强大的灯试验基础上类圆线虫属在18 s rRNA spp.-Derived部分序列人类尿液样本类圆线虫病诊断的潜在生物标志物

文摘

人类类圆线虫病土壤传播感染所致类圆线虫属stercoralis是一种最被忽视在所谓的被忽视的热带病(被忽略)。美国stercoralis是一种线虫,全球分布;据估计,它可能影响数以百万计的人,主要在热带和亚热带地区流行。诊断的困难导致感染率被低估了。无症状患者有慢性感染可导致严重高度传染综合症或传播类圆线虫病在免疫功能低下的患者。类圆线虫病很容易被误诊,因为传统faecal-based技术缺乏敏感性感染性幼虫形态识别的粪便。当前使用的分子方法都没有尿液样本代替粪便样本用于诊断类圆线虫病。本研究旨在比较,第一次使用一个新的loop-mediated等温扩增(灯)分子试验(强-灯)与传统方法对患者的尿液样本。24尿液样本取自患者纳入研究涉及两名西班牙医院类圆线虫病筛查使用寄生虫学的和血清学测试。类圆线虫属幼虫被发现在11个病人的粪便样本,从而确定他们的疾病。其他病人抗体滴定度很高但是没有发现幼虫粪便。聚合酶链反应和所有的尿液样本进行分析强-灯检测。没有使用PCR放大时发生。强-灯导致检测美国stercoralisDNA在尿液样本病人先前确认类圆线虫病的寄生虫学的测试和/或怀疑被感染的血清学方法。的强大的灯试验是一个有用的分子工具研究关于人类尿液样本的类圆线虫病。进一步验证后,强大的灯试验也可以用于补充和类圆线虫病的有效诊断在临床设置。

1。介绍

类圆线虫病是感染引起的寄生线虫属类圆线虫属:美国stercoralis并在较小程度上类圆线虫属fuelleborni。最初被称为“anguilulosis”或“Cochinchina腹泻”,世界卫生组织(世卫组织)认为这一种被忽视的热带疾病(元)1,2]。美国stercoralis有一个世界性的分布在热带和亚热带地区3]。它还可以发现在温带地区,如地中海地区,美国南部和日本。关于美国fuelleborni虽然主要影响非人灵长类动物,人类病例也被描述在非洲和东南亚,主要是在巴布亚新几内亚(4,5]。

类圆线虫病在世界范围内目前已经被计算从30 - 100人感染,主要发生在低收入国家和那些恶劣的卫生条件6,7]。变化对其评估在很大程度上是由于其无症状的临床征象,诊断方面的巨大困难,影响人民缺乏卫生系统。这种疾病的发病率,被认为是大大低估了(8]。美国stercoralis是一个土生土长的寄生虫在西班牙地中海海岸线,尤其是在瓦伦西亚省La Safor地区,西班牙,在高危人群达到12.4%农业相关工作(6,9];情况下也被报道了银行的埃布罗河10]。大多数欧洲病例关心寄生虫病从strongyloidiasis-endemic进口由移民地区,在较小程度上,旅客参观等领域的11,12]。

类圆线虫病临床表现取决于寄生虫发展和入侵阶段,其自体感染能力,患者的免疫状态。这可能表现为急性感染和慢性感染和产生一个高度传染综合症和/或传播感染。急性类圆线虫病是不常见的,通常出现在旅客返回从一个高流行地区遭受痒的皮炎(由于幼虫穿透皮肤),肺炎伴随着咳嗽和咳痰(当幼虫进入肺),和发烧。寄生虫产生胃肠疼痛伴有腹泻,恶心,偶尔,呕吐,当他们到达肠道。慢性(或低强度)类圆线虫病通常是无症状的,虽然它可以有轻微到中度症状,伴有胃肠道、肺和皮肤表现,嗜酸性粒细胞(75%的患者)13]。

它能产生高度传染综合征免疫抑制个体幼虫迁移时,伴随着更严重的肠道和肺部症状,发热、虚弱和大量的幼虫粪便和痰。免疫抑制治疗皮质类固醇、固体或造血的器官移植,癌症,htlv 1感染被认为是最重要的相关危险因素(4),营养不良和相关感染[拥有高度流行地区14]。Anti-TNF疗法(独立或与糖皮质激素)支持临床图片和高度传染的发展影响Th2细胞的免疫反应(15,16]。

幼虫可以穿过血脑屏障,产生脑炎和死亡率高达87%。治疗通常用于类圆线虫病不再是有效的在这一点上(17];筛选个人疑似类圆线虫病免疫抑制治疗前因此至关重要(4]。伊维菌素已被视为最有效治疗药物使用的控制策略;它仍然是首选的药物对于其他选项如阿苯达唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑更有效和更不安全6,16,18,19]。

然而,诊断无疑是主要问题关于类圆线虫病由于小知识提供有关疾病,其影响在nonendemic地区,目前小的敏感性和特异性,诊断技术在寄生虫学的方法需要专门人员,中心和没有黄金标准诊断。这意味着新诊断的病例定义和可能的验证方法极大地阻碍了(20.]。

当前的寄生虫学的和免疫美国stercoralis通过分子生物学方法诊断方法因此被补充(17,21,22]。不同的分子检测方法美国stercoralis在粪便样本已发达的描述类圆线虫属spp。18 s核糖体亚基序列,用聚合酶链反应(PCR),既简单又嵌套技术,和真实time-PCR (rt - PCR) [8,23]。最近的另一个替代方法分子诊断类圆线虫病病人的粪便样本(24)是loop-mediated等温核酸扩增(灯),它有优于其他更复杂的分子诊断技术25,26]。

灯是目前被认为技术拥有巨大的潜力在野外条件下,主要在流行地区,未来,高效、快速检测方法(27]。Fernandez-Soto和他的同事们(28)已经开发出一种新的灯方法调用强大的灯的分子检测类圆线虫属种虫害的尿液和粪便样本在小鼠模型。它也被用于分析病人的粪便样本以前由寄生虫学的诊断和分子(rt - pcr)方法,从而使其高效的诊断技术(28]。在这部作品中,强大的灯是用来在人类第一次尿液样本在两家医院求诊的患者相比,西班牙和寄生虫学的和血清学方法。

2。材料和方法

2.1。获得样品

本研究中使用的尿液样本来自热带医学患者(大部分是移民)参加单位在医院诊所de巴塞罗那(西班牙巴塞罗那)和医院de波尼恩特风(El合作农场阿尔梅里亚、西班牙)作为一个类圆线虫病的诊断筛查研究的一部分。入选标准是同时被病人血液、粪便和尿液样本;有一个积极的寄生虫学的和/或血清学诊断的类圆线虫属招募了一项多中心研究类圆线虫病诊断;因此便利抽样方式执行,考虑到上述标准。每个个体的临床情况被记录。所有的患者纳入研究首次分析了美国stercoralis血清学使用Microwell酶联免疫试剂盒(试管研究公司,卡尔斯巴德,CA) (https://ivdresearch.com/elisa/strongyloides-serum-antibody-detection-microwell-elisa/只有一个样本)和执行coproparasitological分析(里奇技术和琼脂板文化对病人参加医院de波尼恩特风,只是琼脂板文化对巴塞罗那医院诊所的病人)进行检测美国stercoralis。样品的光密度值(OD) IVD-ELISA≥1的测试被认为是积极的(根据制造商的规格)。这项研究涉及24尿液样本:16从医院诊所(巴塞罗那)和8从医院de波尼恩特风(阿尔梅里亚)。所有样本被送到在10毫升CIETUS管和冷冻贮藏直到使用。

2.2。道德的考虑

两个医院的伦理委员会批准了这项研究;后的尿液样本获得患者签署知情同意表格关于他们的分析。

2.3。获取和准备DNA样本

2.3.1。获取和准备类圆线虫属venezuelensisDNA

DNA美国venezuelensis感染性丝状幼虫(L3)用作PCR扩增积极控制和灯反应;他们的生物周期经常维护实验用受感染CIETUS Wistar鼠,萨拉曼卡大学。NucleoSpin组织工具包(Machery-Nagel)是用于从幼虫中提取DNA,按照制造商的说明。DNA浓度测定在NanoDrop分光光度计(nd - 1000)和最后5 ng /调整μL浓度。这个DNA (2μL)被用作所有后续PCR和积极控制灯的反应。

2.3.2。获取和病人的尿液的DNA做准备

这涉及2毫升整除的患者的尿液从解冻瓶;其余仍然冻结在-20°C。瓶是分析旋转在4000 rpm 15分钟获得使用i-genomic尿液沉积物中提取DNA的DNA提取迷你包(内含生物技术),按照制造商的说明。NanoDrop分光光度计(nd - 1000)是用于测量尿液样本的DNA浓度(100μL洗脱体积);然后他们被贴上标签并存储在使用两瓶(50 -20°CμL在每个)。

2.4。灯放大放大目标和特定的引物类圆线虫属DNA。

的强大的灯方法之前在CIETUS用于验证和发展类圆线虫属spp。DNA扩增17]。简单地说,选择的目标是一个放大类圆线虫属venezuelensis部分18 s rRNA基因(加入基因库号:AJ417026.1) 329碱基对(bp)序列;底漆Explorer V.4软件(https://primerexplorer.jp/e/)是用于设计一组四个引物(F3, B3、工厂检验计划和毕普)在这个序列(表1显示所选引物序列)。费舍尔科学合成装备,和净化产品在100 pmol /悬浮在超纯水μL最终浓度。

2.5。分子分析患者的尿液样本

2.5.1。外部引物PCR分析F3和B3

尿液样本分析的外部引物PCR使用F3和B3组4灯检测引物;正确的PCR功能已经被验证美国venezuelensisDNA。降落PCR (TD-PCR)进行了包括降低退火温度1度每放大周期保证一个合适的退火温度范围正确的目标序列扩增(29日];短暂,TD-PCR进行如下:94°C的60秒和着陆程序涉及18个周期;表2显示了反应混合物,用于TD-PCR放大条件。96 -热循环(梯度Mastercycler,埃普多夫)是用于所有PCR反应。

2.5.2。灯的分析病人的尿液样本

所有的尿液样本进行分析强-灯之前所描述的Fernandez-Soto et al。28]。表3描述所使用的反应混合物。所有反应都孵化60分钟在63°C加热块(K Dry-Bath)在80°C + 10分钟去活化的酶和停止反应;2μL尿液样本DNA用于放大;美国venezuelensisDNA (2μL)和超纯水而不是DNA (2μL)被用作积极和消极的控制,分别。

2.5.3。检测放大产品

(1)多聚酶链式反应。PCR扩增产品检测到1.5%琼脂糖凝胶(100毫升0.5 x此种,1.5 g琼脂糖),与溴化乙锭染色60 V 20分钟,然后在90 - 100 V一小时。凝胶是呈现拍摄使用紫外成像系统(UVITEC凝胶文档系统,剑桥,英国)。

(2)Strong-LAMP。通过观察白灯放大产品视觉检测浊度底部的反应管和通过比色变化对添加2μL我绿色SYBR荧光染料(英杰公司)(1:10;每个反应管10000 x)。绿色表示积极的结果和橙色- 1(即。,维护染料的原始颜色)。比色结果验证了1.5%的琼脂糖电泳观察乐队出现在积极的特征模式灯的结果。凝胶被拍到和图像保存在数字格式进行编辑。

2.6。统计分析

占据国会议员14.0统计软件被用于分析数据。一个描述性的分析;定量变量显示为中位数或意味着相应的分散措施(四分位range-IQR或标准Deviation-SD);为每个测试意义5%置信区间计算。协议血清学和coproparasitological筛查强大的灯的结果本研究量化和分析使用kappa系数(κ),解释为:< 0.00差, 轻微的, 公平的, 温和, 实质,> 0.80几乎完美的(30.]。

3所示。结果

3.1。血清学和寄生虫学的数据

研究结果显示,54%的样本来自拉丁美洲的患者(主要来自玻利维亚(9/24),其余来自非洲(尤其是冈比亚(4/24)和几内亚比绍(2/24))。病人的流行病学数据表示,62.5%(15/24)是男性,大多数是年龄在30至60岁(75%),和一个 ( )。关于临床照片,50%(12/24)的目标人群有症状,如腹痛、腹泻、荨麻疹和瘙痒。嗜酸性粒细胞在45.8%(11/24)的人口,一个 ( ),伴随着高IgE水平52.15%(12/23),与一个 ( )(表4)。类圆线虫病诊断试验研究显示,87.5%的人口为IVD-ELISA≥1滴定度 ( )。然而,37.5% (CI) 0.19 - -0.614 95%的人口被coproparasitological积极分析琼脂培养板法(个人导致辅料表1和2。一旦确诊,95.8%(23/24)的个人与伊维菌素治疗;但一个病人随访。

3.2。人类的尿液样本分析TD-PCR F3-B3化验

图1显示了TD-PCR放大结果;没有放大的样品分析。

3.3。强大的灯的分析病人的尿液样本

发现50%的个人(0.25 - -0.67 95% CI)是积极的根据测试参数。图2显示强大的灯的结果分析病人的尿液样本医院诊所de巴塞罗那和图3从医院de波尼恩特风;其他测试的结果也会显示出来。

3.4。协议分析和筛查强大的灯

强大的灯结果相比试管测试结果然后coproparasitological分析结果。图中的数字代表样本的总证明积极的在每个测试分析。规模较低的轴上显示比例与总积极的个人(图4);37.5%的协议是根据观察和可怜的相关性试管和价值强大的灯分析( ; )。这样的数据不同于观察到的关于色情文学和强大的灯结果协议是79.17%。的值给温和的相关性( ; ),根据上面描述的分类。

4所示。讨论

关于类圆线虫病的一个主要问题仍然是缺乏一个真正的疾病诊断的金标准。尽管寄生虫学的方法继续被认为是“临床或确定性诊断”(即。,they enable visualising the larvae in faecal samples), they involve great disadvantages, mainly regarding their sensitivity [6,21]。

血清学方法也有关于敏感性的问题(特别是在疾病的急性期)和特异性由于经常产生交叉反应有关其他线虫的诊断。pcr分子方法和变量(例如,rt - pcr)近年来先进的最合适的诊断类圆线虫病,即使需要复杂的基础设施和专业设备和人员在日常实践和昂贵而且很难执行strongyloidiasis-endemic地区的野外条件下(17,31日]。

缺乏一个合适的和标准化的诊断方法导致低估了疾病的患病率。尽管移民筛选在这项研究中,有趣的是,大多数人来自拉丁美洲,主要来自玻利维亚。研究不一致当报告疾病的患病率在拉丁美洲;值高于20%在阿根廷、厄瓜多尔、委内瑞拉、秘鲁和巴西(32]虽然Getaz的研究[33]在玻利维亚估计患病率为20.0%。嗜酸性粒细胞被发现在45.8%(11/24)的目标人群伴随着IgE增产9例是在类圆线虫病已报告参数情况下(34]。然而,个人痛苦嗜酸性粒细胞不能总是认为这取决于这种寄生虫的周期和伴随的感染35]。关于IgE水平,正常水平在个人感染已报告类圆线虫属stercoralis他也证明了人类t细胞阳性淋巴细胞病毒1型(htlv 1) [36]。

困难对于诊断尤为重要对于免疫力低下的人或免疫抑制候选人(例如,在移植)谁能开发高度传染导致致命的结果对病人(4]。一项由Luvira et al。37),包括免疫功能不全的患者由于不同的原因,分析了因素如年龄,性别,和免疫功能低水平和报道,他们不与类圆线虫病;患病率从5% - -7%不等,coproparasitological分析琼脂是最敏感的技术在这个研究37]。新的敏感,具体,技术简单,经济适用的诊断方法因此必须发达;他们还必须成为纳入常规临床实践类圆线虫病的筛查方法患者候选免疫抑制治疗。

然而,大多数分子诊断检测的方法美国stercoralis都是基于使用粪便或土样在寻找幼虫。涉及问题收集粪便样本(串行、至少3样本),处理(通常要求他们集中),和存储它们。尿液分析是另一种使诊断(20.,28,38,39]。新的分子诊断方法如灯用于尿样因此提供了一个有趣的方法,结合这一技术的优势其他分子(即方法。PCR)和尿液样本分析的优点。先前的研究已经评估了尿液中寄生虫的存在;一项由Lodh et al。40)检测美国stercoralis -通过分子生物学方法提取DNA,蒙et al。41)评估寄生虫等常规方法和分子诊断q-PCR分析尿液样本和粪便材料;他们发现qPCR尿液分析灵敏度是17%相比,粪便材料分析灵敏度(63%41]。

在之前的工作,强大的灯灯检测方法的适应类圆线虫属venezuelensis已经证明有效的关于粪便和尿液样本在实验感染模型中涉及啮齿动物和对病人的粪便样本也有确认吗美国stercoralis感染(28]。目前的工作评估,第一次强大的灯的方法作为一种分子检测方法美国stercoralis在病人的尿液样本。

外部引物PCR最初使用F3和B3(尽管所有样品都成为放大)验证是否PCR可以作为分子方法分析尿液样本。单一PCR用于其他研究为检测提供了良好的效果美国stercoralisDNA在粪便样本和散文作为方法互补的分子DNA提取前幼虫粪便样品中浓度(42]。PCR F3-B3(与0.01 ng类圆线虫属spp。有效地检测DNA检测极限)美国venezuelensis在粪便样品在实验感染模型28]。

然而,当使用PCR阳性扩增结果没有F3-B3在病人的尿液样本,这意味着它不能被提出作为一个互补的分子方法类圆线虫病的确诊。然而,使用强大的灯方法和样本导致积极的可见放大的结果有关色度变化和解决反应产物对琼脂糖凝胶。

十一24尿液样本分析的寄生虫学的积极的结果美国stercoralis通过至少一个(即coproparasitological诊断方法。,Ritchie technique and/or agar plate culture), and 45.83% of the samples were positive by强大的灯。此外,16%的样品少了明显的绿色(指示扩增)比其余的阳性样本,和乐队的模式得到了调光器在琼脂糖凝胶。这些样品的蛋白质含量高可以放大有限;260/280比例吸光度有关DNA从样本中提取(通常小于1,大多数是约0.5)远低于期望值为纯粹的核酸(在1.8和2.0之间;≥1.8进行DNA),从而限制分析的目的。如此高的蛋白质浓度会抑制PCR分析样品的主要原因。

强大的两个尿样(我的灯放大。D: 3和4)获得的病人有消极的粪便样本结果琼脂板的文化。给可怜的敏感性coproparasitological技术在分析单个病人的粪便样本,样品可以证明正面如果连续分析被执行(至少三个样本相同的病人,在交替天)想象美国stercoralis幼虫(21]。

关于血清学分析结果,大多数样本血清学试管指数大于1 OD,考虑考虑结果积极的截止限制这种技术(43]。例如,示例3有一个非常高的试管指数(13.7 OD),说明反美国stercoralis抗体。值得注意的是,样品13由琼脂板文化和积极的强大的灯有一个试管血清学指标考虑负(0.005 OD)。它已经指出,假阴性时有时出现使用试管血清学测试(43]。只有一个人是HIV阳性(A2阶段)被证明是积极的在所有的测试中进行这项研究。检测寄生虫的测试更有效率的这些人,因为他们可能有一个高度传染综合症,当观察到一个案例报告Grossi et al。44)描述一个hiv阳性男性有外周t细胞淋巴瘤发展高度传染综合症和成功治疗皮下注射伊维菌素(44]。在巴西的一项研究Marchi-Blatt和Aparecida-Cantos [45)相比类圆线虫属stercoralis诊断技术对HIV阳性和阴性患者;研究发现,HIV阳性的患者更高美国stercoralis感染的频率( )(45]。一项研究关于尿液分析在埃塞俄比亚通过Hailegebriel et al。46)表明,coproparasitological分析和之间的协议强大的灯的尿样本研究78%;因此应该有价值的评估测试的效率在一个更广泛的人群。

尽管使用外部引物PCR F3-B3和强大的灯的方法已被证明为检测具有相同的限制类圆线虫属spp。DNA (0.01 ng)28),从分析尿液样本获得的结果是一致的灯的方法在这方面拥有更大的宽容所描述的其他作者关于可能的抑制剂在生物样品分析关于PCR (47]。

尽管需要更多的研究将涉及增加尿液样本分析,目前的结果表明,工作强大的灯的方法和获得的粪便(28)表明,该技术可以作为一个互补的分子工具在诊断类圆线虫病。它可以作为常规PCR分子方法,因为它具有一定的优势,例如,it is cheaper as samples are amplified at constant temperature (59-66°C) making equipment such as water baths and thermal blocks sufficient, it can detect small concentrations of DNA in samples and is highly specific making it a simple technique to use [48- - - - - -50]。

5。结论

的强大的灯的分子诊断方法用于检测第一次类圆线虫属spp。DNA在病人的尿液样本。的强大的灯在检测方法证明有效美国stercoralisDNA在患者的尿液样本证实类圆线虫病和/或寄生虫感染的血清学的怀疑。的强大的灯的方法可以用于检测尿液样本作为补充方法美国stercoralis感染。

数据可用性

所有数据用于支持本研究的结果包括在手稿和数字。

信息披露

投资者没有参与研究设计、数据收集和分析,决定发表,或准备的手稿。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

佩德罗Fernandez-Soto和卡门·t·Celis-Giraldo同样贡献了同样的工作。

确认

我们想感谢杰森·加里翻译手稿。本研究支持的卫生研究所卡洛斯三世,ISCIII、西班牙(http://www.isciii.es),资助:RICET RD16/0027/0018、DTS16/00207 PI16/01784,欧盟共同筹资费德(洋底Europeo de Desarrollo地区)“Una manera de做欧罗巴”。大学罗萨里奥,波哥大(哥伦比亚),介绍了开放存取的指控。

补充材料

表1。个别病人结果从医院诊所de巴塞罗那,西班牙巴塞罗那。表2。个别病人结果从医院•德•波尼恩特风El合作农场,西班牙阿尔梅里亚。(补充材料)

引用

1. a·奥尔森l . van Lieshout h·马蒂et al .,“Strongyloidiasis-the最被忽视的被忽视的热带病?”事务皇家热带医学和卫生学会的,卷103,不。10日,967 - 972年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. r·托莱多c . Munoz-Antoli和j·g·埃斯特万”类圆线虫病与强调人类感染及其不同的临床类型,“寄生虫学的进步卷,88年,第241 - 165页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. g . a . Schad l . m . Aikens, g·史密斯。”类圆线虫属stercoralis有规范的迁徙路线通过主机?”《华尔街日报》的寄生虫学,卷75,不。5,740 - 749年,1989页。视图:谷歌学术搜索
4. f . Schar Trostdorf, f .谷俊侠等。”类圆线虫属stercoralis:全球分销和风险因素,”《公共科学图书馆·被忽视的热带疾病,7卷,不。7篇文章e2288 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. t . Thanchomnang p . m . Intapan o . Sanpool et al .,”第一个分子的识别类圆线虫属fuelleborni在长尾猕猴在泰国和老挝人民民主共和国显示相当大的遗传多样性,”寄生虫学杂志》,卷93,不。5,608 - 615年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. s . Puthiyakunnon s Boddu y李et al .,“类圆线虫病——一个洞察其全球患病率和管理,“《公共科学图书馆·被忽视的热带疾病,8卷,不。8篇文章e3018 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. a . Tuyizere a . Ndayambaje t·d·沃克et al .,”普遍存在的类圆线虫属stercoralis感染和其他土壤传播寄生虫通过横断面调查农村社区Gisagara区,南部省份,卢旺达,“事务皇家热带医学和卫生学会的,卷112,不。3、97 - 102年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. m . Dorris和m . Blaxter”类圆线虫属的小亚基核糖体RNA序列stercoralis,”国际寄生虫学杂志,30卷,不。8,939 - 941年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. r . i Adell和v . d .马尔克斯Estrongiloidiasis: epidemiologia manifestaciones丹尼y记录。Experiencia en una带endemica: la comarca de la Safor(瓦伦西亚)、“心血管Infecciosas y Microbiologia我们25卷,38-44,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. a p·r·桑切斯·古兹曼Guillen s . m . et al .,“西班牙地中海沿岸类圆线虫病流行,”QJM:国际医学杂志》上,卷94,不。7,357 - 363年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. g . Ramirez-Olivencia m。c·埃斯皮诺萨,a, b .马丁et al .,“在西班牙进口类圆线虫病,”国际传染病杂志》上卷。18日,32-37,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. w . Winnicki m·埃德尔·到Mazal f . j . Mayer g . Sengolge l·瓦格纳,“流行_Strongyloides stercoralis_感染和肾移植受者中高度传染综合症中欧,”科学报告,8卷,不。1,第15406条,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. 人感染t . b . Nutman。类圆线虫属stercoralis和其他相关类圆线虫属的物种。”寄生虫学,卷144,不。3、263 - 273年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. d . c . Pichard j·r·汉斯莱·e·威廉姆斯,a . b .阿波罗公元Klion,和j·j . DiGiovanna“迁徙的快速发展、线性和波形的病变与免疫抑制,”美国皮肤病学会杂志》上,卷70,不。6,1130 - 1134年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. t·阿里·s . Kaitha马哈茂德,a . Ftesi j .石头和m . s .青铜,“anti-TNF疗法的临床使用和增加感染的风险,”药物、医疗和患者安全5卷,第99 - 79页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. m . f . Khaliq r . e . Ihle和j·佩里,“免疫抑制和抗肿瘤坏死因子治疗导致类圆线虫属高度传染综合症,”在传染病病例报告卷,2018篇文章ID 6341680, 4页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. d . Buonfrate f·蒙、f . Perandin和z Bisoffi,”诊断的新方法类圆线虫属stercoralis感染。”临床微生物学和传染病,21卷,不。6,543 - 552年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. y Suputtamongkol: Premasathian, k Bhumimuang et al .,“单引号和双剂量的伊维菌素的临床疗效和安全性与7天高剂量阿苯达唑为慢性类圆线虫病,”《公共科学图书馆·被忽视的热带疾病,5卷,不。5篇文章e1044 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. c . Henriquez-Camacho e . Gotuzzo j·埃切et al .,“伊维菌素与阿苯达唑和噻苯咪唑类圆线虫属stercoralis感染。”Cochrane系统评价的数据库,2016年CD007745条。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. a . Requena-Mendez p . Chiodini z Bisoffi, d . Buonfrate e . Gotuzzo和j·穆尼奥斯,”类圆线虫病的实验室诊断和跟进:系统回顾,“《公共科学图书馆·被忽视的热带疾病,7卷,不。1,文章e2002, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. m·蒙特斯c·汀和n . Barros”类圆线虫属stercoralis:但未见。”当前舆论传染病,23卷,不。5,500 - 504年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. f·m·波拉·m .马耳他、p·d·马科斯et al .,“类圆线虫属的分子诊断stercoralis移植候选人中,“移植传染病,20卷,不。4篇文章e12909 2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. a·佩雷拉,j . p .玛雅f·豪尔赫·d·j·哈里斯,“线虫的分子筛查lacertid蜥蜴从伊比利亚半岛和巴利阿里群岛使用18 s rRNA序列,”寄生虫学杂志》,卷87,不。2、189 - 194年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. m·r·瓦特·g·詹姆斯,y Sultana et al .,“loop-mediated等温扩增(灯)测定类圆线虫属stercoralis在凳子上使用视觉检测方法syto - 82荧光染料,”美国热带医学和卫生杂志》上,卷90,不。2、306 - 311年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. m . Parida s Sannarangaiah p k, p . v . Rao k .盛田昭夫,“环介导等温扩增(灯):新一代的创新基因扩增技术;在传染病临床诊断的视角评论在医学病毒学,18卷,不。6,407 - 421年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. k . Dhama k .恋人s Chakraborty et al .,“Loop-mediated等温扩增的DNA(灯):一个新的诊断工具灯的世界动物和人类病原体的诊断:复习一下,”巴基斯坦生物科学杂志》上,17卷,不。2、151 - 166年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. z . k . Njiru”Loop-mediated等温扩增技术:对护理诊断,”《公共科学图书馆·被忽视的热带疾病》第六卷,没有。6篇文章e1572 2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. p . Fernandez-Soto A . Sanchez-Hernandez j . Gandasegui et al .,“Strong-LAMP:一盏灯试验类圆线虫属spp。粪便和尿液样本的检测。对人类类圆线虫病的诊断从一种啮齿动物模型中,“《公共科学图书馆·被忽视的热带疾病,10卷,不。7篇文章e0004836 2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. p . Fernandez-Soto诉Velasco Tirado, c·卡·罗德里格斯j·l·Perez-Arellano和a . Muro”长期冷冻储存尿液样本:一个麻烦PCR结果在血吸虫spp。DNA检测?”《公共科学图书馆•综合》,8卷,不。4篇文章e61703 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. 答:皮特里和c .萨宾”评估协议,”医疗统计皮特里和c .萨宾Eds。,pp. 118–121, Wiley, UK, 3rd edition, 2009.视图:谷歌学术搜索
31. m·a . Levenhagen和j . m . Costa-Cruz“更新人类类圆线虫病的免疫学和分子诊断,”Acta Tropica卷。135年,33-43,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. d . Buonfrate m . a . Mena a Angheben et al .,“类圆线虫病患病率在拉丁美洲:文献的系统回顾,“流行病学和感染,卷143,不。3、452 - 460年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. l . Getaz r·卡斯特罗,p .扎莫拉et al .,“流行病学类圆线虫属stercoralis玻利维亚感染高危患者的并发症,”《公共科学图书馆·被忽视的热带疾病,13卷,不。1,文章e0007028, 2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. a·米尔d . Benahmed r . Igual et al .,“Eosinophil-selective介质在人类类圆线虫病,”寄生虫免疫学,28卷,不。8,397 - 400年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. c . Carranza-Rodriguez m . Escamilla-Gonzalez Fuentes-Corripio, m . j . Perteguer-Prieto t . Garate-Ormaechea和j·l·Perez-Arellano”蠕虫病和嗜酸性粒细胞在西班牙(1990 - 2015),“心血管Infecciosas y Microbiologia我们,36卷,不。2、120 - 136年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. m . Higashiarakawa t . Hirata t .田中et al .,“正常血清IgE水平和嗜酸性粒细胞计数期间展出类圆线虫属stercoralis感染。”寄生虫学国际,卷66,不。1,第812 - 807页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. 诉Luvira k . Trakulhun m . Mungthin et al .,“比较类圆线虫病在免疫功能低下的患者,诊断”美国热带医学和卫生杂志》上,卷95,不。2、401 - 404年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. 任和a . Metwally”障碍的诊断类圆线虫属stercoralis,”寄生虫学家美国杂志,7卷,不。1,5 - 12,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. a . Requena-Mendez d . Buonfrate z Bisoffi, j·m·古铁雷斯“人类类圆线虫病的诊断的进步,”目前热带医学报告,1卷,不。4、207 - 215年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. n . Lodh r·卡罗美国开发,a . Scott a . Krolewiecki和c . Shiff”的诊断类圆线虫属stercoralis:parasite-derived DNA的检测尿。”Acta Tropica卷。163年,第四,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. f .蒙g . la马卡f . Perandin et al .,“一个诊断的研究比较传统和实时PCR类圆线虫属stercoralis尿液和粪便样本。”Acta Tropica卷,190年,第287 - 284页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. h . Moghaddassani h . Mirhendi m . Hosseini m . Rokni g . Mowlavi和e·克钦独立军”的分子诊断类圆线虫属stercoralis感染的特定DNA PCR检测人类的粪便样本,”伊朗寄生虫学杂志》》第六卷,没有。2,23-30,2011页。视图:谷歌学术搜索
43. b好,s . Houze h·塔拉巴尼et al .,“快速酶联免疫吸附试验评价类圆线虫病的诊断,“临床微生物学杂志,48卷,不。5,1716 - 1719年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. p . a . Grossi d . Lombardi Petrolo et al。”类圆线虫属stercoralis高度传染的感染艾滋病毒的病人成功治疗皮下注射伊维菌素,”热带医学和传染病,3卷,不。2,p。2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. j·马奇平板和g . Aparecida章”,评价的诊断技术类圆线虫属stercoralis在人类免疫缺陷病毒(HIV)阳性和HIV阴性个体在伊塔雅伊,巴西。”巴西传染病》杂志上,7卷,不。6,402 - 408年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. t . Hailegebriel b·佩特和t . Endeshaw寄生虫学的评价的检测方法类圆线虫属stercoralis个体在选择医疗机构在亚的斯亚贝巴,埃塞俄比亚,”埃塞俄比亚健康科学杂志》上,27卷,不。5,515 - 522年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. m·h·邓l . y .钟o . Kamolnetr y Limpanont, y和z Lv,“寄生虫的检测loop-mediated等温扩增试验:更新技术的回顾和未来前景,”传染病的贫困,8卷,不。1,p。20日,2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. p . r . Sahoo k . Sethy s Mohapatra和d .熊猫“环介导等温扩增:一个创新的动物疾病,基因扩增技术”动物世界,9卷,不。5,465 - 469年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. Khurana和s·塞提,”土壤传播的蠕虫病的实验室诊断热带寄生虫学,7卷,不。2、86 - 91年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. m . Keikha”灯方法最好的候选人取代使用PCR方法,”马来西亚医学科学杂志》上,25卷,不。1,第123 - 121页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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