MASPIN和EZRIN蛋白在外观基础细胞癌中的表达

摘要

背景。本研究的目的是研究maspin和ezrin在眼周基底细胞癌(BCC)不同亚型中的表达。方法。来自43例外观BCC患者的组织样本。我们的病例包括10个形态型基底细胞癌，25个结节型基底细胞癌和8个腺样体型基底细胞癌。通过设想检测系统进行Maspin和Ezrin的免疫组织化学染色。结果。BCC不同亚型之间maspin表达的阳性率、强度和表达方式没有差异。Ezrin在所有类型的基底细胞癌中均有表达，但在形态型基底细胞癌中Ezrin的表达强度明显高于结节型和腺样型(和、职责);90%的morpheaform样本显示强烈的ezrin强度，而这种强度仅存在于腺样体和结节型的25%和12%。maspin和ezrin的表达与年龄、性别或肿瘤边缘受累无关。maspin和ezrin的表达无相关性，但在结节型中呈负相关．结论。Ezrin在眼周形态基底细胞中表达强烈。需要进一步的研究来证明这一发现对形态基底细胞癌预后的重要意义。

1.介绍

皮肤的基础细胞癌（BCC），人群中最常见的恶性肿瘤，代表眼睑肿瘤的20％和90％的眼睑恶性肿瘤[1那2］．BCC亚型，包括结节性，腺样，肤浅，微透模和形态学/渗透亚型，具有不同的临床和形态学图片[3.］．

最近，鉴定了各种肿瘤生物标志物，其在预测癌症的临床行为方面具有重要意义[3.[中间，MASPIN和EZRIN可能参与BCC发病机制。Maspin蛋白，蛋白酶抑制剂系列的成员，呈作分泌的细胞质，核或细胞表面相关蛋白[4.那5.］．Maspin是肿瘤抑制基因的产物，参与凋亡和癌症侵袭，转移和血管生成的抑制作用[4.］．它的表达在癌症进展中下调[6.］．

Ezrin是ERM (Ezrin -radixin-moesin)蛋白家族的成员，在细胞膜和肌动蛋白细胞骨架之间起连接作用，参与多种细胞功能，包括细胞与细胞外基质的粘附、细胞与细胞间的通讯、信号转导和凋亡[7.那8.］．Ezrin在调节肿瘤生长和进展和转移传播的情况下具有积极作用，以及许多癌症的转移传播[9.那10.］．

难以熟悉麦满和含喹啉生物标志物在围眼皮肤肿瘤中的表达。这项工作的目的是调查宫颈BCC中的Maspin和Ezrin表达，以通过免疫组织化学在这种癌的发病机制中揭示其作用，以及将它们与肿瘤的临床病理特征相关联。

2.材料和方法

从2011年4月至2012年4月，从石油医学院喀利里医院的病理实验室归档，从43例诊断诊断诊断患者中获得的切除组织样本。所有患者在此期间均已诊断出来，并且没有收到病人在样品收集之前对其BCC进行任何治疗。在光学显微镜下检查苏木精和曙红染色切片，以确认BCC型和肿瘤余量的参与的诊断和测定。排除了组织学评估中具有鳞状分化的血型癌。来自着色的BCC病例的组织样品显示出结节型的病理特征，因此它们被分配为结节型。从石蜡包埋的组织块中取出五个微米厚的部分，并安装在聚L赖氨酸载玻片上。然后将部分在二甲苯中脱硅氧化，并在乙醇的下降等级中再水化。

用Envision检测系统进行maspin和ezrin免疫组化染色。这是一个两步的过程;第一步是用最佳稀释的一抗(1/2000)孵育组织，第二步是用Envision试剂孵育组织。昂科威试剂是一种过氧化物酶偶联聚合物，它也携带针对兔子或小鼠免疫球蛋白的抗体。

Maspin单克隆一抗(小鼠抗人抗体，Santa Cruz Biotechnology Inc.， Texas, USA)针对人Maspin n端对应的重组蛋白而产生。Ezrin多克隆一抗(rabbit antihuman antibody, Texas, Santa Cruz Biotechnology Inc.， Texas, USA)针对人源Ezrin的c端肽段提出。Maspin和ezrin抗体分别用TRIS-EDTA和柠檬酸缓冲液稀释至1:20 00。抗原提取是在TRIS-HCL缓冲液(pH 7.4)中煮沸组织。然后使用一抗，4℃保存过夜。

展望检测系统由葡聚糖主链与过氧化物酶分子和二抗组成。应用二抗(Cat number K5007, code S3245 DAKO Cytomation)分别为抗maspin和ezrin的小鼠IgG抗体和兔IgG抗体。底物体系为二氨基联苯胺(DAB)显色剂。梅耶的苏木精被用作复染剂。前列腺基底细胞和十二指肠粘膜组织分别作为maspin和ezrin的阳性对照。在masaspin和ezrin染色时，也以正常皮肤作为阳性对照。用PBS替代一抗，得到maspin和ezrin的阴性对照。

在肿瘤组织和邻近表皮层中评估Maspin的免疫反应为阴性或阳性，其中阳性为细胞质和/或核染色。评价Ezrin在肿瘤、邻近表皮和瘤周淋巴细胞中的免疫反应性(强免疫反应性的参考)。当存在或不存在膜性免疫反应的细胞质阳性时，病例被划分为ezrin表达阳性。maspin和ezrin的表达强度分为0 - 3分，0分表示没有染色，1分表示弱染色，2分表示中等染色，3分表示强染色。所有的切片均由两位病理学家独立评估。

2.1。统计分析

结果采用SPSS 17统计软件包进行分析。芝加哥,美国)。采用Fisher精确检验和Spearman相关系数进行数据分析。的价值被认为是统计学意义的。Kappa统计数据用于测试Interray可靠性。

结果

我们的病例包括10个形态型基底细胞癌，25个结节型基底细胞癌和8个腺样体型基底细胞癌。未见浅表型、结节囊肿型和小结节型。所有基底细胞癌样本和正常皮肤的对照样本在所有表皮层均显示弥漫性胞浆蛋白表达。不同类型眼周基底细胞癌的临床及病理资料见表1．Maspin蛋白在74.4％的样品中表达。不同类型的BCC有关于MASPIN表达和染色强度之间没有显着差异（和0.82,分别地)。maspin的表达模式在BCC亚型中没有差异。表格2在不同类型的眼周基底细胞癌中均有maspin表达。图中为肿瘤细胞maspin阴性、弱、中度染色1．

Ezrin蛋白在93%的样本中表达。ezrin的表达在不同类型的基底细胞癌中无明显差异，但不同类型的基底细胞癌中ezrin的表达强度不同。与结节型和腺样体型相比，morpheform BCC中ezrin的表达强度显著升高(和、职责);90%的morpheaform样本显示强烈的ezrin强度，而这种强度仅存在于腺样体和结节型的25%和12%。关于Ezrin强度的结节和腺样亚型之间没有显着差异（）.Ezrin在不同类型眼周基底细胞癌中的表达情况见表3.．数字2显示肿瘤细胞中弱，中等和强烈的ezrin表达的样品。

ezrin和maspin在形态和腺样基底细胞癌中的表达强度没有相关性(和0.16，RESP。）但是ezrin和结节型表达之间的反比相关性（）.

年龄与maspin ()或ezrin (）.我们还没有发现边缘参与和MASPIN或EZRIN表达之间的任何显着相关性（和0.058,分别地)。

性别与maspin和ezrin表达均无显著相关性(值= 0.53和0.96，RESP。）。在任何BCC亚型中，性和MASPIN和EZRIN表达之间没有显着关联。

我们分别达到MASPIN和EZRIN测定的κ值0.86和0.75，以分别进行Interriter可靠性。两个值都在几乎完美的协议范围内。这种发现意味着在本研究中，Maspin和Ezrin的测定是可重现的。

4.讨论

参与恶性细胞转化机制的生物标志物的鉴定对预测肿瘤的进一步临床行为具有重要意义，在诊断和治疗中具有预后价值[3.］．在这项研究中，我们评估了MASPIN和EZRIN在不同类型的外观BCC中的表达。已知微透过，渗透，基染色，形态和混合的BCC亚型具有侵袭性组织学特征，并且据信腺样体变异是非收场亚型[11.］．我们排除了非典型基底细胞癌病例，因为它们具有鳞状细胞癌的中间特征。在我们的病例中，我们没有发现小结节型、结节囊肿型和浅表型，因此我们将病例分为三组:形态型、结节型和腺样体。

Maspin是一种肿瘤抑制基因的产物，被认为可以抑制肿瘤的侵袭、转移和血管生成[12.］．但是，既减少和增加了马斯宾平行肿瘤进展的表达[12.］．74.4%的病例中发现阳性masaspin表达。我们的结果与Reis-Filho等人的研究一致[13.[BCC中的Maspin表达显示为87.5％。但是，在Abdou等人完成的研究中。BCC中的MASPIN表达为48％，可能是由于3个遗产的存在[12.］．在他们的研究中，16％和32％的BCC病例分别显示出麦满的弱和中度表达，并且没有患者具有强烈的麦满表达[12.］．在任何情况下，我们还没有发现Maspin的强烈表达，并且发现弱和中度的Maspin表达式出现在34.9％和39.5％的案件中。

我们的研究结果并不赞有利于MASPIN表达的不同类型的BCC与表达的阳性，强度和表达模式或与患者年龄的任何关联之间的任何差异。此外，我们没有发现MASPIN表达与肿瘤边缘参与之间的任何显着相关性。

Maspin主要是一种可溶性细胞质蛋白质，其在核中的存在是由于通过核膜的被动扩散或由于核心伴细胞核[12.］．一些研究表明，在乳腺癌等多种肿瘤中，maspin的核表达与更好的预后有关[14.]肺的非小细胞癌[15.]，以及胰腺导管腺癌[16.］．Maspin核表达也与喉鳞状细胞癌术后较低的复发率和较长的无病间隔时间相关[17.］．

我们在表达该标记的所有病例的59.4％中检测到MASPIN的核表达，并且其余的样品仅显示细胞质表达。但是，在Abdou等人完成的一项研究中。只有33.3％的阳性病例患有MASPIN的核表达[12.］．我们的发现的重要性将被验证，因为它以前建议皮肤BCC中的Maspin核染色具有肿瘤抑制作用[12.］．Abdou等人在皮肤基底细胞癌中发现maspin的核表达与年龄增大和腺样体变异之间存在显著相关性[12.］．然而，我们没有发现masaspin的核表达与患者年龄和肿瘤边缘受累之间的任何联系。我们也没有检测到腺样体、结节型和形态型之间关于masaspin的核和细胞质表达的任何显著差异。

先前的研究表明，作为ERM (ezrin-radixin-moesin)细胞骨架相关蛋白家族的一员，ezrin的表达与许多类型的人类癌症预后不良相关[18.］．例如，在乳腺癌中，ezrin的胞浆表达与高级别、激素受体负性和淋巴结转移相关[19.］．Ezrin在鳞状细胞癌中的表达高于侵袭性较低的肿瘤，如鲍文氏病、光化性角化病、角化棘皮瘤和脂溢性角化病[9.］．此外，发现EZRIN表达与皮肤的原发性黑色素的转移，肿瘤厚度，进展和侵袭相关[20.］．Ezrin在胃肠道间质肿瘤中过表达与非星形位置和无病生存降低相关[10.］．93%的病例表达Ezrin。我们的结果与之前的研究一致，ezrin染色强度在侵袭性更强的形态型基底细胞癌中明显高于腺样体和结节型。ezrin的表达与患者的年龄或肿瘤浸润边缘无显著相关性。

据我们所知，在基底细胞癌中，maspin作为一种肿瘤抑制产物，与ezrin作为肿瘤进展的标记物的表达没有关系。除结节型外，maspin和ezrin的表达没有显著相关性。maspin与ezrin在该类型眼周肿瘤中的表达呈负相关。

5.结论

我们可以得出结论，无论其亚型，麦满在大多数外观BCC病例中表达，而与结节性和腺样类型的形态BCC，Ezrin强度较高。Maspin和Ezrin表达之间没有关联，除非结节型，其中MASPIN和EZRIN表达之间存在逆相关性。Maspin和Ezrin表达与患者的年龄没有相关性，并且在手术时患者和肿瘤边缘参与。

我们研究的不足之处在于病例数量有限。边缘受累与maspin或ezrin表达缺乏显著相关性，临床意义低，因为值近0.05（和0.058,分别地)。此外，我们患者临床结果数据的缺乏可能会影响我们的结果的临床效用。需要更多的病例来强调这两种肿瘤标志物的表达对BCC的诊断和预后的重要性。我们也建议在眼周基底细胞癌和身体其他部位基底细胞癌中比较maspin和ezrin的表达，因为肿瘤来源的区域可能影响其生物学和临床特征。

利益冲突

作者没有相关的附属机构或财务参与任何组织或实体的财务利益或财务冲突的主题事项或材料在论文中讨论。

承认

这项工作得到了补助金的支持。4180来自Poostchi眼科研究中心，Shiraz医学科学大学，Shiraz，Iran。

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