小说在p -进化模型和周期图和q-Individual辅助淋巴结和颊细胞的染色体

文摘

信号拷贝数(SCN)和信号强度(SI) subtelomeres (ST)进行辅助淋巴结(ALN)和颊(BUC)细胞荧光原位杂交。提取的总细胞的38256年和2309年,分别分析了从良性ALN - BUC-cells乳腺癌患者的影响。周期模型是基于圣行为包括正常————,调节克隆与多样化的视交叉上核。基于arm-p / q比率签名,subtelomeric数组,反映了不整合和一致性的ST-behavior个体染色体作为一个概念的“个性化的细胞”,而不是“Global Insight的细胞”。周期图表可以被认为是一个可靠的和可刷新平台通过细胞进化可能是图案和特征。签名的ST-profile BUC ALN细胞和不同的视交叉上核和SI的本质作为定量和定性值导致建模细胞进化的真正个性化的视角。Ki67的蛋白质表达、细胞周期蛋白D1和细胞周期素E化验,作为一个互补的面板。这些目标可以应用的预测和预防标记早期检测BUC和ALN各级计划所需的乳腺癌患者的管理。

建模这样的签名和矿业subtelomeric信号分析单个染色体的臂可以翻译buccal-cells个性化发展的洞察力和辅助乳腺肿瘤细胞的淋巴结小说周期图表。

1。介绍

颊的可靠性(BUC)细胞是不同的物质由于其灵敏度所使用的人可能影响癌症或其他疾病。在这样的过程中,材料在BUC结合饮食因素,和/或任何环境危险元素(http://aghealth.nih.gov/2002)。mucous-secreting上皮,粘膜,分为两种类型:(1)肌层内(角质化)和(2)(nonkeratinized)。肌粘膜似乎厚,密度,减少血管结缔组织组件。角蛋白作为屏蔽域对不同类型的刺激(1]。BUC细胞,形态特征和他们的尺寸相对较大,平面形状,nongranular细胞质,中心线位于细胞核,细胞质和大比原子核。这样的性格使BUC可靠的组织细胞生物学和遗传学的调查。

揭露的性质不同的拷贝数作为量化值和强度作为定性的观点可以帮助跟踪方式个性化视角内的数值和结构性变化在个人颊,辅助淋巴结(ALN)细胞。

是以前公布的人类生殖系几乎在末端的DNA epigenetically hypomethylated,但是体细胞组织的甲基化模式显示是新创(2,3]。它也强调,subtelomeric每个subtelomere(单份DNA是多样化的4,5]。对于人类基因组,向近端包围异染色质和常染色质的地区远侧地的六聚体的几个碱基组成的端粒重复(4]。摘要终端重复地区具有男童kb (TTAGGG) n重复序列,和短重复(50 - 250)n中发现高纯度subtelomeric DNA。

此外,出版,人类subtelomeric地区港口马赛克duplicons补丁(5- - - - - -7)这样的改变是发现来自终端染色体易位(8]。它也表明,端粒和接近端点的序列是倾向于姐妹染色单体交换(9]。集体,subtelomeres敏感,倾向于DNA断裂和修复系统;的表达在这个基因组进化领土在端粒的邻域是一个令人惊讶的事件。

关于BUC,没有可用的论文subtelomere地区在细胞水平。然而,端粒长度测量是血,颊粘膜,成纤维细胞的遗传性骨髓衰竭综合征患者(10]。BUC样本在口腔癌也用作目标(11]。在这些障碍,端粒长度的平均Q-PCR (TL)长纤维母细胞和颊细胞比血。他们建议相对TL tissue-independent在这些症状,发现显著的血液和成纤维细胞之间的相关性,血液和BUC细胞,成纤维细胞和BUC细胞。这些数据突显出,短端粒并不局限于血液或成纤维细胞,但也存在于BUC细胞。删除2 q subtelomeric地区被发现在自闭症儿童12]。

通过考虑一个协会之间的端粒长度与衰老和衰老相关疾病包括癌症、多样化的端粒长度的重要性在阿尔茨海默氏症病例相关类型的抽样组织(13]。他们观察到低TL值在血细胞BUC细胞进一步减少。然而,可用的论文subtelomere而集中在分子水平和细胞定位尚未考虑。

到目前为止,还没有系统的评价方法,跟踪个人subtelomere在人类染色体是可用的。此外,缺乏关键事实信号拷贝数(SCN)和信号强度(SI)在单个细胞和染色体臂subtelomere地区推迟了进步的创新大道走向个性化和细胞基础管理。因此,它的目的是研究人类染色体的成套的大量细胞群影响乳腺癌患者的荧光原位杂交(FISH)分析。这种技术将提供非凡的和广泛的信息SCN和SI和BUC细胞水平。这些数据将全面提供定量和定性的信息在人类体细胞subtelomere域。总的来说,这样的方法需要将立即铺平了道路跟踪系统中的个人subtelomere癌症细胞生物学和发育。

颊域可以被视为敏感,可刷新的生物细胞的转化目标筛选将作为初始目标后外周血二次访问。这个领域能够受到环境因素的影响,为它作为一个来源的诱发和预测肿瘤的目标包括良性和恶性肿瘤可能。所以它值得确定BUC作为内部控制的组织。

视交叉上核和SI subtelomere领土的反射的功能和发展机械在增殖细胞的行为有自己的特征。创建这样的生物模型通过继承和进一步进化过程中个人的生活。因此,本研究的目的是探索BUC细胞作为生物访问目标的重要性和矿业subtelomeric SCN的本质和SI标记,创建小说周期图表和建模的过程进化历程通过专注于不同个体的染色体的武器,比p / q和异型的行为BUC ALN-level在人类肿瘤细胞。

2。结果

2.1。描述性的数据

以下基本描述性数据作为证据支持,强调多元化和异型的subtelomeric行为个体染色体的p -和q-arm BUC和ALN之间。

根据逻辑回归,BUC / ALN的比率是非常重要的不同的因素,包括week-SI(优势比:6.535−,可信区间0.000 - -0.016,)和介质SI(优势比:9.135,置信区间170.182 - -505386.699,)。显著正相关之间发现了一个与两个视交叉上核(SCN);周()和强()如果;还有两周视交叉上核()和介质()如果在颊细胞。相同的方式之间的相关性也实现了周和中SI (强大和介质之间的),或者如果。

显著负相关也可以追溯到缺乏SCN之间存在一个()两个视交叉上核()和()和介质()如果。

关于p-arm、缺乏SCN显示有显著的意思是ALN高于BUC除了1号染色体,2、12、18日和19日()。由1和2 SCN BUC意味着细胞显著高于在所有染色体,ALN除了染色体17日19日和20在一个视交叉上核,分别在两个SCN类别和染色体3 ()。染色体由三个SCN,很少有显著的意思是ALN高于BUC ()。此外,本周如果显示有显著的意思是BUC高于所有染色体ALN除了2号()。考虑如果强,所有染色体显示显著的意思是BUC高于ALN,除了染色体1和17 ()。通过关注q-arm,所有染色体反映了较高的视交叉上核的意思是比BUC-cells ALN-cells,除了染色体2 ()。所有染色体显示显著的更高的视交叉上核的意思是由不同类别()。所有类别的SI q-arm显示显著的意思是BUC高于ALN染色体()。关注全球染色体p - q-arms,之间有一个重要意味着subtelomeric SCN和SI ALN BUC细胞()。得分的SI显示意味着BUC -显著高于ALN-cells所有染色体17除了强大的SI和染色体X周SI (&)。通过引用p / q比率的平均差信号强度,本周介质,和强大的SI显示明显高于ALN比颊细胞除了染色体18日X;4、5、7、18和19个;分别和9、10和18。此外,蛋白质Ki67的表达,细胞周期蛋白D1,和细胞周期素E、互补的功能分析,包括现在程度的增殖和细胞周期中的关键目标的行为。

2.2。进化建模的洞察力

周期图表信息,支持,和指令指导,可能会导致提供小说进化建模SCN和SI BUC ALN-cells(数字1- - - - - -10)。

3所示。讨论

3.1。描述性的数据

总的来说,特定subtelomeric探测器已被广泛应用于自闭症障碍(12),只有有限的单一探测器,包括染色体5、9和7问在血液学的骨髓疾病可用14,15]。目前工作的主要目的是找到subtelomeric发展的方向课程之间BUC细胞作为生物目标和ALN作为进一步进化的良性肿瘤领域的目的地。我们的发现表明,无论程度的SI, BUC细胞是高度有效的候选人之间的过渡性组织外周血和肿瘤组织(ALN)。在这种情况下,更高的平均一周,strong-SI反映程度的表达下调和调节强度,在ALN作为定性值,反之亦然。此外,意味着较低的ALN不同程度的如果不太倾向于改变程度的SI。通过考虑中SI BUC细胞显示为正常价值意味着更高的硅。考虑p和q武器为一个统一的领土,现在发现也可能候选人BUC细胞作为一个可靠的预测和诱发细胞的目标。

的细胞具有更高的平均p-arm BUC细胞缺乏视交叉上核,有一个或两个SCN多数染色体。只染色体1,17、19和20的视交叉上核和染色体3两SCN透露,值得注意的是,参与多元化发展。关于三SCN,倾向p-arm染色体包括4,6,7,9,10,16日和17日作为一个群体,主要是关于获得参与课程发展的遗传物质通过显示额外的ALN细胞内信号拷贝数,但染色体5,8日,11日,20,X可以BUC细胞内被认为是一个可靠的目标。

几乎所有染色体都倾向于结构变更BUC p染色体臂的反映在不同程度的SI和遗传物质得失的代表。这些发现可能的候选人BUC细胞作为一个平台,通过它subtelomeric SCN或SI与异种的行为是参与细胞的发展和演化过程。

针对q-arm,几乎所有染色体都倾向于数值改变通过考虑缺乏任何SCN水平。相比之下,失去了遗传物质的SCN只有一个可以突出BUC细胞使其可靠的候选人参与发展进化过程中,在这个域名访问。可以得出结论,q-arm所有染色体的参与BUC细胞。此外,BUC细胞通过更高的意思是正常的视交叉上核地位似乎稳定比ALN关于两个视交叉上核,但相比之下,进化过程中显著反映低意味着肿瘤级别的细胞。

通过考虑q-arm所有单个染色体结构改变,subtelomeric SI显著影响在BUC细胞可以定义它作为一个可靠的筛查早期检测的目标。这些发现证明可检测的重要性,通过分析SI subtelomeric领土的结构性变化。

从正面考虑计算的p-arm SI视交叉上核的细胞,发育过程似乎是多样化和BUC水平。高意味着一周SI的ALN细胞反映subtelomeric材料的减少所有除了18号染色体。中SI表明,相比之下,高意味着BUC细胞染色体异常的染色体1,12日,16日和17日表明多元化发展比较SI。对于强大的SI,相似的场景中SI与额外的异常染色体2,4,20。这些发现ALN定义为一个预设的目标方向的表达下调,周信号特征,BUC域为调节目标称为强有力的信号。

考虑到subtelomeric SI, q-arm个体染色体是多样化的表现,反映了引人注目的参与BUC域作为一个计划目标更高意味着不同类别的圣突出表达下调和调节模式。

通过观察全球染色体,异型的意思之间subtelomeric SCN和如果被发现的ALN和p -或q-arm BUC细胞。这种多样性是反映能力的ALN细胞进化;然而,BUC细胞可用于早期筛查试验。即使整个组染色体检查,一个多样化的趋势可以观测到p -和q-arms之间,但没有任何染色体规范。

强调个体染色体的重要作用,p -甚至q-arms之间联合域显示多样化subtelomeric行为和BUC细胞。这样的发现是更加突出了在有限和特定细胞与视交叉上核三染色体包括组一个,3,7日,22日和组2包括染色体11、13、14日和x这两个组织分别占主导地位的ALN BUC细胞,分别。

14号染色体似乎在所有类别的SI,和15弱和中等如果倾向于有更高的意思是比BUC。

此外,p / q比率是一个重要的价值多样化两个染色体臂作为两个不同的地区。关于细胞和三个SCN,多数染色体在ALN意味着显著高于BUC细胞除了数字8 - 18和11个,分别。在细胞缺乏的情况下信号或两个信号,几乎2/3rd染色体有更高意味着比BUC细胞。这些发现支持多元化subtelomeric SCN p -和q-arm每个染色体,可能被视为一种异质性的证明和BUC水平。然而,不同方式的意思是比个人BUC细胞染色体可以被视为一种个性化的预测价值。

几乎所有个体染色体被发现显著更高的p / q比率意味着比BUC-cells ALN-cells,除了一些染色体18号染色体的发现最常见的作用。染色体X意味着BUC细胞显著高于ALN细胞中p / q比率非常减少(图1)。这可能被视为一个进化的过程。总的来说,我们的数据如果是高度异型的和批准p -和q-arms的不同行为。

3.2。进化建模的洞察力

subtelomeric信号可以在个人定义良好BUC-and ALN-cells描述的具体性质p -和q-arms每个染色体(数字1和2)。此外,周期图表促进水平和垂直穿过道路和机动的进化过程中,常见的和多样化的视交叉上核和SI的参与模式可以实现个体的染色体。此外,交互式谐波模式也可以观察到在视交叉上核和SI组。

通过定义p / q比率的价值,不同类别的视交叉上核和SI ALN -和BUC-cells图案的数据(4- - - - - -10)。等签名subtelomeric数组说明谐波特定染色体SCN和/或SI的分享一些特点,换句话说,它反映了不整合和subtelomeric行为的一致性在个体染色体依靠异型的p / q比率的行为。目前周期图表可以被认为是一个可靠的和可刷新平台通过细胞行为可能在单个染色体设计和特征。

configurative模型和发展方案subtelomeric p / q比率每个染色体,表格系统可以设计。这样的周期表组织通过提供两个三行,包含信息SCN作为量化值和SI定性值,分别。周期性的上下行反射版本和能够重新组装或娱乐更多的补充数据。不同箱信息,反映了不同类别的视交叉上核之间的合作和SI,还有共同的特定染色体之间的相互作用。事实上,这样的周期图表可以用来建设抽丝任何细胞的状态目标可能与其他分子和/或细胞反应特性,或作为一个唯一的;这将导致垂直和/或水平阵列分析和翻译行为和相互作用所涉及的不同元素在癌症细胞和分子生物学(数字6和7)。不同的p / q比率分析ALN -和BUC-cells时会通过这些图表。此外,普通subtelomeric类别可以追踪通过垂直和水平操纵这些图表。分享共同的方式是个体染色体之间或不同类别的视交叉上核和SI。系统,这些周期图表可以显示不同群体对SCN和SI唯一,或伴随机械。

染色体3参与所有类别包括正常两SCN,要么失去一个或两个SCN,也获得了一个额外的SCN突出了它作为一个最倾向的染色体是不同的水平。涉及的10号染色体正常的克隆和失去SCN翻译一个极端异常条件定量水平或正常的行为。通过考虑BUC意味着比升高,11号染色体没有参与任何SCN类别似乎作为限制染色体通过比较增加的比例比BUC(图8)。在这个图表中,视交叉上核的垂直和水平评估,增加和减少p / q值和BUC可以相比。

当p / q比率减少ALN比BUC SCN损失,对一个或两个视交叉上核,非常严重的比这个比例增加(图9)。然而,视交叉上核染色体增加是有限的,只有3、5、7、8似乎有一个额外的SCN。相比之下,当ALN p / q比率越高,没有一个染色体SCN增益。看来,无论进化的方式通过比较BUC细胞向ALN作为指数目标,视交叉上核获得不是一个重要事件,但染色体3,5,7,8提供了互补的面板的强和弱如果能够改变监管subtelomeric领土内的遗传机制。

如图9显示,并没有迹象表明SCN获得染色体9 - 12、16 - 20 X在进化过程ALN的意思是减少p / q比率,但在表达下调categry(图10),有限的染色体被发现有强壮的SI(染色体9和10)和弱和strong-SI染色体18。集体,染色体9、10和18似乎倾向参与,BUC-cells。这一发现将强调定性因素的重要性可能与分子的性质变更的相关基因(s) subtelomere领土,这可能被命名为“目标跟踪”分子分析。共同进化模型通过颊subtelomeric SCN -和辅助淋巴node-cells。此外,通过考虑BUC作为一个可靠和索引生物目标,增加和减少视交叉上核的细胞都视为一个进化过程。

染色体通过两个正常的视交叉上核线开始,可以被视为一个基线,并进一步改变包括缺乏SCN,失去一个信号,并获得一个信号都包含在进化的过程中。通过专注于p / q比率和排除组D和G(由于缺乏p-arm)和X染色体1 - 20所有通过2 SCN正常克隆参与了这个交响曲。此外,无论考虑变更SCN-p / q比率的模式,也就是说,和海拔下降BUC ALN-cells,所有染色体,失去一个或两个SCN,参与下一步的进化。但当SCN的p / q比率增加,ALN进化的模式反映出更具体的改变。染色体在这方面,1、2、5,16日,17日和19个被列为参与正常的克隆;1号染色体也倾向于失去正常的视交叉上核;有趣的是,染色体3、4、17和20不参与任何SCN类别;染色体6和7都倾向于失去正常的视交叉上核;染色体8和10是倾向于只失去一个视交叉上核;染色体9、11和12,除了参与正常的克隆,也倾向于只失去一个正常的视交叉上核或失去一个或两个视交叉上核,分别为失去一个视交叉上核(图9)。有趣的是,通过考虑减少SCN类别在ALN BUC细胞,它们发挥不同的笔记和场景。染色体3、4、6,7,8,9,10,18日20日和X已经资助了正常的克隆。失去一个视交叉上核染色体1只涉及;2号染色体通过失去一个或两个视交叉上核;3号染色体是参与所有类别包括正常两个视交叉上核,失去一个或两个SCN也获得一个额外的视交叉上核。

染色体1,2,3,6,8,9,10,11,12日,16日,17日,20日和X被归类为初始正常克隆通过反射强度,中值与控制细胞可比。(定性差别周强度反映了对这些损失),和强大的强度反映了upregulation(定性获得)。所有染色体进化的过程中,除了分享染色体9日10日和X,由于缺乏倾向的调节和表达下调,分别(图10)。在调节模式下,18号染色体已经参加两周SI,也没有强力SI与表达下调状态。目前的数据表明,染色体9和10不容易调节,和染色体X是不能表达下调。然而,18号染色体不是倾向于SI变更,不参与进化的过程中(图10)。

失去两个视交叉上核,预计检测没有如果;相对而言,这是真实的如果染色体表达下调类别(数字标识9和10)。但值得注意的是,有一种强烈的SI数据调节行;在这种情况下,它是有价值的检查组织的核型和跟踪甚至一个小x染色体的部分或全部三染色体细胞克隆。

数据4和5视为两个进化模型subtelomeric SCN和SI单个染色体宣布subtelomeric行为。然而,提供更具体的为每个染色体和个性化模型,反映最特征的进化过程中,将是可能的。在这方面,进化模型基于p / q比率subtelomeric SCN和SI的染色体9和5,分别提出了(数字4和5)。所示,当p / q比率增加ALN-cells比BUC-cells(类别1),没有迹象表明SCN增益和强劲的SI的9号染色体;相反,发展过程包括损失的视交叉上核和发生下调SI星期SI(图4)。此外,当subtelomeric行为似乎ALN的下降比BUC细胞(类别2),失去SCN类似于前面的类别,但有趣的是,强大的SI表明SI(图的调节状态4)。可以得出结论,在类别1中,进一步的进化过程中,影响正常的克隆过程包括损失的SCN,伴随着表达下调的信号定性模式”如果“和扩散。但在第二类,SCN伴随着调节事件的损失,也就是说,如果强。这个事件反映了异质的ALN细胞的行为也取决于不同的p / q比率个体染色体的怀抱。这一事实宣布进化论的消息在BUC /水平。

通过观察染色体5,情况是完全不同的,在类别1;没有得失的迹象SCN周和SI强劲,但在第二类;得失的一个信号,失去两个视交叉上核,没有进一步发展SI包括弱和强可以观察(图5)。作为结论,自然进化的类别1是显示没有SCN收获,伴随着量化值差别均对这些薄弱,strong-SI和扩散。但在第二类,进化过程从正常克隆被失去,导致增生性肿瘤,two-SCN,获得一个视交叉上核,没有迹象表明,下调的信号强度(图5)。作为一个例子,有一个显著的多样性之间的染色体5和9。这也适用于其他染色体(数字7和8)。

不同染色体玩自己的仪器记录或谐波。如果失去了SCN伴随着强大的SI(调节模式),这可能是由于不同行为的一个或多个染色体(s)在不同的细胞可能导致异种的函数在定性和定量的水平。此外,通过考虑p / q比率为公元前一个个体或一个看似健康的个体,18进化模型可以提供,然后分组每个常见模型的可能。癌症是多样性的重要,不仅在单个细胞也在特定的染色体(s)。总的来说,这些发现可以被认为是进化的级联,互补的核型分析测试也会打开一个新的方向来揭露与染色体脆性更复杂的互动网站和发现新基因(s)。此外,根据逻辑回归,被认为是一个变量引用因子。

此外,基因组染色体端粒的长度(TL)这个病人之前已经化验和显示9.00 kb和8.60 kb时57和66年,分别。肿瘤基因组TL 6.1 kb, TL率/ ALN报道是1.47 66年57岁和1.40岁。端粒酶活性是积极的(16)(图2)。集体,互补信息的包在TL和圣也能澄清衰老和癌症细胞作为一个统一的见解。

4所示。蛋白表达

状态Ki67的蛋白表达,细胞周期蛋白D1,细胞周期素E被如果化验(图3)。虽然退火的本质是发现是良性的,小的细胞克隆反映Ki67相对较高的表达和细胞周期素E可能反映少数hyperplasic模式ALN细胞,尽管低表达的细胞周期蛋白D1的细胞周期素E细胞周期过程中发挥了有效的作用。进步的细胞周期机械表示,不同的细胞周期蛋白D1和异型的表达和细胞周期素E显著的诊断作为一个显然良性组织。此外,Ki67的批准作用提供上升的一个新的发展平台内的洞察力。有一个伟大的关注良性形态出现的细胞。

5。结论

癌细胞的系统生物学是相当复杂和混乱由于多学科机械。在这方面,抽丝和矿业的见解可能有用的揭露一些事实领域内的影响力对衰老和致癌作用的影响。机制的本质subtelomeric域是不清楚,事实在细胞水平上实现的方式可能会导致一些关键的途径。

小说周期图表subtelomeric定量和定性值可以提供一个个性化的颊,辅助淋巴node-cell基础概要文件在肉体层面。

通过考虑subtelomeric概要的p / q比率BUC-cells ALN,不同周期图表将有利于抽丝的状态信号拷贝数和信号强度。

基于个性化细胞subtelomeric概要文件将导致设计一个可靠的签名subtelomeric p / q比率视交叉上核和SI BUC和细胞。这样的路径可能导致揭露更具体的分子多样性在特定染色体的臂通过挖掘不同克隆的细胞(s)和跟踪未发现的基因。

关于多样性和异质性方面,减少和p / q比率升高SCN模式的监管信号强度可以从BUC翻译目标的平台。

周期图表视为的信息和可刷新平台通过BUC subtelomeric SCN -的进化模型和ALN-cells可以设计在细胞生物学的不同方面。

通过考虑BUC作为一个可靠和指数生物目标,增加和减少SCN ALN细胞可以识别为进化过程的结果。

subtelomeric SI的进化模型这两个细胞群提供一个平台,这些改变将起源于单个染色体的武器。最后,除了subtelomeric行为的关键作用,补充和批准Ki67的角色发起一个新的发展平台内的洞察力。最后的话,端粒、端粒酶和subtelomere,细胞标记,衰老细胞和肿瘤中发挥互补作用。

6。材料和方法

6.1。材料

但是。病人的信息

左侧辅助淋巴结(ALN)的66岁女性曾影响浸润性导管癌的右乳房恶性肿瘤的57岁是负数。病人积极的家族史的癌症包括乳房。

分析了2309年和38256年的总细胞BUC和ALN水平,分别。的是,subtelomerically,化验。认为道德法规,同意签署的信函。

6.1.2。Subtelomere多功能探针

的Cytocell subtelomere特定探测器“Chromoprobe多功能探针”使用的是(http://www.cytocell.com/)。这个系统可以促进多种鱼类探测器的应用通过考虑整个染色体组在同一时间和条件。这个subtelomeric探针是扫描的宽度能力“subtelomere枚举和完整性”(http://www.cytocell.com/)。p和q探针是共轭FITC和pe-cy5分别相同的染色体,是由荧光显微镜可见的信号(德国徕卡有限公司)。该多功能探针位于染色体特定DNA的大部分远地区,平均大小为100 kb,和克隆Chromoprobe Multiprobe-T系统映射到在600 kb的真正的端粒。每个24多功能探针设备包含的具体调查的p -手臂和q-arm每个染色体。

6.2。方法

6.2.1。细胞的准备

细胞群包括颊(BUC)肽作为内部控制组织,和辅助淋巴结(ALN)肽somatic-neoplastic平台。Buccal-cells被孤立的洗涤过程磷酸缓冲溶液(PBS)两次,其次是固定在3/1甲醇和冰乙酸的混合物。Five-micrometer-thick paraffinized组织辅助lymp节点放置在带正电的幻灯片和deparaffinized二甲苯两次,然后用100%的乙醇,冻干脱水和胃蛋白酶处理。PBS的细胞被洗两次,固定在3/1甲醇和冰乙酸的混合物。p -和q-arm探针都贴有特定FITC的光谱和荧光团Pe-Cy5(德州红色)。

6.2.2。荧光原位杂交(FISH)

(我)模板滑动定位(一)细胞密度在幻灯片模板需要经×10个目标。(b)移液2μL细胞悬液到所有24个地区。(2)预处理的幻灯片(一)模板滑洗。(b)模板的幻灯片是通过乙醇脱水系列-100%乙醇和70%放置att 37°C。(c)组合的杂交解30μL整除每多功能探针设备37°C孵化器。(d)加1μL多功能探针的杂交解决每一个设备。(3)变性。幻灯片/多功能探针设备被放置在75°C 2分钟。(iv)杂交。幻灯片放在37°C水室过夜。(v)Posthybridization过程(一)幻灯片是处理解决方案在72°C 2分钟。(b)放置在幻灯片渐变的解决方案/ 0.05%,持续30秒。(vi)安装和可视化(一)增加20μL DAPI-Antifade解决幻灯片和覆盖24毫米×60毫米盖玻片。

预计所有除了近端着丝染色体D & G组,正常样本,反映2绿色(p-arm)和红色(q-arm)信号。完成删除subtelomere地区将导致没有信号的情况下,信号强度为弱,媒介,强劲。

6.3。免疫荧光(如果)

如果执行检测蛋白表达在细胞水平上的模式,根据前面提供的技术(16,17]。

单克隆细胞处理鼠标反Ki67 (FITC共轭,同形像IgG1, Dako Cytomation), anti-cyclin D1 (IgG2a同形像,Biosource),和鼠标anti-cyclin E(同形像IgG2b,酶实验室、表达载体immunodetection)。

范围1000 - 5000细胞是用1 x PBS,杂化与抗体和孵化4度25分钟,随后进一步洗涤1 x PBS。相应的anti-mouse添加和孵化在4度为25分钟。最后,蛋白表达的本质被徕卡发现,DM RXA2-fluorescence显微镜。

6.4。端粒长度分析

印迹分析根据罗氏诊断提供的标准技术。补充测试,Q-FISH被端粒化验机构鱼包/ Cy3代码K5326 Dako Denemark (http://www.dako.com/ar42/p107840/prod_products.htm)。

6.5。数据分析

数据库组织和SPSS 17版本。统计测试如下。

提供的结果平均值±标准偏差。EM-algorithms(期望最大化)应用于实现一个可靠的标准偏差(SD)稳定的均值为个体染色体。(我)频率之间的单向方差分析测试被认为存在多样性的个体染色体和目标因素。(2)皮尔森相关系数测试是用来实现相关因素之间的相关性。这是支持中心极限定理的基础上。(3)二元逻辑回归分析的回归模型至关重要。

意义被认为是在和的水平。

缩写

ALN:	辅助淋巴结
公元前:	乳腺癌
BUC:	颊
鱼:	荧光原位杂交
如果:	Immuno-fluorescence
视交叉上核:	信号拷贝数
如果:	信号强度
圣:	Subtelomere
Q-FISH:	定量荧光原位杂交。

利益冲突

所有作者披露,没有商业关系或咨询公司,股票或股权利益,或者专利许可协议,可以被视为一个利益冲突有关提交论文。

承认

作者感谢Baghdasarian女士的帮助在抽样过程中。

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版权©2013 p . Mehdipour et al。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。