文摘
背景和目的。谷氨酸(Glu)的会是一个主要危险因素为新生儿缺血脑损伤(HIBD)。兴奋性氨基酸转运蛋白的作用2 (EAAT2)和α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-proprionic酸受体(AMPAR)在调节亚基GluR2 Glu会一直是热点。本研究旨在调查的早期改变谷氨酸代谢后的基底神经节分(嗨)在新生儿小猪模型使用1H-MRS。方法。25刚出生的小猪被选中,然后随机分配到对照组( )和模型组( )嗨。你好是诱导下双边颈动脉血流阻断同时吸入6%的氧气混合物。1H-MRS数据获得的基底神经节嗨后在以下时间点:6、12、24和72 h。EAAT2蛋白质含量的变化和GluR2由免疫组织化学分析。代谢物浓度之间的相关性、代谢物比值和EAAT2的蛋白质含量和GluR2调查。结果。Glu水平大幅增加后,嗨,达到瞬态损耗水平低,接近正常水平在对照组,随后再次增加。浓度之间的负相关性被发现Glu EAAT2蛋白质水平( , )和Glu之间/肌酸(Cr)比和EAAT2蛋白质水平( , )。此外,改变GluR2蛋白质水平显著负相关与Glu级别(绝对Glu浓度, , ;Glu / Cr, , )。结论。Glu水平衡量的变化1H-MRS呈负相关与EAAT2 GluR2蛋白质水平后,嗨,,结果证明1H-MRS可以反映体内glutamatergic活动的早期变化。
1。介绍
兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)是一个主要的兴奋性神经递质在中枢神经系统的哺乳动物,有至关重要的作用在维护正常的大脑功能。在正常生理条件下,细胞外液的Glu水平仅仅是0.5 - 5μ米(1]。星形胶质细胞保持低Glu水平细胞外液,防止Glu会和异常突触传递。胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)被广泛认为是一个特定的分子标记星形胶质细胞,因为它是星形函数相关的蛋白质主要是(2,3]。兴奋性氨基酸转运蛋白2 (EAAT2,也称为谷氨酸转运体1 (GLT-1)在啮齿动物)星形胶质细胞的细胞膜负责大部分的Glu体内运输(4,5]。Glu发布的突触前神经元进入星形胶质细胞通过再吸收和转化为nonexcitatory氨基酸谷氨酰胺(Gln)谷氨酰胺合成酶,后来经历吸收由突触前神经元完成Glu-Gln周期(6]。
暴露在分(HI)从突触前神经元损伤诱发大量的Glu释放7)和损害Glu再吸收的活动系统。因此,过度Glu积聚在突触空间和结合谷氨酸受体位于突触后神经细胞膜,从而会引起。主要的兴奋性ionotropic谷氨酸受体N-methyl-D-aspartate酸受体(NMDAR) [8)和α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-proprionic酸受体(AMPAR) [9]。可以激活NMDAR和AMPAR Glu过剩,它们有至关重要的作用在调节Glu会(8- - - - - -10]。大多数研究都集中在确定Glu的NMDAR中介机制会在缺血脑损伤(HIBD)。随后的研究提出了“GluR2假说”(9],它认为HI-induced的结构性变化AMPAR调解神经损伤。GluR2亚基是一个重要的功能一部分AMPAR;GluR2决定Ca2 +渗透率AMPAR [11- - - - - -13),参与调解Glu会引起。
HIBD的发生在围产期新生儿一般伤害特定的大脑区域。深部灰质核被嗨(很容易受伤14),基底神经节极易受Glu会(15]。不成熟的大脑的婴儿更容易受到Glu会比成熟的成年人的大脑14- - - - - -16]。HIBD是永久性功能障碍的重要原因和围产期新生儿的死亡,发生大约每1000项出生2 - 317),影响家庭和社会。没有治疗策略也已经被开发出来,以有效改善这些患者的生活质量和生存。
本研究旨在调查在基底神经节使用谷氨酸代谢改变1H-MRS嗨侮辱后小猪模型和初步探索Glu的可能机制会引起。
2。材料和方法
2.1。实验动物
动物实验都是按照规定执行的管理事务有关实验动物(http://www.asianlii.org/cn/legis/cen/laws/rftaoacea704/)。动物伦理委员会批准的协议是中国医科大学盛京医院、沈阳、中国。25新生儿男约克郡小猪(P3-5,体重:1.5 - -2.0公斤)选择实验动物中心,然后随机分为对照组(sham-operation集团 )和你好模型组( )。嗨模型组分配成四个组HI-induced脑损伤后不同评估时间:6、12、24和72 h ( 小猪每组)。实验动物是维持与无限的食物和水在一个安静和温暖的环境。
2.2。动物模型的制备
模型组最初的新生仔猪麻醉的肌内注射0.6毫升/公斤甲苯噻嗪盐酸盐。动物麻醉后,在仰卧位固定在操作台上。加热垫在手术期间工作来维持体温 。气管插管(执行2.5毫米),然后,每个小猪是连接到一个唯一- 200 c小动物呼吸机机械通气与100%的氧气和呼吸机参数如下: (呼吸率)和呼吸 。心率和血氧饱和度监测连续使用TuffSat手持脉搏血氧计(美国通用电气医疗集团,密尔沃基,威斯康星州)。切口站点和邻近皮肤消毒,小猪受到中产前颈部切口。双边颈总动脉分离得到邻颈内静脉和迷走神经。动物的状况稳定后40分钟,双边颈总动脉闭塞使用小动脉夹。然后,包含6%的氧气和94%的氮的气体混合物被吸入机械40分钟。40分钟后,小动脉夹双边颈总动脉被移除,和血流量恢复。同时,再次吸入氧(100%)是机械,缝合切口。手术后,小猪被转移到一个孵化器(37°C)维持正常体温在手术后的恢复。小猪在对照组(pseudooperation组)接受那些将要动手术准备一样的模型组,但没有受到嗨感应程序。
所有操作进行有效的镇痛和麻醉下减少动物的痛苦。
2.3。磁共振成像
所有动物的MRI检查进行sham-operation和模型组。小猪与甲苯噻嗪盐酸盐麻醉。然后,动物被放置在一个仰卧位与一个特殊的泡沫垫在头上保持头为中心。然后,以下扫描进行:传统fast-field回波(FFE) t1加权成像(T1WI)(重复时间(TR) / echo (TE), 200/2.3女士;矩阵, ;和切片厚度5毫米)和涡轮旋转回声(TSE) t2加权成像(T2WI) (TR / TE, 5000/80女士;矩阵, ;和切片厚度5毫米)。进行了核磁共振扫描使用飞利浦的阿奇沃3.0 t磁共振成像系统(最好,荷兰)和8路相控阵头线圈。新生仔猪也小心翼翼地裹着厚厚的棉被来维持温度。
1使用point-resolved H-MRS扫描进行光谱学single-voxel收购(出版社)序列(TR 2000 ms;37岁的TE女士;样本,1024;带宽,2000赫兹;和国家安全局,64)。短TE序列( )是用于更好地演示Glu峰,这可能减少松弛效应的影响,获得一个更好的频谱。自动匀场扫描前已经完成。位置确定的轴向T2WI基底神经节,和感兴趣的体积(VOI) 放置在左侧基底神经节。被小心地避免噪声引起的周边地区,如脑脊液、血管、脂肪、和空气。饱和带是放置在一个区域在VOI之外,和现场填隙和water-suppressing操作进行VOI内实现 和 并允许后续光谱数据的集合。基底神经节被选为感兴趣的区域(ROI),因为他们是最敏感的地区之一HIBD新生婴儿。
2.4。1H-MRS后处理和数据分析
谱获得的原始数据1H-MRS扫描使用线性组合模型进行了定量分析软件(LCModel,版本6.3 - 1 b, S.W. Provencher) (18]。这个流行的软件定量分析的光谱数据采用黑盒操作,允许自动平均的原始光谱图像、基线校正和平滑,相位校正、代谢物鉴定,最后获取的数据为不同的代谢物。代谢物的绝对数量得到,Cramer-Rao下界(CRLBs)计算;这些都是作为一个索引的代谢物定量评价拟合结果的可靠性。光谱是配备了一个化学位移大约0.2 - -4.0 ppm ( )使用LCModel软件。最后模拟光谱包括以下17个代谢物:丙氨酸(Ala)、天冬氨酸(Asp),肌酸(Cr)、磷酸肌酸(PCr),γ酸氨基丁酸(GABA)、葡萄糖(相关)、Glu、Gln, glycerophosphorylcholine (GPC),磷酰胆碱(PCho)、谷胱甘肽(谷胱甘肽),肌醇(Ins),乳酸(Lac),N-acetylaspartate (NAA),N-acetylaspartylglutamate (NAAG) scyllitol (Src)和牛磺酸(τ)。基线设置的基本设置还包括大分子和脂质。只有光谱数据 和一般< 25% 被包括在统计分析。
我们分析的水平Glu、Gln Glx (Glu + Gln复杂),中子活化分析(NAA + NAAG), choline-containing化合物(Cho) (GPC + PCho),和Cr (Cr + PCr)和总金额都用于乙酰天冬氨酸,赵,Cr以保证数据的可靠性。Glu生成复杂信号大约在2.04 - -2.35 ppm和3.75 ppm,主峰2.35 ppm。神经毒性时除了色氨酸超过神经传递的Glu的生理需求。Gln,这是一个中间代谢物支持多个通道的能量代谢和神经传播,形成共振峰值为2.45,3.78和2.15 ppm。虽然j耦合效应Glu与Gln导致峰值之间相互重叠,我们发现该软件可以在一定程度上正确地分开。因此,定性分析Glu、Gln单独进行。主要的NAA峰是在2.02 ppm,这反映了神经元的线粒体功能(19]。赵是一个重要的细胞膜磷脂,其主峰3.20 ppm。主要Cr峰在3.03和3.94 ppm;Cr对能量代谢很重要在神经元和星形胶质细胞胞浆。
在这项研究中,Glu的绝对浓度,Gln, Glx, NAA、赵,铬在基底神经节进行了分析。此外,我们测量了Glu / Cr, Gln / Cr, Glx / Cr,乙酰天冬氨酸/ Cr和Cho / Cr浓度比率(即相对浓度),也提供的LCModel软件。
2.5。组织学检查
在MRI检查结束后在指定的时间点,新生小猪立即牺牲,他们的大脑迅速收集病理检查。大脑在10%甲醛溶液固定48 h,然后在冠状平面分段。然后,部分包含基底神经节是嵌入在石蜡和薄片4μ米厚度传统hematoxylin-eosin(他)和免疫组织化学染色(包含IHC)。
HE-stained大脑部分进行评估在光学显微镜下对基底神经节病变。大脑的变化进行了评估,取得了与李的大脑病理评价标准et al。20.]:0 - 6的比分神经病理损伤与脑水肿(0 - 3 0,没有;1、温和;2、温和;3、严重)和0 - 3对神经细胞损伤和坏死(0,没有;1、温和;2、温和;3、严重)。总分是个体分数的总和,和更高的总分表示更严重的伤害。脑水肿包括细胞毒性水肿和vasogenic水肿。包括单个细胞的死亡,细胞坏死组织的细胞,在一定地区的所有细胞。 The evaluation was conducted by an experienced professional physician who was blinded to the experimental grouping, and it was based on the observation of cell morphological changes under the light microscope (400x magnification).
包含IHC染色过程如下。石蜡切片是孵化H为3%2O2在室温15分钟阻断内源性过氧化物酶活动然后堵塞5%正常山羊血清在室温下30分钟。此后,一夜之间,这些部分被孵化在4°C以下主要抗体:兔子anti-GFAP(1: 1000年,Abcam),兔子anti-EAAT2(1: 200年,Abcam),和鼠标anti-GluR2(1: 100年,Abcam)。与生物素化的部分被洗,孵化anti-rabbit /鼠标免疫球蛋白G在37°C 1 h,发达与轻拍,用苏木精复染色,安装与中性香脂。准备部分光学显微镜下观察染色的基底神经节。磷酸盐是用来代替主要抗体消极的控制,和其他程序是相同的。添加二级抗体后,所有程序进行同时保护部分。所有图片和图像分析系统进行了分析。五个字段(400 x放大)随机选择测量的光学密度抗体绑定,和平均光密度(OD)作为测量值(GFAP任意单位),EAAT2, GluR2表达式。
2.6。统计分析
列文的方差数据的同质性进行了分析测试。方差齐性决定通过多组比较分析了单向方差分析。韦尔奇的方差的非均质性进行了分析 - - - - - -测试。克鲁斯卡尔-沃利斯的分类数据进行了分析测试。光谱数据和病理结果之间的相关性进行了分析使用的斯皮尔曼相关分析相关系数。统计软件SPSS 20.0 v(美国纽约IBM)是用于所有分析。所有统计测试双尾, 被认为具有统计显著性。
3所示。结果
3.1。HI-Induced基底神经节的神经元和星形胶质细胞形态的变化
在对照组,神经元定期安排,与正常细胞形态、丰富的细胞质,细胞核清晰。星形胶质细胞GFAP-positive反应较低,光染色,细胞体积小,又瘦又矮突起,稀疏分布。然而,在嗨模型组,GFAP-positive细胞的数量增加,染色深,胞体大,突起生长厚。HI-treated神经元和星形胶质细胞显示以下更改在特定时间点:嗨,后6 h神经元没有显示任何重要的形态学变化;在12 h,许多星形胶质细胞肿胀并显示一个轻轻沾细胞质和液泡;在24小时,许多神经元和星形胶质细胞肿胀;在72 h,星形胶质细胞明显肿胀和退化,神经元细胞膜受损,细胞核肿胀,轻轻染色(数字1和2)。脑组织的病理损害更加严重。病理评分在不同时间点展示在表1。
(一)
(b)
(c)
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3.2。EAAT2 HI-Induced GFAP的变化,在基底神经节和GluR2表达
GFAP、星形胶质细胞的生物标志物蛋白嗨后发生了重大的变化。结果显示GFAP的表达水平增加免疫染色后观察到嗨相比对照组。有统计学意义的差异嗨侮辱12 h, 24小时,72 h组相对于对照组(两种 )(图2)。
在正常对照组,EAAT2主要是等离子体膜的细胞中表达。嗨在EAAT2的表达引起了重大的变化。基底神经节的EAAT2表达水平显著低于嗨侮辱6 h组比对照组( )。然后,EAAT2表达明显倾向于增加12 h组,之后再次下降(图3)。EAAT2之间有一个统计上的显著差异表达的12 h组,72 h组,对照组( 或 )。
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基底神经节的GluR2蛋白质水平显著下降随着时间的推移,嗨的价格相比控制后,差异具有统计学意义(包括 )(图4)。结果还表明,GluR2蛋白质水平是负相关,病理病变的严重程度( , )和GluR2表达较低时HI-induced脑损伤更严重。
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3.3。1H-MRS结果
结果在图5显示代谢物的变化1H-MRS。与对照组相比,绝对Glu含量明显改变随着时间的推移在嗨侮辱(图5 (c))。Glu含量显示一个两相的变化。Glu浓度明显增加HI治疗后6 h,然后达到一个瞬态最低12 h,接近水平在对照组然后再增加24 h。有不同组之间在统计上有显著差异的Glu含量( , )。组间分析表明,控制和HI组之间有显著差异在6、12、24日和72 h嗨受伤后( , , ,和 ,分别)和HI组之间在12 h和6,24和72 h ( , ,和 ),但也有其他的子组之间没有显著差异。Glx的绝对浓度的趋势是类似于Glu,在6小时明显升高,24小时,72小时后与对照组相比(你好 )。曹浓度增加出现后随着时间的推移,嗨的侮辱。之间有显著差异24 h和72 h嗨子组和对照组( 和 ,分别)。此外,重要的曹浓度之间的相关性被发现和病理评分( , )。虽然没有Gln的绝对浓度的差异,NAA或Cr不同群体之间的观察( , ; , ;和 , )。
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Glu的变化/ Cr和Glx / Cr率相似的变化Glu或Glx浓度(图5 (d))。该研究还分析了乙酰天冬氨酸/ Cr和Cho / Cr的变化比率。乙酰天冬氨酸/ Cr嗨侮辱后随着时间的推移逐渐下降,与72 h之间的显著差异观察嗨子组和对照组( )。研究结果还表明,乙酰天冬氨酸/ Cr的变化与病理损伤的严重程度负相关在基底神经节( , )。也有类似的变化与绝对曹曹/ Cr浓度比率浓度。Cho / Cr比率的增加12 h, 24小时,72 h嗨子组被认为是具有统计上的显著差异,而对照组( , ,和 ,分别)。和Cho / Cr率呈显著相关,病理评分( , )。
3.4。HI-Induced GluR2变化之间的相关性,EAAT2和基底神经节中Glu含量
嗨侮辱后,Glu浓度的变化和EAAT2表达的动态变化是显著负相关的基底神经节( , ),和Glu的变化/ Cr率显著负相关与EAAT2表达式( , )(数据6(一)和6 (b))。然而,没有明显的绝对浓度之间的相关性Glx, Glx / Cr率,和EAAT2的表达( , ; , )(数据6 (c)和6 (d))。
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此外,绝对Glu浓度和GluR2基底神经节的蛋白质表达水平显著相关( , ),是Glu / Cr率和GluR2蛋白质水平( , )(数据6 (e)和6 (f))。同样,Glx的绝对浓度和Glx / Cr率负相关,GluR2表达式( , ; , )(数据6 (g)和6 (h))。
4所示。讨论
本研究调查了Glu的代谢变化水平使用1H-MRS体内和分析的角色EAAT2和GluR2调节HIBD的Glu水平在急性期。大量研究表明,Glu在维护正常的大脑功能有重要作用,在细胞外液和Glu浓度必须控制在一个较低水平(< 100μ米),防止会引起。星形胶质细胞发挥重要作用在维护Glu体内平衡。Glu积累在细胞外液主要由细胞通过sodium-dependent EAATs。一旦在星形胶质细胞,Glu由谷氨酰胺合成酶转化成Gln,星形胶质细胞释放。细胞外Gln被突触前神经元,神经元和星形胶质细胞之间完成Glu-Gln周期。嗨损伤破坏星形胶质细胞Glu吸收。因此,嗨损伤诱发细胞外Glu积累高水平,在新生儿和合成会加重脑损伤(21]。我们的研究结果与之前的研究一致。Glu代谢水平大幅增加后嗨的价格相比对照组(图5)。新生小猪受伤的程度随着时间的推移变得更加严重嗨侮辱后,表明增加Glu积累密切相关,结果会造成的脑损伤(22]。在嗨损伤的早期阶段,Na+/ K+泵功能障碍可能会显著增加细胞外K+浓度,促进神经元去极化,激活压敏电阻器钙通道和大规模的Ca2 +涌入,引发突触终端释放过度Glu [15]。在嗨损伤的后期(即。,24 h after HI in this study), ATP levels are depleted and reperfusion injury causes cell rupture and/or impaired astrocyte reuptake [23),这又导致Glu释放。
EAAT2是主要的亚型EAATs出现在纹状体中,和EAAT2星形胶质细胞的细胞膜被认为是负责90%的人类(Glu运输24),Glu-Gln周期的维持体内平衡是至关重要的。因此,本研究重点的变化后EAAT2嗨。本研究表明,Glu含量显著增加嗨受伤后与控制相比,和Glu含量的变化(包括绝对Glu浓度和Glu / Cr率)与EAAT2表达的变化呈负相关。这表明在嗨EAAT2可能有关键作用损伤减少Glu会引起。EAAT2表达减少在早期嗨受伤,随后增加,可能是因为早期嗨提拔大规模Glu释放而抑制细胞膜上EAAT2函数和减少EAAT2表达式。嗨时间增加,EAAT2表达升高,和一些Glu接受氧化代谢提供能量高效EAAT2运输、Glu损耗达到顶峰,这一部分EAAT2开始功能防止大规模Glu积累。更重要的是,现阶段GFAP增加蛋白质含量;这个反应astrogliosis星形胶质细胞可能是一种自我保护机制。在稍后阶段,仍然GFAP的表达水平升高,这种过度可能的重要机制之一可能会引起神经元。一些研究还表明,这种过度会导致脑损伤领域的胶质疤痕的形成,这是一种大脑神经再生障碍的重要原因(25]。虽然EAAT2蛋白质表达水平下降,Glu水平增加,也许是因为很难维持Glu体内平衡由于神经元坏死和功能抑制星形胶质细胞上的EAAT2膜。我们的研究结果证实,对HIBD EAAT2有至关重要的影响。许多调查人员试图减少调节EAAT2 HI-induced脑损伤表达式。目前很多研究专注于移植EAAT2表达式,Glu吸收增加,减少Glu会,并与白藜芦醇减轻神经损伤(26],sulbactam [27),组胺(28),头孢曲松钠(24)证实,脑缺血预处理可以上调GLT-1表达式在星形胶质细胞,从而提高脑缺血耐受的影响。目前,一些研究者发现诱导EAAT2表达间充质干细胞可以显著降低谷氨酸会(29日]。当然,这些方法的临床应用需要进一步验证。
HI-related Glu-Gln周期的中断会导致细胞内和细胞外的变化Glu的水平。当细胞外Glu达到一定水平时,相关受体的激活导致的一系列变化,生理和病理。离子Glu AMPAR是一个重要的子类型的受体广泛表达于媒介带刺的基底神经节的神经元。AMPAR包含四个不同的子单元,GluR1 GluR4。GluR2已经作为一种重要的功能特征AMPAR的一部分。在正常生理条件下,GluR2 AMPAR大部分神经元中高度表达,并是不透水的Ca2 +,这取决于编辑GluR2 pre-mRNA Q / R (Gln /精氨酸)的网站。GluR2表达的变化可以改变Ca2 +磁导率(9,12,13),从而在HI-mediated损伤中发挥作用。本研究评估嗨侮辱后GluR2蛋白质水平的变化和可能的机制调解HI-induced脑损伤。我们发现GluR2基底神经节中的蛋白质含量随着时间延长嗨呈下降趋势。GluR2蛋白水平与病理损伤的严重程度负相关。我们也观察到,Glu代谢水平变化与GluR2蛋白质水平负相关。这些结果表明,Glu嗨导致激活后积累AMPAR GluR2的差别,然后对这些基因的表达;更重要的是,GluR2表达水平进一步下降,你好伤恶化。因此,GluR2可能参与基底神经节的易感性。
机制阻碍快速Ca2 +后流入明显削弱HI-mediated GluR2减少,Ca2 +通过激活钙流入细胞2 +透水AMPAR。这将导致细胞内钙2 +过载,提高Glu毒性,引起神经元死亡。这种机制可能占次要伤害你好。最近的研究表明,GluR2 mRNA表达下调后嗨和AMPA受体的功能活性的变化可能调解Ca2 +涌入(13]。有显著减少GluR2表达水平在全球脑缺血再灌注后大鼠模型(30.),这与我们的研究结果是一致的。颅内注射反义寡核苷酸可拆卸GluR2表达式在老鼠31日死,海马CA1区锥体神经元细胞增强短暂性脑缺血发作的致病性。
调解机制减少GluR2表达式嗨仍有待澄清后,和几个问题仍未得到解答。例如,如何GluR2 mRNA转录编辑你好,影响其他AMPAR单元如何变化,AMPAR变化的电生理特点?GluR2表达差别先前的研究表明,急性对这些可以作为“分子开关”形式2 +透水AMPAR [9,13在神经损伤)和加强Glu毒性。有些研究人员成功地减轻或逆转GluR2表达的差别,对这些治疗细胞3、5、3 - - - - - -triiodo-L-thyronine (T3) [32),染料木黄酮(4 ,5,7-trihydroxyisoflavone) [33),或异氟烷34Glu),从而保护神经元免受损伤会引起。我们使用1H-MRS评价NAA和Cho水平。结果表明,乙酰天冬氨酸/ Cr率嗨受伤后随着时间的推移逐渐下降,基底神经节损害的严重程度呈负相关( , )。我们的结果与以前的研究一致35,36)报道,低乙酰天冬氨酸/ Cr表示你好后预后不良。乙酰天冬氨酸被认为是神经制造商和乙酰天冬氨酸水平与神经元的数量和活动密切相关。你好后,乙酰天冬氨酸水平降低通常是不可逆的,说明神经元损失和不可逆的脑损伤(37]。然而,由于新生儿大脑的可塑性高,神经干细胞的分化可以帮助恢复受损的神经元在某些情况下(38]。因此,NAA并不完全是不可逆转的。几项研究[39,40)报道,NAA水平并没有显著降低患者轻度至中度HIBD却永久地在那些严重HIBD耗尽。我们与这些研究的结果是一致的。乙酰天冬氨酸/ Cr在嗨损伤,早期没有显著不同于对照组。在72 h嗨受伤后,NAA水平明显低于对照组。这提供了进一步的证据,一个永久的损耗可以使用乙酰天冬氨酸/ Cr作为HIBD预后不良的指标。需要注意的一个有趣的事情是,我们的结果,不同于先前的研究[35,39,41嗨后),表明Cho水平增加。它可能被视为反映astrogliosis [42神经元[]或有缺陷的发展43]。此外,赵水平相关积极与病态的分数在我们的研究中(绝对曹浓度, , ;Cho / Cr, , )。赵和Cho / Cr可能用作评估制造商脑损伤的程度。未来的研究样本量大,需要进行验证这一观点。
嗨,后日到24日的不成熟的大脑通常有一个潜伏期h,紧随其后的是会引起,炎症和氧化应激反应(称为“致命三联征”)44,45]。这可能最终诱发二次能源失败和不可逆的神经损伤。Nerve-protecting策略之前,必须应用的发生不可逆的损伤。新生仔猪的大脑非常类似于新生儿的人类,所以刚出生的小猪被选为实验动物研究中。你好刚出生的小猪模型被用来模拟人类婴儿HIBD的病理过程。组织学染色显示,神经元损伤后6 h不嗨,神经水肿最初观察到12 h,和大量的神经元水肿在24 h,但主要的病理变化是可逆的神经元坏死。在72 h神经水肿变得更加明显,大脑组织已经不可逆转,严重的病理变化(包括神经元细胞凋亡和坏死)。我们的研究结果显示,没有不可逆损伤和Glu水平的轻微复苏后12 h内嗨表明这个时期之前二次能源的发展临床治疗失败可能是最好的时间。在这个时间窗口,如果药物或其他干预措施是用来调节EAAT2和GluR2蛋白质的表达减少Glu会引起,它将打开一个新的路径儿科医生进行HIBD的及时和有效的治疗。值得注意的是,这个最佳时间窗口的确定还需要进一步研究。
有一些注意的局限性。首先,由于复杂HIBD的病因和发病机理,动物嗨模型建立不同于临床病例,可能不能准确地显示起源,发展,新生儿HIBD的病理。其次,使用小样本大小在这项研究中,可能遭受偏见。还需要进一步的深入研究在一个更大的样本来证实目前的结果。
5。结论
我们观察到嗨后基底神经节中Glu含量增加,显示两相的变化。Glu水平变化呈负相关嗨后EAAT2和GluR2表达的变化。这项研究的结果强调1H-MRS可以使用估计的激活状态EAAT2 GluR2体内和提供一个可靠的影像学证据HIBD的及时和有效的治疗方法。未来的研究可以集中在减少excitotoxicity-induced脑损伤通过调节EAAT2和GluR2蛋白质的水平。因为新生儿的特殊性,需要更多的工作来进行,以确保临床用药的安全性和有效性。
数据可用性
所有数据用于支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
作者要感谢我们的同事在放射学、中国医科大学盛京医院的统计和技术支持。这项工作得到了国家自然科学基金(批准号81871408),优秀的科学基金盛京医院(项目编号201402),345年在中国医科大学盛京医院人才项目。