文摘

非小细胞肺癌(NSCLC)是全球最常见的癌症之一。越来越多的证据表明,异常表达的小分子核糖核酸(microrna)参与致癌和非小细胞肺癌的进展。目前的研究旨在调查血清mir - 629在NSCLC的临床意义。表达与非小细胞肺癌患者的血清mir - 629水平,良性的肺部疾病,患者和健康对照组被实时定量聚合酶链反应评估。我们的研究结果表明,血清mir - 629水平相比,非小细胞肺癌患者显著调节控制。血清mir - 629表现出更好的性能差别非小细胞肺癌患者与健康对照组,相比传统的生物标志物CYFRA 21-1和CEA。此外,高血清mir - 629水平呈正相关,不良临床病理参数包括淋巴结转移、分化、和临床阶段。血清mir - 629大幅减少在非小细胞肺癌患者接受手术治疗。此外,高血清mir - 629组的患者遭受贫穷的整体存活率和无病生存期比低血清mir - 629组。总之,血清mir - 629可能作为一种潜在的非小细胞肺癌预后的生物标志物。

1。介绍

肺癌是最常见的癌症之一,到目前为止世界上癌症相关的死亡率的主要原因。非小细胞肺癌(NSCLC)占大约85%的肺癌(1]。非小细胞肺癌的发病率和死亡率仍在发达国家和发展中国家(每年增加2]。遗传易感性,不良的饮食习惯、职业暴露和吸烟是主要的非小细胞肺癌的危险因素。目前,非小细胞肺癌的治疗方法包括手术、免疫疗法,放射治疗和靶向治疗3]。虽然已经取得了很大的进步在改善治疗策略,非小细胞肺癌的预后仍然贫穷,5年总体生存率只有15% (4,5]。因此,发展高效的生物标志物对预后的预测非小细胞肺癌对改善非小细胞肺癌的临床结果至关重要。

小分子核糖核酸(microrna)是一类高度保守的小非编码rna基因表达的转录后的调控中发挥作用6,7]。microrna已确定参与多样化的生物过程,如细胞分化、增殖、凋亡和开发过程8]。此外,异常的microrna的表达一直在观察不同类型的人类癌症包括非小细胞肺癌(9]。例如,过度的mir - 154显著压抑的非小细胞肺癌细胞的迁移和入侵的能力在体外,这表明mir - 154可能是一个潜在的抗癌治疗非小细胞肺癌(目标10]。同样,据报道,mir - 101作为一个肿瘤抑制microrna在非小细胞肺癌11]。

先前的研究已经表明,mir - 629是各种癌症中高度表达,如肺腺癌、胃癌、胰腺癌(12- - - - - -15]。然而,在非小细胞肺癌血清mir - 629的临床意义尚不清楚。因此,本研究的目的是确定血清mir - 629的表达水平在非小细胞肺癌和探索其潜在的预后价值。

2。材料和方法

2.1。招聘和样本收集

这项研究得到了伦理道德委员会批准北京积水潭医院,协议是按照《赫尔辛基宣言》。从每个参与者书面知情同意了。总共166与非小细胞肺癌患者,70例肺良性的疾病,和100名健康志愿者参与我们的研究。所有的非小细胞肺癌病例病理证实。参与者的详细信息如表所示1。良性的肺部疾病患者和健康对照组与非小细胞肺癌病例的年龄和性别。血清是由离心分离血液在室温下10分钟的1200克。所有提取血清样本存储在−80°C,直到进一步的分析。

表1
研究对象的临床信息。
2.2。RNA提取和存在

一个miRNeasy血清/血浆工具包(试剂盒、希尔登,德国)被用来从血清样本中提取总RNA。RNA质量和浓度进行评估使用NanoDrop™1000分光光度计(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)。的OD260年/ OD280年比率是1.8 - -2.2,OD260年/ OD230年比率是2.0 - -2.2。互补DNA合成的逆转录反应使用TaqMan微rna逆转录工具包(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。定量实时PCR的相对量化血清mir - 629进行了使用miScript SYBR绿色PCR试剂盒(试剂盒)7500实时PCR系统(应用生物系统公司)。PCR条件为5分钟95°C,紧随其后的是40周期在94°C 15秒55°C,持续30秒。停在Cel-miR-39被用作标准化者血清mir - 629量化。相对的血清mir - 629水平进行了计算通过2- - - - - -ΔΔCt方法。

2.3。酶联免疫吸附试验

CYFRA21-1和癌胚抗原(CEA)在非小细胞肺癌患者和健康者与CYFRA21-1测定酶联免疫试剂盒(美国MyBioSource,圣地亚哥,CA)和人类癌胚抗原酶联免疫试剂盒(MyBioSource),分别。

2.4。统计分析

血清mir - 629水平之间的差异和在不同组由Mann-Whitney决定 - - - - - -测试或克鲁斯卡尔-沃利斯检验。接受者操作特征(ROC)曲线和ROC曲线下的面积(AUC)生成评估血清mir - 629的诊断准确性,CYFRA 21-1,和CEA。总体生存和无病生存被kaplan meier评估分析和生存率较。使用GraphPad Prism 7.0执行统计分析软件(GraphPad棱镜软件公司,拉霍亚,CA,美国)。一个 值小于0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。血清mir - 629水平显著调节在非小细胞肺癌

mir - 629的表达水平在166年研究非小细胞肺癌患者中,70例肺良性的疾病,和100名健康对照定量rt - pcr。intra-assay和interassay变异系数(CV)血清mir - 629如下:非小细胞肺癌组(intra-assay ,interassay ),良性的肺部疾病组(intra-assay ,interassay ),和健康对照组(intra-assay ,inter-assay )。我们的研究结果表明,血清mir - 629的表达水平明显高于非小细胞肺癌患者比非恶性的肺部疾病患者和健康对照组( )。没有发现显著差异之间良性的肺部疾病患者和健康对照组( )(图1)。


图1
血清mir - 629的表达水平显著提高NSCLC患者相比,在良性的肺部疾病和健康对照组。
3.2。非小细胞肺癌的诊断血清mir - 629的潜力

血清mir - 629为非小细胞肺癌的诊断价值与ROC曲线进行了分析。结果表明,血清mir - 629的AUC值判别非小细胞肺癌患者的健康对照组为0.835(图2(一个)),高于CYFRA 21-1 ( )(图2 (b))和CEA ( )(图2 (c))。

(一)
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(c)
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图2
诊断的准确性为非小细胞肺癌血清mir - 629。(一)诊断血清mir - 629的性能差别非小细胞肺癌患者与健康对照组。(b)的诊断性能CYFRA 21-1歧视NSCLC患者健康对照组。(c)的诊断性能东航歧视NSCLC患者健康对照组。
3.3。血清mir - 629之间的关系表达与非小细胞肺癌的临床病理特征

如图3,非小细胞肺癌患者低分化等级( ),积极的淋巴结转移( ),或高级临床阶段( )血清mir - 629水平要明显高于那些/中度分化等级,负面的淋巴结转移,早期临床阶段。此外,血清mir - 629之间没有发现显著差异和其它临床病理的分析参数包括年龄( ),性别( ),主要位置( ),吸烟史( ),和组织学类型( )。


图3
血清mir - 629水平之间的关系和非小细胞肺癌临床病理参数。
3.4。血清mir - 629表达之间的关系以及生存和治疗反应

共有135名非小细胞肺癌患者在这个群体接受手术治疗。然后我们比较血清mir - 629水平进行预处理样品和posttreated样本。我们的研究结果表明,血清mir - 629水平显著减少在非小细胞肺癌患者手术治疗后( )(图4(一))。表达式中值显示血清mir - 629水平,非小细胞肺癌患者分为高表达组( )和一个低表达组( )。kaplan meier分析表明,高血清mir - 629组患者明显短总体存活率比低血清mir - 629组( )(图4 (b))。此外,更高层次的患者血清mir - 629已经糟DFS与血清mir - 629水平较低( )(图4 (c))。

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(b)
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图4
血清mir - 629水平之间的关系及治疗反应,以及在非小细胞肺癌生存。(一)血清mir - 629水平手术治疗后显著增加。(b, c)高的患者血清mir - 629组总体存活率和无病生存比那些低血清mir - 629组。

4所示。讨论

在这项研究中,我们已经表明,血清mir - 629在NSCLC患者显著调节。此外,血清mir - 629与非小细胞肺癌患者的分化良好健康对照组。此外,治疗后血清mir - 629的表达明显减少。非小细胞肺癌患者血清mir - 629高表达更糟糕的临床特点和预后。这些发现可能表明,血清mir - 629可能作为小说潜在的非小细胞肺癌预后的生物标志物。

与我们的研究结果一致,积极水平之间的相关性被发现mir - 629和肿瘤侵犯肺腺癌(LUAD)标本。此外,过度的mir - 629肺癌细胞的侵袭性能力增强,表明mir - 629肿瘤促进作用在LUAD [12]。同样,mir - 629 - 3 - p也发现调节LUAD组织和细胞系。执行mir - 629 - 3 - p的表达促进细胞增殖通过下调SFTPC[的表达13]。

异常表达mir - 629也报告了其他类型的癌症。例如,李等人表明,mir - 629的表达是胃癌的调节。异位表达mir - 629抑制胃癌细胞增殖和促进细胞凋亡针对FOXO3 [14)同样,燕等人表明,mir - 629表达明显调节在胰腺癌组织中。mir - 629超表达增强胰腺癌细胞的细胞增殖和转移在体外和在活的有机体内(15]。施等人报道,mir - 629组织和血清样本中显著增加胰腺癌患者。此外,血清mir - 629被证明是一种很有前途的生物标志物对胰腺癌的诊断和预后16]。mir - 629的表达也与tipifarnib阻力在乳腺癌细胞系(17]。道等人报道,mir - 629显著调节肝细胞癌(HCC)组织中与相邻正常组织。此外,一个在体外试验表明,过度的mir - 629推广扩散,迁移,和肝癌细胞的侵袭性,而击倒mir - 629导致相反的效果(18]。在结直肠癌,mir - 629被发现显著调节在大肠癌组织和细胞系,upregulation增强mir - 629细胞增殖和迁移以及直接抑制细胞凋亡的表达下调CXXC4 [19]。

我们研究的潜在的局限性之一是相对比较小的样本大小。样本量大,迫切需要进一步的研究来验证我们的发现。此外,正如我们上面所讨论的,血清mir - 629也可能是调节在其他类型的癌症或其他人类疾病。因此,结合血清mir - 629,目前已知的生物标记为非小细胞肺癌的临床参数可能有助于改善非小细胞肺癌的诊断和预后的预测。此外,在非小细胞肺癌肿瘤促进作用的分子机制会计需要进一步调查。

总之,我们所知,这是第一个研究报告,血清mir - 629在NSCLC调节。增加血清mir - 629水平与非小细胞肺癌的临床疗效不佳有关,表明血清mir - 629可能作为一种很有前途的和小说为非小细胞肺癌预后生物标志物。

数据可用性

的数据支持本研究的发现可以从相应的作者在合理的请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

刘博士财政年度,李博士TS,胡博士P,和戴博士L设计研究中,进行了实验,分析数据,并写了手稿。所有作者都阅读和批准了最终版本的手稿。