文摘

客观的。先前的研究已经证实了这一点GCKRrs780093多态性与甘油三酯(TG),一个已知的冠心病(CHD)的危险因素。我们的研究的目的是探索协会GCKR在汉族人口rs780093多态性与冠心病。方法和结果。共有568名冠心病病例和494 non-CHD控制进入目前的病例对照研究。基因分型是通过使用熔化温度转变(Tm-shift)方法。我们的研究结果还表明,GCKRrs780093多态性与TG水平显著相关( )。虽然没有明显关联情况下和控制( ),故障分析,年龄产生了一个重要的协会GCKRrs780093多态性与冠心病人年龄在65岁及以上(基因型: ;df = 2; ;等位基因: ;df = 1; )。结论。我们的研究结果证实了的贡献GCKRrs780093多态性TG新陈代谢和演示GCKRrs780093冠心病的一个危险因素年龄在65岁及以上的人。

1。介绍

冠心病(CHD)发病和死亡的主要原因之一,在发达国家,其患病率迅速增加在发展中国家1]。冠心病已成为世界上主要的健康负担(2]。冠心病是一种复杂的疾病造成的环境和遗传因素,以及这些因素之间的相互作用(3]。冠心病可能导致严重的事件,包括心脏性猝死(SCD)或急性心肌梗塞(AMI)。冠心病是可遗传的4- - - - - -6]。尽管遗传因素估计约占30 - 60%的冠心病风险7,8),冠心病的发病机制还不完全清楚。

异常的血脂水平和葡萄糖是冠心病的危险因素9,10]。高甘油三酯(TG)含量有关冠心病等心血管事件的风险增加(11]。的GCKR轨迹是最强的全新的轨迹与TG新陈代谢(12]。有趣的是,GCKR也与患心血管疾病的风险(13]。

位于染色体2 p23、GCKR基因由19个外显子,编码625个氨基酸组成的蛋白质14]。GCKR是2型糖尿病的易感性基因(15]。GCKR肝脏和胰腺胰岛细胞基因产物抑制葡糖激酶通过共价结合形成一个不活动的复杂与葡糖激酶,从而在葡萄糖稳态中起着举足轻重的作用16,17]。最近的全基因组关联研究(GWAS)已经确定了GCKR对调节血清TG(很重要18]或空腹血糖水平。冠心病风险是强烈和独立与异常的葡萄糖代谢19,20.]。此外,动物实验已经证实的扰动GCKR代谢途径可能会增加血清TG浓度(21,22]。

GCKRrs780093 (A / G)多态性是一种intronic SNP。最近的一项研究发现GCKRrs780093与TG水平在欧洲15]。由于大多数研究都是在欧洲进行的,我们的研究目标之一是确认的相关性GCKRrs780093多态性和TG水平在汉族人口。

在目前的研究中,我们收集了568冠心病个体和494年non-CHD控制来自中国宁波东部和执行一个病例对照研究调查的贡献GCKRrs780093多态性与冠心病的风险和TG水平在汉族人口。

2。方法和材料

2.1。样品收集

共有1062名患者从宁波Lihuili无关的医院2011年9月至2013年5月。我们的研究包括568例冠心病(平均年龄: )和494 non-CHD控件(平均年龄: )。所有患者根据上被标准化的冠状动脉血管造影检查的方法23]。诊断结果判断至少两个独立的心脏病专家。根据血管造影结果,冠心病病例定义为直径狭窄程度≥50%的主要冠状动脉。此外,前史的患者血管成形术或冠状动脉搭桥手术被认为是冠心病的病例。Non-CHD控制狭窄< 50%的冠状动脉或没有动脉粥样硬化血管疾病的历史。患有先天性心脏病或心肌病,肝脏或肾脏疾病并不包括在或对照组。收集血液样本的情况下和控制在禁食状态和治疗同样的调查。然后,收集血液样本3.2%柠檬酸sodium-treated管和储存在−80°C到分析。血清甘油三酯和总胆固醇测定使用自动分析仪(日立7060、日立、日本东京)在一个月内的样本集合。研究方案是在宁波Lihuili医院的伦理委员会批准。 All participants signed the informed consent that included genetic association studies.

2.2。SNP基因分型

基因组DNA分离外周血淋巴细胞的核酸提取自动分析仪(Lab-Aid 820,厦门,中国)。使用PicoGreen双链DNA DNA浓度是量化的量化工具(分子探针Inc .)、美国)。PCR进行GeneAmp PCR系统Veriti 96孔样本块模块(应用生物系统公司、AB、美国)。pcr是设置如下:0.25μ在每个三个引物(表的L1);6μL SYBR绿色我;3.25μL ddH2O;和2μL DNA。PCR过程开始,最初在95°C变性30秒,紧随其后的是40三步放大的周期,包括变性在95°C,持续30秒,30秒59°C的退火,30秒72°C的底漆扩展,和最后一个扩展为30秒72°C。基因分型的PCR产物进行使用熔化温度转变转变(Tm)根据制造商的指示24]。Tm-shift方法使用两个allele-specific引物和一个反向引物扩增多态性地区编码目标变量(图1和表1)。

表1
pcr引物一个。

图1
基因分型的GCKRrs780093使用Tm-shift方法。GG基因型具有较高的Tm价值,即5′末端加入长序列的等位基因纯合子。AA基因型的Tm价值较低,即5′末端加入短序列的等位基因纯合子。AG)的混合曲线和Tm高值较低。
2.3。统计分析

哈迪温伯格平衡(HWE)分析了Arlequin程序(3.5版)(25]。基因型分布及等位基因频率和non-CHD控制冠心病病例之间决定使用Clump22软件与10000年蒙特卡洛模拟(26]。使用权力和权力分析样本大小计算软件(27]。比值比(或)和95%可信区间(CI)与一个在线评估计划(http://faculty.vassar.edu/lowry/odds2x2.html)。基因型之间的逻辑回归分析,并使用SAS统计软件的冠状动脉狭窄程度。单向方差分析测试用来测试基因型和TG水平之间的相关性。显著差异的测试是由值表示 。

3所示。结果

研究的基线特征数量表所示2。基因型分布的rs780093遇到HWE冠心病病例和控件( 、表3)。基因型和等位基因频率GCKRrs780093多态性是表所示3。图2展示了三个基因型(AA、AG)和GG)GCKR由Tm-shift rs780093多态性分析。我们的研究结果表明,rs780093不是整个样品(与冠心病相关的表3(表),gender-stratified样本4)。协会在显性和隐性模型也无法提出一个重大协会rs780093冠心病(表5)。最近的研究在美国人口已经表明,高级个人(≥65岁)有资格获得二级预防冠心病的28]。因为年龄是一个不可变的冠心病危险因素,我们执行一个age-stratified分析研究年龄是否影响的贡献rs780093冠心病的风险。如表所示6岁之前,我们的亚组分析显示一个重要rs780093和冠心病个体之间的联系65岁以上(基因型: = 6.86;df = 2; ;等位基因:或= 1.38;95%可信区间= 1.01 - -1.89; = 4.11;df = 1; )。

表2
病人的主要临床特点一个。
表3
基因型分布及等位基因频率的rs780093病例和控制一个。
表4
故障关联测试案例和控制之间的性别一个。
表5
协会与冠心病rs780093显性和隐性的模型一个。
表6
故障关联测试情况和控制之间的年龄一个。

图2
TG浓度和之间的联系GCKRrs780093多态性。TG浓度表示为±SEM。

我们的研究没有观察性别差异与冠心病rs780093协会( )。进一步在显性和隐性遗传基因测试模型并没有产生显著的结果。时代的另一个亚组分析显示与冠心病重要rs780093协会高级个人(超过65岁)在主导模式下(表7, 或= 2.03,95% CI = 1.26 - -3.27)。

表7
崩溃rs780093协会由年龄在显性和隐性冠心病模型一个。

根据血管造影的结果,我们定义冠心病的严重程度分为三个阶段,其中一个,两个,三个或三个以上的冠状动脉狭窄≥50%。Logistic回归分析显示无显著关联的冠状动脉狭窄和rs780093(表阶段8)。

表8
逻辑回归分析rs780093和冠心病的严重程度之间的关系。

根据先前的TG浓度之间的联系和rs780093欧洲人口,我们执行一个类似的相关测试在汉族人口。我们的数据证实,rs780093-AA基因型预测TG水平远高于其他基因型在汉族人口( ,图2)。

4所示。讨论

我们的病例对照研究的目的是探索的贡献rs780093冠心病的风险和TG水平汉族人口。先前的研究已经表明,TG和低密度脂蛋白胆固醇的水平是独立遗传的心血管疾病的危险因素(29日]。一些冠心病的风险基因可能会影响其功能通过调节或与这些因素相互作用。TG是由甘油和脂肪酸组成的;脂肪酸的循环水平与冠心病的风险(30.,31日]。之前的荟萃分析表明一个强大的协会rs780093与脂肪酸的水平在欧洲32]。和rs780093 /一个基因型与脂肪酸(循环水平的提升32)和高TG水平在多个人群包括欧洲人(15,33),美国人(33),和非洲裔美国人34]。符合之前的发现,我们的研究结果显示,rs780093在汉族人口与TG显著相关。在GCKR,rs780093强大的连锁不平衡(LD) rs1260326 (Pro446Leu)两套( )和CEU人类基因组单体型图的数量( )。在欧洲血统的人的一项研究表明,rs1260326一直持续与甘油三酯和降低空腹血糖升高和降低空腹血糖(35,36]。P446L的GCKR基因显示,以减少对葡糖激酶抑制活性,增加糖酵解水平和预计生产malonyl-CoA、TG的关键基质合成和新创脂肪生成(36]。未来研究是调查是否合理GCKR变异可以增加基质的可用性新创脂肪生成。

早发性冠心病的定义是如果有急性冠脉综合征(心肌梗死或不稳定性心绞痛),血管再生过程,或积极的功能成像研究男性在50岁或55岁女性37]。大多数冠心病发生在个体年龄超过65;只有5 - 10%的冠心病发生在年轻患者(2]。尽管我们无法观察的重要rs780093之间的联系GCKR基因和早发性冠心病,是一个重大协会rs780093冠心病患者在65年之后。

根据血管造影结果,冠心病患者分为三个子组的冠状动脉狭窄。这种分类方法的冠心病可能不准确地反映冠心病的严重程度,从狭窄的比例不考虑规模程度。这种限制的分类可能会导致缺乏rs780093与冠心病的严重程度之间的相关性。一个更好的参数是需要定义的冠状动脉狭窄程度。

在目前的研究中,G的等位基因频率(47.8%)与人类基因组单体型图类似慢性乙肝人口(42.9%)。我们还观察到一个大民族的差异rs780093在欧洲(60.6%)、撒哈拉以南的非洲(89.8%),和中国的人口(47.8%)在人类基因组单体型图计划数据库中根据rs780093频率报告。尽管共有1062人被招募在目前的研究中,我们协会rs780093有55%的权力,这表明样本容量可能是不够的。与此同时,所有的 病例对照研究中的值的数量可以纠正测试;因此,我们不能排除假阳性的可能性在我们的发现。

总之,GCKRrs780093显著相关的冠心病的风险汉族人口65岁以上和显著降低TG水平。另外,我们观察到显著rs780093与冠心病之间的关系后,65岁的主导模式下。

作者的贡献

Jiangfang丽安和郭剑同样这项工作。

确认

赠款支持的研究是国家自然科学基金(31100919和31100919),浙江省自然科学基金(LR13H020003和LY13H020008),黄kc麦格纳基金在宁波大学先进宁波的关键科技项目(2011 c51001),基金的宁波市科技创新团队(2011 b82015),宁波城市的自然科学基金(2011 a610037),宁波社会发展研究项目(2012 c50032),宁波人才培训项目(第一级)和宁波医学和科学的项目(2009 a02)。