血清细胞因子il - 10、il - 12在慢性肝病:免疫和炎症反应

文摘

当前的研究旨在探讨血清白细胞介素- 10”和interleukin-12与丙肝病毒感染在慢性肝病和评估其可能在肝细胞癌发展作为新的生物标志物。材料和方法。四十一患有慢性肝病患者(33港丙肝病毒感染和8 HCV-negative病人)参加本研究,组织病理学诊断为15个HCC患者16 LC患者,肝组织学兼容precirrhotic肝炎患者和10 (PCH)。十个病人抱怨胆囊炎包括nondisease控制。血清il - 10、il - 12水平测定,酶联免疫吸附测定(ELISA)。结果。hcv感染的患者相比,显示高表达的il - 10、il - 12 nondisease控件(),但没有显著差异对他们表达HCV-negative病人。血清il - 10、il - 12与疾病进展显著升高()和il - 10之间的正相关系数发现,il - 12 (,),和转氨酶值表明他们可能在慢性炎症导致HCC进展中的作用。结论。il - 10、il - 12可能参与了慢性炎症导致HCC进展及其评价可以作为新的生物标志物反映在肝癌发展程度的炎症。

1。介绍

丙型肝炎病毒(HCV)感染影响近3%的世界人口患病率最高(15%)在埃及(1]。丙肝病毒感染导致慢性肝炎在70%以上的受感染的病人,而20 - 30%的病人恢复自然(2]。病毒感染的发病机理和结果明显受到宿主免疫反应的影响。免疫系统能够消除很多病毒感染的急性期。然而,一些病毒、丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV),可以逃避宿主的免疫反应,建立持续感染(3]。

免疫反应的精确作用与丙肝病毒感染的病人,尤其是炎症/监管水平细胞因子之间的关系和丙肝病毒感染过程中,尚不清楚。最近的研究表明,这些细胞因子可以触发不同的保护模式或免疫病理反应,他们参与的间隙或建立慢性丙肝病毒感染(4]。然而,促炎细胞因子和监管的平衡似乎是重要的在确定丙肝病毒感染过程中(5]。

细胞因子发挥重要作用在分化、成熟和功能激活免疫细胞(6]。细胞因子是由多种细胞类型,如NK细胞和巨噬细胞CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞。反应被称为Th1-like Th2-like后细胞因子的原始描述概要文件由CD4的子集⁺T细胞(7]。Th1-like反应包括2、TNF -α和干扰素-γ分泌和需要一代的细胞毒性T淋巴细胞及NK细胞活化在宿主抗病毒免疫反应。Th2-like反应产生il - 4和il - 10,有助于增强抗体的生产和抑制发展Th1反应(8]。

巨噬细胞产生的细胞因子il - 10是一种多效性的辅助2 Th2细胞和淋巴细胞,可以刺激和抑制免疫反应。il - 10可以抑制各种免疫反应(9]。Interleukin-12 (il - 12)是其中最重要的促炎细胞因子产生主要是由抗原呈递细胞的干扰素-γ刺激(10)和免疫反应的起始,il - 12可以被视为一个最明确的因素决定Th1、Th2细胞分化[11]。因此,当前的研究旨在探讨血清炎症和免疫调节细胞因子的表达与丙肝病毒感染(il - 10 / il - 12)在慢性肝病和评估其可能作为新的生物标志物在慢性炎症进展导致肝癌。

2。材料和方法

2.1。研究人群

41(34名男性和7女性;平均年龄点年)患者遭受慢性肝脏疾病进入本研究;33例(80.5%)患者有积极的反应性丙肝病毒感染检测丙肝病毒RNA和没有与其他hepatotropic病毒合并感染的血清学证据或人类免疫缺陷病毒和8例(19.5%)患者丙肝病毒感染的负面反应。所有患者在胃肠病学给书面知情同意手术中心,收住曼苏拉大学,科埃及。研究小组受到临床检查,影像放射学,实验室调查,肝活检。肝组织和血液样本收集所有个人和血清储存在−70°C,直到被使用。

肝组织标本常规组织病理学诊断处理,所有病例在10%中性缓冲福尔马林固定,石蜡嵌入式,切成3 - 5μ米厚的部分。研究了组组织病理学诊断和分为15例(36.58%)患者(男13例,女2例;平均年龄58岁)与肝细胞癌;16例(39.0%)患者(12男4女;平均年龄与肝硬化。9岁);9和10个(24.4%)患者(男1女;平均年龄22岁)和肝脏组织学兼容precirrhotic肝炎(Metavir得分A2F3)。肝癌的肿瘤分级组织病理学评估作为年级我在2(13.3%)、二级4(26.7%),和三级15 9例(60%)肝细胞癌的病例。

同时,十(10)患者抱怨胆囊炎没有临床肝炎史和没有症状或肝脏疾病的迹象包括nondisease对照组(7男3女;平均年龄(表。1年)1)。

2.1.1。生化和病毒学的决心

肝生物化学特性包括白蛋白、球蛋白、ALT、AST、碱性磷酸酶和总胆红素测定自动分析器。乙肝病毒和丙肝病毒的血清学诊断是由自动免疫测定。HBsAg由商业免疫测定(美国雅培公司)。分析了Ab血清丙肝病毒第三代酶联免疫试剂盒(BIOKIT, S.A.西班牙巴塞罗那)。

2.1.2。通过rt - pcr基因检测丙肝病毒RNA链

从125年总丙肝病毒RNA是孤立的μL使用血清和纯化的SV总RNA隔离系统(美国Promega有限公司)。定性检测丙肝病毒的基因组RNA是使用链具体实时rt - pcr使用耐热酶(t)在高温互补脱氧核糖核酸的合成。放大的基因组丙肝病毒RNA链,两套寡核苷酸引物(美国synthesis)推导出的高度保守的丙肝病毒基因组的5′非编码区域诱导在第一和第二阶段,分别。

第一阶段感觉C196 (5′-CCATGGCGTTAGTATGAGTG-3′)。反义Seq-CR (5′-TGCTCATGGTGCACGGTCTA-3′)。

第二阶段感觉Seq-3 (5′-AGAGCCATAGTGGTCTGCGG-3′)。反义Seq-4 (5′-CTTTCGCGACCCAACACTAC-3′)。

2.1.3。酶联免疫吸附测定il - 10、il - 12

血清il - 10、il - 12水平测定酶联免疫试剂盒(法国贝桑松Diaclone研究,)根据制造商的指令可以检测3 pg / mL的人类il - 10和人类白介素5 pg / mL。简单地说,50μL标准和样本添加到复制的预镀带板;然后,50μL的生物素化的抗体被添加到每个共轭抗体2小时。洗后三次,100年μL的链霉亲和素辣根过氧化物酶(合)被添加到每个好30分钟100紧随其后μL(三甲衬底30分钟的解决方案。最后,100年μL停止的解决方案是添加到每个好,板的吸光度检测在盘子里读者在450海里。孵化项目和记录都是在室温下进行。

2.2。统计分析

结果表示为均值±SD(中位数)。的差异意味着被克鲁斯卡尔沃利斯(Mann-Whitney评估U测试)和所有的差异被认为是重要的。相关性被斯皮尔曼相关系数的计算。

3所示。结果

临床、病毒学和生化特征研究集团的上市根据病理诊断表1。意味着血清ALT, AST,总蛋白和s胆红素、凝血酶原时间显示高表达与疾病进展。只有ALT和AST升高显著疾病人群。之间的差异ALT记录precirrhotic肝炎(PCH)和其他组织(LC和肝细胞癌)和AST水平记录差异PCH和其他团体(LC和肝细胞癌)。相反,血清白蛋白水平与肝脏疾病状态下降,但无显著性差异。

肝癌的严重性决定通过结合临床和实验室评估儿童评分系统的上下文中。孩子分数被记录在肝细胞癌患者中20%(3/15),儿童B在40%(6/15),和儿童C在40% (6/15)。血清il - 10的表达和il - 12根据病理诊断是列在表中2。il - 10、il - 12显示明显的海拔与疾病进展和最高的表达检测肝细胞癌相比,LC和PCH (),但没有显著差异LC和PCH对il - 12之间。然而,血清il - 10、il - 12水平没有显著差异对肿瘤部位,肿瘤,或孩子的分数。

il - 10呈显著正相关,il - 12不同肝脏疾病患者(,)(图1)和il - 10、il - 12之间发现了一个重要的相关系数与慢性肝病患者转氨酶值(图2)。il - 10与ALT显著正相关性(,)和AST值(,)。此外,il - 12显示与ALT显著正相关(,)和AST值(,)。

il - 10、il - 12显著升高()患者的血清丙肝病毒感染nondisease对照组相比(表3)和疾病之间的水平显著升高组()。hcv感染患者显示il - 10在高于HCV-negative病人和相反HCV-positive白介素表达式模式,HCV-negative病例。HCV-positive之间的不同细胞因子表达水平很低和HCV-negative病例以及它们之间没有显著差异。此外,一个显著的正相关(,)检测il - 10、il - 12(图之间3在hcv感染的病人。

4所示。讨论

细胞因子发挥重要作用在病毒清除,感染控制,炎症、再生、纤维化和也与病理过程发生在肝脏病毒感染(12]。因此,我们的研究旨在探讨血清il - 10、il - 12水平与丙肝病毒感染在慢性肝病及其协会和评估其可能作为新生物标志物在慢性炎症进展导致肝癌。

il - 12是一个最重要的促炎细胞因子在免疫应答的启动,确定Th1、Th2细胞分化[1]。卡彭et al。13)的血清水平相比众多细胞因子,趋化因子,生长因子在HC和LC患者对肝癌患者进行研究。他们发现这些分子的平均浓度的肝细胞癌患者更高比信用证。我们的结果与这些发现一致性在肝细胞癌患者血清il - 12水平更提高比与LC和PCH ()和高程增加与疾病进展。这表明,这些炎性分子的表达倾向于增加慢性炎症进展导致信用证和肝细胞,因此,评估可用于预后研究[12]。尽管有争议的数据在文献中,一些报道称,血清il - 12水平在慢性丙肝病毒感染患者显著高于健康献血者(14,15]。在当前的研究中,血清il - 12的表达在HCV-chronic肝病重要高程nondisease相比个人和水平是增强与疾病进展表明强烈的促炎细胞因子反应可能发挥重要作用的发展在慢性丙型肝炎患者肝脏损伤,因此,除了导致病毒清除,这种极化免疫档案可能导致肝脏疾病的发病机理16]。

血清il - 10浓度已报道在慢性丙肝患者显著升高和il - 10可能与hepatocarcinogenesis免疫监视的抑制(17]。il - 10浓度的测量慢性丙肝病毒感染患者的血清样本酶联免疫吸附测定(ELISA)显示对比的结果。Kakumu et al。14)展示了更大的自发的il - 10生产通过外周血单核细胞(PBMc) CHC和肝硬化患者比健康对照组和减少在干扰素治疗。相反,Yamashiki et al。18)报道,单核细胞/巨噬细胞上清液中il - 10的水平的患者CHC显著低于健康对照组。在一致性与奥斯曼et al。19服部)和et al。20.),il - 10浓度升高的患者丙肝病毒,肝硬化,肝癌和与疾病进展相关的浓度,表明il - 10反映了肝脏的炎症程度和可能与肝癌的发展。然而,增加循环患者il - 10报道不同类型的肿瘤包括可切除的肝细胞癌(21]。

这些结果可以解释为基础,肝细胞癌患者血清il - 10水平高的结果由肿瘤细胞分泌的il - 10,除了生产现场与激活浸润的单核细胞在肝脏炎性改变(22]。il - 10的免疫抑制效应可能在肿瘤的发展过程中扮演着主要角色通过抑制巨噬细胞激活和移行细胞生产,从而削弱了两个潜在的抗肿瘤反应介质;这可以帮助肿瘤细胞逃避宿主免疫监视和有权势的人肿瘤细胞转移(19]。另外,il - 10的功能结果绑定到其受体在肿瘤细胞可能是细胞程序性死亡的预防和促进扩散23]。因此,它提出了il - 10起着关键作用的oncogenetic和转移性肿瘤的能力24]。

序贯分析血清吴等人报道的数据。25]表明il - 10、il - 12在宽容阶段之间的显著相关性(相关系数0.42,),这表明il - 10可能是双官能团的乙型肝炎病毒感染的过程中,其作用可能取决于血清水平和合作细胞因子il - 12和下游- 2。在当前的研究中,一个显著的正相关(,)检测il - 10、il - 12之间HCV-chronic肝病患者。il - 10在丙肝病毒感染患者升高而HCV-negative病人和在HCV-positive白介素表达式模式相反,HCV-negative病例。这些结果表明,高程的血清il - 10的差别可能参与对这些炎症反应在慢性肝病14]。此外,interleukin-12生产直流似乎被il - 10表达下调,而成熟,DC可以生成大量的il - 12和抗药性抗原呈递功能的抑制作用,il - 10 (26]。

在慢性炎症,患者il - 1α、IL-2R MIF,β神经生长因子的正相关系数显示显著相关,转氨酶值,而在这些患者高于健康对照组。因此,这些蛋白质可以被认为是一个索引的免疫激活。特别是,这些结果与文献数据报告,il - 1和协议IL-2R参与从肝损伤、肝纤维化进展(27,28),β-VGF参与肝脏肿瘤的生长和转移,可以作为慢性感染导致信用证和肝指数(29日,30.]。与这些研究协议,il - 10、il - 12之间显著正相关检测在我们的研究中检测到显著的相关系数与转氨酶水平在所有肝脏病理是高于nondisease控件;记录海拔明显疾病进展表明,il - 10、il - 12可以作为索引来反映肝脏的炎症程度与终极肝癌的发展。然而,刘等人。31日)报道,tnf的水平,il - 1、il - 10、il - 12在慢性肝衰竭患者增加,il - 10的增加是次要的il - 12的高程。

5。结论

il - 10、il - 12的重要高程与疾病进展和转氨酶值可能参与了慢性炎症导致HCC进展及其评价可以作为肝癌发展新的生物标志物。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

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