文摘

客观的。由于早期诊断是非常重要的治疗胃癌(GC),我们旨在检测血清小富脯protein2A (SPRR2A)来验证其对GC病人诊断价值。方法。血清样本收集从200年GC患者,100例胃炎、直肠癌患者40 (RC), 50结肠癌患者(CC)和100名健康对照组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测设备应用于测量血清SPRR2A浓度。血清SPRR2A之间的相关性和癌胚抗原(CEA)、临床病理参数的GC和接受者操作特征(ROC)曲线进行了分析。结果。GC病人血清中位数SPRR2A浓度明显高于健康对照组和胃炎或结直肠癌患者( )。血清SPRR2A浓度80.7 pg / ml的截止值取得了0.851的AUC,敏感性为75.7%,特异性为74.5%歧视GC病人健康的人。血清的AUC SPRR2A浓度结合CEA浓度为0.876,敏感性为79.7%,特异性78.7%。同样,血清SPRR2A歧视GC病人从胃炎患者的AUC 0.820,敏感性为90.5%,特异性61.7%。血清的AUC SPRR2A浓度结合CEA浓度为0.848,敏感性为87.8%,特异性68.1%。GC患者血清SPRR2A水平与淋巴结转移和tumor-node-metastasis (TNM)阶段( )。明显有不同血清SPRR2A GC病人手术前后之间的表达式( )。结论。这些结果表明,血清SPRR2A可以作为有效的GC标志。

1。介绍

胃癌(GC),一个上皮恶性肿瘤,是第三个全球癌症相关死亡的主要原因,占7%的癌症病例和癌症相关的死亡人数的9% (1]。整个5年相对存活率约20%在世界大部分地区,除了日本,5年生存率70%以上的阶段I和II的胃癌已报告(2]。许多研究已经清楚地指出,GC的发生和发展涉及多基因失调和多步参与,最终导致细胞生物学行为的进化从正常不正常3]。因此,重要的是要确定致癌基因为癌症的早期诊断和治疗。

上消化道内窥镜检查是一个敏感的和特定的胃癌的诊断测试。然而,内镜介入检查,导致偶尔合规和可怜的成本效益4]。由于外周血可以无创获取并易于存储,检测多个血清生物标志物已成为另一种方法帮助早期诊断的GC。一个常见的生物标志物用于GC是东航的诊断。然而,在GC CEA检测的敏感性和特异性分别为30%和70%,分别。它不能被用作GC良好的诊断的生物标志物。迫在眉睫的是确定一个新的有效的肿瘤标志物诊断GC。

在先前的研究中,我们筛查GC-associated基因GC和正常胃组织使用基因芯片和发现SPRR2A表达增加GC组织高达12倍(补充数据中描述(可用在这里)),这表明SPRR2A可能发挥重要作用的发展GC [5]。小脯氨酸蛋白(SPRRs)组成的一个子类具体cornified信封前体基因家族编码的集群内表皮分化复杂区域(6]。SPRR家庭成员在文献中报道(SPRR-1 SPRR-2,或SPRR2A)展览在皮肤和肛门肿瘤表达升高;SPRR1或SPRR2表达式是皮肤,减少肺癌、食道癌、喉癌癌,和口腔7- - - - - -11]。据报道,SPRRs在伤口愈合非常规范,能促进细胞迁移(12]。

在这项研究中,我们旨在验证血清的超表达SPRR2A与ELISA GC。结直肠癌患者血清SPRR2A的表达和良性胃炎也检查了。我们也分析了SPRR2A作为一种无创性的敏感性和特异性生物标志物来提高临床预测GC。

2。材料和方法

2.1。病人和样品收集

病人血液样本收集从390年承认杭州附属第一人民医院之间的浙江大学医学院2016年8月和2019年5月。患者包括200 GC, 100年与胃炎、与直肠癌(RC), 40和50结肠癌(CC)。一般临床资料390例表所示1。血样早上经常获得手术前7 - 10天内。患者血液样本也获得72 GC早上手术后7 - 10天内。所有样品都是根据2010年举行的美国癌症联合委员会(与)分期系统。两个病理学家证实了组织学诊断和tumor-node-metastasis (TNM)阶段的胃和结肠直肠癌。各种成像、临床实验室、病理检查和临床数据的选择受试者详细记录。入选标准如下:(1)病人被诊断为胃癌第一次33岁,81年,(2)胃癌的病理类型仅限于胃腺癌,(3)没有放疗或化疗之前执行操作,和(4)I-IV患者在临床阶段,详细的临床资料和个人基本信息。排除标准如下:(1)患者手术前化疗或放疗;(2)病人的身体状况很差,无法容忍相关考试或操作,术后精神状态很差,和预后影响是由于基本的物理条件差;(3)有多种疾病,尤其是第二种类型的癌症在人体内消除胃癌。

表1
胃肠道癌症血清SPRR2A和CEA的水平。

此外,血液样本收集100名健康对照的体检中心隶属杭州浙江大学医学院第一人民医院2017年1月和2017年5月之间。健康对照组被证实没有胃炎通过胃镜检查和活检,和体检报告显示,他们没有许多其他疾病。我们选择胃炎包括慢性浅表胃炎(48例)和慢性萎缩性胃炎(52例)。其中,74年胃炎患者惠普积极和26日惠普消极。血液从早上控制也收集。当前研究机构伦理委员会批准的附属杭州第一人民医院的浙江大学医学院。

2.2。血清标本

3毫升的血液来自每个参与者在早上空腹状态的第一次访问。1毫升的血清被离心法分离的血液样本为3000人 10分钟和0.2毫升的血清随后离心后获得10000 为5分钟。准备的血清样本存储在-80°C。

2.3。ELISA用于量化血清SPRR2A

血清SPRR2A测量与SPRR2A酶联免疫试剂盒(x - y生物技术,中国上海)。提供的标准与原标准稀释(960 pg / ml),然后是标准稀释稀释。浓度的标准解决方案准备30岁,60岁,120年,240年,480年和960 pg / ml,标准曲线制备基于结果。

移液后40μl样品缓冲到每个10μl SPRR2A标准储备溶液和血清样本添加到每个。随后,板上覆盖和孵化为30分钟37°C。SPRR2A检测试剂添加到每个好和孵化为30分钟37°C。streptavidin-HRP工作的解决方案是添加到每个好,然后在37°C样本孵化15分钟。洗后,油井开发三甲,反应是停止使用停止的解决方案。最后,盘子在全波长度标(MD VersaMax、分子器件、钙、和美国)在450海里。

2.4。为CEA免疫测定

血清CEA进行了定量测量的实验医学的杭州第一人民医院的浙江大学医学院。CEA浓度的血清样本由使用一个Elecsys东航工具包(美国雅培,IL)根据制造商的指示。随后的测试样本化验的电化学发光分析仪(美国建筑师i2000,雅培,IL)。异常东航被定义为引用值≥5.0 ng / ml。

2.5。统计分析

比较SPRR2A水平两组之间用Mann-Whiney执行 测试和组之间的差异而利用克鲁斯卡尔-沃利斯 测试。SPRR2A的预测能力、CEA和2为GC标志的组合是由逻辑回归。接受者操作特征(ROC)曲线分析应用于计算ROC曲线下的面积(AUC), 95%可信区间(CI), Youden指数( )为每个肿瘤标志物。所有上述分析通过使用IBM SPSS统计软件,版本21.0(美国纽约阿蒙克的IBM公司)。相应的实验数据用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad软件公司,拉霍亚,CA,美国)。

3所示。结果

3.1。五组的血清SPRR2A水平科目

我们收集血清样本200 GC未经治疗的患者,100例胃炎、RC患者40,50 CC的患者和100名健康控制。200 GC患者的中位年龄是52岁(范围33 - 81)年,有126男性和74女性,绝对血清SPRR2A浓度中位数为124.10 (82.73 - -186.05)pg / ml。100年健康对照组的平均年龄是29岁(范围15 ~ 60)年,54岁男性和46名女性,平均绝对血清SPRR2A浓度为44.93 (28.54 - -74.27)pg / ml。100例胃炎患者的平均年龄是43岁(范围23 - 70)年,58岁男性和42岁女性,绝对血清SPRR2A浓度中位数为50.07 (30.57 - -87.54)pg / ml。RC患者的中位年龄是55岁(39 ~ 72)年,22名男性和18个女性,绝对血清SPRR2A浓度中位数为56.58 (41.17 - -75.20)pg / ml。CC是患者的平均年龄57(31 ~ 82)年,39岁男性和11个女性,绝对血清SPRR2A浓度中位数是62.04 (51.56 - -78.59)pg / ml(表1)。

中位数在所有GC患者血清SPRR2A浓度明显高于健康对照组和胃炎和结肠直肠癌患者( ,图1)。健康对照组之间没有显著差异,胃炎患者和其他癌症(CC和钢筋混凝土, )在血清中SPRR2A浓度。


图1
五组的血清SPRR2A水平科目。胃癌组血清SPRR2A表达水平(在124.10(82.73,186.05)明显高于胃炎组(在50.07(30.57,87.54),结肠癌组(在62.04(51.56,78.59),直肠癌组(在56.58(41.17,75.20),与健康对照组(44.93 (28.54,74.27))( ,所有)。没有差别在患者与健康对照组血清浓度SPRR2A胃炎、结肠癌、直肠癌( , ,和 ,分别)。
3.2。血清SPRR2A表达水平之间的关系和GC患者的临床病理学特征

鉴于水平显著增加血清为GC SPRR2A病人,与GC发展的过程吗?根据不同临床病理因素的GC,我们分类200 GC患者。之间没有显著差异SPRR2A水平和性别、年龄、肿瘤大小、组织学分化,或在GC劳伦分类患者( )(表2)。重要的淋巴结转移之间的关联,TNM阶段,观察血清SPRR2A浓度( )。中位数在淋巴结转移患者血清SPRR2A浓度明显高于无淋巴结转移的病人( )。至于GC病人,SPRR2A浓度更容易处于高级阶段(第三阶段和第四阶段, )。

表2
血清SPRR2A水平和不同临床病理参数的相关性GC。
3.3。血清SPRR2A水平确定GC的有效性

患者从健康人血清SPRR2A歧视GC的AUC 0.851 ( -0.916)。的截止值80.7 pg / ml,检测的敏感性和特异性分别为75.7%和74.5%,分别。血清CEA浓度在5.0 ng / l的截止值产生的AUC 0.743 ( -0.832),敏感性为23%,特异性98%。此外,SPRR2A和CEA的AUC是0.876 ( -0.935),敏感性为79.7%,特异性78.7%。同样,血清SPRR2A歧视GC病人从胃炎患者的AUC 0.820 ( -0.899),敏感性为90.5%,特异性61.7%。血清CEA产生的AUC 0.763 ( -0.850),敏感性为23%,特异性97.9%。血清的AUC SPRR2A浓度结合CEA浓度为0.848 ( -0.919),敏感性87.8%,特异性68.1%(图2 (b))。血清SPRR2A浓度80.7 pg / ml的截止值产生的AUC 0.877(95%置信区间:0.793—-0.960),敏感性87.0%,特异性70.2%的差别阶段III和IV病人健康的人。阶段I和II病人,AUC的基础上区分GC患者和健康对照组血清SPRR2A为0.780(95%置信区间:0.669—-0.891),与敏感性69.6%,特异性68.1%(图2 (c))。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
图2
接受者操作特征曲线(ROC)血清SPRR2A和CEA水平单独考虑并结合预测胃癌或胃炎。(一)血清SPRR2A浓度产生的AUC 0.851 ( -0.916),75.7%的敏感性和特异性识别GC患者74.5%健康的人。血清CEA浓度产生的AUC 0.743 ( -0.832),敏感性为23%,特异性98%。血清的AUC SPRR2A浓度结合CEA浓度为0.876 ( -0.935),敏感性为79.7%,特异性78.7%。(b)同样,血清SPRR2A歧视GC病人从胃炎患者的AUC 0.820 ( -0.899),敏感性为90.5%,特异性61.7%。血清CEA产生的AUC 0.763 ( -0.850),敏感性为23%,特异性97.9%。血清的AUC SPRR2A浓度结合CEA浓度为0.848 ( -0.919),敏感性为87.8%,特异性68.1%。(c)血清SPRR2A的AUC是0.877(95%置信区间:0.793—-0.960),敏感性87.0%,特异性70.2%识别阶段III和IV病人健康的人。血清SPRR2A的AUC是0.780(95%置信区间:0.669—-0.891),敏感性为69.6%,特异性为68.1%阶段I和II的病人。
3.4。微分血清SPRR2A GC水平在72年之前和之后的手术病人

SPRR2A是否可以作为一个潜在的诊断标记GC手术前,我们收集血液样本72例手术,之前和之后的GC和微分SPRR2A表达进行了分析。在GC患者术后血清SPRR2A表达式38.00 (35.08 - -101.05)pg / ml,这明显低于术前的病人(133.46 (88.04 - -188.01)pg / ml) ( )。血清中没有显著差异SPRR2A GC术后患者和健康对照组之间的表达式( )(表3,图3)。

表3
GC SPRR2A表达水平在72年之前和之后的手术病人。

图3
手术前后血清SPRR2A水平的变化趋势。血清SPRR2A表达在胃癌患者术后,38.00 (35.08,101.05)pg / ml,明显低于胃癌患者术前,133.46 (88.04,188.01)pg / ml ( )。

4所示。讨论

肿瘤标记通常被定义为一个生化指标中发现异常集中在肿瘤的存在13]。所讨论的原子力安全保安院et al ., SPRR2A扮演了双重角色在入侵和治疗头颈部鳞状细胞癌的阻力。高表达SPRR2A淋巴结转移,随着nonoropharyngeal原发肿瘤的位置,一个独立的预后因子对区域复发后手术和放射治疗(14]。在目前的研究中,患者的血清SPRR2A表达式GC,胃炎,结肠直肠癌和健康人被ELISA检测。我们发现SPRR2A的表达显著增加GC患者与健康对照组相比,虽然没有显著区别慢性胃炎和结肠直肠癌患者和健康对照组。这些结果表明,SPRR2A可能被认为是一个潜在的肿瘤生物标志物为GC。然后,我们评估SPRR2A表达和各种临床病理参数之间的关系,包括性别、年龄、肿瘤大小、组织学分化,劳伦分类、淋巴结转移、临床分期。因此,高水平的有显著关联SPRR2A和淋巴结转移及TNM阶段,但没有明显SPRR2A表达与其他临床病理特征之间的联系。

高灵敏度是一个重要的指标,以避免假阴性诊断。因此,我们决定80.7 pg / ml的截止值相当高的敏感性为75.7%,特异性为74.5%。积累的数据显示,东航是一种方便的指标监测复发和远处转移,以及化疗的疗效评价和预后在GC [15]。因此,我们结合测量血清SPRR2A与东航所有GC为了提高诊断效率的病人。马瑞利等人发现,75年的敏感复发病例从133 GC病人潜在的治疗为CEA手术是44%,56%,CA胜负,51%,CA 72 - 4,东航的结合使用时,CA胜负,和CA 72 - 4的敏感性上升到87%,达到100%的阳性患者术前水平(16]。我们的研究支持这些最近的结果表明,组合血清学诊断的标志物是一个宝贵的GC。我们发现SPRR2A和CEA的检测导致更好的AUC比个人的肿瘤标记物。值得注意的是,我们的研究结果表明,SPRR2A低特异性识别胃炎与胃癌之间。因为胃炎病例选择的目的是检测的内容是否SPRR2A胃癌之间的不同,慢性胃炎,我们在研究中没有具体选择慢性胃炎。有慢性浅表胃炎(48例)和慢性萎缩性胃炎(52例)。许多现有的研究结果表明,慢性萎缩性胃炎是胃癌的癌前病变;我们的研究结果还表明,一些慢性萎缩性胃炎患者血液中有较高水平的SPRR2A,但由于小数量的情况下,尚不确定是否SPRR2A有关慢性萎缩性胃炎。上述原因可能是特异性(61.7%)低的原因SPRR2A胃炎与胃癌之间。

血清SPRR2A表达明显不同的GC和术后患者( ),表明血清SPRR2A可能预测预后的GC和GC的术后监测患者的援助。不幸的是,在胃癌复发的标本数量有限,所以没有数据表明SPRR2A是更好的比东航胃癌复发的肿瘤标记物。在下一步中,我们将继续跟踪有关病人的预后分析SPRR2A复发的肿瘤监测。

测试时SPRR2A在胃癌的诊断效果,我们还测试了它在细胞生物学行为,发现SPRR2A在胃癌细胞可以促进细胞增殖和迁移(数据没有显示)。据报道,SPRR2A是一个重要的球员在细胞迁移,迁移特性是相关的转录活动SPRR2A调节p53 [17]。p53可以引起细胞周期阻滞,细胞凋亡、DNA修复和抑制epithelial-mesenchymal过渡(EMT)。据报道,SPRR2A可以抑制p53的upregulation乙酰化作用,促使受损细胞暂时发挥间充质属性(18]。尽管EMT在诱导伤口愈合中起着重要的作用,它也是必不可少的癌症和转移的进展。因此,我们假设SPPR2A可能通过抑制乙酰化作用促进EMT p53在GC的发展,最后诱导GC细胞的浸润和转移。还需要进一步的研究,揭示了精确的机制。

虽然我们的研究首次表明,检测血清SPRR2A可以发挥互补作用在GC的诊断,尤其是当结合血清CEA的检测,本研究仍存在一些局限性:首先,这种前瞻性研究选择少量的胃癌病例和一个相对简单的组织类型(只有胃腺癌)。在先前的研究中,我们发现SPRR2A信使rna的基因芯片是胃腺癌中高度表达。因此,本研究的研究对象都是选择胃腺癌患者。进一步验证SPRR2A的角色在胃癌的诊断,多中心的回顾性研究,大样本大小和也需要多种组织类型(例如,胃麦芽和要点)。第二,没有严格的限制的类型胃炎控制情况下,和一些疾病可能影响血清SPRR2A水平的条件,如感染、缺血,和糖尿病,不考虑。此外,尽管我们的测试数据表明,GC患者的血清SPRR2A水平明显低于手术前,血清SPRR2A浓度的变化可以用于动态监测GC接受手术治疗的患者的预后。然而,由于小数量的情况下,我们没有评估血清SPRR2A的预后价值。

5。结论

总之,SPRR2A显示高GC患者的诊断价值;SPRR2A和CEA为GC是一种很有前途的新型生物标志物的诊断。

缩写

SPRR2A: 血清脯氨酸蛋白质小2 a
GC: 胃癌
答: 结肠癌
RC: 直肠癌
东航: 癌胚抗原
中华民国: 接受者操作特性曲线。

数据可用性

和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。

伦理批准

本研究的协议是附属的伦理委员会批准的杭州第一人民医院的浙江大学医学院。

所有参与者签署知情同意样本采集为研究目的。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

XXM长足贡献概念和设计,分析和解释数据,和准备的手稿。DXY参与了数据的采集。所有作者阅读和批准最终的手稿。

确认

这项工作得到了杭州科技委员会(2015号z01),中国传统医学委员会(2016号za158),浙江省医疗卫生科技计划项目(2020号ky688)和浙江省自然科学基金(没有。LY19H160053)。

补充材料

我们筛查GC-associated基因GC和正常胃组织使用基因芯片和发现SPRR2A表达增加GC组织高达12倍(补充数据中描述),这表明SPRR2A可能发挥重要作用在GC的发展。(补充材料)