复发性乳腺脓肿的原因棒状杆菌属kroppenstedtii这是一种在白种人女性中不常见的人类病原体

摘要

背景．棒状杆菌属kroppenstedtii（Ck)于1998年首次从人类的痰中发现。与毛利人等少数民族的情况相反，Ck在白种人女性中很少从乳腺脓肿和肉芽肿性乳腺炎中分离出来。案例展示．我们在此报告一例复发性乳腺脓肿的46岁白人女性。结论．在复发性乳腺脓肿的病例中，即使是白人女性，也可能涉及Ck应该调查。目前缺乏这样的调查，可能是由于难以发现Ck，可能导致对这种病因的低估。

1.背景

大部分棒状杆菌是正常的皮肤菌群。通常很难区分由分离细菌引起的感染、定殖和污染。相比之下,我们的棒状杆菌属kroppenstedtii（Ck)菌株为单菌培养物。Ck是一种亲脂性的棒状杆菌属．1998年首次从人的痰中分离出来[1］．它也被发现与炎性乳房疾病有关[2］．2003年，Taylor等人观察到毛利人妇女中棒状杆菌相关炎性乳房疾病的发病率远高于欧洲血统妇女，而这种感染在欧洲血统妇女中很少见[2］．这个物种的棒状杆菌属不含霉菌酸，生长需要脂质。这就是为什么乳腺区域富含脂质，有利于其发育和增殖。这一生理特征解释了这种罕见细菌的罕见组织趋向性及其在乳房中有效生长的能力。

2.案例介绍

46岁白人女性，复发性乳腺脓肿。患者的病史显示，她不吸烟，没有服用任何药物，最近也没有哺乳史。在症状出现之前，没有乳房病变的迹象。7个月前，第一个症状(0 = M0月)是左乳剧烈疼痛，没有发烧和其他症状。1个月后(M1)，第一次超声和乳房x线检查显示左侧乳晕旁肿物，尺寸为24mm × 16mm。高回声肿块周围有低回声和高血管晕。同时给予阿莫西林-克拉维酸3 g - 0.375 g口服，每日3次，连续8天。病人的临床和放射学均无改善。在第一个疗程后，对患者进行取样。细针吸出和活检的细胞学和组织学分析均未发现任何恶性迹象。 Three months later (M4), the first surgery allowed to examine the lesion. The patient then received a second course of treatment with amoxicillin-clavulanic acid 3 g–0.375 g three times a day for 10 days. The sampled purulent liquid was sent to a hospital bacterial laboratory for routine and basic analysis, which showed negative results. Six months later (M6), the pain reappeared and the clinical examination revealed para-areolar swelling. A second echography was performed and showed two masses of 30 and 35 mm in the areolar region of the left breast. These masses were hypoechoic and heterogeneous. The lesion was delimited by a thick membrane containing thick pus. Determining the concentration of the C-reactive protein and the blood cell count revealed normal values. One month after (M7) and just before a second surgery, a needle biopsy was performed on one abscess and sent to our laboratory. We isolated and identified, by 16S rRNA gene sequencing as described below, a棒状杆菌属kroppenstedtii来自临床样本，是单微生物的。第二次手术切除了两个脓肿，并送往病理实验室寻找包括抗酸杆菌和寄生虫在内的细菌:没有发现。放置排水管，放置10天。由于其良好的组织可用性，患者接受口服普霉素(500 mg, 3次/ d，连续15天)治疗。在M28，患者未出现任何复发。因此，尽管该菌株对阿莫西林敏感，但与阿莫西林-克拉维酸两种治疗方法相反，原霉素治疗能有效清除感染在体外．

光镜下革兰氏染色显示大量多形核白细胞，但没有细菌。将脓液接种到含有5%马血的胰蛋白酶大豆琼脂平板和巧克力琼脂平板(BioMérieux, Marcy l 'Etoile，法国)上，并在37℃的空气中添加5% CO培养₂．第一个分离株是在4天后观察到的。有10个殖民地是孤立的。血琼脂上的菌落无色，小，直径小于1mm，光滑圆形，无光泽，不溶血。细胞为革兰氏阳性，不活动，不孢子形成，呈棒状排列，呈栅栏状。使用API Coryne系统鉴定条带(bioMérieux, Marcy-l 'Etoile，法国)获得的结果与当前版本(V3.0)数据库中的任何记录都不匹配，无论是我们的分离株还是菌株类型c . kroppenstedtii(CIP）.药敏试验采用纸片扩散法E-测试(bioMérieux, Marcy-l 'Etoile，法国)在穆勒-欣顿琼脂添加5%马血。结果如表所示1．目前，我国对该问题的建议较少棒状杆菌属属，但没有关于这个特定的物种c . kroppenstedtii。根据临床及实验室标准学会(CLSI)的指引[3.结果表明，该菌株对青霉素G、阿莫西林、头孢噻嗪、米诺环素、卡那霉素、庆大霉素、红霉素、普霉素、克林霉素、万古霉素、利福平、利奈唑、莫西沙星敏感，对甲氧苄啶-磺胺甲恶唑、磷霉素耐药。

来自分离物CIBU090024的16S RRNA基因的完整序列通过如前所述的经典Sanger方法进行[4］．共测定了1460个连续核苷酸。该序列(GenBank登录号JF299190)使用BLASTN程序与GenBank数据库中所有可用的细菌序列进行比较(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/Blast.cgi)和Lasergene软件的MegAlign模块(DNASTAR, Madison, WI, USA)。利用邻域连接算法生成系统进化树[5)(图1）.分离株与菌株的差异率为0.4%c . kroppenstedtii．由此分离出CIBU090024属于该种棒状杆菌属kroppenstedtii。重新排序的微阵列与细菌方法平行使用。开发了该分子工具，用于检测大规模的病毒和细菌剂以及超过600个致病性或抗生素抗性的基因[6- - - - - -9］．从分离物中获得的细菌签名证实了细菌的鉴定。没有通过这种方式获得补充数据(数据未显示)。

3.结论

作为对经典医学细菌学方法的补充，16S rRNA编码基因的测序仍然是鉴定此类疾病病因的主要工具。棒状杆菌属kroppenstedtii是一种在病理实验室标准条件下很难分离和鉴定的物种。取样和细菌培养之间尽可能短的滞后时间，在第一个菌落出现之前尽可能长的培养时间，以及脂质补体的使用是细菌生长和分离的必要因素。这就是为什么1%吐温80被添加到马血琼脂(图2)[10］．分离是成功检测、准确鉴定和药敏试验的必要条件。因为它很难分离和识别，这棒状杆菌属可能被低估为乳腺脓肿的原因。

同意

发表本文获得患者的知情同意。

利益冲突

两位作者均未宣称存在任何利益冲突。

作者的贡献

A. Le Flèche-Matéos、F. Lomprez、Y. Arnoux和A. Sophie Le Guern进行了细菌培养和抗生素检测。N. Berthet进行了分子研究，包括在重测序微阵列上的杂交。A. Le Flèche-Matéos, A. Maria Burguière和j . c .Manuguerra参与了本研究的实验设计。A. Le Flèche-Matéos, N. Berthet, I. Leclercq, A. Maria Burguière和j . c。Manuguerra参与了数据分析。A. Le Flèche-Matéos, N. Berthet, A. Maria Burguière和j . c .Manuguerra参与了手稿的撰写。所有作者都对论文进行了修改和建议。J.-C。 Manuguerra conceived and coordinated the study. All authors read and approved the final paper.

致谢

作者感谢Veille卫生研究所(InVS，法国圣莫里斯)提供的资金支持。该方案得到了巴斯德研究所(法国巴黎)资助和巴斯德研究所total基金会赞助的研究横向方案(PTR DEVA n°246)的支持。他们感谢Grégory Jouvion (Unité d’histophathologie humaine et modèles animaux, Institut Pasteur)对组织学的一些翻译和Philippe Riegel (Université Louis Pasteur, Hôpitaux Universitaires de Strasbourg)的临床经验。他们还感谢巴斯德研究所病原体和公共卫生基因分型平台(PF8)使用Affymetrix工作站，并感谢Meriadeg Le Gouil提供摄影帮助。

参考

1. m.d. Collins, E. Falsen, E. Åkervall, B. Sjöden和A. Alvarez，”棒状杆菌属kroppenstedtiiSp. nov.，一种不含霉菌酸的新型棒状杆菌，国际系统细菌学杂志，第48卷，第48期4、1998年。视图:谷歌学者
2. G. B. Taylor, S. D. Paviour, S. Musaad, W. O. Jones和D. J. Holland，“34例炎性乳房疾病的临床病理回顾，显示棒状杆菌感染和肉芽肿性乳房炎之间的关联，”病理第35期2，页109-119,2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
3. CLSI,不常见分离或挑剔细菌的抗菌稀释和磁盘药敏试验方法，批准的指南。M45-A，临床和实验室标准协会，韦恩，宾夕法尼亚州，2006。
4. C. Harf-Monteil, A. Le Flèche, P. Riegel et al.， "猴粪便中分离的simiae气单胞菌sp. nov. "国际系统与进化微生物学杂志第54卷第5期2，页481-485,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
5. N. Saitou和M. Nei，“邻居连接法:重建系统发生树的新方法”，分子生物学和演化，第4卷，第4期。4，页406-425,1987。视图:谷歌学者
6. N. Berthet，P. Dickinson，I. Filliol等，“使用高密度微阵列”大规模平行的病原体鉴定“微生物生物技术， vol. 1, no. 11，第79-86页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
7. N. Berthet, I. Leclercq, A. Dublineau等，“公共卫生突发事件中的高密度DNA微阵列重测序”，自然生物技术第28卷第2期1，页25-27,2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
8. L. Dacheux, N. Berthet, G. Dissard等，“广谱重测序微阵列在横纹肌病毒基因分型中的应用”，病毒学杂志(第84卷)18, pp. 9557-9574, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
9. I. Leclercq, N. Berthet, C. Batéjat等，“使用共识序列设计高密度重测序微阵列:流感病毒范式”，BMC基因组学，第11卷，第5期。2010年第586条第1款。视图:出版商的网站|谷歌学者
10. P. Riegel, P. Liégeois, M. P. Chenard, C. Mathelin，和H. Monteil，“孤立的棒状杆菌属kroppenstedtii因为乳房脓肿"国际医学微生物学杂志，第294卷，第2期6，页413-416,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者

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