文摘
背景。早期诊断是非常重要的临床治疗胃癌(GC)和结直肠癌(CRC)。我们旨在检测高尔基磷蛋白质3 (GOLPH3)和评价其诊断价值。材料和方法。血清浓度GOLPH3被ELISA检测到136年CRC患者,102 GC患者,50名健康对照组在福建医科大学第二附属医院从2016年6月到2019年12月。血清CEA浓度和CA19-9 ECLIA探测到。结果。血清浓度GOLPH3、CEA和CA19-9高GC和CRC患者比健康对照组( )。血清GOLPH3浓度增加GC和CRC患者肿瘤大于5厘米,可怜的分化,肿瘤侵犯深度,并增加淋巴和远处转移( )。GC和CRC组,auc GOLPH3高于CEA和CA19-9 ( ),虽然标记组合的auc是高于GOLPH3 ( ),和术后血清GOLPH3水平低于术前水平( )。CRC患者的血清浓度GOLPH3将积极与CEA和CA19-9浓度( )。结论。血清浓度GOLPH3 GC和CRC患者TNM相关阶段。GOLPH3可能代表一种新的生物标志物的GC和CRC的诊断。的结合血清GOLPH3、CEA和CA19-9 GC和CRC的浓度可以提高诊断效率。GOLPH3有望成为一个指标的早期诊断和评价手术效果。
1。介绍
根据2018年GLOBOCAN报告由国际癌症研究机构(IARC),胃和结肠直肠癌(分别为GC和CRC)占15.9%的新癌症病例和死亡的总人数的17.4%,高于其他癌症(1]。筛选健康的人能让肿瘤的早期诊断,从而有效地减少GC和CRC的发病率和死亡率。血清肿瘤标记物对肿瘤的早期诊断定值,但敏感性和特异性的血清癌胚抗原(CEA)和antigen199 (CA19-9)是有限的,通常用于GC和CRC的诊断。因此,寻找新的血清肿瘤标志物具有十分重要的意义。
最近的研究表明,高尔基体磷蛋白质3 (GOLPH3)作为外围trans-Golgi网络中的膜蛋白(TGN)。GOLPH3是一种新型肿瘤蛋白与细胞信号转导和由压力可能是动员2]。在一项由胡锦涛et al .,在GC患者血清GOLPH3浓度显著高于健康人,但是血清的临床价值为GC GOLPH3没有进一步评估(3]。此外,风扇等人报道,卵巢癌患者血清GOLPH3水平显著高于健康人群。此外,患者的血清GOLPH3水平比术前后显著降低。有人建议,血清GOLPH3浓度可以被认为是一个指数对卵巢癌的诊断和手术效果评价(4]。通过分析GOLPH3表达的差异在癌症患者和健康人之间,陆等人发现,血清GOLPH3膀胱癌的早期诊断价值,ROC曲线下面积(AUC) 0.948和特异性和敏感性的92.5%和83.8%,分别为(5]。血清的临床价值GOLPH3浓度在其他癌症还没有报道。
本研究旨在检测血清浓度GOLPH3 GC和CRC患者,探讨其临床意义。
2。材料和方法
2.1。临床样品和病理资料
总共有238 GC和CRC患者第一次诊断福建医科大学第二附属医院从2016年6月到2019年12月,包括136 CRC患者和102 GC患者,被录取;50名健康对照组同期也包括在内。血清样本收集的所有患者在治疗前3天;样本收集从225年病人根治手术(128 CRC患者和97 GC患者) 和 手术后。所有患者签署了审判伦理知情同意的形式审查,经医院伦理委员会批准。第八版的UICC /与TNM分期系统是用于GC和CRC临床分期。
2.2。Oncomine数据库分析
本研究开始之前,我们使用了Oncomine数据库(https://www.oncomine.org)下载一个现有的癌症微阵列数据集澄清GOLPH3 GC和CRC的mRNA表达状态。Oncomine过滤器指数设置与搜索模式设置为“GOLPH3”基因。主要的过滤器设置差异分析“癌症与正常组织”和癌症“胃癌”和“结直肠癌。“数据集过滤器设置为数据类型”信使rna,“和统计结果表明微分mRNA的表达GOLPH3 GC / CRC和正常组织之间,包括样本量,价值,褶皱变化,统计箱线图。
2.3。检测血清GOLPH3、CEA和CA19-9浓度
空腹静脉血外围收集(4 - 5毫升)患者和健康对照组。所有样品都是在室温下放置2 h和离心机在3000 r / min 5分钟。样品是用移液器吸取到聚丙烯管(EP管)和存储在-20°C。样品的溶血发生被丢弃。样品在室温下解冻和混合避免泡沫的生产。
使用酶联免疫吸附试验检测血清GOLPH3浓度工具包(ELISA,从MyBioSource购买)(标准曲线范围:0.2 ng / mL-60 ng / mL;灵敏度:0.11 ng / mL;intra-assay: ;interassay: )。板井带平衡在室温下30分钟,分为标准井和样本井。50毫升标准的解决方案是用移液器吸取,20μ样例和30 LμL的稀释溶液(2.5倍稀释)同时添加到盘子里。除了空白威尔斯,100μL的辣根过氧化物酶(合)检测抗体标记被添加到每个标准井和样本井,在37°C和盘子孵化60分钟。然后洗盘子;350年μL使用的清洗解决方案是稀释和洗4次样品。接下来,50μA和B L每个显色的解决方案是添加到每个。孵化后37°C在黑暗中15分钟,50μL反应的停止的解决方案是添加到每个终止反应。15分钟内OD450价值评估。标准溶液的吸光度值计算,以标准溶液浓度的对数为轴和标准溶液的吸光度的对数轴;标准曲线绘制使用Excel工作表。相应的样品浓度测定在曲线上使用不同的样品的光吸收值。结果乘以稀释系数2.5以获得最终的样品浓度在ng / mL。
使用电化学发光免疫分析法(ECLIA)东航定量测定试剂盒和CA19-9决心装备从罗氏诊断有限公司购买,检测血清CEA和CA19-9浓度。东航的正常参考值范围是假定为0 - 5.2 ng / mL, CA19-9 0-37 U /毫升。实验操作进行严格按照指令。
2.4。统计分析
统计分析了使用IBM SPSS统计软件,版本25.0(美国纽约阿蒙克的IBM公司)。每组的数据首先接受一个正态分布测试(Shapiro-Wilk测试)。测量数据的非正态的分布,比较两组是由使用Mann-Whitney测试和组间差异比较利用克鲁斯卡尔-沃利斯测试。Wilcoxon测试来比较手术前后血清GOLPH3的浓度。GOLPH3的预测能力,东航,CA19-9,所有的组合3两种癌症标记是由逻辑回归。接受者操作特征(ROC)曲线在SPSS计算绘制ROC曲线下的面积(AUC)和95%可信区间(CI)的肿瘤标志物。Youden指数(灵敏度+ specificity-1)计算与Excel。比较两个进行了auc德龙的算法通过使用MedCalc统计软件版本15.2.2 (MedCalc软件投资兴建,奥斯坦德,比利时)。斯皮尔曼相关系数的计算评估GOLPH3之间相关性,东航,CA19-9表达水平。上面的统计测试是双面的,值< 0.05被认为是显著的。值被Bonferroni调整修正为多个组间比较。相应的实验数据用GraphPad Prism 8.3版本软件(GraphPad软件公司,拉霍亚,CA,美国)。
3所示。结果
3.1。Oncomine数据库分析证实Upregulation GOLPH3 mRNA在GC和CRC
基于先前的研究表明,GOLPH3蛋白表达是调节在GC和CRC组织,我们进行了数据挖掘和分析GOLPH3转录配置文件数据的现有数据集和比较mRNA的表达GOLPH3 GC / CRC和正常组织。根据统计分析的数据从公开Oncomine下载数据库,GOLPH3 GC和CRC的mRNA表达高于正常组织(图1)。
(一)
(b)
3.2。血清浓度GOLPH3、CEA和CA19-9 GC和CRC患者和健康对照组
血清GOLPH3浓度为6.49(5.61 - -7.90)在GC ng / mL患者和7.67 (5.51 - -12.75)ng / mL CRC患者明显高于2.78 (2.25 - -4.12)ng / mL健康对照组( )(表1和图2)。血清CEA和CA19-9浓度也在GC和CRC患者明显高于健康对照组( )。
(一)
(b)
(c)
3.3。血清浓度差异GOLPH3、CEA和CA19-9根据GC和CRC的临床特点
浓度GOLPH3 GC和CRC患者的血清与肿瘤大小有关,肿瘤侵犯深度、细胞分化、淋巴结转移和远处转移。此外,患者的血清浓度的GOLPH3肿瘤大小超过5厘米,深度渗透,分化差、淋巴结转移、远处转移和肿瘤的患者明显高于那些小于5厘米,浅渗透,更好的分化,没有淋巴结转移和远处转移( )。相比之下,在其他因素没有显著差异,比如年龄和性别,观察血清GOLPH3浓度(表2)。
3.4。比较血清GOLPH3不同阶段患者和健康对照组之间
GC患者的血清浓度GOLPH3在每个阶段(II-IV)明显高于健康对照组(所有 ,图3(一个)),尽管没有明显区别我和健康对照组病人阶段。此外,血清浓度GOLPH3 CRC患者在每个阶段(I-IV)明显高于健康对照组(所有 ,图3 (b)),有显著性差异的平均血清浓度GOLPH3 GC或CRC患者不同阶段( )。
(一)
(b)
3.5。诊断血清GOLPH3的功效、CEA和CA19-9浓度GC和CRC患者
的auc GOLPH3、CEA和CA19-9在GC患者0.881(95%置信区间:0.824—-0.939, ),0.858(95%置信区间:0.796—-0.919, ),和0.674(95%置信区间:0.587—-0.760 ),分别。GOLPH3 ROC曲线(图4(一)),Youden指数是0.654,它对应于一个血清GOLPH3浓度4.24 ng / mL,这是本研究的截断值。在这个截断值(表3),血清GOLPH3浓度GC诊断的敏感性是85.3%,特异性是80.0%。标志组合的AUC是0.946(95%置信区间:0.908—-0.984, )。减法的auc组合- GOLPH3是0.065,值是2.693, 。诊断价值的不同组合和GOLPH3之间在统计学上意义重大。三个标记的组合的诊断疗效高于GOLPH3。
(一)
(b)
的auc GOLPH3、CEA和CA19-9 CRC是0.888(95%置信区间:0.840—-0.935, ),0.857(95%置信区间:0.790—-0.923, ),和0.700(95%置信区间:0.623—-0.778 ),分别。GOLPH3 ROC曲线(图4 (b)),Youden指数0.638,截断值对应的血清浓度GOLPH3 4.24 ng / mL。在这个截断值(表3),血清的敏感性GOLPH3浓度CRC的诊断为83.8%,特异性为80.0%,和标记组合AUC为0.938(95%置信区间:0.902—-0.974, )。减法的auc组合- GOLPH3是0.050,值是2.422, 。此外,诊断价值的差异之间的组合和GOLPH3统计学意义,并结合的诊断效力高于GOLPH3。
3.6。比较水平的血清GOLPH3 GC和CRC患者手术前后
136年九十七102 GC患者和128 CRC激进手术患者。血清样本收集1周( )和1个月( )手术后。Wilcoxon测试被用来分析根治手术前后血清GOLPH3浓度的影响,结果表明,根治手术前后血清GOLPH3浓度的差异具有统计学意义( )。
成对比较表明没有统计上的显著差异在手术后1周血清GOLPH3浓度(平均6.19 ng / mL)和手术前(中位数6.38 ng / mL)在GC患者( )。与之前或手术后1周相比,差异具有统计学意义在手术后一个月(平均4.27 ng / mL) ( )(图5(一个))。在CRC患者,血清GOLPH3浓度的差异在1周后(平均7.31 ng / mL)和(平均7.38 ng / mL)手术前也显著( ),就像之前或之间的区别1周后手术和手术后一个月(平均5.43 ng / mL) ( )(图5 (b))。的价值被Bonferroni纠正方法。
(一)
(b)
3.7。血清GOLPH3之间的相关性、CEA和CA19-9浓度GC和CRC患者
血清之间没有显著相关性GOLPH3浓度和血清CEA和CA19-9浓度GC的病人。然而,CRC患者的血清浓度GOLPH3将积极与血清CEA和CA19-9浓度,以及相关显著(表4)。
4所示。讨论
早期临床检查方法为GC和CRC包括胃肠道内窥镜、胃肠造影,肿瘤标记物。由于其精度高、内窥镜检查是确诊的金标准的GC和CRC;尽管其安全性和便利性,很难用于大规模筛查。相反,肿瘤标志物检测的优点是无创、方便,高度可重复,更容易被患者接受。事实上,它被广泛用于胃肠道肿瘤的筛查和早期诊断,帮助评估预后。
大量的国际研究已经证实GOLPH3 protooncogene是各种固体癌症组织中高度表达,高恶性肿瘤和不良预后有关6- - - - - -10]。许多研究相关GOLPH3致肿瘤性AKT / mTOR, MAPK / ERK JAK2 / STAT3和Wnt /β连环蛋白信号通路。肿瘤细胞体外实验或实验裸鼠澄清GOLPH3蛋白质的作用在癌症细胞增殖、转移和血管生成(11]。此外,我们以前的研究证实,GOLPH3 CRC组织基因表达调节。GOLPH3能促进肿瘤细胞增殖在结肠癌PI3K / Akt / mTOR和Wnt /β连环蛋白的信号,它的超表达可以被认为是一个重要标志,来评估预后的CRC (12,13]。通过一系列的实验,我们发现GOLPH3的表达增加结肠癌HT29细胞对5 -氟尿嘧啶(研究者用)。沉默GOLPH3基因增强HT29细胞研究者用化疗的敏感性(14],GOLPH3-induced HT29细胞对顺铂的化疗抵抗包括相同的分子通路(15]。
在这项研究中,我们调查是否GOLPH3可以用作肿瘤早期诊断和预后的标志在GC和CRC患者。GC和CRC患者血清GOLPH3浓度明显高于健康对照组。血清GOLPH3和临床病理参数的关系进行了分析。总的来说,我们的研究结果表明,血清GOLPH3可能反映肿瘤侵犯的深度与淋巴结和远处转移。因此,GOLPH3可能是一个很好的指标来评估局部淋巴或远处转移的GC和CRC。不同血清浓度GOLPH3 GC和CRC患者手术前后之间明显,表明GOLPH3可以用作GC和CRC预后指标。
肿瘤标记物CEA和CA19-9广泛用于诊断、监测、随访和预后GC测定和CRC患者。一般来说,联合检测可以提高预测精度的方法。例如,术前血清CEA、CA19-9和CA125水平可以用来预测resectability胆管癌(16]。王等人发现,联合检测CA125和了无可能提高诊断效率的肺癌肝转移(17]。根据乔et al ., scCD147和scMMP-9可以独立因素的预测化疗的结果,提出提高诊断效率,结合scCD147和scMMP-9 [18]。在我们的研究中,ROC曲线分析的结果表明,血清GOLPH3 AUC很高。GOLPH3可能因此被应用作为一种新的肿瘤标记GC和CRC和更高的诊断效能结合CEA和CA19-9检测。
我们还发现,在CRC患者,术前血清浓度GOLPH3积极与血清CEA和CA19-9浓度相关。高尔基体是蛋白质糖基化的主要网站和糖蛋白的糖链结构对蛋白质分泌至关重要。他们可以影响蛋白质折叠和调解运输和蛋白定位在分泌途径(19]。GOLPH3在肿瘤发生中的作用可能与其参与相关蛋白质运输从高尔基体到质膜和增加癌症相关的糖蛋白的糖基化3]。我们推测,GOLPH3可能参与糖基化处理和CEA和CA19-9运输。
总之,在GC和CRC患者血清GOLPH3浓度高于健康对照组。此外,患者肿瘤分化差、分期晚期血清GOLPH3浓度较高。结合检测GOLPH3、CEA和CA19-9可能作为一种新的诊断方法和索引激进手术后评价手术效果,和GOLPH3可能作为一种新的肿瘤标记为GC和CRC。
应该注意的是,患者在本研究从一个中心,本研究样本量不足和缺乏长期随访。因此,进一步研究GOLPH3作为GC和CRC的预后指标是必要的,而且我们相信GOLPH3之间的相关性和胃肠道肿瘤在后续研究将变得更清楚。GOLPH3可能重要的价值为监测GC和CRC的复发和有针对性的治疗。
5。结论
血清浓度GOLPH3 GC和CRC患者TNM相关阶段。GOLPH3可能代表一种新的生物标志物的GC和CRC的诊断。的结合血清GOLPH3、CEA和CA19-9浓度可以为GC和CRC提高诊断效率。GOLPH3有望成为早期诊断和评价指标的手术结果。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
与本文相关的利益冲突并没有报道。
确认
我们真诚感谢耿道和Xiaorong林系的实验室福建医科大学第二附属医院(中国福建泉州)和Mingzhen王从厦门的第五医院(厦门、福建、中国)对他们的帮助。本研究支持的福建省医疗创新项目(批准号2017 - cxb - 7),中国福建省自然科学基金(批准号2020 j01202),福建省卫生技术项目(批准号2020 ggb035)。