基于时间分辨荧光法的三明治杂交分析HLA-DQA1分型

摘要

一种基于微量滴定板的时间分辨荧光(TRF)杂交分析用于HLA分型，利用生物素化序列特异性捕捉探针和铕(Eu)标记基因位点特异性检测探针，使时间分辨荧光仪读取反应。在HLA-DQA分型的应用中，扩增了DQA1基因多态性外显子2的228碱基对长区，变性PCR产物与检测探针和一个捕获探针一起分布在链霉亲和素包被的微滴定孔中。在孵育和洗涤后，加入增强液，通过测量发出的光检测特定的杂交信号。利用DQA1*01、*0101/0104、*0103/0201/0601、*0201、*03、*0401/0601、*05和*0502等位基因的生物素化探针对100个分离的基因组DNA样本进行了研究，结果表明该检测方法能够检测到目标等位基因。一系列的全血点样本也被研究，结果证实了这种修改的测试的适用性。

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