文摘
中性粒细胞gelatinase-associated lipocalin (NGAL)是一个neutrophil-derived蛋白质浓度的增加血浆和尿液持续的肾损害。尿白细胞尿NGAL的潜在来源。本研究的目的是探讨尿中性粒细胞计数和其他泌尿系统参数的影响与负面文化在尿尿NGAL值。验尿,尿培养,测定尿NGAL进行33个临床健康负urinoculture nonproteinuric狗。uNGAL浓度中位数狗在这个研究人口9.74 ng / mL (IQR 1.93 -25.43 ng / mL)。与白细胞样本> 5高通滤波器(平均15.9,6-50白细胞/高通滤波器),uNGAL值显著高于中值样本与白细胞< 5高通滤波器(平均0.9,0 - 3白细胞/高通滤波器),(4.96 pg / mL(0.29 - -11.34)和23.65 pg / mL(20.04 - -29.80),分别地;)。尿脓尿和UPC价值的严重程度与uNGAL浓度。我们的研究结果表明,尿NGAL浓度与白细胞数与负urinoculture尿沉积物的狗。目前的研究表明,非传染性的脓尿尿NGAL值显著相关,可能会影响uNGAL值。
1。介绍
中性粒细胞gelatinase-associated lipocalin (NGAL)是一个蛋白质表达的中性粒细胞,单核细胞,和各种各样的组织如肾脏、肝、肺、肠、和脂肪组织(1,2]。NGAL的铁载体蛋白作为中介的哺乳动物先天免疫反应。细菌需要铁的新陈代谢。在感染细菌脂多糖诱导NGAL然后转录和细菌生长抑制NGAL的抑菌作用,因为它可以防止细菌铁吸收(1,3]。
在生理条件下,肾NGAL由肾小球过滤,然后由近端小管细胞重吸收。在肾损伤有减少NGAL重吸收和增加其表达,有助于增加NGAL血清和尿液浓度(2,4]。
在人类患者NGAL已经调查了一系列几项研究[5),评估,它是在近端肾小管上皮细胞诱导肾脏损伤后的再生过程(3]。NGAL已经证明是一个高度预测生物标志物对急性肾损伤(AKI),慢性肾脏疾病(CKD),尿路感染(UTI) [5- - - - - -8]。
在兽医研究尿NGAL (uNGAL)已经被证明是有价值的生物标志物为犬不同肾脏疾病如阿基和慢性肾病2,9- - - - - -11]。尿液NGAL比血清肌酐水平似乎是一个早期生物标志物检测阿基在狗(12]。最近的一项研究报告称,在nonazotemic狗尿NGAL浓度显著增加,尿路感染(UTI) [1),推测非传染性的脓尿可能会影响尿NGAL值。
本研究的目的是评估如果尿NGAL浓度是影响非传染性的脓尿。
2。材料和方法
2.1。动物
这项前瞻性研究是由米兰大学的兽医教学医院。血液样本分析、尿液、尿液文化,测定尿NGAL进行33个临床健康犬。
狗被认为是健康的临床检查和正常结果的基础上完成概要血细胞计数和血清化学。尿路感染(UTI)是基于没有排除泌尿道感染的迹象,血尿,频尿,小便涩痛或排尿困难,消极的尿液文化,蛋白/肌酸(UPC)之比< 0.5。考虑脓尿尿白细胞中位数时临床相关的沉积物/六氟> 5 [13),狗被分为2组:狗的意思是尿液中白细胞沉积物> 5六氟和狗尿液中白细胞沉积物< 5六氟。
2.2。样品收集
血液和尿液样本收集的常规诊断术前筛查绝育手术和牙科缩放。获取通知业主同意后剩余的尿液样本提交uNGAL决心和尿液文化。
收集的尿液样本自然排泄和立即冷却到4°C。常规尿液、尿液沉积物准备,和定量的尿液进行细菌学的文化不同部分在米兰大学的兽医教学医院。
2.3。实验室方法
在分析之前,尿液样本分为树整除。常规尿液进行所有新鲜尿液样本的2小时内提交。比重的尿液样本测量折射计和尿液化学考试是衡量试纸测试(Combur10测试、罗氏诊断印第安纳波利斯,美国)。每个样本的一个整除离心机在309 g 5分钟和上层清液被冻结,并存储在−20°C尿蛋白、肌酐,尿NGAL的决心。整除的其余部分被用于尿液文化在4小时的样品收集。显微镜检查(10场400 x)离心机尿液彩色沉积物被用来识别和量化的白细胞数量(白细胞)和红细胞(红血球)在大功率领域(高通滤波器),晶体上皮细胞,投(上皮细胞投射(ECC)和颗粒投射(GC)),和细菌。
上层清液中蛋白质和肌酸酐浓度测量使用Cobas米拉经典化学分析器(瑞士巴塞尔罗氏诊断部门)。尿蛋白浓度测定用焦棓酸红比色测定(Ben srl生化企业,意大利米兰)和尿肌酐浓度测定用修改后的动能Jaffe方法(哈根Diagnostica srl,圣乔凡尼,意大利)。
尿液上层清液稀释的比例是1:100年前肌酐测量。
UPC比率计算自动尿蛋白浓度除以(mg / dL)肌酐浓度(mg / dL)。
尿中性粒细胞gelatinase-associated lipocalin (NGAL)是由一个商用夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)设备验证犬科动物(BioPorto诊断、丹麦)。化验使用按照制造商的指示。短暂,解冻后,尿液样本整除被稀释和提供的样品或标准(NGAL, 0 - 400 pg / mL)被添加到复制96 -孔板和孵化在室温下60分钟;孵化和洗涤后,生物素化的Dog-NGAL抗体被分发到每个microwell和孵化在室温下为60分钟。洗后,检测抗体HRP-conjugated链霉亲和素添加和孵化室温度为60分钟;最后,洗后,colour-forming三甲基质添加10分钟后潜伏期反应是立即停止与硫酸和阅读。吸光度测量在450海里。NGAL在每个样本的浓度标准曲线,计算得到一个4-parameter回归对数曲线。ELISA试验的检测极限是4 pg / mL - 400 pg / mL。对于统计计算值低于检出限是0.2 pg / mL的赋值。
Intra-assay可变性估计通过确定尿NGAL浓度在重复3犬尿液样本3不同浓度(19.74 pg / mL, 28.52 pg / mL,和138.39 pg / mL)。每天重复分析运行两次5天。计算变异系数CV,意味着/ DSX100。
2.4。统计分析
定量测量被描述使用摘要统计信息(标准差,中位数、最小和最大值)。
所有数据的正态分布进行了测试与D 'Agostino-Pearson正常测试。正态分布数据表示为平均值±标准偏差。非正规的分布式数据被表示为中位数和四分位范围(差)。皮尔森的相关性或斯皮尔曼等级相关系数(ρ)被用来评估之间的关系uNGAL浓度和尿参数:/ UC,白细胞,红细胞表面,上皮细胞,晶体和投射。uNGAL水平两组之间的统计差异的狗与白细胞与白细胞< 5 > 5高通滤波器和高通滤波器和均值uNGAL浓度两性之间通行使用独立的样本以及或者Mann-Whitney独立样本测试(MedCalc软件、版本12.7.8.0 Mariakerke,比利时)。意义是。
3所示。结果
狗群由33个狗(22混合品种,11的杂种狗;20男,13个女性),年龄从6个月至14年(表1)。白细胞> 5六组由12只狗,10个完整的男性,1完整的女性,和1阉割女性;白细胞< 5六组由21个狗,3完整的男性,6阉割男性,4个完整的女性,和8个阉割的女性。
所有参数,除了尿路上皮细胞,并不是正态分布。
uNGAL浓度中位数狗在这个研究人口9.74 ng / mL (IQR 1.93 -25.43 ng / mL)。uNGAL值明显高于中位数男性比女性(23.37 ng / mL和4.75 ng / mL,分别地;)。
与白细胞样本> 5高通滤波器(平均15.9,差6-50白细胞/高通滤波器)uNGAL值显著高于中值样本与白细胞< 5高通滤波器(平均0.9,差0 - 3白细胞/高通滤波器),4.96 pg / mL(差0.29 - -11.34)和23.65 pg / mL (IQR 20.04 - -29.80),分别;。在考虑泌尿系统参数中,只有尿脓尿和UPC价值的严重程度与uNGAL浓度(表2)。Intra-assay可变性是10.39。
4所示。讨论
先前的研究已经报道,增加uNGAL血清肌酐浓度之前增加急性肾损伤的标志在狗10]。NGAL是一个新兴的肾急性和慢性肾损伤早期检测的标记物(9- - - - - -11]。最近已经发现uNGAL水平增加的泌尿道感染(1,6,8]。在中性粒细胞NGAL存在于颗粒和细菌感染在先天免疫过程中发挥作用。它有能力结合细菌铁含铁细胞防止细菌生长(1,6,8,11]。泌尿道感染是最常见的细菌感染的狗之一(14]。在狗有人建议,尿NGAL可以作为生物标志物的泌尿道感染(1]。Daure et al。1)报道,uNGAL浓度显著增加与泌尿道感染相比nonazotemic狗狗与阴性尿液文化的结果。在Daure等的研究中,特异性uNGAL很低(76%),作者认为缺乏特异性uNGAL可能是由于非传染性的脓尿可能影响uNGAL值。我们的研究结果表明,尿NGAL浓度与白细胞数与负urinoculture尿沉积物的狗。这些数据进一步支持的显著差异中发现平均uNGAL狗群之间的水平和白细胞/高通滤波器> 5的白细胞/高通滤波器< 5。这些结果可以解释的存在NGAL来自尿中性粒细胞。
当uNGAL用作生物标志物来诊断泌尿道感染(1),应考虑白细胞产生的可能的影响。在大多数情况下泌尿道感染的尿沉积物白细胞存在(14),但非传染性的脓尿可能会影响uNGAL值(1]。无菌可能出现脓尿尿石病或肿瘤等非传染性的条件13]。在我们的研究中uNGAL文化与负面评价尿尿,但是超过5白细胞/高通滤波器被发现在12的33个样本经检验尿液沉积物。我们不能确定的原因非传染性的脓尿。在我们的研究中,没有相关性的存在晶体和白细胞尿沉积物被发现。尽管如此,可能出现的石头在膀胱当然不能排除在外。当前研究的一个限制是它没有提供进一步的诊断调查如腹部超声检查,排除男性的前列腺炎或肿瘤的存在。我们想强调狗组白细胞> 5高通滤波器是由几乎完全完整的男性,因此可以推测前列腺白细胞的起源。这种猜测也可以解释的中值明显高于uNGAL中发现男性比女性(23.37 ng / mL, 4.75 ng / mL resp。)。
此外本研究的局限性之一是使用尿液通过自发的排尿可能干扰白细胞的存在,可能导致白细胞,从接触生殖器粘膜或皮肤。
正如前面描述的人类和兽医9,15)在本研究中我们发现UPC价值和uNGAL浓度之间的正相关关系,尽管所有受试者认为nonproteinuric在这项研究。
5。结论
虽然受限于数量减少的情况下,我们的研究结果表明,随着尿中性粒细胞可以被视为一个潜在来源uNGAL,也非传染性的脓尿可能导致尿NGAL浓度。因此存在非传染性的脓尿可能影响uNGAL的解释结果,导致误诊的泌尿道感染如果uNGAL用作标记的疾病。这个结果必须在更大数量的样本证实,应收集受试者的障碍可能会导致不育诊断脓尿。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。