可编程的朋友GC取样器120和分流比为10:1。入口和传输线温度为250°C和300°C,分别。离子源是电子轰击(EI)进行70 eV和温度为250°C。的质量范围m / z125年到700年是扫描的速度3扫描/ s。TOF分析仪的校准之前是每个分析使用一个安捷伦校准优化组合。

2.3。分析反相超高液相色谱法耦合(爸爸)和QTOF-MS二极管阵列检测

分析了安捷伦1200系列快速解决(美国帕洛阿尔托,CA)配备一个二进制泵、autosampler和爸爸。移动阶段由水0.2%甲酸(流动相)和乙腈(流动相B),和一个多步线性渐变应用:0 - 5.5分钟,1 - 7% B;5.5 -11分钟,7 - 14% B;11 - 17.5分钟,14 - 24% B;17.5 - -22.5分钟,24 - 40% B;22.5 - -27.5分钟,40 - 100% B;27.5 - -28.5分钟,B 100 - 100%;28.5 - -29.5分,100 - 1% B .后者值B(99%和1%)举行5.5分钟平衡列与初始条件下注射前。总运行35分钟。流量被设定为0.5毫升/分钟整个梯度。 Separation was carried out with a Zorbax Eclipse XDB-C18 column (4.6 × 50 mm, 1.8 μ米粒子大小)(安捷伦)25°C。紫外可见光谱被记录了从190年到600海里,和一个波长通道的 纳米应用定量的目的。注射量是1μl

光谱是在正面和负面的离子模式获得一个质荷(m / z)从70年到1500年不等。操作条件中设置适当的极性如下:气体温度:325°C;干燥气体:氮10 L / min;喷雾器压力:20 psig;鞘燃气温度:400°C;鞘气流:氮12 L / min;毛细管电压:4000 V;除油船:45 V;octapole射频电压:750 V;聚焦电压:500 V,相应的极性自动设置。AutoMS2收购模式。

每个样本的内部质量校正进行了连续灌注的安捷伦TOF混合物包含两个质量参考电离模式。在积极的电离模式下,两个参考质量离子m / z121.0509(嘌呤)和922.0098 (hexakis (1 h, h, 3 h-tetrafluoropropoxy) phosphazine)。另外,在消极的电离模式三氟乙酸铵盐(m / z112.9856三氟乙酸)和hexakis (1 h, h, 3 h-tetrafluoropropoxy) phosphazine (m / z1033.9881对应三氟乙酸铵盐加合物)。检测窗口设置为100 ppm。数据采集(2.5赫兹)是治理概要文件模式通过安捷伦MassHunter工作站B.05.01。

数据分析是进行大量猎人B.06.00定性分析,评论过。同位素模型选择的是“普通有机分子”峰间距的宽容m / z0.0025和7 ppm。

分析GC-QTOF-MS和RP-HPLC-DAD-QTOF-MS都是一式三份完成。

2.4。数据处理

数据分析进行MassHunter定性分析B.06.00(安捷伦科技)。化合物的特征是由一代的候选人公式5 ppm的质量精度限制分析RP-UHPLC-DAD-QTOF-MS GC-QTOF-MS和10 ppm,也考虑到女士的分数应该接近100。后者贡献质量的准确性,相关参数是同位素丰度,同位素间距公式生成的分子。使用GC-QTOF-MS,生物碱的特点是直接比较他们的分裂模式与NIST的数据库(NIST11.L)和NIST化学WebBook(女士http://webbook.nist.gov/chemistry/)如果可能,以及文学对罂粟科。对于RP-UHPLC-DAD-QTOF-MS和- MS / MS, MassBank和Metlin咨询。此外,化学结构信息也从SciFinder学者检索(https://scifinder.cas.org),Reaxys (http://www.reaxys.com),背包核心系统(http://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/top.html)。

2.5。质量控制Protopine

盐酸Protopine股票的解决方案是方便用甲醇稀释准备校准点(8 - 260 nmol /毫升)。外部标准方法和校准曲线的线性回归估计使用曲线下的面积protopine浓度。重复性是由三个连续注射化验methanolic解的三个层次(盘中重复性)和三次五次在两个不同的日子(interday重复性)22]。检测极限(LOD)和量化(定量限)估计protopine集中给一个信号等于空白信号+ 3和10个空白的标准偏差,分别为(23]。

3所示。结果与讨论

3.1。生物碱的分析通过GC-TOF-MS

简单,没有针对性的生物碱的提取分析通过GC-TOF-MS战略是由分子的生成公式的检测离子色谱概要(图1(一)),研究分裂模式尽可能使用NIST女士库或基于文献[11,12,14,24]。提供的结果GC-TOF-MS分析仪在表1女士,这显示了实验数据,保留时间(RT)和主要EI所产生的碎片f . capreolata生物碱。表S1(在网上补充材料https://doi.org/10.1155/2017/5178729)另外提供了文学的发生f . capreolata在气相,分散模式,信息在数据库中找到。使用这种方法,共有八个异喹啉生物碱的特点,筛选了按照以下顺序:stylopine, protopine, cheilanthifoline, isoboldine, coreximine, dihydrosanguinarine fumariline, parfumine。这些生物碱的代表protoberberine protopine, benzophenanthridine aporphine, spirobenzylisoquinoline类型。这些结果同意先前的研究在这种植物使用GC耦合四极质谱分析器(11,12和其他的研究9,25),另外我们也发现coreximine。此外,与之前的研究结果相一致13,14,17,24)我们的研究结果表明,固定相5%苯95%二甲基聚硅氧烷也是一个适当的替代100%二甲基聚硅氧烷组成的无极的静止阶段,也是常用的分离异喹啉生物碱(11,12]。
峰
N°
(分钟)		 提出了
生物碱		 前体
m / z(M+)		 分子
公式		 女士
分数		 质量
错误(ppm)		 EI-MSm / z
(相对强度,%)		 生物碱
类型
1 17.5 Stylopine 323.1139 C19H17没有4 94年 3.96 323.1139 (44),322.1071 (52),148.0523 (100),91.0541 (26) Protoberberine
2 18.7 Protopine 353.1247 C20.H19没有5 94年 3.53 163.0396 (19),149.0564 (11),148.0518 (100),91.0539 (14) Protopine
3 20.4 Cheilanthifoline 325.1296 C19H19没有4 91年 3.86 325.1289 (40),324.1215 (46),149.0581 (26),148.0518 (100) Protoberberine
4 21.2 Isoboldine 327.1438 C19H21没有4 80年 8.09 327.1438 (54),326.1375 (100),284.1048 (32),253.0833 (27) Aporphine
5 23.8 Coreximine 327.1428 C19H21没有4 69年 3.57 327.1436 (57),326.1376 (63),178.0841 (100),176.069 (45) Protoberberine
6 24.7 Dihydrosanguinarine 333.0971 C20.H15没有4 83年 7.01 334.1014 (18),333.0971 (88),332.0899 (100),105.0669 (15) Benzophenanthridine
7 25.2 Fumariline 351.1089 C20.H17没有5 96年 3.5 336.0862 (28),323.1104 (25),322.1061 (100),264.1006 (29) Spirobenzylisoquinoline
8 29.8 Parfumine 353.1246 C20.H19没有5 89年 4.4 353.1246 (17),338.1006 (29),325.1252 (26),324.1215 (100),322.086 (31),308.126 (31) Spirobenzylisoquinoline
RT:保留时间和EI-MS:电子impact-mass谱分析。
表1
生物碱的特点在f . capreolataGC-QTOF-MS。
(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
(c)”name=
(c)
(d)”name=
(d)
图1
GC-QTOF-MS获得的总离子色谱图(a)、(b)基地色谱峰正电离模式,(c)色谱图在280 nm, (d) 450海里的生物碱提取RP-UHPLC-DAD-QTOF-MS获得的。化合物根据表编号2:(1)pallidine;(2)isoboldine导数;(3)N, N-dimethylcoclaurine (4) fumaritine;(5)coclaurine;(6)N-methylcoclaurine;(7)magnoflorine;(8)reticuline;(9)parfumine;(10)parfumidine;(11)isoboldine;(12)coreximine;(13)methylcoreximine 1;(14)methylcoreximine 2;(15)cheilanthifoline; (16) dehydrocheilanthifoline; (17) demethyleneberberine/jatrorubine; (18) cryptopine; (19) protopine; (20) fumariline; (21) stylopine; (22) coptisine; (23) corysamine; (24) impatien C; (25) dihydrosanguinarine; (26) 8-oxocoptisine. 1′–6′ unknown compounds.
峰
N°
(分钟)		 提出了
生物碱		 分子
公式		 m / z
([M + H]+/ M+)		 错误
(ppm)		 分数 UV马克斯。
(nm)		 主要碎片
女士/小姐		 生物碱类
1 11.59 Pallidine C19H21没有4 328.1544 −0.6 98.9 282年 297.1051,265.0834,251.0635,243.0954,237.0846,211.0704,192.0962 Morphinandienone
2 11.77 的导数isoboldine
(demethyl)		 C18H19没有4 314.1381 3.79 91.27 268年,306年 283.0920,268.0680,251.0664,233.0555,223.0716,205.0617 Aporphine
3 12.14 N, N-Dimethylcoclaurine 314.1763 −3.87 95.1 260年,358年 299.1133,298.1061,269.1159,237.0903,209.0957,175.0762,121.0610,107.0497 Benzylisoquinoline
4 12.33 Fumaritine C20.H21没有5 356.1481 0.6 94.4 283年 338.1313,277.0788,249.0847,137.0541 Spirobenzylisoquinoline
5 13.32 Coclaurine C17H19没有3 286.1427 2。0 88.0 286年 269.1131,237.0864,209.0921,175.0723,145.0631,143.0457,107.0460 Benzylisoquinoline
6 13.44 N-Methylcoclaurine C18H21没有3 300.1585 3.0 96.0 282年 269.1105,237.0846,209.0902,177.0489,175.0692,145.0232,107.0445 Benzylisoquinoline
7 14.12 Magnoflorine 342.1701 −0.4 99.5 268年,305年 297.1081,282.0853,265.0828,237.0915,191.0832 Aporphine
8 14.80 Reticuline C19H23没有4 330.1696 1。6 96.6 281年 192.0990,175.0719,143.0460,137.0564 Benzylisoquinoline
9 15.05 Parfumine C20.H19没有5 354.1341 −1.4 97.2 271年,372年 336.1191,323.0927,305.0774,295.0930,279.0611,179.0912,137.0567 Spirobenzylisoquinoline
10 15.29 Parfumidine C21H21没有5 368.1478 3.7 93.5 290年 323.0859,305.0756,293.0754,261.0502,193.1053,137.0556 Spirobenzylisoquinoline
11 15.42 Isoboldine C19H21没有4 328.1546 −0.4 98.4 279年,304年 297.1125,282.0840,265.0826,237.0877,233.0559,205.0610 Aporphine
12 15.73 Coreximine C19H21没有4 328.1535 2。4 96.5 282年 313.1226,178.0803,151.0693,119.0436,91.0493 Protoberberine
13 16.03 Methylcoreximine 1 C20.H23没有4 342.1701 −0.3 99.1 282年 327.1431,192.0989,177.0754,151.0728,137.0573 Protoberberine
14 16.47 Methylcoreximine 2 C20.H23没有4 342.1701 −0.4 97.3 280年 192.0976,177.0743,151.0712 Protoberberine
15 16.53 Cheilanthifoline C19H19没有4 326.1405 −1.1 90.6 285年 311.1157,192.0988,178.0829,151.0721,119.0461,91.0517 Protoberberine
16 17.58 Dehydrocheilanthifoline 322.1074 0.3 99.3 267、355、458 307.0755,294.1039,279.0808,264.0663,250.0778,222.0839 Protoberberine
17 18.11 Demethyleneberberine / jatrorubine 324.1217 3.8 92.4 276年,355年 309.1003,294.0765,266.0814,210.0910 Protoberberine
18 18.32 Cryptopine C21H23没有5 370.1603 1。2 97.2 283年 291.1008,222.1115,204.1006,190.0853,165.0898,165.0536,149.0582 Protopine
19 18.69 Protopine C20.H19没有5 354.1342 −0.9 96.4 288年 206.0780,189.0755,188.0678,165.0518,149.0603 Protopine
20. 19.24 Fumariline C20.H17没有5 352.1187 −2.8 93.0 270年,372年 334.1026,309.0703,279.0601,263.0653,177.0740,135.0404 Spirobenzylisoquinoline
21 19.86 Stylopine C19H17没有4 324.1232 −0.4 99.3 288年 176.0678,149.0563,119.0459,91.0515 Protoberberine
22 20.05 黄连碱 320.0917 −1.2 90.1 265、357、459 305.0668,292.0912,277.0725,262.0855,249.0779,234.0905 Protoberberine
23 21.47 Corysamine 334.1068 3.4 95.6 268、345、449 320.0909,306.1083,291.0843,276.0974,261.0741,248.1019 Protoberberine
24 23.44 Impatien C C22H21没有6 396.1454 −2.9 96.3 288年 322.1019,176.0671,149.0557,119.0452,91.0507 Protoberberine
25 29.62 Dihydrosanguinarine C20.H15没有4 334.1079 −2.8 90.7 277年 319.0792,318.0723,317.0703,304.0958,276.0972,274.0812 Benzophenanthridine
26 27.15 8-Oxocoptisine C19H13没有5 336.0858/358.0703 9.16 /−4.82 71.5/92.22 277年,330年 320.0532,308.0889,278.0784,280.0966,174.0520 Protoberberine
其他人
1′ 11.28 未知的 C11H22没有6 265.153 −3.7 95.0 290年,318年 177.0511,145.0256,117.0313,89.0364
2′ 12.21 未知的 340.1188 −2.95 92.67 ND 322.1015,309.0697,291.0601,279.0597,281.0766,263.0645,251.0653,233.0547,205.0592,165.0772,123.0402
3′ 13.69 未知的 C19H21没有4/ 328.1530 4.4 91.0 ND 297.1074,282.0847,265.0817,237.0868,209.0923,191.0823
4′ 23.01 未知的 C25H25没有5 420.1836 0.43 98.51 282年 364.1485,321.0935,292.0956
5′ 23.07 未知的 C26H19没有5/ 426.1341 −1.18 96年 ND 398.1341,320.0867,107.0468
6′ 27.89 未知的 C24H17没有7 432.1044 7.86 77.28 330年 241.0425,219.0608,191.0698
实验:实验;max。:最大;RT:保留时间; [M + Na]+。
表2
生物碱的特点在f . capreolataRP-UHPLC-DAD-QTOF-MS。

EI源被认为是一个艰难的电离方法因为它引起广泛分散的高高能电子。有趣的是,TOF质量分析仪使我们检测分子离子(M+)的每一个生物碱本身并生成分子公式错误低于10 ppm(表1和表 )。看来,这个平台是极具吸引力的,因为它不仅能提供生物碱的分裂模式,而且其分子公式,基本线索未知化合物的结构说明,在当前气库不可用。这是dihydrosanguinarine和parfumine(表 ),其结构提出了基于他们的分子式和分裂模式可以幸运的是与文献[11,14,24]。

作为一个例子的策略之后,人物2显示的分裂模式stylopine protopine,并使用GC-QTOF-MS fumariline。

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图2
分裂的stylopine模式((a)和(b)), protopine ((c)和(d)),和fumariline ((e)和(f))中所描述的图书馆和由GC-QTOF-MS决定,分别。
3.2。生物碱的分析通过RP-HPLC-DAD-QTOF-MS

初步f . capreolata生物碱进行了研究使用应急服务国际公司在两个正面和负面的电离模式。第二电离模式导致更丰富和复杂的色谱概要(图 )和更强烈的信号。因此,它被选中作进一步研究。这并不奇怪,因为大多数质方法应用后者电离模式生物碱的分析。作为一个例子,生物碱的f . capreolata如图1 (b)。它描述了基本色谱峰(BPC)在选定的分析条件下,以及色谱在280 nm,异喹啉生物碱的吸收,和450海里,是第四纪protoberberine生物碱的特殊。

之后,使用该分析平台,生物碱的特性是基于以下的策略描述在我们先前的研究在其他植物植物化学物质(20.]。首先,紫外可见光谱和分子的生成公式使提出生物碱的化学结构。为此,文献Fumariaspp。9,11,12,25,26)和上述化学数据库咨询。其次,深度的MS / MS谱进行了研究。这样,26个生物碱特点的基础上,他们的光谱数据和结果如表所示2和表S2: RT,分子式,观察到m / z女士,质量错误,分数,紫外吸收最大值,和主要MS / MS碎片。和之前一样,表S2包含额外的信息。化学结构是描绘在图3。


图3
中的生物碱的化学结构f . capreolata提取和QTOF平台的特征。化合物根据表编号2。

使用积极的电离模式,高等生物碱[M + H]+离子,而第四纪生物碱产生[M]+离子质谱是按照丁et al。27]。此外,不同类型的生物碱显示不同的紫外吸收光谱最大吸收260至290海里(表2和表 )。有趣的是,紫外可见光谱是特别有用的说明第四纪异喹啉生物碱。例如,第四纪protoberberine紫外吸收光谱的生物碱,16日,17日,22日,23日,是由auxochromic组绑定到环D,最低在301 - 310海里,表明protoberberine核心与取代基在碳C9 C10 [28),还提出了一个最大特征吸收约450海里,同意Grycovaa et al。29日]。作为一个例子,在人物看到黄连碱3和4。



图4
紫外可见光谱和碎片isoboldine模式((a)和(b)), protopine ((c)和(d))、黄连碱((e)和(f)),和stylopine ((g)和(h)),分别由RP-UHPLC-DAD-QTOF-MS决定。

一旦分子公式生成和紫外可见结果对比,MS / MS分裂模式进行了研究和比较与数据库,但只有实验protopine MS / MS谱和cryptopine(表中被发现 )。然而,大多数的MS / MS谱共同离子与那些从罂粟科植物含有生物碱的研究中发现,樟科,芸香料(27,30.- - - - - -35)是有用的定义生物碱的化学结构。作为一个例子,图4显示了碎片isoboldine模式,protopine、黄连,和stylopine (tetrahydrocoptisine),作为aporphine的例子,protopine,分别protoberberine第四纪和高等生物碱。isoboldine和黄连的分裂模式被取代的解理特征组生物碱的核心,而没有观察到环融合。从这个意义上讲,isoboldine (m / z328)显示了CH的主要损失3NH2(31 Da)m / z297年因在氨基甲基取代基的存在,因为它是观察它的导数(m / z314)m / z283年。这是一个特点,这种类型的aporphine生物碱(36]。后来,CH的损失3,CH3,哦,CH3哦,公司发生。离子在protopine的情况下,他们的产品是由脱水生成(m / z336),retro-Diels-Alder碎片(m / z149年和206年),随后H的损失2O (m / z188)和哦(m / z189),依照垫片等。37和施密特et al。30.]。protopine骨干的碎片也观察到GC-QTOF-MS如图2。同样,stylopine产生碎片离子的支柱的碎片m / z176年和149年,这是最丰富的。这些离子碎片也被观察到的MS / MS谱化合物24 (m / z396年,C22H21没有6)(表2),片段在一起m / z322发布后的损失主要是中性的取代基与分子式C3H6O2(74 Da)。因此,这种化合物初步确认为impatien C, protoberberine最近特征凤仙花属植物延胡索(Fumarioideae罂粟科)(38]。

Dihydrosanguinarine (benzophenanthridine类型)也以取代基的碎片,是最丰富的离子形成的CH的损失3(m / z319),CH2O (m / z304),公司(m / z276)(表2)。Benzylisoquinolines NH的损失3(coclaurine), CH3NH2(N-methylcoclaurine)或C2H6NH (N, N-dimethylcoclaurine)m / z269年,取代基异喹啉的核心,同时共享一个共同的离子m / z107 (C7H7O+),它对应于甲酚一部分产生的感应解理(37]。最后,spirobenzylisoquinolines显示不仅取代基的生物碱的中性丢失核心也异喹啉核心生成离子的断裂m / z177 (C10H11没有2)(fumariline), 179 (C10H13没有2)(parfumidine)和193 (C11H15没有2)(parfumine),其随后的碎片(例如,m / z135年和137年)。

3.3。比较QTOF平台

图5代表一个上述比较结果的情节。所有的异喹啉生物碱GC-TOF-MS发现提取的f . capreolata使用RP-HPLC-DAD-QTOF-MS也被检测到。更多的极地生物碱,如第四纪生物碱,没有检测到第一个分析平台可能由于他们可怜的波动,是其主要的缺点17]。此外,RP-HPLC-DAD-QTOF-MS的使用使我们能够找到一些生物碱,由其他作者在这个工厂没有报告(例如,化合物2、3、5、10、13、14、17日,23日,24日和26日)。这可以解释的事实,大部分的研究Fumaria种虫害气用于研究其生物碱的概要文件。


图5
比较定性分析的总结f . capreolata生物碱GC-QTOF-MS和RP-UHPLC-DAD-QTOF-MS。

最近的一项研究表明使用应急服务国际公司的趋势,EI,和matrix-assisted激光解吸电离(MALDI) /作为天然产物的电离源调查;ESI源的应用不断增长,而谱和EI保持不变(39]。这一趋势可能反映了ESI应用在这个领域的大幅扩张解释的事实女士是一个通用的检测系统和ESI源使广泛的化学结构的分析,结果显示。

3.4。量化的Protopine

Protopine展品抗炎活性在体外和在活的有机体内(40,41]。这种生物碱可以贡献,至少部分解释antinociceptive和抗炎作用f . capreolata提取显示在我们先前的研究[2,6,7]。因此,对于这种生物碱提取物的质量控制,protopine初步选为分析/活跃的标志,因为它也是商用和rp方法被选中,因为它是短于GC方法。此外,这种化合物的量化是在280海里。这个检测器被选中,因为它是便宜和常见的制药工业/工厂,感兴趣的可以复制的异喹啉生物碱提取协议f . capreolata或进一步标准化的目的。回归方程是y= 1.78x+ 7.43。一个 0.999了,这表明一个好的相关性。重复性符合质量标准,相对标准偏差值低于10%,精度值接近100%,分别为(42)(表S3)。LOD和定量限分别为0.2和6.6 nmol /毫升。最后,使用这种方法的protopine的估计量 毫克/ g。

该分析方法也可以扩大phytopharmaceuticals包含的质量控制Fumaria提取,目前在市场上没有详细描述他们的有效成分。

4所示。结论

GC和RP-UHPLC耦合的高分辨率QTOF质量分析器是强大的分析平台快速结构测定异喹啉生物碱,先前其他光谱的应用工具。尽管GC-QTOF-MS提供结构信息8生物碱,RP-HPLC-DAD-QTOF-MS给了更详尽的剖析f . capreolata生物碱类化合物特征(26)。后者分析方法似乎需要检测第四纪生物碱基于我们对这种植物的结果和以前的文献。此外,小说在这种植物生物碱进行了使用这两种方法时,但这个数字是当使用RP-UHPLC-DAD-QTOF-MS更高,比如脱甲基isoboldine的导数,coclaurine,N, N-dimethylcoclaurine, 8-oxocoptisine等等。

信息披露

现在联系的Maria del Mar孔特雷拉斯是分析化学的部门,科尔多瓦大学。

的利益冲突

作者宣称没有利益上的冲突。

补充材料

峰的色谱图S1:基地f . capreolata提取由RP-UHPLC-DAD-QTOF-MS和elecrospray电离的正面和负面的电离模式。

表S1:生物碱的特性f . capreolata由GC-QTOF-MS提取。

表S2:生物碱的特性f . capreolata由RP-UHPLC-QTOF-MS提取。

表S3:方法的精密度和准确度。

  1. 补充材料
  2. 补充材料
  3. 补充材料
  4. 补充材料

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