文摘
目标。的发生和发展相关的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是脂质过氧化反应,炎症反应的不平衡因素,免疫功能失调。本研究的目的是调查炎性细胞因子的表达水平和adipocytokines Th17 / Treg平衡与大黄蟅虫丸治疗非酒精性脂肪肝患者(DHZCPs)。方法。研究招募了100名非酒精性脂肪肝患者被安排到测试组和对照组。与DHZCPs测试组中的患者治疗,而对照组患者在治疗。外围TH17和Treg细胞流式细胞仪探测到,和外围IL-17 hs-CRP, TNF - il - 10α表达水平测定酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。胃促生长素的浓度、瘦素和脂联素定量检查。结果。的水平TC, TG、ALT和AST拒绝,但高密度脂蛋白胆固醇水平增加在非酒精性脂肪肝患者DHZCPs与未经治疗的患者相比( )。的比率Th17 / Treg DHZCPs患者非酒精性脂肪肝(1.52±0.21),这是明显低于未经处理的病人(2.39±0.45)( )。的水平IL-17 hs-CRP, TNF -α较低,但在非酒精性脂肪肝患者il - 10水平更高DHZCPs比未经治疗的患者( )。胃饥饿素和脂联素的表达水平在非酒精性脂肪肝患者DHZCPs显然是高于未经治疗的患者( ),和瘦素的表达水平在非酒精性脂肪肝患者DHZCPs显然低于未经处理的患者( )。结论。管理DHZCPs调节非酒精性脂肪肝患者的免疫功能通过保持Th17 / Treg平衡和影响炎性细胞因子的水平和adipocytokines。
1。介绍
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是一种肝脏疾病影响全球约四分之一的成年人,导致大量的疾病负担与广泛的社会和经济影响1]。非酒精性脂肪肝是一个渐进的疾病从脂肪变性有或没有轻度炎症发展到非酒精性脂肪肝炎的特点是坏死性炎症和纤维化进展更快2]。非酒精性脂肪肝的特点是脂肪积累,胰岛素抵抗,获得肝损伤代谢压力。它被认为是一个重要的理由向肝硬化发展,甚至肝细胞癌(3]。非酒精性脂肪肝的发生和发展是一个复杂的过程与多个因素。除了脂质过氧化、肥胖和糖尿病,拉美裔种族和遗传多态性GCKR, TM6SF2, PNPLA3 MBOAT7, HSD17B13基因被确定为非酒精性脂肪肝的风险因素4]。有趣的是,非酒精性脂肪肝的发病机制涉及许多免疫细胞介导炎症过程以及免疫功能的不平衡(5,6]。辅助T 17 (Th17)是一个提供促炎作用和一般福利的一种T细胞子集宿主防御通过释放效应细胞因子,如interleukin-17 (IL-17)。Th17细胞被认为是主要的诱发的自身免疫,导致组织炎症(7]。调节性T细胞亚群)和CD4 + CD25 + foxp3 +表型参与免疫自我耐受性和自身免疫抑制,Th17细胞亚群之间的平衡已成为一个突出因素调节自身免疫(8]。
据报道,多达80%的人肥胖,超过60%的糖尿病患者非酒精性脂肪肝(9]。非酒精性脂肪肝的治疗和管理通常是有限的药物治疗和生活方式干预对减肥(10,11]。吡格列酮,PPAR -γ受体激动剂,是一种有效的药物选择的减少非酒精性脂肪肝糖尿病患者的肝纤维化进展(12]。维生素E主要用于儿童非酒精性脂肪肝患者,可能被认为是治疗成人非糖尿病(13]。有第三阶段或IIb阶段随机对照试验进行测试抗炎和antifibrotic药物和代谢调节剂治疗非酒精性脂肪肝(14]。
传统中药(TCM)已经成为一种很有前途的治疗方法治疗肝纤维化由于一些副作用和高安全(15]。大黄蟅虫丸(DHZCPs)属于中医古代公式,由地面甲虫、牛膝、干地黄、甘草、水蛭、白牡丹、杏仁、桃仁、黄芪、grub,大黄和其他药物(16]。DHZCPs著称的功能在促进血液循环,消除血瘀和清除热间隙和干燥保湿、营养的阴和血(17]。以前的证据表明DHZCP公式似乎抑制肝纤维化血清标志物表达在慢性乙型肝炎患者18]。更重要的是,随机对照临床试验进行了探讨DHZCPs治疗矽肺患者的临床疗效和安全性,建议DHZCPs可以改善肺功能,生活质量,和矽肺患者的运动能力19]。在这项研究中,我们使用DHZCPs治疗非酒精性脂肪肝并观察其临床疗效及其对炎性细胞因子的调节和adipocytokines Th17 / Treg平衡与DHZCPs非酒精性脂肪肝患者的治疗。
2。材料和方法
2.1。研究参与者
这项研究包括100名非酒精性脂肪肝患者的诊断和治疗在我们医院从2018年1月到2020年1月。它包含62男性和38岁女性,年龄在24岁至68岁,平均(52.36±9.64)年。非酒精性脂肪肝患者经非酒精性脂肪肝的诊断标准20.]。患者应该排除如果他们在过去1个月免疫调制剂和发病毒性、药物引起的疾病或自身免疫性肝炎,hepatolenticular变性,不足βlipoproteinemia、先天性脂质萎缩、腹腔疾病,恶性肿瘤和其他特定疾病可导致脂肪肝。其中,分配给测试组60例,其余40例作为对照组。书面知情同意了每个参与者或其监护人。研究伦理委员会批准的协议是郑州大学第一附属医院。
2.2。研究设计
所有的研究参与者被要求改变他们的生活方式,比如节食,适度锻炼,吸烟和酒精停止和控制主要疾病的恶化,潜在的疾病,和伴随疾病,减少肝脏的脂肪含量,促进脂肪的回归。在测试组患者口服DHZCPs每天三次(每天5.0克)3个月。所有患者低脂肪和低胆固醇的饮食,即摄入总热量的50% - -60%碳水化合物组成,10% - -20%的蛋白质,不超过30%的脂肪。比饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸是1:1:1。
2.3。流仪TH17细胞亚群分析
空腹静脉血(5毫升)从每个主题,收集放入实际上管,并与溶血素补充道。混合物与淋巴细胞分离离心机和添加解决方案。在1000×g离心20分钟后,淋巴细胞层提取。细胞浓度调整为1×105细胞在磷酸缓冲盐/毫升(PBS)。Th17细胞immunophenotyped CD4 + IL-17 +和亚群CD4 + APC-CD25 + PE-Foxp3 + (21通过使用一个FACSCalibur流式细胞分析仪(美国贝克曼库尔特)使用FITC-CD4, APC-CD25, PE-Foxp3, APC-IL-17荧光抗体(美国eBioscience)。进一步流仪使用CelQuestv3.2分析软件分析。
2.4。检测IL-17, il - 10、hs-CRP和TNF -α
空腹静脉血(2毫升)从每个主题,收集放在实际上管,以及离心机在1000×10分钟得到血清g。的水平IL-17、il - 10和TNF -α被检测到的酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,严格按照指令所提供的试剂盒(南京建成生物工程研究所、中国)。每个在一个波长的吸光度值使用微型板块读者获得了450海里(美国Bio-Rad),规范标准曲线。hs-CRP水平是衡量高灵敏度immunoturbidimetric化验(美国罗氏诊断,印第安纳波利斯)使用一个自动化的临床化学分析仪。
2.5。测量胃饥饿素、瘦素和脂联素水平
瘦素的浓度是由酶放大定量检查敏感性免疫测定(美国表达载体BIOSOURCE)。推荐将范围从0.5到41.5 ng / ml根据供应商。胃促生长素的浓度分析未及(BIOSOURCE,英杰公司)。预期的浓度根据生产者之间的300和4000 pg / ml。脂联素的浓度是由使用人类的脂联素RIA工具(美国圣查尔斯Linco研究Inc .)按照指令由供应商提供。
2.6。统计处理
SPSS19.0统计软件对收集的数据进行统计处理。组使用一个独立的之间的比较t以及,组内比较使用成对进行t以及,多个组之间的比较是用单向方差分析。使用卡方检验统计数据进行了分析。 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。改善肝功能的非酒精性脂肪肝患者治疗后DHZCPs
的水平TC、TG、hdl - c、ALT、AST的肝功能测定评价非酒精性脂肪肝患者治疗后DHZCPs。如表所示1发现的TC水平,TG, ALT, AST和拒绝与DHZCPs治疗非酒精性脂肪肝患者,都低于未经处理的非酒精性脂肪肝患者( )。高密度脂蛋白胆固醇水平的提高与DHZCPs治疗非酒精性脂肪肝患者,这是高于治疗非酒精性脂肪肝患者( )。
3.2。较低的比率Th17 / Treg细胞在非酒精性脂肪肝DHZCPs患者
Th17和Treg CD4 + T辅助细胞的子集,似乎保持一种微妙的平衡有机免疫内稳态包括肝脏。Th17 / Treg平衡的干扰肝脏被发现与肝脏损伤和疾病有关。因此,我们进行了流量仪分析外围TH17和Treg细胞在非酒精性脂肪肝患者DHZCPs和未经处理的非酒精性脂肪肝患者。测试组Th17细胞的比例(11.23±1.39)%,这是明显低于对照组(14.36±2.28)% ( )。Treg细胞的比例在测试组(7.36±1.01)%,这是明显高于对照组(6.01±0.89)% ( )。Th17 / Treg细胞的比率在测试组(1.52±0.21),这明显低于对照组(2.39±0.45)( ,表2)。
3.3。改变IL-17, il - 10、hs-CRP和TNF -α在非酒精性脂肪肝患者治疗后DHZCPs表达
IL-17的血清il - 10, hs-CRP, TNF -α确定评估中炎性细胞因子的产生非酒精性脂肪肝患者治疗后DHZCPs。观察到IL-17的表达水平,hs-CRP, TNF -α在测试组显著低于对照组( ),和测试组的il - 10的表达水平显著高于对照组( ,表3)。
3.4。饥饿激素的变化、瘦素和脂联素表达与DHZCPs非酒精性脂肪肝患者治疗后
胃饥饿素的表达水平、瘦素和脂联素在非酒精性脂肪肝患者治疗后DHZCPs决定。结果表明,胃饥饿素和脂联素的表达水平测试组明显高于对照组( ),和瘦素的表达水平在测试组明显低于对照组( ,表4)。
4所示。讨论
非酒精性脂肪肝已成为异常肝生物标志物的主要原因在中国慢性肝脏疾病和健康检查。非酒精性脂肪肝的病因和发病机理还没有完全理解,其有效的预防和治疗带来一定的困难(22]。王等人。23]发现NAFLD患者淋巴细胞亚群的障碍。增加CD4 + T淋巴细胞的炎症活动中扮演着重要角色在非酒精性脂肪肝患者的免疫功能紊乱。Th17 Treg细胞和CD4 + T淋巴细胞的新发现的成员。Th17具有抗炎作用主要分泌炎症因子IL-17 Treg细胞调节IL-17主要通过分泌il - 10的表达炎症抑制因子。因此,之间存在动态平衡Th17 / Treg细胞和分泌IL-17 / il - 10的因素(24]。
Th17 / Treg失衡参与许多疾病的发生。他等。25)发现Treg和Th17细胞的异常表达在非酒精性脂肪肝患者。罗拉et al。26)发现,Th17细胞的表达对纳什的发生非常重要,在非酒精性脂肪肝小鼠肝纤维化的发展。目前的研究发现,Th17细胞的比例和Th17 / Treg非酒精性脂肪肝患者的比例显著高于对照组。效应分子IL-17和IL-17 / il - 10比值也明显高于对照组。上述结果表明,Th17 / Treg失衡参与非酒精性脂肪肝的发病机制。在这项研究中,有关试验结果进行了比较测试组(DHZCPs治疗)和对照组(未处理)。发现测试组TH17细胞的比例低于对照组。此外,Treg细胞的比例在测试组高于对照组。Th17 / Treg细胞的比率在测试组低于对照组。
越来越多的证据表明,adipocytokines参与胰岛素抵抗,导致非酒精性脂肪肝的发生(27]。脂肪,作为一个高度活跃的组织,存储热形式的甘油三酯和分泌一系列荷尔蒙因素,如瘦素的蛋白质,脂联素、抵抗素,visfatin [28]。许多adipocytokines与炎症和免疫调节29日]。此外,他们调节身体的新陈代谢的方式内分泌、旁分泌和自分泌(30.]。瘦素可以调节体内脂肪和能量平衡。一项研究发现,瘦素在某些非酒精性脂肪肝患者明显增加,表明在这些患者可能存在瘦素抵抗31日]。高瘦素和瘦素抵抗水平可以提高胰岛素水平,促进胰岛素抵抗,影响肝细胞的胰岛素信号转导通路,并增加肝细胞脂肪酸含量,导致脂肪肝发生(32]。肿瘤坏死因子-α是主要的细胞因子导致非酒精性脂肪肝肝损伤(33]。尽管肿瘤坏死因子的三维结构-α脂联素的非常相似,它们的功能是完全相反的。非酒精性脂肪肝患者脂联素水平的降低会导致脂肪酸合成的增加,TG的积累,脂肪酸氧化的阻塞34]。胃饥饿素是一种内源性生长激素促分泌素受体配体近年来发现。胃饥饿素不仅能促进生长激素的分泌,还会增加体重和调节能量代谢。发现胃饥饿素密切相关的胰岛素,血糖和脂质代谢(35]。低胃促生长素水平被认为是二型糖尿病的危险因素和葡萄糖耐量36]。胃促生长素调节中枢食欲监管网络,特别是神经肽γ,胃促生长素与各种adipocytokines交互,如瘦素和胰岛素和肥胖的病理过程中起着重要的作用。如图所示,我们的数据,管理DHZCPs显著增加胃饥饿素和脂联素的表达水平,但减少瘦素的表达水平与DHZCPs治疗非酒精性脂肪肝患者。这些发现支持了先前的研究。
总之,上述研究结果表明,管理DHZCPs调节非酒精性脂肪肝患者的免疫功能通过保持Th17 / Treg平衡和炎性细胞因子水平的影响,IL-17, il - 10, hs-CRP, TNF -αadipocytokines、瘦素、脂联素和生长素。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者没有利益冲突的声明。
作者的贡献
小华段和王健林Lv艘同样这项工作。