文摘
越来越多的证据表明,维生素D受体(论述)基因是一个重要的候选基因影响骨质疏松症的发展。这项研究的目的是评估的潜在基因变异之间的联系论述基因和骨矿物质密度(BMD)和中国绝经后妇女的骨质疏松症。这项研究包括970名中国绝经后妇女绝经后骨质疏松症(482)和健康对照组(488)。腰椎BMD (L2 - 4前后视图)、股骨颈臀部和臀部是评估使用诺兰庄园XR-46双能x线吸收仪(用)。的基因型论述遗传变异是由创建限制site-PCR (CRS-PCR)和经DNA测序方法。我们的数据表明,论述p。Glicine (g) 14丙氨酸(Ala)和p。组氨酸(他)305 glutanine (Gln)基因变异与调整后的股骨颈髋部BMD相关统计,腰椎BMD调整,调整后的总髋部BMD (值< 0.05)。这项研究的结果表明论述p。Gly14Ala和p。His305Gln基因变异与BMD下降显著相关中国绝经后妇女和可能被用作评估分子标记BMD和骨质疏松症的风险。
1。介绍
骨质疏松症,一个重要的和复杂的绝经后妇女的健康问题,是一个多基因、多因素疾病,特点是脆弱性骨折的风险增加和减少骨矿物质密度(BMD) (1- - - - - -11]。发表在过去的十年里,许多研究已经指出的潜在协会环境和基因变异与BMD和骨质疏松症(8- - - - - -33]。广泛接受的是遗传因素在骨质疏松症的发病机制发挥主要功能(34- - - - - -39]。然而,骨质疏松症的确切病因仍知之甚少。近年来,维生素D受体(论述)基因被认为是一个重要的候选基因的改造和发展弹道导弹防御和骨质疏松症(8- - - - - -32]。的论述基因位于染色体包含14个外显子和12 q12-q14,核受体家族的成员的转录因子(11,40,41]。论述调制影响基因的表达和转录参与骨质形成和钙吸收,如骨钙素和钙结合蛋白(11,42]。的论述基因是多色的基因和单核苷酸多态性(SNPs)论述基因可能影响的表达和功能论述蛋白质,证明了影响BMD和骨质疏松症的风险。莫里森等人首先调查的遗传变异论述基因可以预测脊椎和股骨BMD在白人女性12,13]。自那以后,大量的流行病学研究已经报道了论述遗传变异(如霍英东我(rs10735810),Bsm我(rs1544410),美国心理学协会我(rs7975232))与BMD和骨质疏松症在不同民族8- - - - - -32]。然而,到目前为止,还没有发表类似研究p的潜在关系。Glicine (g) 14丙氨酸(Ala)和p。组氨酸(他)305 glutanine (Gln)的遗传变异论述基因与BMD和骨质疏松症。因此,考虑的重要作用论述基因BMD和骨质疏松症的发病机理,本研究的目的是探讨p。Gly14Ala和p。His305Gln基因变异的论述基因和评估潜在的协会的这两个单核苷酸多态性与BMD和中国绝经后妇女的骨质疏松症。
2。对象和方法
2.1。研究对象
我们招收了970名中国绝经后女性在绝经后骨质疏松症的主要包含482(45 - 86岁)和488名健康对照组(43 - 89岁)的病例对照研究。所有受试者招募了来自中国人民解放军305医院2010年2月到2014年3月。所有与会者都中国汉族无关的基因。主题与绝经后骨质疏松症主要被医生诊断和确认。个人的过去或现在历史疾病影响骨代谢或吸毒的人会影响骨代谢被排除在本研究之外。本研究的协议是经当地伦理委员会批准的中国人民解放军305医院。知情同意是获得所有受试者中病例对照研究。
2.2。骨矿物质密度测量
腰椎BMD (L2 - 4前后视图)、股骨颈臀部和臀部是评估使用诺兰庄园XR-46双能x线吸收仪(用)(美国WI诺兰庄园Coopersurgical集团)43]。BMD值自动计算出骨矿物质含量(g)和骨区域(cm2),表示为g / cm2。所有数据显示为均值±SD (SD,标准定义的意思是,BMD值调整年龄、身高、体重)。
2.3。DNA提取、PCR扩增
外周静脉血液收集从每个主题在这个病例对照研究。从血液基因组DNA分离使用QIAamp DNA血液迷你包(试剂盒,GmbH,德国),然后储存在−80°C到分析。根据人类的论述基因的DNA序列(基因库ID: NG_008731.1)和(基因库ID: NM_000376.2),信使rna序列的特定引物聚合酶链反应(PCR)被设计使用底漆总理5.0软件(总理Biosoft国际,帕洛阿尔托,CA)。表1显示引物序列的详细信息,地区,退火温度和片段的大小。PCR扩增的基因变异论述在20 -基因进行μL反应混合物,包含50 ng模板DNA, 1 x缓冲区(100更易Tris-HCl, pH值8.3;500年更易与氯化钾),0.25μ2.0摩尔引物,更易与MgCl20.5、0.25更易与核苷酸,U Taq DNA聚合酶(豆类,大连,中国)。PCR循环协议是由一个初始变性5分钟在94°C,紧随其后的是32个周期94°C的30年代,在相应的温度下退火(见表1)30年代,30年代和72°C,最终在72°C扩展了10分钟。PCR产物分离在2.0%琼脂糖凝胶电泳染色包括0.5μ克/毫升溴化乙锭和观察在紫外线照射下。
2.4。基因分型
基因变异的基因型p。Gly14Ala和p。His305Gln在论述基因是由创建限制网站与一个引物的PCR (CRS-PCR)方法包含一个核苷酸不匹配,使得使用限制性内切酶识别序列变化(44- - - - - -48]。制造商的指示后,放大PCR产品(10μL)与2 U选择限制性内切酶消化(表中给出1在37°C) 10 h。消化PCR产品包含0.5在2.5%琼脂糖凝胶电泳μg / mL溴化乙锭染色1 h在100 V,和不同的基因型论述在紫外光照射下被直接可视化的遗传变异。为了证实基因分型结果的一致性CRS-PCR方法,我们选择随机样本(样本总数的20%)再分析的DNA测序方法(ABI3730xl DNA分析仪,应用生物系统公司,促进城市,CA)。
2.5。统计分析
统计分析都是由社会科学统计软件包分析软件(SPSS 16.0版;SPSS Inc .);美国芝加哥,IL)。卡方()测试是用来比较等位基因和基因型频率的分布的研究主题。的基因型频率论述基因变异为哈迪温伯格平衡(HWE)进行了测试。多元回归分析来评估潜在变量之间的关系。所有数据都表示为平均数±标准差。被设定为显著水平。
3所示。结果
3.1。鉴定和基因分型的论述的遗传变异
通过CRS-PCR和DNA测序方法,我们发现两个论述遗传变异(p。Gly14Ala和p。His305Gln) in this study. Our DNA sequencing analyses suggest that the p.Gly14Ala is a nonsynonymous mutation, which caused GC exon3的突变论述基因导致了g阿拉巴马州的氨基酸替换(p。Gly14Ala、参考序列,基因库id: NG_008731.1 NM_000376.2, NP_000367.1)。PCR产品消化的美我限制性内切酶,分为三个基因型,GG(195和18 bp), GC(213195和18 bp)和CC(213个基点、表1)。至于p。His305Gln, DNA测序分析表明,它也是一个产生突变,exon9 C→G突变引起的论述基因和导致Gln氨基酸替换(p。His305Gln、参考序列,基因库id: NG_008731.1 NM_000376.2, NP_000367.1)。PCR产品消化的美第三限制性内切酶和分为三个基因型,CC (bp) 17个和189个,CG (bp) 17个和206189个,GG(206个基点、表1)。
3.2。等位基因和基因型频率
的等位基因和基因型频率分布p。Gly14Ala和p。His305Gln基因变异的论述基因在表中做了总结2。allele-G和基因型GG的p。Gly14Ala allele-C和基因型p CC。His305Gln主要等位基因和基因型的遗传变异的研究主题,分别(表2)。至于p。Gly14Ala,我们发现显著差异情况下的等位基因频率(G, 64.11%;C, 35.89%)和健康对照组(G, 69.67%;C, 30.33%,,)。此外,基因型频率在例(CC GC GG, 43.57%, 41.08%, 15.35%)显著不同于健康对照组(CC GC GG, 47.13%, 45.08%, 7.79%,,、表2)。至于p。His305Gln,等位基因频率之间的显著差异被发现的病例(C, 67.53%;G, 32.47%)和健康对照组(C, 72.34%;G, 27.66%,,)。此外,基因型频率情况下(CC, 46.06%;GG CG, 42.94%, 11.00%)不一致与健康对照组(CC, 54.30%;GG CG, 36.07%, 9.63%,,、表3)。卡方()测试表明,这两种论述遗传变异是安装在HWE(所有值> 0.05)。
3.3。之间的联系论述基因变异和骨矿物质密度
价值的体重、年龄、身高、体重指数(BMI)、调整股骨颈髋部BMD,腰椎BMD的调整,调整后的总髋部BMD在不同基因型的研究主题报道在表3。我们的数据表明,论述p。Gly14Ala基因变异与调整后的股骨颈髋部BMD相关统计,腰椎BMD的调整,调整后的总髋部BMD。个人基因型GG显示明显高于调整后BMD值比GC和CC基因型(值< 0.05,表3)。至于p。His305Gln,在调整后的股骨颈髋部BMD显著差异,腰椎BMD的调整,调整后的总髋部BMD检测在不同基因型的研究主题。个体与基因型CC明显高于调整后BMD值比和GG基因型CG (值< 0.05,表3)。
4所示。讨论
已经证实,骨质疏松症是一种常见的骨骼疾病,其特征是低骨密度下降引起的骨代谢,增加破骨细胞的活动1- - - - - -9,13,49]。越来越多的证据支持的论述基因是最重要的一个候选基因修改的BMD新陈代谢和骨质疏松症的发病机理。基因变异的论述基因已经被证明是可能与BMD和骨质疏松症(8- - - - - -32]。然而,从这些已发表的研究结果相互矛盾,但不是决定性的。协会的机制论述遗传变异与BMD和骨质疏松症仍然是不确定的。在目前的研究中,我们评估的遗传影响p。Gly14Ala和p。His305Gln基因变异的论述基因易感性BMD和中国绝经后妇女的骨质疏松症。我们的数据表明,有显著差异在等位基因和基因型的分布主要绝经后骨质疏松症患者和健康对照组p。Gly14Ala和p。His305Gln基因变异的论述基因(值< 0.05,表2),这两个基因变异与减少对BMD相关统计和骨质疏松症(值< 0.05,表2)。因此,本研究的结果表明,allele-C和p基因型CC。Gly14Ala allele-G和基因型GG的p。His305Gln遗传变异论述基因可能导致中国绝经后妇女骨密度降低的风险(表3)。的论述p。Gly14Ala和p。His305Gln c。269C>A genetic variants are nonsynonymous coding mutations that caused amino acid replacement in论述蛋白质。这两个基因变异可能与其他有关论述遗传变异(如Fok)我(rs10735810),标准检验局(rs1544410)和ApaI (rs7975232))已被证明影响的功能论述蛋白质和影响BMD和骨质疏松症的发展做出贡献。结果从这些报道可以支持我们的研究结果公布。我们的数据提供了更多的证据来支持的论述基因变异可能影响发展的BMD和骨质疏松症。因此,我们假设p。Gly14Ala和p。His305Gln基因变异的论述基因扮演类似的功能发展的BMD和骨质疏松症。我们的研究结果表明论述p。Gly14Ala和p。His305Gln基因变异与调整后的股骨颈髋部BMD相关统计,调整腰椎BMD,总髋部BMD和调整。这项研究的结果表明论述p。Gly14Ala和p。His305Gln基因变异与BMD显著相关,中国绝经后妇女骨质疏松症和可能被用作评估分子标记骨质疏松症的风险。
5。结论
总之,这个病例对照研究是第一个报道的影响论述p。Gly14Ala和p。His305Gln基因变异在中国绝经后妇女BMD和骨质疏松症。我们的发现表明这两个基因变异可能导致影响BMD和骨质疏松症的发病机制。更多的流行病学和机械的研究与大量不同种族人口是必要的来确认我们的研究结果,进一步评估的作用论述在调节BMD和骨质疏松症的遗传变异。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突。