文摘

目标。KiSS1是一个转移抑制基因与抑制细胞趋化性和入侵衰减黑色素瘤的转移和乳腺癌细胞系。沿着KiSS-1至少有294个snp基因被描述;然而协会这些多态性遗传标记的转移在乳腺癌的研究中还没有被调查。在这里,我们描述两个简单PCR-RFLPs协议识别rs5780218(9解决)和rs12998 (E20K)KiSS1多态性的等位基因、基因型和haplotypic频率在墨西哥一般人群(GP)和良性乳腺疾病患者(bdd)或乳腺癌(BC)。结果。rs5780218多态性是单独与乳腺癌有关和rs12998多态性显示统计学意义差异当医生与案例(公元前和bdd)组比较。H1单体型(G / -)更频繁地发生在公元前组(0.4256)而H2单体型(G / T)是最流行的bdd组(0.4674)。结论。我们的数据表明,rs5780218多态性分别授予易感性乳腺癌在墨西哥人口的发展和可能的角色作为H1的遗传标记在乳腺癌转移单体型(Wt /变种)KiSS1基因必须在其他人群进行分析。

1。介绍

乳腺癌是墨西哥混血儿女性最常见的恶性肿瘤,占所有女性癌症的21.2% (1]。乳腺癌转移是癌症患者死亡的主要原因,而不是作为一个主要的肿瘤生长。

KiSS1是一个转移抑制基因位于染色体1问。是6151个碱基对长度和有四个外显子。第一外显子不是翻译在第2和第3外显子编码外显子。KiSS-1可以抑制趋化性和入侵衰减乳腺癌和黑色素瘤的转移2]。一些研究显示可能的角色KiSS1调节事件后cell-matrix粘附和细胞骨架重组2,3]。KiSS1表达减少95%,但不抑制致瘤性的转移潜能。它调节粘附分子如钙和减少通过NF - MMP9的表达κB结合抑制启动子(4- - - - - -6]。编码蛋白显示54-amino酸COOH-terminal极端,在G protein-coupled受体配体参与人类[7- - - - - -9]。在基因KiSS-1描述了至少294个snp的42对应突变位于未翻译区(UTR), 30在intronic其实和其他地区(10]。

本研究的目的是确定rs5780218(9解决)和rs12998 (E20K)KiSS1多态性的等位基因、基因型和haplotypic频率在墨西哥一般人群(GP)和良性乳腺疾病患者(bdd)或乳腺癌(BC)。

的变异KiSS1基因分析研究的基础上选择理论功能相关性或生物的影响。9 del T (rs5780218)多态性KiSS1基因位于146−位置的5′UTR mRNA转录和对应的删除(腺嘌呤)。E20K (rs12998)多态性是一个G过渡的位置212 cDNA决定的变化Glu-Lys残渣20的蛋白质(10]。

到目前为止还不知道这些变化与蛋白质功能的一些变更或者他们是否授予对开发转移的乳腺癌患者的易感性。

2。材料和方法

2.1。研究人群

我们使用信息从225年开始连续45乳房切除乳房活检和病理解剖学组织病理学文件的单位在医院从Centro医生Nacional de Especialidades研究院Mexicano del原本社会。所有患者的选择标准是不相关的人,年龄18岁以上,女性,同样的种族(墨西哥混血儿),两个前几代,没有乳腺癌家族史,既不放疗或化疗治疗前活检。排除标准包括重复样本,无法访问病人临床图表,足够数量的样本,或坏质量后DNA提取。只有130/265的样品符合列入本研究的标准。组织病理类型是基于标准标准(11]。综述了幻灯片从所有情况下选择特定的石蜡包埋组织块包含主要影响组织的基因组DNA提取和分析之前对其他多态性(12]。

一百三十基因组DNA样本从石蜡包埋的乳腺组织中恢复过来(例)在目前的研究中,编号,然后加工进行基因型分析的另一位合著者没有知识组织病理学诊断。基因分型完成后,病例分布在两组根据病理评估为乳腺癌(BC)组和良性乳房疾病(bdd)组(表1)。数据从90年从一般人群的血样提取的基因组DNA个人也包括比较(GP组);这一组包括男性和女性nonrelated和健康成人(哈迪温伯格平衡)和18 - 65岁的年龄范围。所有人都属于同一墨西哥混血儿族群。

2.2。基因分析

DNA从石蜡包埋组织中提取和使用传统的方法从血液样本13,14)和存储−20°C。rs12998和rs5780218多态性基因型KiSS1基因是由PCR-RFLPs协议由我们组实现。表2显示使用的引物序列和限制性内切酶。PCR是在最后的10μL,添加MgCl₂(3.5毫米),核苷酸(2毫米),引物:(0.1μ米),反向(0.1μ米),DNA (10 ng)。PCR条件进行了4分钟在94°C的初始变性紧随其后30周期(94°C 45秒;65°C 45秒;72°C 1分钟)和最后一个10分钟的延伸72°C。

在PCR-RFLPs片段(rs12998) 238个基点和294个基点片段(rs5780218)显示两个乐队158个基点和80个基点和224个基点和70个基点,分别。存在变异的等位基因的限制性位点多态性(数据丢失1(一)和1 (b))。

2.3。统计分析

推断出组的单我们使用了单体型重建计划。哈迪温伯格平衡测试观察到的基因型。所有组比较并在需要时确切概率法;一个值≤0.05被认为是显著的。任何给定的力量SNP-cancer协会是衡量比值比(或)及其相应的95%可信区间(CI)。

等位基因和基因型的分布是由基因决定的计算,提出了简单的频率。应急表和卡方测试是用来比较基因型及等位基因频率和单体型协会在公元前bdd患者或健康人群以及测试哈迪温伯格的存在基因型之间的平衡。

3所示。结果

3.1。多态性

共有220个DNA样本进行了分析:从病人78人被分类在BC组同时52的bdd组和90个样本来自GP组(普通人群个人)。

表3显示了等位基因和基因型频率rs12998和rs5780218多态性KiSS1基因的三个学习小组。没有区别BC和bdd团体多态性;然而,当医生是比较与公元前或bdd组有差异,可能是由于组织的类型(血液和石蜡包埋组织)的DNA提取(表3)。

3.2。单

单体型建设使用野生型(Wt)或每个等位基因的变体rs12998 rs5780218多态性。基于隔离分析和纯合性染色体单体型阶段可以成立于156年从公元前104染色体bdd和180染色体GP组。四种可能的单(rs12998:等位基因1、rs5780218:等位基因2)是H1: Wt /变体(G / -);H2: Wt / Wt (G / A);H3:变异/变体(/);和H4变体/ Wt (A / A)。都是在公元前和bdd组,而只有三个单GP组中被发现。单体型频率如表所示4。bdd和GP组之间的比较没有差异单体型H1 (Wt /变种)和H2 (Wt / Wt)。然而,比较分析BC和bdd团体之间的单显示显著差异(公元前,或者= 3.32)以及或bdd组和GP (或= 3)。

4所示。讨论

在KiSS1至少有294个snp基因被确定(10),没有以前与乳腺癌有关。rs12998和rs5780218 snp没有先前报道有关癌症的研究。在这个协会研究,个人从墨西哥一般人群和良性乳腺疾病患者或乳腺癌被认为是。多态性的基因型和等位基因频率在研究类似组(),这表明这些多态性分别不授予对乳腺癌的发展。此外,信息包含在一些患者的临床病史BC组允许我们识别乳腺癌患者有或没有转移(16 - 13日resp)。当再次分析了等位基因和基因型频率的多态性观察组之间无显著差异(;数据未显示)。小样本大小有限制,在这项研究中我们只能描述这些发现没有一个明确的结论。

通过比较我们发现差异的结果rs12998多态性之间的病例组(公元前和bdd)和普通人群组(BC之间),和GP组rs5780218多态性()。然而,有必要考虑到基因组DNA的生物样品类型得到每组不同:石蜡包埋组织和外周血。所以在一般人群个人我们确定本构基因型多态性,而基因型在集团(公元前和bdd)被确定在特定组织(乳房)有或没有癌症。杂合性丢失(LOH)是一个等位基因在特定的损失轨迹删除突变引起的,从一对染色体或染色体丢失,导致异常hemizygosity [15]。这是发现当杂合的标记轨迹单型的因为一个等位基因被删除。此外,在几项研究中,在癌症相关基因多态性(致癌基因或肿瘤抑制基因)进行了分析,LOH报告观察胚和tumoral基因型之间的不一致时(从外周血DNA和肿瘤组织)(15]。石蜡组织块分析在这项研究中获得了在2002 - 2005年期间11];因此我们没有获得这些患者外周血样本和我们没有确定本构基因型为了建立杂合性的可能损失rs12998或rs5780218多态性可以解释所观察到的基因型间的差异类型的生物样品。

BC之间的单体型分布,bdd和GP组表明,H1单体型频率明显高于在公元前(0.4256),尤其是乳腺癌患者和转移(0.5101),比在海里,bdd,或者GP组(表3);因此H1单体型可能被认为是一个可能的乳腺癌的风险单体型和转移人口,之前没有描述。然而有必要考虑这个研究的主要限制,小样本大小。然而,即使有这个限制,我们的研究是第一个有用的分析这些多态性作为潜在的遗传标记对乳腺癌的风险,有可能建立等位基因,基因型和单体型频率在墨西哥人口。而且也限制不知道生殖系基因型的研究对象,因为我们只知道DNA的基因型组织中获得,因此不可能在这些多态标记分析杂合性的损失。最后,临床图表中的信息或医疗记录是有限或可怜的几例选择病人。

此外,我们不知道这些多态性在癌细胞的生物学意义,而且没有其他基因变异中所描述的信息KiSS1。Kisspeptin,编码KiSS1第一次被认为是一种肿瘤转移抑制基因;然而,它起着非常重要的作用在调节hypothalamic-pituitary-gonadal轴,很多研究在分析多态性或单体型KiSS1基因尤其是中央性早熟。Huijbregts等人表明,G-rich序列多态性位于3′UTR,上游的转录的结束KiSS1基因,影响其表达水平(16,17]。同样,在多态性和基因表达研究已经表明KiSS1低mRNA表达与静脉入侵,先进的临床阶段,复发转移的发生,在不同类型的癌症患者18,19]。Kiss-1 / GPR54系统在乳腺癌,estrogen-related基因表达谱,监管和成绩单的亚型KiSS1描述了基因(20.- - - - - -24)和谢等人淋巴结参与之间的关系,缺乏Kiss-1表达式在早期乳腺癌患者()[25];然而,没有信息是否存在多态性可能参与微分KiSS1基因的表达。因此,它将在未来的研究有必要确认与一个更大的样本量,如果这里描述H1单体型可能是癌症的风险单体型和/或在乳腺癌的转移,来分析他们的协会与其它癌症的转移和分析mRNA表达水平的相关性与多态性的存在知道他们可能的生物学意义。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作部分支持的洋底de Investigacion en Salud研究院Mexicano del原本社会(FIS / /保护/ C2007/064 IMSS)和洋底扇形Ciencia Basica, CONACyT 2007 Reg。082292。