文摘
的目标。特发性膜性肾病(IMN)具有不同的临床过程,需要准确预测作为治疗管理的先决条件。目前,其预后依靠蛋白尿,开始落后于肾损伤的临床参数。尿排泄增加矩阵metalloproteinase-9 (MMP-9)和nephrin IMN-like肾小球疾病的报道,他们反映疾病的严重程度。然而,很少或没有已知的重要性这些生物标志物在IMN,成人肾病综合征的主要原因。强调他们的潜力,我们测量生物标志物和评估他们在IMN肾功能与关键参数的关系。方法。107年我们量化尿MMP-9 nephrin biopsy-proven IMN患者和70名健康受试者通过酶联免疫吸附试验(ELISA)。然后我们之间的生物标志物的水平相比患者和健康者和患者不同的临床特征。我们也决定每个生物标志物的关系与蛋白尿和肾小球滤过率(eGFR)。结果。尿MMP-9和nephrin相比,IMN明显高于健康对照组。不像nephrin MMP-9显著相关与蛋白尿和肾病患者中明显高于蛋白尿。生物标记物都与表皮生长因子受体,但只有MMP-9患者明显高于eGFR少于90毫升/分钟/ 1.73米2。结论。我们的研究表明,尿MMP-9拥有更大的潜力比尿nephrin监控IMN的严重程度。
1。介绍
视为一个器官自身免疫性疾病,特发性膜性肾病(IMN)是一种亚型的膜性肾病成人肾病综合症是由于很多情况下。IMN影响男性比女性多,其患病率在原发性肾小球疾病是一个增加的趋势(1,2]。IMN的发病机制涉及破坏肾小球基底膜的一个免疫介导的过程,结果大量的蛋白尿。这个过程是通过磷脂酶A2受体(PLA2R),主要的肾小球抗原,或其他一些小的抗原,如血小板反应蛋白1型domain-containing 7 (THSD7A) (3]。在大约80%的情况下,解放军血清2R抗体是为数不多的候选标记的预后IMN [4,5]。
目前,有一个缺乏生物标志物能够预测IMN的过程中,特别是在初期阶段。蛋白尿是唯一推荐的2012肾脏疾病预后参数改善全球的结果(KDIGO)临床实践指南。然而,使用蛋白尿预测IMN的课程并非没有挑战。而蛋白尿报告(定义为尿液 毫克/ mmolCr)被发现的风险减少终末期肾病(ESRD)和可以预测的肾脏的长期生存6,7),后发生显著的肾损害。此外,需要一个尿蛋白质含量高达2.43克/天基线预测哪些病人会遭受严重的IMN在一年内(7]。因此,寻找替代生物标志物能够预测的IMN之前严重肾损害是十分必要的。
矩阵metalloproteinase-9(也称为白明胶酶B)和nephrin肾小球功能障碍的早期的一些标记。这些标记的尿排泄和活动是已知反映肾病综合症其他肾小球疾病的严重程度(8- - - - - -13]。来自肾小球足细胞,nephrin和MMP-9影响肾小球功能;MMP-9肾小球基底膜的降解IV型胶原蛋白(14,15]虽然nephrin检查蛋白尿和促进足细胞损伤后恢复16]。
这些生物标志物的潜在效用已经被记载在肾小球疾病,包括糖尿病肾病,Henoch-Schonleinpurpura,微小病变性,局灶节段性肾小球硬化症8,11- - - - - -13]。然而,没有尝试在评估他们在IMN的潜在效用。迄今为止,nephrin和MMP-9仅在疾病研究模型具有重要的启示,如增强肾小球表达MMP-9和离解的nephrin podocin蛋白尿的发病前(17,18]。
尽管有这些发现,这些生物标志物的诊断和预后的潜在从未在人类被试进行研究。只有MMP-9潜力的诊断和预后研究但只有童年形式肾病综合症(8,9,12]。因此,它仍有待决定如果尿nephrin MMP-9,作为单独的标记或结合其他生物标志物,可能是重要的在一个成年人IMN等形式的肾病综合症。因此,这是研究的目的是量化尿MMP-9 nephrin,评估他们的肾功能与参数的关系,推导出其重要性在IMN的管理。
2。材料和方法
2.1。伦理批准
这项研究是研究伦理委员会批准的中国医科大学盛京医院。
2.2。招聘的特发性膜性肾病患者
107年biopsy-proven IMN患者从医院的肾脏学部门从2018年3月到2020年1月。在招聘的时候,没有一个病人接受IMN治疗。参与者被筛查所有可能的二级膜性肾病和其他肾脏疾病的原因。这些发现与肿瘤、癌症、糖尿病、自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮、紫癜性肾炎,乙型肝炎和丙型肝炎病毒等感染和其他并发症被排除在外。此外,病人也被排除的基础上的历史接触药物和化学品如利福平、卡托普利、丙磺舒、布洛芬、避孕药,双氯芬酸、甲醛和挥发性碳氢化合物。肾活检拍摄并受考试通过光学显微镜、电子显微镜和荧光显微镜。
2.3。招聘健康对照组
健康对照组是从健康检查中心招募中国医科大学盛京医院。这些发现与尿路感染或其他异常被排除在外。
2.4。样本收集和存储
收集尿液和血液样本从参与者在肾活检。血液被收集到普通真空采血管和允许凝结前彻底离心法获取血清而随机尿样收集使用干净的塑料容器和离心机1000 g 20分钟得到上层清液。血清和尿液上层清液都保持在-80°C等待分析。
2.5。数据收集
2.5.1。基本的临床和人口特征
人口统计学和临床信息收集招募参与者从医院的实验室信息系统(LIS)和卫生信息系统(他的)。生化参数的测定,如尿蛋白、血清肌酐、血尿素、血清半胱氨酸蛋白酶抑制物C (Cys-C)、血糖、血清总蛋白、血清白蛋白、尿肌酐(加州大学)是使用一个建筑师C 16000生化分析仪(美国雅培)。估计的肾小球滤过率(eGFR)计算使用慢性肾脏疾病流行病学合作(CKD-EPI)公式: (值: , ; 价值:女,血清 , ,血清 , ; 价值:男,血清 , ,血清 , )。
2.5.2。的化验尿Nephrin Metalloproteinase-9和矩阵
尿nephrin的水平和MMP-9决定依照指令的操作手册工具包(http://www.cloud-clone.com/manual/ELISA-Kit-for-Matrix-Metalloproteinase-9- (MMP9) -SEA553Hu.pdf和http://www.cloud-clone.com/manual/ELISA-Kit-for-Nephrin-(NPHN) -SEA937Hu.pdf)。nephrin和MMP-9的浓度,与尿肌酐标准化,报道。
2.6。标准评估尿Nephrin协会和参数矩阵Metalloproteinase-9特发性膜性肾病的肾脏功能
尿nephrin和MMP-9评估可能对尿蛋白和表皮生长因子受体如下:
2.6.1。尿Nephrin协会和矩阵Metalloproteinase-9蛋白尿
确定尿nephrin协会和MMP-9蛋白尿,我们首先建立了相关的生物标志物在所有患者蛋白尿。然后我们分组的患者分为两组,即。报告:集团( 毫克/ mmolCr)和肾病范围组( 毫克/ mmolCr),相比他们的水平。
2.6.2。尿Nephrin协会和矩阵Metalloproteinase-9估计肾小球滤过率
评估尿nephrin的协会和MMP-9肾功能,我们首先确定表皮生长因子受体与每个生物标志物的相关性。然后分层患者分为两组(即。表皮生长因子受体的患者不到90毫升/分钟/ 1.73米2与表皮生长因子受体大于90毫升/分钟/ 1.73米2),并比较了生物标志物的水平。
2.7。统计分析
数据分析使用SPSS版本19。测试数据的正常Kolmogorov-Smirnov测试。与正态分布变量提出了 而那些偏态分布提出了中位数(四分位范围)。性别比例比较使用卡方检验而组使用独立样本均值和中位数进行比较 - - - - - -测试和Mann-Whitney适当的测试。斯皮尔曼的相关性测定和皮尔逊相关适用的地方。所有测试都是双面的,值小于0.050被认为是重要的。
3所示。结果
3.1。之间的人口和基本临床特征比较患者和健康对照组
关于人口和研究参与者的基本临床特征总结如表1。
没有显著差异,年龄、性别比例、空腹血糖、肌酐和表皮生长因子受体之间的病人和健康的话题。然而,血清白蛋白水平有显著差异,血清总蛋白、血清半胱氨酸蛋白酶抑制物C,血清尿素、舒张压、收缩压、尿液蛋白质。
3.2。比较尿Nephrin和矩阵Metalloproteinase-9患者和健康对照组之间
尿nephrin和MMP-9 IMN患者显著增加健康受试者相比(表2)。
不像MMP-9检测患者和健康对照组,nephrin只有患者中检测到。
3.3。比较尿Nephrin和矩阵Metalloproteinase-9之间没有肾病综合症患者
如表所示3,生物标志物的尿水平更高的患者比那些没有肾病综合症。
肾病患者尿MMP-9显著增加范围比报告:蛋白尿患者蛋白尿。然而,与尿MMP-9增加尿nephrin没有达到统计学意义。
3.4。之间的尿生物标志物水平比较患者肾小球滤过率低于和高于90 ml / min / 1.73米2
建立nephrin的尿液排泄是否和MMP-9患者肾功能的差异之间的不同,我们比较患者表皮生长因子受体之间的生物标志物水平低于90 ml / min / 1.73米2与表皮生长因子受体大于90毫升/分钟/ 1.73米2。如表所示3,只有尿MMP-9显著增加患者表皮生长因子受体少于90毫升/分钟/ 1.73米2。没有显著差异水平之间的尿nephrin两组。
3.5。评估肾尿生物标志物,建立了参数之间的线性函数
评估尿nephrin和MMP-9水平是否与肾功能的主要参数,我们决定每个生物标志物的相关性与表皮生长因子受体和蛋白尿。如表所示4蛋白尿,尿MMP-9显著相关性和表皮生长因子受体而尿nephrin只有表皮生长因子受体密切相关。
4所示。讨论
IMN管理仍有问题,由于缺乏可靠的生物标记物预测病人的结果在早期阶段的能力。这么长时间,预测病人的结果依赖于蛋白尿,开始落后于肾脏损害的临床参数。在这项研究中,我们检测了尿nephrin协会和MMP-9肾功能的目标与关键参数推导IMN潜在角色管理。
nephrin的水平和MMP-9显著增加患者与健康对照组相比(表3和4)。然而,与MMP-9 nephrin察觉在健康受试者。这个观察是一致的研究Bienias和Sikora12)和Musial et al。8)在其他形式的报道更高水平的MMP-9肾小球肾病。我们的结果也符合王的et al。10]尿nephrin只可检测的患者但不健康对照组。两个生物标志物的水平反映IMN患者肾功能异常。事实上,这些发现恭维和渲染相信研究海曼肾炎(IMN)的疾病模型MMP-9调节和nephrin从肾小球足细胞分离17,18]。
在最近的研究中,肾病综合症患者的尿MMP-9不仅高,而且与蛋白尿(表3和4),一个观察结果一致Henoch-Schonleinpurpura [9]。然而,这并非如此与肾病综合征nephrin水平的研究对象既不是相当高,也不是与蛋白尿有关。
与表皮生长因子受体(表生物标志物都显著相关4),但只有MMP-9明显高于患者表皮生长因子受体少于90毫升/分钟/ 1.73米2(表3)。表皮生长因子受体是一种通用参数用于确定肾功能下降的速率(19)和预测ESRD的发生在慢性肾脏疾病(CKD) [20.]。由于相关性与表皮生长因子受体和增加患者表皮生长因子受体水平低于90 ml / min / 1.73米2,我们的研究表明,尿MMP-9持有更大的潜在替代肾脏功能的标志。
我们的研究表明,MMP-9优于nephrin反映肾功能下降。目前,有稀疏的文献关于尿nephrin的能力和MMP-9反映肾脏功能,尤其是在慢性肾病。然而,尿nephrin似乎只是一个定性的标志肾小球损伤发生在IMN的早期阶段,可能携带没有预后价值。以至于尿nephrin患者检测表皮生长因子受体是大于90毫升/分钟/ 1.73米2(表3在健康受试者(表),而不是2),这项研究的结果支持这一观点。也缺乏与蛋白尿显著相关的观察到在当前的研究中进一步支持,尿nephrin不能反映疾病活动。
关于尿MMP-9适应性的生物标志物反映肾功能的下降,我们的研究结果与之前的研究相协调这报道重大尿水平相关与表皮生长因子受体(20.,21]。除了有辱人格的“绿带运动”,MMP-9也促进系膜增生性变化异常(22]。MMP-9发起纤维化,这一过程不可逆转损害肾小球功能。由巨噬细胞骨桥蛋白裂解化学引诱物,MMP-9激活转化生长因子-β(TGF -β),一个细胞因子诱导肾纤维化(23,24]。
IMN原发性肾小球疾病的严重程度取决于肾小球损害的程度。肾小球足细胞是由anti-PLA针对免疫破坏的2r .根据侮辱的大小,受伤的足细胞进行细胞凋亡或一系列adaptational变化。足细胞的adaptational变化包括肌动蛋白细胞骨架的重排,这一过程会导致脚过程抹杀和超然的表达蛋白质如nephrin [25]。随着肾小球侮辱肆虐,越来越多的凋亡足细胞分离和冲洗尿空间造成总蛋白尿和podocyte-expressed蛋白质的相应提高。”这就解释了为什么尿nephrin高(但不明显)患者肾病范围相比蛋白尿肾病蛋白尿(表范围3)。
MMP-9属于白明胶酶家族。明胶酶的酶是一组分裂IV型胶原蛋白“绿带运动”的主要组成部分。尽管MMP-9反映的潜在的严重性IMN尚未研究,MMP-9是公认的球员在一些肾小球疾病的发病机制22]。肾小球足细胞的接触白蛋白增强的活动和肾小球表达MMP-9 [26,27),IMN的现象,可能是真的。因此,我们推测,在IMN免疫介导的肾损伤后,血清蛋白质暴露足细胞白蛋白渗透率增加移植MMP-9的表达式和顺向尿脱落。这也许有助于解释观察MMP-9和蛋白尿之间的积极关系研究。
识别MMP-9作为一个潜在的标志的严重性IMN管理是至关重要的。IMN有一个变量与三分之一的患者临床病程进展迹象。这样的进展可以预防或减少如果准确地确定其严重程度和预后和适当的治疗管理。
5。结论
当前的研究首次表明,尿MMP-9和肾功能参数之间存在的关系在IMN。不像nephrin MMP-9与蛋白尿方面表现出显著的协会,一个参数目前用于评估IMN的严重程度。因此,MMP-9拥有更大的潜力在监测IMN的严重程度。为了进一步阐明MMP-9的潜力,需要更多的研究,特别是在确定关系解放军IMN-specific标记等2R抗体。
本研究的局限性包括设计不允许评估生物标志物水平随着时间的推移和缺乏信息的其他IMN-specific抗体致病性和预后的作用。未来的研究应该调查的尿液排泄模式MMP-9以潜在的方式更好地欣赏其预后IMN潜力。
缩写
| CKD: | 慢性肾脏疾病 |
| CKD-EPI: | 慢性肾脏疾病流行病学合作 |
| 克雷格: | 肌酸酐 |
| 表皮生长因子受体: | 估计肾小球滤过率 |
| ELISA: | 酶联免疫吸附试验 |
| 迹象: | 终末期肾脏疾病 |
| IMN: | 特发性膜性肾病 |
| 中国人民解放军2接待员: | 磷脂酶一2受体 |
| TGF -β: | 转化生长因子-β |
| THSD7A: | 血小板反应蛋白1型domain-containing 7。 |
数据可用性
我们没有获得同意在公共场合共享数据。然而,在当前的研究中使用的数据将其用于个人通讯作者在一个合理的请求。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
我们承认整个实验室医学系,中国医科大学盛京医院的技术支持使我们进行这项研究。我们承认黛娜太太Kamusiime,老Vedrana Ljubic,和陈先生的家庭道德支持和善意,让我们进行这项研究。我们也承认Turyakira埃莉诺女士提供的援助在修改手稿。IMN的筛查的帮助来完成中国的辽宁省自然科学基金(批准号20180550523)和2018年的主要特殊项目施工程序(培养)中国医科大学的临床医学。