组织学和免疫组织化学评价有效性的一个新的化妆品配方治疗皮肤光老化

文摘

客观的。化妆品不是经常的作用机制研究。本研究的目的是确定组织学、免疫组织化学和临床变化的新的化妆品配方。方法。病人自控,前瞻性单盲随机研究与轻度至中度10名志愿者的皮肤光老化的手。产品应用一方面和一个标准的奶油在另一方面,一天两次三个月了。标准化的照片拍摄在基底(T0)和最终的访问(T1)和皮肤活检进行。组织学和免疫组织化学标记变化进行了研究。主观确定临床变化。结果。治疗后,26.3%的改善表皮厚度检测和显著增加胶原蛋白我三世,弹性蛋白、纤连蛋白纤维实现()。基质金属蛋白酶的表达保持稳定,改善皮肤矩阵是归因于他们合成的刺激。显著地提高临床治疗一方面是获得,而控制。结论。这个新的美容产品组合的三个注册技术(WGC IFC-CAF,和RetinSphere),专注于再生皮肤基质和激活皮肤细胞增殖,表明高效降级的皮肤光老化。

1。介绍

有两种基本类型的皮肤老化,即内在和外在老化。前者,也称为时间老化,端粒缩短和积累有关活性氧(ROS),主要由线粒体代谢,细胞无法中和(1]。轻微rhytides与失去弹性和真皮萎缩临床这种类型的皮肤老化的迹象1]。相比之下,在外在老化或光老化,长期暴露于紫外线辐射的影响(UVR)和其他环境因素,如重力、污染、饮食、烟草、疾病、或压力,有利于临床发展的外在老化的迹象,比如色素变化,毛细管扩张,增加角膜大小,深皱纹,光化性角化病,癌前和恶性皮肤损伤(2]。

岁皮肤镜下的特征是细胞衰老,决定降低角质细胞和纤维母细胞的扩散和生理学。这导致减少表皮更新,减少皮肤细胞外基质(ECM)的合成组件,如胶原蛋白和弹性蛋白。此外,ECM的退化是由于加速,在某种程度上,增加表达的金属蛋白酶(mmp),主要是金属蛋白酶- 1和MMP-3 [3]。,这些变化与表皮和真皮萎缩和结束,最后,损伤组织的结构和生理特性(4,5]。

最近新产品设计基于三种技术的结合,其中每个解决临床光老化的迹象,因此试图提供一个全球方法皮肤条件:IFC-CAF(细胞激活因子),WGC(沃顿商学院凝胶复杂),RetinSphere。

的作用机制研究的不同的技术产品

RetinSphere技术归一化的表皮增殖和毛囊角质化抗炎作用提高产品的渗透

IFC-CAF抗氧化效果皮肤干细胞的增殖和迁移,细胞角化细胞和成纤维细胞。DNA的稳定性

WGC抗氧化效果成纤维细胞的增殖和迁移合成胶原蛋白,III,七世和弹性蛋白。

RetinSphere协会包含两个局部类维生素a:视黄醇glycospheres和hydroxypinacolone retinoate。它有消炎和规范表皮增殖。此外,它提高了渗透化妆品配方的其他组件(6]。这个成分增加皮肤弹性和光明和减少皱纹和photoaged皮肤色素沉着7]。此外,其他研究已经表明,RetinSphere改善肤色不均和毛细管扩张8]。

IFC-Cellular激活因子(IFC-CAF)的化妆品成分从溶解产物获得鸡蛋Helicidae腹足类的家庭,与强大的再生能力,证明了减缓干细胞增殖(9)和诱导皮肤干细胞迁移时间和剂量依赖性的方式改善皮肤内稳态。此外,这种成分可以促进更好的组织细胞骨架蛋白(f -肌动蛋白和波形蛋白)和促进ECM组件的生产(纤连蛋白,胶原蛋白和基质金属蛋白酶)和细胞基质粘附vinculin蛋白质。这个因素的治疗降低体内标记的表达β牛乳糖、p53和p16INK4 UVB照射后衰老成纤维细胞,提高细胞生存和核HaCaT细胞修复(10]。此外,它保护HaCaT细胞基因组损伤,减少已经证明的组蛋白的磷酸化形式的水平H2Ax与UVB辐射照射后(10]。

沃顿商学院凝胶复杂(WGC)是由自然的葡糖氨基葡聚糖的混合物(笑话)从沃顿商学院获得的果冻脐带的猪。WGC刺激成纤维细胞的增殖和展品高趋药性的活动,刺激他们迁移到的注入,通过transwell迁移分析如图所示。

ECM组件的分析证明的能力WGC增加胶原蛋白的水平我和纤连蛋白纤维,以及胶原蛋白的合成三世和七世和透明质酸合成酶1和3 (HAS1和HAS3) (11]。因此WGC具有再生特性是一种有效成分。

这项研究的主要目的是评估的有效性改善面部photodamage化妆品产品包含其中,这三种活性成分的结合,将评估通过分析改善几个免疫组织化学标记物的表达。

评估的临床变化,如色素沉着和水合作用,使用该产品后,以及改善的程度被研究者和病人,被视为次要变量。不良事件监测整个研究。

2。研究人口和方法

这是一个前瞻性单盲随机研究,志愿者作为自己的比较器及产品只在一方面,而另一方面应用标准水化政权。病人也充当自己的内部控制之前和之后的治疗。十个志愿者招募。

2.1。入选标准

(我)女性年龄在45到64岁之间。(2)手上没有治疗在过去的3个月。(3)在即将到来的几个月不想怀孕和使用避孕措施的。(iv)没有伴随疾病。(v)政府另一个局部或系统性的产品,不得干扰或影响的结果。(vi)没有过敏成分的产品。

2.2。治疗方案

治疗包括新配方的应用(Endocare Cellage®/ CellPro®ifc SA)三个月的一天两次的背区域指定为每个志愿者的手。另一方面,一个标准的应用。

2.3。临床评估

双手和皮肤活检的临床评估的手收到研究基底访问(T0)和产品进行了为期三个月的治疗后(T1)。未经处理的手没有活检是出于伦理方面的原因。

在这两个时间点,经典临床摄影进行了揭示RBX技术和活检是®系统。伪装postbiopsy伤口底部的第五跖骨,绷带被覆盖住,同样的是在同一个地方做侧手的评价仍然蒙蔽。两个不同的皮肤科医生,他们不同的人进行活检,独立进行临床评估。

以下参数记录:(我)的年龄。(2)凸版照相。(3)手光老化程度被病人(0 - 3)(见“毕业临床评估评估病人和调查人员”)。光老化的迹象表明,病人应该评估包括rhytides、粗糙,缺乏亮度,缺乏弹性,雀斑,脱皮的病变。(iv)色素沉着和水化程度被研究者(0 - 3)(见“毕业临床评估评估病人和调查人员”)。(v)所认为的光老化程度的改善病人(−2到3)(见“毕业临床评估评估病人和调查人员”)。(vi)光老化的改善程度被研究者(−2到3)(见“毕业临床评估评估病人和调查人员”)。负面影响也在研究和报道了(0 - 2):脱屑、瘙痒,燃烧,红斑、干燥、或其他(见“毕业临床评估评估病人和调查人员”)。

毕业临床评估评估病人和调查人员色素沉着和水化调查员如下:0:没有,1:灯,2:温和,和3:强烈。光老化变化被调查者描述如下:0:没有,1:轻微改善,2:温和改善,3:强烈的改善,−1:轻微恶化,和−2:强烈的恶化。病人和调查员全球评估如下:0:没有,1:轻微改善,2:温和改善,3:强烈的改善,−1:轻微恶化,和−2:强烈的恶化。不良事件:脱屑、瘙痒,燃烧,红斑、干燥、和其他人如下:0:没有,1:温和,和2:强烈。

2.4。组织学评估

切片的病理学家评估不知情的样本是否之前或之后的治疗。包括积极的和消极的控制。石蜡固定后,4μ片被削减为组织学和免疫组织化学染色。

活检是沾hematoxylin-eosin评估表皮和真皮厚度和形态。

地衣红染色进行评估治疗前后弹性纤维的表达。半定量的分析弹性组织变性(0 - 3)和网状真皮弹性纤维密度进行了测定。

黏多糖的网状真皮半定量的评估(0 - 3)胶体铁染色。

免疫组织化学分析也执行地址的表达几个标记:CD31(单克隆Ab。克隆JC70A, prediluted), Ki67(单克隆Ab。克隆MIB1, prediluted),胶原蛋白我(多克隆Ab,稀释的1/100),胶原蛋白3(单克隆Ab。克隆IE7-D7,稀释的1/600),纤连蛋白(多克隆Ab,稀释的1/250),金属蛋白酶1(金属蛋白酶- 1单克隆Ab。克隆EP1247Y,稀释的1/75),和金属蛋白酶3(单克隆Ab。克隆148 - 1 - 3,稀释的1/75)。

这些标记细胞阳性量化和表达为阳性细胞/平方毫米(40 x)和胶原纤维、纤粘连蛋白的表达是半定量的评价,评分显微镜图像从0(没有)3(高)。

2.5。统计分析

化妆品的影响之间的比较和预处理和后处理效果评估半定量或定量变量,根据免疫组织化学生物标志物。每个变量的研究中,非参数Wilcoxon测试(成对样品)被用来对比后之间的可能的显著差异,治疗前和治疗与参与。结果表示为每个临床和组织学的平均值±标准偏差变量。一个值小于5% ()被认为是重要的(,相比,预处理)。所有的计算和测试是由使用软件SPSS V21.0。

3所示。结果

总共10包括45至64岁的女性。他们完成了这项研究。

3.1。临床评估

临床和摄影分析RBX技术如图1,用一个例子形象的手治疗前后研究产品。临床图像分析了由两个独立的调查员,蒙蔽了达成80%巧合当识别收到的手治疗。

关于色素沉着,双手在基线之间没有明显差异;然而,一个轻微的改善,显示趋势意义(观察),色素沉着的治疗比未经处理的手的治疗(表1)。

值得注意的是,非常重要的差异实现的水化程度的治疗比未经处理的手(3.0和1.7;)和相对于基线(),而双手显示相同的水合作用在基线(1.95,即。温和的水合作用)(表1)。

3.2。主观的临床改善

老化程度的知觉被病人取得了同样的双手在基线(平均1.45,即。,mild and moderate), objectifying a significant improvement in the treated hand compared to untreated hand after treatment (1.2 versus 1.6;)(图2(一个))。

病人和调查员评估显示显著改善治疗手在完成治疗的新产品(图2 (b))()。治疗后的改善程度被研究者和病人造成的光老化的感知非常重要的改进治疗比未经处理的手。这种改善的治疗手分为6例严重或中度和轻度4。相比之下,在未经处理的手,调查员和病人观察任何改善。

在任何情况下没有不良反应报告。

3.3。组织学评估

hematoxylin-eosin染色的切片中执行治疗手显示明显的差异在许多的样品对表皮和真皮厚度治疗手治疗后与基线相比,尽管只有表皮厚度显著增加。在基线平均表皮厚度为94.4岁μm,在治疗后119.2微米时,显示显著增长26.3% ()(图1)。然而,略有增加皮肤厚度的8.2%是观察到活组织检查治疗前后(1.10毫米和1.19毫米,职责。)但没有达到统计学意义()。

有趣的是,细胞增殖标记Ki67的表达(细胞/×40)治疗后基线相比高出73.2% ()(图3)。

尽管真皮厚度没有显著变化,观察皮肤的重要增加ECM纤维治疗后与基线相比。组织学研究表明,弹性蛋白密度增加50.0%后3个月的治疗相对于基线()(数据4(一),4 (b),5)。同样,显著增加在胶原纤维类型我(治疗后高100.0%,)和三(116.6%更高的治疗后,)(数据4 (c),4 (d),5)。同样,纤连蛋白表达有显著提高治疗手后治疗相对于基线的80.0% ()(数据4 (e),4 (f),5)。

值得注意的是,没有观察到显著变化在治疗后金属蛋白酶1和3的表达。没有观察到任何炎性浸润志愿者之前或之后的治疗。

有关的分析表达内皮标记血小板内皮细胞粘附分子1 (PECAM1或CD31)(船/×40)活检解决毛细现象,增加了102.3%的表达这个治疗后内皮标记()被发现(图6)。

最后,粘蛋白表达明显降低50%后观察治疗()相对于基线(图7)。

4所示。讨论

光老化的特点是表皮萎缩,与ultraviolet-induced损伤干细胞的基本层和毛囊(12]。研究产品显著增加表皮厚度,这增厚是由促进表皮细胞增殖,它已被证实的显著增加的表达基底细胞增殖Ki67的标志层。这种刺激可能是由于类维生素a组件的产品,如前所述在文献[13),或者IFC-CAF,据报道,促进体外增殖,分化,和角化细胞迁移9,14]。

关于真皮胶原蛋白类型我是最主要的组成部分,人类的皮肤ECM (15]。它由成纤维细胞合成和正在慢慢退化衰老,这一过程是在光老化加速16]。这种退化主要是由金属蛋白酶(17]。在光老化也有退化的积累弹性纤维与其他蛋白质结合,如粘多糖,fibrillin,和溶菌酶沉积上真皮引起弹性组织变性(18]。诺等人表明,纤连蛋白的活性降低后暴露在紫外线和在光老化19]。此外,在老化减少胶原蛋白的合成,它已经推测它可能是由于成纤维细胞的衰老20.]。这些变化,促进胶原蛋白的总数的减少,弹性蛋白、纤连蛋白纤维的稀疏结构支撑的真皮和损失。

在这项研究中,我们没有观察到一个明显的弹性组织变性现象;然而,弹性蛋白纤维,以及其他ECM组件,被免疫组织化学显示减少的水平。诱导治疗三种技术的组合非常显著增加胶原蛋白我三世,弹性蛋白、纤粘连蛋白纤维。此外,一个重要的真皮厚度增加,虽然没有达到统计学意义。进一步的研究将是必要的,以评估是否增加ECM组件转换为临床相关性,如增加皮肤的弹性和紧实度。

合成的刺激可能是由于直接行动的真皮成纤维细胞的活性成分。WGC根据初步研究,诱导成纤维细胞的迁移,增加胶原蛋白的表达三世和七世的直接刺激成纤维细胞(11]。它也会增加及护的表达,这是已知的诱导胶原合成和抑制金属蛋白酶(数据文件)。因此,WGC可能不仅增加ECM的合成组件,也避免抑制基质金属蛋白酶降解,常数所显示的水平分析金属蛋白酶(金属蛋白酶- 1和MMP-3)。最后,WGC诱导透明质酸合成酶的表达(数据文件),负责合成透明质酸。

此外,IFC-CAF也已被证明能够增加胶原蛋白I型、纤粘连蛋白的水平(10),因此它也可以帮助改善成纤维细胞分泌ECM组件的性能。此外,局部类维生素a显示能够诱导neocollagenesis [21]。

因此,在目前的研究中,观察到的不同的表达增加ECM组件转换为抗衰老的临床效应被患者和研究者。

在photoaged皮肤,皮肤血管受损的胶原蛋白和弹性纤维的降解,不给予必要的支持正确的真皮的配置(22]。在这项研究中,一个显著增加内皮标记的表达CD31后表明,刺激血管生成治疗。因为这是在没有炎症的情况下,这不会继发于炎症血管生成过程但皮肤再生,因为它证明了角化细胞和纤维母细胞活动的增加(23]。

虽然皮肤黏蛋白提供抵抗结缔组织在正常情况下,一个不寻常的存款是观察到在某些情况下,比如inflammaging。在我们的研究中粘蛋白含量明显下降了,这可能与减少与光老化相关的慢性皮肤炎症(24]。

关于临床评估,有一个正常的黑色素在光老化,增加相关的超额生产的衰老黑色素细胞。使用类维生素a(特别是这种组合的hydroxypinacolone retinoate视黄醇glycospheres)在先前的研究表明改善色素沉着过度,因此它可能是暗示治疗(25]。尽管临床改善色素沉着的程度是实现,一个客观的评估,以确定其精确的范围是必要的。重要的变化得到关于水合作用,按照患者和研究者的看法。

宽容是优秀的,被认为是必不可少的任何抗衰老的产品,以确保适当的遵从性。

总之,这个新的化妆品组合证明它是有效的治疗皮肤光老化,用它治疗取得了显著改善的组织学及临床参数。显著的增殖和表皮更新,以及补充皮肤细胞外基质的组件,包括胶原蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白纤维,完全被表现为临床改善几个光老化的迹象。

相互竞争的利益

m . t . Truchuelo是偶尔的医学顾问工业Farmaceutica坎塔布里亚。其余的作者声明没有利益冲突有关的出版。

确认

作者玛丽亚Vitale表达他们的感激之情,皮肤科医生医学博士为医疗部门国际金融公司工作,和生物化学家Arancha Delgado博士为医疗部门国际金融公司工作,为他们的贡献。

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