文摘

背景。GA-binding蛋白质(GABPA)、转录因子,广泛参与生理和病理过程。几项研究已经调查之间的关系GABPA各种恶性肿瘤的表达水平和成果。然而,功能和GABPA在子宫内膜癌的临床病理的意义(EC)仍不清楚。方法。EC GABPA mRNA表达的组织和相邻,TCGA数据库中的非肿瘤的组织参与我们的研究。107年GABPA EC的蛋白表达组织和15名正常子宫内膜组织是通过免疫组织化学方法检测到。结果。GABPA表达显著下调在EC组织与正常组织的表达( )。GABPA是明显的表达与II型EC ( )和三年级EC ( )。趋势已经观察到患者低GABPA水平相对贫穷的总生存期(OS) ( )和无病生存期(DFS) ( )比高患者GABPA水平。多变量Cox比例风险模型表明,低表达GABPA差是一个独立的预后因素操作系统( )和DFS ( )。类似GABPA表达水平低与不利预后之间的相关性也被发现在II型或三年级EC。包含IHC分析显示EC GABPA组织表达较低,这说明预后相对较差。此外,我们发现,GABPA mRNA表达与甲基化水平负相关( , )这是GABPA基因沉默的机制之一。结论。GABPA可能作为临床预后的独立预测因子,作为电子商务的一个潜在的目标基因疗法。

1。介绍

子宫内膜癌(EC)是最常见的妇科恶性肿瘤之一,发病率上升大约1.3%每年在过去的10年。据估计,大约65620个新电子商务案例将诊断在美国和大约12590名女性将死于2020年欧共体(1]。它主要发生在女性55岁和65岁之间2]。但是随着生育率的持续下降和增加肥胖、EC的发病率正在增加在年轻女性1]。当前的电子商务策略包括手术治疗和辅助治疗,如化疗、放疗、激素疗法、免疫疗法。手术是欧共体的一线治疗,也是疾病的综合治疗的基础,尤其是对早期电子商务。高风险EC的特点是更高的等级,高级阶段,或nonendometrioid组织学(3]。约15%至20%的EC患者伴有高危疾病,预后差(4]。尽管新的抗肿瘤制剂和更有效的联合治疗,据报道,四期患者的5年生存率大约是17%5]。因此,重要的是要探索新的分子标记和识别潜在的治疗靶点。

E26转换的(ETS)家族的转录因子包括30个不同的成员,在发展中扮演关键角色,细胞分化和肿瘤形成6]。GA-binding蛋白质(GABPA)的ETS是独一无二的因素,这是一个专multimeric蛋白质复杂的调节DNA结合转录(7]。此外,GABPA交互与其他转录因子或辅活化因子调节多种基因的表达,参与了一系列复杂的生理和病理过程(8]。

GABPA参与维护和分化的造血干细胞(hsc)通过激活的转录DNA甲基转移酶和组蛋白乙酰基转移酶(9]。此外,需要GABPA增殖和分化的骨髓和淋巴细胞(10,11]。GABPA还控制着线粒体功能相关基因的表达,及其失活导致早期胚胎杀伤力(12]。此外,GABPA扮演了一个主要的直接参与细胞周期进展(13,14]。之前报道,条件删除GABPA在小鼠胚胎成纤维细胞(mef)会导致功能障碍在细胞周期进展,包括延迟在G1年代过渡,减少数量的细胞进入细胞周期(15,16]。几项研究已经显示的异常表达GABPA有关穷人生存在各种癌症,包括白血病、肝癌、甲状腺癌、膀胱癌、前列腺癌(6,17- - - - - -22]。GABPA参与EC仍不清楚。

为了评估GABPA是否可以作为欧共体的预后因子,我们检查了GABPA EC在mRNA和蛋白表达水平的组织。GABPA的表达水平之间的关系和临床病理特点和预后价值在EC评估。此外,我们已经初步探索GABPA的差别上的机制对这些基因的表达。

2。材料和方法

2.1。TCGA数据集

癌症基因组图谱(TCGA)项目,是由国家癌症研究所和国家人类基因组研究所,是一个具有里程碑意义的项目旨在全面阐明分子变化在致癌作用和肿瘤进展和癌症基因组数据链接到病人的临床资料。RNA-seq表达数据(543例)、临床数据和甲基化数据(如检测到Illumina公司HumanMethylation450 BeadChip)从TCGA官方网站下载了子宫语料库子宫内膜癌(UCEC)项目在2019年10月。

2.2。病人和标本

从2010年2月到2014年12月,107年电子商务组织和15的良性的组织选择山东大学齐鲁医院的病理石蜡切片。所有的患者接受化疗或放疗前的操作。我们的研究是通过山东大学齐鲁医院医学伦理委员会。所有样品都是鉴定和作为完全匿名提供样本。所有患者的随访数据通过面试或电话。

2.3。Hematoxylin-Eosin和免疫组织化学染色

组织与中性10%福尔马林固定石蜡和嵌入式,和4μ米厚的部分是由病理技术员。hematoxylin-eosin染色(圆))染色,部分醇脱蜡和水分梯度。沉浸在磷酸缓冲盐(PBS)后,部分被沾染了)。免疫组织化学染色(包含IHC)是由标准染色程序如前所述[23]。GABPA抗体(1:21542 - 1 - ap)购买从Proteintech(武汉,中国)。

2.4。评价免疫染色

GABPA的表达是根据免疫反应性的评估分数(IRS),由评估阳性肿瘤细胞的比例,得分为0(≤5%阳性肿瘤细胞),1阳性肿瘤细胞(6 - 25%),2(26 - 50%阳性肿瘤细胞),3(51 - 75%阳性肿瘤细胞)和4(≥76%阳性肿瘤细胞)和染色的强度,评分为0(负面),1(弱),2(中度),3(强)。染色强度得分然后乘以阳性细胞的比例获得每个样本的免疫反应性的得分,从0到12。为了方便统计评估,GABPA蛋白表达水平是根据半定量的重新分类计划。被定义为低水平的表达 ,和被定义为高水平的表达 。

2.5。统计分析

执行统计分析使用GraphPad Prism 8.0(美国GraphPad软件,圣地亚哥,CA)和IBM SPSS 21.0软件(美国纽约IBM SPSS,阿蒙克)。详细的统计方法是前面描述的23]。GABPA基因甲基化水平和mRNA表达之间的关系由相关分析探讨。统计学意义是由 。

3所示。结果

3.1。EC患者GABPA mRNA的表达和临床病理特征

RNA-seq和543例的临床资料遭受EC UCEC从TCGA官方网站下载。没有患者新辅助治疗的历史。前一个癌症患者历史或多原发性肿瘤的诊断、病人的随访时间小于30天或超过8年手术后,患者复发或死亡后30天内操作被排除在外。最后,490名患者,TCGA参与分析。为了定义真正的“高”和“低水平”,病人携带EC TCGA分为两组,表达低( )或高GABPA水平( )(表1)。

表1
临床病理的特点。

490名患者的临床病理学特点携带电子商务涉及归纳在表格1。患者的平均年龄为63.70岁( ),我和大多数病人阶段EC (62.86%)。大部分患者(76.94%)诊断为endometrioid子宫内膜腺癌,其次是浆液性子宫内膜腺癌(18.78%)和混合型(4.28%)。总之,患者携带三年级EC(58.16%)是最常见的。其他临床特征详细表1。

GABPA表达显著下调在EC组织相比,其表达在正常子宫内膜组织( )(图1(一))。符合这一发现,在23个成对样品分析表明,GABPA EC的表达明显低于在邻近正常组织( )(图1 (b)),GABPA表达式在EC的病理类型与正常子宫内膜组织相比显著降低( )(图1 (c))。此外,GABPA II型EC表达明显相关( )(图1 (d))和三年级EC ( )(图1 (e))。然而,之间没有显著相关性GABPA表达和肿瘤阶段( )(图1 (f))。

(一)
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(b)
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(e)
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图1
的表达GABPA TCGA分析了EC患者数据库。(a)的转录水平GABPA EC组织和正常子宫内膜组织。(b)的表达GABPA在23个配对样本(EC组织及其邻近的正常组织)。(c) GABPA的表达在不同病理类型的电子商务。(d)的表达GABPA EC的两种类型。(e)的表达在不同等级的EC GABPA。(f)的表达GABPA EC的不同阶段。
3.2。GABPA mRNA表达和分析EC患者生存时间

kaplan meier生存分析被用来评估GABPA EC患者的预后价值。GABPA表达水平低的患者比患者相对贫穷的OS GABPA高表达水平(人力资源:0.488,CI: 0.258 - -0.922, )(图2(一个))。我们也发现了类似的趋势在DFS(人力资源:0.585,CI: 0.381 - -0.897, )(图2 (b))。

(一)
(一)
(b)
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图2
kaplan meier生存分析TCGA GABPA表达式EC患者的数据库。(a)的影响GABPA表情EC患者的总生存期。(b)的影响GABPA表情EC患者的无病生存。

鉴于II型EC与不良预后相关,我们进一步分析GABPA II型EC患者的表达。与低表达组相比,高表达组表现出更好的操作系统(人力资源:0.290,CI: 0.096 - -0.874, )和DFS(人力资源:0.406,CI: 0.182 - -0.905, )在II型EC(数字3(一个)和3 (b))。此外,我们发现GABPA的低表达与操作系统负相关(人力资源:0.383,CI: 0.187 - -0.784, )三年级EC患者,类似的研究结果给出了分析DFS(人力资源:0.434,CI: 0.256 - -0.734, )(数据3 (c)和3 (d))。

(一)
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(b)
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(c)
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图3
GABPA表达式的子群分析EC患者TCGA的数据库。(a)的影响GABPA表情II型EC患者的总体生存。(b)的影响GABPA表情II型EC患者的无病生存。(c) GABPA表达式对整体存活率的影响3年级EC患者。(d)的影响GABPA表情成绩3 EC患者的无病生存。
3.3。EC患者的预后价值GABPA mRNA

在单变量分析中,GABPA的低表达与预后不良的操作系统(人力资源:0.487,CI: 0.246 - -0.966, )(表2)和DFS(人力资源:0.584,CI: 0.375 - -0.910, )(表3在电子商务。其他临床病理特征与贫穷有关生存包括II型、优质和晚期(表2和3)。在多变量COX回归,GABPA被确认为一个独立的预后标记操作系统(人力资源:0.491,CI: 0.246 - -0.977, )(表2)和DFS(人力资源:0.619,CI: 0.397 - -0.966, )(表3)。

表2
单变量和多变量Cox回归分析EC GABPA表达和总生存期的患者。
表3
单变量和多变量Cox回归分析GABPA表达和EC患者的无病生存。
3.4。的表达GABPA蛋白质和EC患者的临床病理特点

为了进一步澄清GABPA的蛋白质表达水平和本地化电子商务组织,我们执行包含IHC染色107 EC组织和15正常子宫内膜组织。后续数据100年107 EC患者的队列。EC患者的临床病理的特点详细的表4。研究结果与之前的研究结果一致,1级肿瘤患者最常见(43.93%),和三年级肿瘤是最常见(22.43%)。深子宫肌层的入侵是观察到33.64%的患者和9.35%患者的宫颈入侵。包含IHC染色显示GABPA表达式是ECs(图中高度异构4),分布在细胞核和细胞质。在这项研究中,美国国税局是基于核染色因为没有显著的相关性被发现之间的胞质染色和临床病理的特点或预后。在EC GABPA组织的表达也与正常组织相比下降(图5 (c))。它还透露,低GABPA表达式是食道癌患者的59.81% (64/107)。

表4
临床病理的特点。
(一)
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(b)
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(c)
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(d)
(d)
图4
代表在EC GABPA组织的免疫组织化学染色。(一)空白控制染色。(b)弱强度。(c)中等强度。(d)强烈的强度。
(一)
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(b)
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(c)
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图5
的表达GABPA包含IHC EC患者进行了分析。(一)GABPA在正常组织的表达。(b)在EC GABPA组织的表达。在EC (c)的蛋白质水平GABPA组织和正常组织。
3.5。的表达GABPA蛋白质和EC患者的预后

接下来,GABPA蛋白表达与操作系统之间的关系在EC患者评估kaplan meier分析和生存率较。EC患者低GABPA表达式的操作系统都很短而高的表达式(人力资源:0.257,CI: 0.103 - -0.638, )(图6(一))。我们发现了同样的趋势在DFS(人力资源:0.373,CI: 0.163 - -0.852, )(图6 (b))。这些结果表明,GABPA低表达患者预后较差。在多变量COX回归,GABPA被确认为一个独立的预后标记操作系统(人力资源:0.267,CI: 0.078 - -0.918, )(表5)。

(一)
(一)
(b)
(b)
图6
kaplan meier生存分析的GABPA表达式包含IHC EC患者。(a)的影响GABPA表情EC患者的总生存期。(b)的影响GABPA表情EC患者的无病生存。
表5
单变量和多变量Cox回归分析EC GABPA表达和总生存期的患者。
3.6。DNA甲基化水平的影响GABPA表达式

最后,我们试图调查在差别GABPA机制对这些癌症。以上的观察表明,在EC GABPA可能表现出肿瘤抑制功能。异常的启动子甲基化是肿瘤抑制基因失活的主要机制。确定GABPA结果的甲基化抑制,我们分析了基因甲基化水平和mRNA表达之间的关系的GABPA ECs TCGA使用。结果表明,GABPA mRNA表达与基因甲基化水平负相关( , )(图7(一))。此外,我们发现一个甲基化CpG cg21890848 GABPA基因发挥了主要作用在它的沉默( , )(图7 (b))。以上结果表明,异常甲基化的主要机制之一是GABPA基因的沉默。

(一)
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(b)
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图7
协会GABPA TCGA信使rna及其基因甲基化分析了数据库。(一)之间的关联GABPA mRNA表达及其基因甲基化。(b)之间的关联GABPA mRNA表达和甲基化CpG GABPA cg21890848的基因。

4所示。讨论

在本研究中,我们发现GABPA的mRNA表达减少EC患者和使用生物信息学分析方法与EC的预后相关。此外,我们的研究表明,蛋白表达的GABPA EC组织与正常子宫内膜组织中表达下调。GABPA的低表达与预后相对较差。这些数据表明,GABPA作为肿瘤抑制电子商务发展和生存。

GABPA、转录因子调节的基因表达参与各种生理和病理过程,如胚胎发育、线粒体功能,先天和后天免疫,细胞周期进展,细胞入侵和转移(12,24]。最近的研究隐含GABPA和肿瘤进展之间的复杂关系。郭等人表示,GABPA规定腔的膀胱癌的身份(BC)细胞和抑制攻击性疾病在公元前通过促进细胞分化尽管刺激影响端粒酶/叔激活(17]。元,Paulsson等人提出,通过直接调节DICER1 GABPA作为肿瘤抑制卵泡和乳头状甲状腺肿瘤(19,22]。张等人表示,GABPA抑制肝癌细胞迁移通过调制钙粘蛋白和作为一个肿瘤抑制(18]。然而,当前癌症GABPA不一致发生和发展机制。一项研究表明,GABPA扮演作为一个复杂的控制乳腺癌上皮细胞迁移通过直接影响RAC2的表达和KIF20A [25]。Sharma等人发现GABPA介导恶性表型在前列腺癌雄激素受体阳性20.]。曼奇尼等人证明了基因敲除的GABPB1L减少GABPA积累导致减少叔表达,端粒损失,最终细胞凋亡和肿瘤发生的损失势在叔promoter-mutated胶质母细胞瘤细胞(26]。这些发现支持GABPA作为癌症的司机。目前还不清楚为什么以及如何发生这种情况和详细的机制是什么。的一个可能的解释是,GABPA是一个转录因子,可以调节不同的下游基因,所以,GABPA如何工作可能取决于不同的细胞环境和肿瘤类型。在免疫组织化学研究中,我们还发现,GABPA蛋白表达细胞的细胞质和细胞核。EC GABPA的确切机制仍在进一步研究阐明。除了作为转录因子,我们推测GABPA可能通过其他方法发挥作用。

大多数EC患者只能通过手术治愈,但是患者在晚期或一些早期患者会复发。因此,它是至关重要的识别新型生物标志物检测EC复发和预测预后。在我们的研究中,我们证明了的表达GABPA corelated与患者的预后。我们还发现GABPA在EC的表达与临床病理的一些特性,包括基于TCGA的病理类型和组织学分级。kaplan meier分析和生存率较建议患者较低水平的GAPBA OS和DFS要差。单变量和多变量Cox回归分析的差别表明对这些GABPA EC与不良预后相关。我们提供了令人信服的证据,GABPA可以作为一个独立的预测电子商务。我们同意最近的一些调查研究,表明低GABPA表达与肿瘤大小越大,晚期或成绩,局部和远处转移,和甲状腺癌患者预后差,肝细胞癌、膀胱癌(17,18,22]。另外,低表达GABPA与短5年生存在透明细胞肾细胞癌和肠癌和头颈癌TCGA基于数据库(24]。

因此,目前的研究指出GABPA可能作为肿瘤抑制,这可能被视为一个潜在的预后EC的生物标志物。

5。结论

总之,我们的研究表明,GABPA EC组织中表达下调可能与它有关甲基化。低GABPA表达与临床病理的某些特征和穷人EC患者的生存。我们的研究表明,GABPA可以作为一个潜在的标记对欧共体EC和治疗是有用的。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

自汉代马和林Qianhan贡献了同样的工作。

确认

这项工作得到了国家自然科学基金(81902657)、中国博士后科学基金(21510077311145和21510077311145),山东齐鲁医院的和科学的基础。