高度敏感的检测试纸牛奶中四环素抗生素的识别

文摘

快速检测试纸测定了四环素(TC)的控制。分析基于固定化TC-protein共轭之间的竞争和TC测试样本与多克隆抗体anti-TC共轭绑定期间胶体金样品的流沿着膜固定化反应物地带。结合胶体金和多克隆抗体的免疫球蛋白(免疫球蛋白)总分数被用来增加特定抗体的检测灵敏度,以确保含量低的共轭。这使得有效抑制自由加沙地带TC和共轭绑定测试区。光度标记注册允许控制减少的绑定,从而提高检测灵敏度。提出的分析可以发现TC含量20 ng / mL,超过已知的类似物的检测极限,在一个广泛的工作范围(两个以上订单)60 pg / mL到10 ng / mL,确保通过使用多克隆抗体。试验时间是10分钟。设计的效率试验显示识别TC牛奶;经济复苏的程度的TC范围从112%到90。浓度测量的精度是不超过10%。

1。介绍

四环素(tc)是一组代表聚酮的化学结构(广谱抗生素1]。通过阻断转移核糖核酸的绑定氨酰基核糖体,抑制蛋白质合成的细菌细胞(2,3]。TCs广泛应用于兽医,对治疗和预防的目的,由于其高活动对许多革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌,小剂量,并广泛的行动。此外,TCs用作生长促进剂对动物体重,驱逐舰的病原体在饮用水源,饲料,食品,植物病原代理在作物生产4]。使用最广泛的四环素抗生素四环素(TC)、金霉素、土霉素(图1)。

因为他们的密集多样的用途,四环素不仅可以进入人体疾病的治疗也与食物。这可能会导致毒性和过敏作用,胃肠道功能障碍,肾功能不全,变形的粘液组织(5,6]。细菌对四环素耐药抗生素的出现是由于大规模临床兽医和农业使用(7]。因此重要的是要监控四环素和其他食品中抗生素的存在。

世界大多数国家都规定食品中四环素可接受的水平。根据关税联盟的规定,牛奶中四环素的浓度,乳制品,肉类,预制肉类产品不应超过10 ng / mL (ng / g)在俄罗斯(8]。欧盟委员会(European Commission)建立最大残留水平(MRLs)大量的四环素,即氧四环素、金霉素、立体异构体,100 pg / g肉,600 ng / g肾脏,鸡蛋200纳克/克,100 ng / g奶(9]。四环素是不允许在一些食品(蜂蜜和婴儿食品);即四环素的水平应该低于推荐的检测阈值分析方法。在美国,四环素的最大容许水平是300μg / g对肉类,6μ肝脏的g / g, 12μg / g肾脏(10]。在中国,MRLs四环素的总含量,盐酸,和氧四环素50 ng / mL牛奶、600 ng / g肾脏、肝脏300纳克/克,100 ng / g肌肉组织(11]。

低MRLs需要抗生素高度敏感的检测方法。TCs在食品需要快速分析的控制方法和需要直接实现采样点。然而,固定方法仍主要在先进的分析实践。

相对简单和低成本的微生物方法被广泛用于识别TC残留在食物12,13]。然而,他们缺乏特异性识别(不同种类的抗生素),并且耗时的(1.5 - 3小时)。基于液相色谱的方法也用于识别TCs (14,15]。这些方法非常具体和高度敏感,但他们也耗时;此外,他们需要大量的溶剂和昂贵的,专用设备基础。这些方法允许场分析。

方法基于使用特定细胞受体(16,17),包括快速变异,获得了广泛的货币,因为很难获得特定于TCs的抗体。TC受体测试的特点是他们的速度(10 - 20分钟),但测试系统需要在恒温浴孵化45°C。

TCs的免疫化学检测方法也已成功开发。实现这些方法不需要昂贵的设备,因此对大规模污染检查。最常见的微型板块酶免疫测定方法(ELISA) TCs (18- - - - - -20.)是在实验室环境中实现的,但使用相对便宜和易于使用的工具。与ELISA、免疫层析法(IC)测试系统是nonlaboratory分析工具。集成电路测试系统中所有进程没有操作员干预或额外的设备:进行接触的测试条样本启动所有后续交互。有几个选项可用于集成电路测试系统来识别四环素抗生素基于单克隆抗体的使用。现有测试系统允许视觉检测的TCs 30 ng / mL以上(21,22),但是这仅仅满足上述规定的一部分。因此,建立一个高度敏感的集成电路分析是一个非常必要和紧迫的任务。

肝功能降低检测极限的两种方法实现。第一种方法是基于涂层金纳米粒子(国民生产总值)多克隆抗体允许的特定抗体TC含量低共轭(23]。正如我们以前所示(24),对于这样的配合,更少的样品中抗原引起饱和抑制抗体价和绑定的带测试区。第二种方法是基于视频的使用数字探测器注册定量降低标签的绑定。这些探测器(25,26)允许减少强度的量化带颜色的测试区和识别存在的抗原浓度的样品不会导致颜色的完全消失。

因此,这项工作的目的是获取和描述国民生产总值与多克隆抗体TC轭合物,应用上述方法检测试纸测定TC,描述生产测试条的敏感性,并研究他们的应用程序识别TC的牛奶。

2。实验

2.1。化学物质

叠氮化钠,牛血清白蛋白(BSA)、3、3′, 5、5′-tetramethylbenzidine(三甲)、二甲亚砜(DMSO)、甲醛、Tween-20,特里同x - 100从σ(圣路易斯,密苏里州)。氯化金和盐酸四环素(TC-HCl)获得丙烯酰胺(书、瑞士)。交联葡聚糖G-25从议员获得生物医学(圣安娜,CA)。准备用于这项工作由anti-TC兔血清和免疫球蛋白(免疫球蛋白)部分中描述的23]。山羊anti-mouse免疫球蛋白抗体购自芒生物制剂(宾夕法尼亚州阿伦敦)。Peroxidase-labeled anti-mouse免疫球蛋白Gamaleya研究所的微生物学和流行病学,俄罗斯。所有其他的化学物质(盐和溶剂的分析级)来自詹(莫斯科,俄罗斯)。

综合的解决方案都是准备使用使用Milli-Q纯化水系统(微孔,贝德福德,妈,http://www.millipore.com/)。股票的解决方案的TC (1μg·毫升⁻¹)准备水和储存在−20°C。

2.2。Tetracycline-BSA共轭合成

的过程20.)是修改和应用。在这个过程中,30毫克的BSA溶解在2.0毫升的H₂O和26个毫克TC-HCl解决方案添加到200年μL DMSO和120μL 37%的甲醛水溶液(BSA摩尔比率:TC:甲醛= 1:120:3600)和室温搅拌过夜。产品从未反应的低分了纯化化合物通过交联葡聚糖凝胶渗透色谱法的磷酸盐G-25载体(PBS, 50 mM, pH值7.4,0.1 M氯化钠)。分光光度法是用来评估TC-BSA共轭的构成。由此产生的产品是储存在4°C。

2.3。微型板块为TC酶免疫分析法

分析进行了使用相同的程序中描述(24]。TC-BSA共轭固定化在微型板块威尔斯(4μ克毫升⁻¹100年美国公共电视台,μL每一夜之间在4°C)及孵化。包含0.05%的股票抗生素溶液在PBS稀释Triton x - 100和1% BSA (PBST)获得一系列的解决方案的范围100毫升0.14 ng⁻¹并添加到微型板块威尔斯(50μL /)。抗体稀释在PBST(从最初的抗血清稀释1:40000卷),微型板块是孵化1 h在37°C。添加了与PBST洗涤后,peroxidase-labeled anti-mouse抗体(PBST稀释的商业产品是1:6000年,100年μL /)和孵化1 h在37°C。最后,微型板块和PBST洗了三次,一次蒸馏水。

检测绑定过氧化物酶的活动标签,衬底的解决方案包含三甲0.42毫米和1.8毫米的H₂O₂在0.1 M柠檬酸钠缓冲,pH值4.0,添加(100μL /)。孵化15分钟后在室温下,1 M H反应停止₂所以₄(50μL /)。反应产物的光密度测量在450 nm使用Zenyth 3100标(Anthos Labtec仪器、萨尔茨堡、奥地利)。

2.4。制备金纳米粒子

金纳米粒子(国民生产总值)平均直径30 nm准备根据描述的协议(25]。简单地说,1.0毫升的1%的水溶液HAuCl₄被添加到97.5毫升的水。混合物加热回流,和1.5毫升的1%柠檬酸钠溶液补充道。回流后30分钟,准备冷却然后储存在4°C。

2.5。代絮凝曲线为国民生产总值将抗体固定住

的过程27)是应用与修改。在这个过程中,200年μL的国民生产总值()被放置在微型板块槽和20的恢复期抗体的解决方案在水含量从200到0.5μg / mL是补充道。孵化后,20μL 10%的氯化钠溶液在室温下被添加到每个槽内10分钟,其次是测量和创造的最终浓度的依赖抗体(絮凝曲线)。

2.6。合成共轭与国民生产总值的抗体

合成进行了使用程序[27,页931 - 932)修订的(28]。抗体被添加到10毫米三羟甲基氨基甲烷缓冲液,pH值8.5。国民生产总值的解决方案(与1 M的碳酸钾)调整pH值8.5 - -9.0,其次是介绍抗体的量根据絮凝选择曲线和下彻底的混合。孕育了混合物在室温下15分钟,其次是引入10%的水溶液BSA (v v = 40: 1)和孵化下10分钟彻底搅拌。金颗粒与抗体固定在其表面被颗粒状离心13.000 g和4°C,持续15分钟。上层清液被免职,残渣溶解在10 mМ三羟甲基氨基甲烷缓冲液,pH值8.5,1% BSA和1%蔗糖(回溯)和相同的环境中受到离心。由此产生的存款是溶解在回溯与叠氮化钠的引入0.05%的最终浓度和存储在4°C。

2.7。上浆的国民生产总值和他们的轭合物与抗体

描述粒子的大小、图像得到了国民生产总值的cx - 100透射电子显微镜(Jeol、东京、日本)的加速电压80000 V和3300000的放大。TotalLab图像处理软件(非线性动力学、纽卡斯尔、英国)。

Zetasizer纳米ZSP(英国莫尔文)被用来评估自由国民生产总值的水力直径及其配合。动态光散射(DLS);每样10 20°C)测定样品的初步孵化。光散射的角度是103°。

2.8。测定抗体吸附在表面上的数量的国民生产总值

极化fluoroimmunoassay被用来比较固定的配方添加浓度的抗体和无限的配方抗体。配方的特点是绑定BSA-TC共轭。

TC-BSA共轭固定化在微型板块威尔斯(5μ克毫升⁻¹100年美国公共电视台,μL每一夜之间在4°C)及孵化。与PBST洗涤后,anti-TC抗体稀释在PBST获得一系列的解决方案的范围10 0μ克毫升⁻¹。离心后,抗体解决方案和上层清液被添加到微型板块井(100μ每口井的L)和微型板块是孵化1 h在37°C。后续反应与peroxidase-labeled anti-rabbit抗体和过氧化物酶活动的测量与标签进行如上所述关联(见部分2。3)。光学密度、测量标准的抗体解决方案和上层清液进行比较。

2.9。生产检测试纸测试

Mdi Easypack(先进微器件,安巴拉Cantt,印度)胎膜包被用来制造检测试纸测试。他们包括塑料支架、硝化纤维膜中石油工作12μ孔隙大小,GFB-R4分离膜,РТ-R7玻璃纤维膜,АР045吸附膜。

试剂被固定在膜使用IsoFlow自动分配器(Imagene技术、汉诺威、NH)。测试区是由TC-BSA共轭和控制区域是由山羊anti-mouse免疫球蛋白。以下使用浓度和固定媒体:TC-BSA共轭,1.0 - -2.0 mg·毫升⁻¹在PBS;和山羊anti-mouse免疫球蛋白g, 1 mg·毫升⁻¹在PBS。1微升的每厘米的条宽应用解决方案。调剂后,膜在室温下干了至少20 h。国民生产总值的共轭稀释相应抗体被发现在玻璃纤维膜。共轭负载是32μL的条宽1厘米。玻璃纤维膜在室温下就干至少20 h。

膜组件的装配后,获得表与索引Cutter-1削减(点技术,阿伦敦,PA)测试条3.5毫米宽。测试条被熔积层铝箔袋包装含有硅胶作为干燥剂使用fr - 900 miniconveyor。在室温下进行切割和包装在一个特殊的房间相对湿度在30%以下。包装测试条被储存在室温下。

2.10。检测试纸测定过程

牛奶样本从当地市场购买。牛奶样品由混合股票TC解决方案和预先测试过TC-free牛奶样品。

试验在室温下进行。纯,牛奶样品用PBS稀释,:= 4:1。一个测试条垂直埋到一个分析物的解决方案或牛奶样本10分钟,对应于流体方面迁移所需的时间沿整个长度的膜。

2.11。检测试纸测定数据的登记和处理

标签的绑定在测试记录和控制区域使用CanoScan利德90扫描仪(佳能、东京、日本)其次是数字处理的图像与TotalLab软件(非线性动力学、纽卡斯尔、英国)。这个程序是用来确定现场边界,总结所有像素的强度属于一个特定的单位,和规范化的金额与现货表面积,从而代表颜色强度相对单位(俄文)。另外,便携式探测器、Reflekom配备Videotest软件(Synteco-Complex,莫斯科,俄罗斯)是用于定量检测抗原。

基于颜色强度()不同浓度的分析物(),使用的四个参数的校准曲线构造乙状结肠函数(29日]: 在哪里是渐近最大(分析物的颜色强度没有),在半对数坐标曲线的斜率在拐点,分析物的浓度在拐点,然后呢是渐近最低(背景颜色的强度)。

定量检测极限计算的TC内容对应绑定抑制10%。计算工作范围为TC含量对应绑定抑制20%(工作范围的下限)和80%(工作范围的上限)(30.]。

视觉检测极限是1000俄文。

2.12。Addition-Detection实验

测试系统的特点是在addition-detection实验中使用牛奶样品。经济复苏(,%)addition-detection实验计算如下: 在哪里TC浓度和添加吗TC浓度获得校准曲线。

3所示。结果与讨论

3.1。准备和Immunoreagents规格

immunoreagents包含在测试系统的特点包括hapten-protein合成共轭的成分测定和评估交互的共轭和多克隆抗体。

TC-BSA共轭的特点是使用分光光度计(图2)。根据光谱的比较数据的主要组件和共轭,TC的摩尔比率:BSA在共轭10:1。

共轭和交互的多克隆抗体四环素是使用微型板块酶免疫测定方法的特点。抗体的浓度吸光率1.0的微型板块酶免疫分析法是获得(与固定化TC-BSA共轭交互期间)为0.15μ克/毫升。TC的有效性识别特点是使用微型板块竞争酶免疫测定方法,的条件(孵化的反应物浓度和持续时间)进行了优化,以确保最低检出限。EIA校准曲线从选定的最佳条件下获得(参见”部分2”)如图3。

与控制水平的四环素的10 - 100 ng / mL,测试多克隆抗体允许其通过ELISA方法测定低浓度的1 - 2倍。这表明他们的生存发展的集成电路测试系统。

3.2。的制备和表征金免疫层析法的配合

3.2.1之上。规格大小的国民生产总值

制定减少HAuCl获得的国民生产总值₄对非盟⁰(31日特征)是利用透射电子显微镜(TEM)和DLS方法。两种方法被使用,因为它们不同的功能。采用TEM来确定电子致密结构的大小,也就是说,粒子的“金属核心”不含水合物、柠檬酸和其他膜。同时,DLS方法用于描述粒子在水环境中,考虑反应物表面固定化和水化壳近似的数量获得反应物的性质在实际检测环境。

TEM显示(图4),国民生产总值的平均直径nm。他们的形状是近球形,延伸系数。根据这些值,估计平均表面积的一个国民生产总值=纳米²。

DLS的结果表明,水力直径的国民生产总值纳米(图51),获得的值的差异通过TEM和DLS方法由于柠檬酸壳表面的国民生产总值。这种效应及其程度的表现符合我们之前研究的结果(32,33]。

monopeak粒子分布窄的大小观察两种方法显示齐次性质制定的国民生产总值,以及缺乏总量和杂质。

3.2.2。轭合物的制备、表征与免疫球蛋白的国民生产总值

国民生产总值抗体的结合的条件是基于光度数据描述产品的聚合反应在高离子强度。絮凝曲线是通过流程如图6。为了增加免疫球蛋白浓度4μ克/毫升以上,高原的记录光密度。这表明,稳定纳米颗粒固定化蛋白质分子,防止纳米粒子的聚合条件下高离子强度。基于图6,TC抗体被接合的OD的点的数量_580年达到了高原和两倍,蛋白质浓度的4.0和8.0μ克每毫升的胶体溶液。

4的浓度μ克/毫升与免疫球蛋白的摩尔比率:国民生产总值在交互等于25:1,8的浓度μ50克/毫升对应比例:1。给定大小的国民生产总值和直径的Fc-fragment免疫球蛋白(4海里),吸附网站的最大数量的表面免疫球蛋白国民生产总值(实现在他们接触的表面分子的Fc-fragment)是100年。因此,配合大量的免疫球蛋白都是选26和52%的国民生产总值的最大数量覆盖整个表面。

固定的会计估计过程与实验数据相比。浓度依赖性的影响,绑定在ELISA相比,固定化TC-BSA共轭获得抗体的解决方案添加共轭时,以及上层清液取样后生成共轭。表1显示了实验数据和计算的数据使用实验结果执行。可以观察到,绑定的免疫球蛋白g发生几乎定量公式。因此,至少有两次的免疫球蛋白(47)可能吸附在国民生产总值比发生在稳定的纳米粒子表面,根据絮凝曲线(24)。

尺寸规格的配合和最初的国民生产总值是通过TEM和DLS方法决定的。

TEM显示近球形的国民生产总值和高度的同质性。共轭的平均直径与免疫球蛋白的摩尔比率:国民生产总值24:1nm,延伸系数。共轭的平均直径与免疫球蛋白的摩尔比率:国民生产总值47:1nm,延伸系数。

共轭纳米颗粒的流体力学直径变化取决于他们的作文,等于海里的共轭与免疫球蛋白的摩尔比率:国民生产总值24:1海里的共轭的摩尔比率47:1(图5曲线2和3)。

显著差异的大小特征通过TEM和DLS方法获得反映膜固定化分子的记录和束缚水使用DLS方法(见上图)。结果表明,共轭不是伴随着纳米颗粒的聚集。这些研究结果与文献数据相一致的固定表面免疫球蛋白国民生产总值(34- - - - - -36]。

保护功能活动IgG-GNP配合测试的绑定检测试纸上的TC-BSA共轭膜(图7)。TC-BSA共轭是取代原生BSA共轭确认交互的具体性质。如下图7配合显示可比性(在相同值的吸光率)程度的绑定特定性质的,它允许使用在集成电路测试系统的开发。

3.3。开发的检测试纸测定四环素

检测试纸测定协议进行优化达到最低TC检出限,包括选择清洁剂浓度,浓度IgG-GNPs TC-BSA固定配合,和准备的牛奶样品。试验优化使用IgG-GNPs共轭47:1描述如下。集成电路测试系统实现基于IgG-GNP共轭24:1显示最糟糕的分析特征;因此,它被排除在进一步研究。

使用洗涤剂在免疫层析法(添加到IgG-GNP共轭应用)促进统一的快速运动的液体膜测试的地带,最完整的洗脱IgG-GNP共轭,着色强度增加的测试区(36]。获得的结果与不同浓度的Tween-20洗涤剂在图所示8。在分析浓度范围5 - 100倍胶束形成的临界浓度(CCM) Tween-20,等于0.01% (37]。从结果如下,Tween-20浓度0.35%的液体的运动提供了一个统一的战线,清晰的界限的结合区,和最大强度的颜色。这个浓度,被选为最优,是CCM 35倍。洗涤剂浓度中推荐使用的文学和免疫测定CCM(至少5倍38,39]。

IgG-GNP共轭浓度变化在对应于OD的变化范围_580年从2到8吸收性单位。从获得的数据如下(表2),颜色的最大强度在这个范围内(即恒定。,coloration in the absence of analyte in the sample) within the tolerance. For the assay option, OD_580年= 4是最优的。这种稀释提供最低检出限和最小的背景颜色的测试区。

最大强度的颜色单位在2毫克/毫升增加与增加TC-BSA共轭浓度在测试区。大量的背景颜色是典型的浓度更高。最优TC-BSA共轭浓度因此选为2毫克/毫升。

应最大限度样品制备简单、快速和non-time-consuming IC化验,缓冲(PBS)样本稀释的牛奶。获得的结果为不同变体的稀释在图所示9。样品的最佳体积比和缓冲区4:1(80%含量的牛奶在测试样本)。在这种情况下,样本矩阵最小影响具体的强度比和背景颜色,达到50:1,TC检测限制保持不变。使用大样本稀释会减少测试系统的灵敏度。

几个参数的集成电路测试系统,包括膜使用,选择基于我们之前的数据测试系统的发展对其他抗原(24,28,40]。

进一步研究中使用的测试条按照最优检测试纸生产参数。

3.4。测试开发的检测试纸的测试系统

校准曲线得到识别TC牛奶中。图10显示测试结果ТС含有不同浓度样品的牛奶。测试系统开发的特点是低仪器检测阈值(0.02 ng / mL)和操作范围宽(0.06 -10 ng / mL)。操作范围覆盖两订单多的浓度明显高于范围测试系统中提供基于单克隆抗体(一阶)41]。这种效果是通过使用的多克隆抗体的亲和力的克隆的个体差异很大,从而提供一个广泛的竞争互动的浓度。浓度测量的精度(标准差)不超过10%。颜色的消失在测试区与俄罗斯ng TC(10毫升的推广⁻¹)。颜色强度的依赖TC浓度是由以下方程描述:

适当的拟合优度(这个方程是5.3)是0.996。

测试系统开发验证识别TC在牛奶样品。这个特点是addition-detection实验。数据表所示3表明的效率测试系统作为一种定量分析的手段;TC提取的程度%。

4所示。结论

发达集成电路测试系统的特点是低检测阈值0.02 ng / mL的牛奶中TC仪器记录,以及操作范围宽(超过两个订单)。定量分析方法是10 - 100倍比集成电路试验更敏感(21)和ELISA (18,42]。的视觉检测阈值测试系统是10 ng / mL,这是商业类的2 - 5倍(吸附、魅力)。试验时间是10分钟,包括non-time-consuming样品制备,仅限于稀释的样本下使用缓冲区分析。测试系统的有效性监控四环素牛奶中被确认。特点建立了允许开发测试系统被认为是一种很有前途的工具来监控食品的安全。

检测阈值是通过使用两种方法,减少如下:(a)从定性评估的结果转变为定量评估基于视频数字录音和(b)使用多克隆配方包含一小部分抗体针对TC和非特异性抗体稳定国民生产总值。这些方法是普遍存在的,并且可以用于集成电路测试系统的发展确定一个广泛的化合物。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是支持的俄罗斯基础研究基金会(批准号15-33-50021;准备和规范的抗体)和俄罗斯科学基金(批准号14-16-00149;检测试纸测定)的发展。

引用

1. 乔普拉和m·罗伯茨,“四环素抗生素:行动的模式,应用,分子生物学和流行病学的细菌耐药性,”微生物学和分子生物学的评论,卷65,不。2、232 - 260年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. w . Hillen和r·a·格林沃尔德四环素在生物学、化学和医学施普林格,纽约,纽约,美国,2001年。
3. l . a . Mitscher四环素抗生素的化学,马塞尔·德克,纽约,纽约,美国,1978年。
4. e·e·塞弗里德四环素耐药基因在水产养殖环境中:基因型多样性和潜在的阻力水库美国威斯康星州麦迪逊大学麦迪逊分校,2007年。
5. g·g·盖洛,g . Lancini和f . Parenti抗生素:多学科的方法施普林格,纽约,纽约,美国,2013年。
6. j·l·玻色酸敏感是由于四环素耐药菌株大肠杆菌美国威斯康星州麦迪逊大学麦迪逊分校,2002年。
7. d·邦萨尔和v . k . Purohit”,可访问性和使用基本药物在卫生保健:在印度目前的进展和挑战,”药理学和药物治疗学杂志》上,4卷,不。1,十三至十八页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. t·r·o·c·联盟,TR铜021/2011食品安全,2011年。
9. (欧盟)委员会条例没有37/2010。
10. CAC、粮农组织和世卫组织、“食品中兽药最高残留限量,”第34届食品法典Commition学报》上2011年7月,瑞士日内瓦。视图:谷歌学术搜索
11. 农业部235号公告,农业的中华人民共和国,2002年。
12. t·j·路易·p·理货,j·g·巴特利特和s . l . Gorbach“快速微生物鉴定氯霉素和四环素,”抗菌药物和化疗,9卷,不。6,874 - 878年,1976页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. f . m . Poonawalla和m . r . Iyengar微生物鉴定维生素B12的四环素的存在,”应用微生物学,13卷,不。5,755 - 756年,1965页。视图:谷歌学术搜索
14. e . m .该镇实行“现代化的高效液相色谱方法验证盐酸四环素胶囊USP专著”公报的药店,开罗大学,52卷,不。2、239 - 244年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. k·Ng和s·w·林德,“高效液相色谱法分离四环素类:激光偏振检测与紫外检测的比较研究,“色谱科学杂志》第41卷。。9日,第466 - 460页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. 诉发言,a . Rault和e . Verdon”验证的商业受体工具包四环素残留的蜂蜜为筛选方法根据欧洲指南,”食品和农业免疫学,24卷,不。1,第128 - 111页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. j·f·m·Nouws g . Loeffen j .思h . Van Egmond h . Keukens h·斯蒂,“检测四环素残留的原料奶”乳品科学杂志》,卷81,不。9日,第2345 - 2341页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. m .正本,i李昌镛Paeng“定量检测四环素残留的蜂蜜通过一个简单的敏感的免疫测定,“分析Chimica学报,卷626,不。2、180 - 185年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. a . Gaurav j·p·s·吉尔,r . s . Aulakh和j·s·贝迪”基于ELISA牛牛奶中四环素残留的监测和分析不同地区的旁遮普,”动物世界,7卷,不。2014 1,页26 - 29日。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. m·a·伯京和中情局Galvidis”,提高集团在竞争酶联免疫吸附试验测定四环素抗生素,“食品和农业免疫学,20卷,不。3、245 - 252年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. s . f .徐l .侯a . j . Wubie et al .,“Anti-oxytetracycline基于单克隆抗体的检测氧四环素残留的蜂蜜,”杂志的食品、农业和环境,11卷,不。2、249 - 257年,2013页。视图:谷歌学术搜索
22. x t·勒·h·Yu, b .在y郭,d . Bi,“开发和验证的检测试纸测试条强力霉素残留的快速检测猪肌肉和肝脏,”食品和农业免疫学,22卷,不。3、235 - 246年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. l . a . Semyonov o . s . Kuprienko i . i Vashkevich et al .,“模型系统的间接酶免疫测定四环素,”第七届国家与国际参与分析化学会议(分析RB的15)p。78年,白俄罗斯明斯克,2015。视图:谷歌学术搜索
24. n . a . Byzova n . i Smirnova a . v . Zherdev et al .,“快速检测试纸测定氧氟沙星在动物原始食品使用本机抗血清标记胶体金,”Talanta卷,119年,第132 - 125页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. j·戈登·g·米歇尔,“侧流免疫测定,分析灵敏度限制”临床化学,54卷,不。7,1250 - 1251年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. c . Parolo a de la Escosura-Muniz, a . Merkoci”增强侧流免疫测定用金纳米粒子含有酶,”生物传感器和生物电子学,40卷,不。1,第416 - 412页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. g . t . HermansonBioconjugate技术、学术出版社,纽约,纽约,美国,2008年。
28. n . a . Byzova e·a·Zvereva a . v . Zherdev s . a . Eremin比比Dzantiev,“pretreatment-free快速检测试纸测定牛奶中氯霉素。”Talanta,卷81,不。3、843 - 848年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 调查局Kurganov, a . v . Lobanov中情局鲍里索夫,和a . n . Reshetilov”标准希尔方程有效性描述生物传感器的校准曲线,“分析Chimica学报,卷427,不。1,11-19,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. j . Uhrovčik”战略LOD测定和定量限values-some基本方面,“Talanta卷,119年,第180 - 178页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. g .友人“金属胶体粒子大小和溶胶稳定。”Kolloid-Zeitschrift和Zeitschrift毛皮复合神经节,卷250,不。7,736 - 741年,1972页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. 诉Safenkova, a . v . Zherdev比比Dzantiev,“多价抗体轭合物的成分之间的相关性与胶体金纳米粒子及其亲和力,”《免疫学方法,卷357,不。1 - 2,17-25,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. y, z . m . Li j .沈w . Liu和x的太阳,“纳米颗粒大小分布的测量系统动态光散射数据,”光学和激光工程,56个卷,第98 - 94页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. a . Hoshino k . Fujioka t .总裁et al .,“物理化学性质和纳米晶体量子点的细胞毒性取决于他们的表面改性,”纳米快报,4卷,不。11日,第2169 - 2163页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. w·刘,s . c . (j . p .齐默,e .田中j . v .一样和m .理想气体,“紧凑cysteine-coated CdSe (ZnCdS)体内应用量子点,”美国化学学会杂志》上,卷129,不。47岁,14530 - 14531年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. a . m . Derfus w·c·w·陈,s . n . Bhatia“胞内量子点的活细胞标记和细胞器跟踪、”先进材料,16卷,不。12日,第966 - 961页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. r . Hidalgo-Alvarez胶体系统的结构和功能性质美国佛罗里达州,CRC出版社,波卡拉顿,2009。
38. 黄r s和h . y .谢霆锋,侧流免疫测定美国纽约,胡玛纳出版社,纽约,2009年。视图:出版商的网站
39. j·r·克洛泽ELISA的指南美国纽约,胡玛纳出版社,纽约,2001年。
40. n . a . Byzova e·a·Zvereva a . v . Zherdev s . a . Eremin p·g .由b . Dzantiev,“Pretreatment-free检测试纸测定链霉素的检测及其应用控制的牛奶和乳制品,”分析Chimica学报,卷701,不。2、209 - 217年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. s, a Garcia-D 'Angeli, j·p·布伦南,和霍,“预测检测限制酶联免疫吸附试验(ELISA)和生物分析技术在一般情况下,“分析师,卷139,不。2、439 - 445年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. f .高g . x赵h·c·张,p . Wang和j.p.王,“生产单克隆抗体对强力霉素免疫测定7牛肌肉和牛奶中四环素,”环境科学和健康杂志》上的B部分:农药、食品污染物、和农业废物,48卷,不。2、92 - 100年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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