合并感染,立克次氏体helvetica在一个年轻的女人和单纯疱疹病毒2脑膜脑炎

文摘

疱疹病毒2型DNA被PCR检测脑脊液中一个年轻女人出现头痛、脖子僵硬和脑脊液细胞增多,血清学结果符合复活。因为她被暴露在蜱虫,莱姆病和蜱传脑炎被排除在外。进一步的调查在一个正在进行的项目,利用PCR和测序的放大产品,显示的存在立克次氏体helvetica脑脊液。细菌也被隔离在维洛细胞培养,和microimmunofluorescence证实了抗体的发展立克次氏体种虫害的优势IgM反应符合近期感染。她使用抗生素治疗,迅速改善。病人很容易被判断有孤立的疱疹脑膜炎。因为瑞典和其他欧洲国家是rickettsioses流行地区,本文重申调查的重要性立克次体感染流行地区的存在的原因不确定的脑膜炎病例。

1。介绍

斑疹热rickettsiae (SFR)很小,有氧,专性细胞内的革兰氏阴性细菌,主要取决于hematophagous节肢动物和向量的不同导致人类发病的能力(1,2]。九种SFR被描述为新兴病原体在欧洲,和在瑞典立克次氏体helvetica和立克次氏体猫属已报告(3- - - - - -5]。Ixodes蓖麻蜱虫是主要的向量和水库r . helvetica,估计有蜱虫的患病率在20%和1.7之间的欧洲国家,是迄今为止唯一tick-transmitted SFR报道从瑞典1,5- - - - - -7]。近来发现蜱虫从候鸟的SFR代理,这可能有助于物种SFR的地理分布广泛和频繁的报告中发现新的地点(8]。

Serosurveys在欧洲和亚洲的人口在流行地区发现了重要的抗体滴定度介于12.8%和2.6之间(9- - - - - -13]。感染引起的r . helvetica最近是一个公认的斑点热群立克次体病。大多数患者被诊断为轻微发热性疾病,有时皮疹。然而,一个更严重的演讲perimyocarditis已经报道,在一个回顾性的情况下,r . helvetica与亚急性有关脑膜炎(3,9,14]。立克次体病、斑疹伤寒、斑疹热和q热病所有可能引起中枢神经系统(CNS)感染,和SFR的,r . rickettsii,r . conorii,r .粳稻有充分证据证明与脑膜脑炎(15- - - - - -17]。同时,r .猫属的主要储层和向量是猫跳蚤(Ctenocephalides猫属),已被证明导致脑膜炎2例,但迄今为止没有报道任何向量在瑞典(4,17]。

单纯疱疹病毒2 - 2)与1型单纯疱疹病毒密切相关,通常引起生殖器感染,坚持在腰骶神经节中的神经元潜伏性感染。四个成人中就有一个在瑞典被感染。病毒的传播性,但大多数是无症状的感染。在极少数情况下,然而,感染的过程更为复杂,表现为脑膜炎,头痛,有时反复发作(Mollaret脑膜炎)18]。

提高临床医生对这些感染认识,他们的相似之处,和合并感染的可能性,我们提出第一个记录在案的急性脑膜炎,由于r . helvetica。

2。案例展示

先前健康的23岁的女人,有头痛(为期4天时间),脖子僵硬,和畏光持续时间(天),2010年7月住院的传染病,乌普萨拉大学医院,瑞典乌普萨拉。她一直住在东部群岛在前一周。没有经过验证的蜱虫叮咬,但小红丘疹是指出她的左大腿。

临床检查没有显示淋巴结病的迹象或皮疹,没有肺,生殖器,或腹部症状。体温是38.5°C承认但以前正常的,可能是因为病人使用退热的平板电脑。

实验室测试显示c反应蛋白在正常上限(11毫克/升),正常的外周白细胞细胞计数(/ L)和正常的血红蛋白值,钠和钾。脑脊液(CSF)显示脑脊液细胞增多(细胞/ L,其中/ L是单核细胞),白蛋白升高(2209 mg / L),和一个稍微降低血糖比(< 0.5)。她治疗脑膜炎的原因不明,开始在头孢噻肟,氨苄青霉素,valacyclovir,倍他米松静脉注射。她迅速改善治疗。血液和脑脊液细菌培养,以及测试包柔氏螺旋体肠道病毒,都是负面的。蜱传脑炎血清学与以前的疫苗接种是相一致的。PCR的HSV-2 CSF是正面的。HSV-2血清IgM是弱阳性,HSV-2免疫球蛋白是阳性血清和CSF比20左右。这是解释为复活的证据或感染的早期阶段。巧合的是,作为一个正在进行的项目的结果,立克次体感染的可能性被认为是和调查显示积极的CSF的直接免疫荧光试验证实了文化和qPCR SFR的脑脊液。抗生素治疗就变成平板电脑强力霉素(100毫克pO b.i.d。)和持续了2周。

总结了特点和实验室结果表1。

直接免疫荧光脑脊液
一滴脑脊液,离心后,固定在一个微观滑动和沾兔子anti-rickettsial hyper-immunoserum和山羊anti-rabbit免疫球蛋白,是检查和显示绿色荧光微生物的大小和形状对应立克次氏体。安装介质与DAPI VECTASHIELD (4′, 6-diamidino-2-phenylindole)(美国伯林盖姆向量实验室)是根据制造商的指示,显示相同的生物荧光细菌DNA阳性(数字1(一)和1 (b))。

提取和聚合酶链反应
细菌和病毒的DNA的CSF,后来从样本中提取分离得到维洛细胞培养、使用NucliSENS easyMAG自动提取平台(bioMerieux、杜伦、数控、美国)根据制造商的指示。斑疹热群立克次氏体化验使用genus-specific实时PCR探针和引物瞄准吗glt一个基因,如前所述19]。实时PCR检测对SFR和HSV进行Rotor-Gene 3000 (Corbett研究,悉尼,澳大利亚)使用LC Taqman主设备(罗氏公司、法国),阳性HSV-2和SFR。试剂控制,不含DNA,没有显示出放大。SFR的Ct值在34.86和37.79之间,表明少于10份的反应。这符合检测极限直接显微镜可以检测10⁴细菌/毫升。

SFR阳性样本进一步放大17-kDa使用嵌套PCR分析化验,经济新闻B和glt基因,如前所述20.- - - - - -22]。传统和嵌套PCR进行DNA热循环(Amp基因PCR系统9700、PE应用生物系统公司、美国),和预期片段大小被证实使用凝胶电泳(琼脂糖1%,溴化乙锭0.01%)。片段大小的确定是基于一个标准分子量DNA标记(Fermentas、Helsingborg、瑞典)。消极的控制,无菌水是包含在每个放大试验。纯化的DNAr . helvetica原本孤立的从一个即蓖麻阳性对照为蜱虫被使用在这些化验(7]。直接循环扩增子的两股测序分析使用一个自动执行ABI 3130基因分析仪(应用生物系统公司、东京、日本)。对于物种识别、双向的相似之处和差异从其他rickettsiae斑疹热组检查使用爆炸分析。多重序列比对进行使用BioEdit版本7.0.9 ClustalW。嵌套和常规PCR的获得序列的部分地区17 kDa,经济新闻B,glt一个基因169个基点(kDa 17日),222个基点(经济新闻B)、716个基点(glt),分别。分析这些扩增子共享99 - 100%相应的基因序列的相似性r . helvetica(加入基因库数字GU827073 (kDa 17日),AF123725 (经济新闻B)和U59723 (glt)),显著核苷酸差异的其他rickettsiae斑疹热组。

立克次体文化
100年μL的脑脊液培养的两个25厘米²烧瓶上汇合的层的维洛细胞。接种后,细胞培养在鹰孵化的基本媒介,含10%胎牛血清和1%谷酰胺潮湿室中5%的股份有限公司₂在32°C。所有试剂和细胞系都检查每周立克次体增长和排除其他细菌污染。细胞培养检测立克次体增长监控使用的直接免疫荧光试验使离心后收集细胞媒介和连接到显微镜幻灯片。准备是沾染了兔子anti-rickettsial超免疫血清和山羊anti-rabbit免疫球蛋白(H + L-chain)免疫球蛋白(Alexa萤石488)(H + L-chain)共轭(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)作为二级抗体。随着越来越多的中等VECTASHIELD DAPI(美国伯林盖姆向量实验室)使用。3周后,观察细胞内细菌的细胞和立克次体DNA验证了实时多聚酶链式反应(19,23]。

血清学
HSV血清学表现在贝林ELISA III处理器和2000年,分别根据制造商的指示(西门子、诊断产品,马尔堡,德国)。HSV免疫球蛋白(AE /毫升)67(积极)脑脊液和1900(积极)的血清。HSV IgM (OD)中没有检测到CSF和为0.37(弱阳性)的血清。
Immunoflourescent检测(IFA)的抗体r . helvetica在接种维洛细胞。感染的整除维洛细胞培养基补充10%的卵黄囊的解决方案,应用于显微镜下井,晒干,在丙酮固定,孵化血清如前所述的连续稀释(13]。积极的控制,从证明感染患者血清样本立克次氏体conorii与端点免疫球蛋白的滴定度1:160年,瑞典传染病研究所提供的控制,和来自另一个患者的血清证明端点免疫球蛋白的滴定度1:80r . helvetica被使用。免疫球蛋白和IgM抗体被发现使用荧光素isothiocyanate-conjugated (FITC)γMu-chain,分别具体多克隆兔反人类免疫球蛋白和IgM (ref。F0202 F0203;Dako、丹麦)。IgM抗体与类风湿因子预处理过程后检查吸附剂(Immunkemi,斯德哥尔摩,瑞典)将复杂的抗体免疫球蛋白。IFA结果总结表1。占主导地位的IgM反应r . helvetica抗原和斑疹热组抗原在急性期和恢复期的血清。所有负面的控制都是消极的。

3所示。讨论

摘要病人出现的症状增加头痛、颈部僵硬,发烧后前往瑞典东部群岛在前一周。实验室调查显示脑脊液脑脊液细胞增多,单核优势,积极的PCR检测HSV-2,和HSV-2血清学指示激活或早期感染,导致HSV-2脑膜炎的诊断和适当的治疗。没有经典的蜱虫咬痕或皮疹暗示立克次体感染。可能由于蜱虫接触,一个正在进行的结果立克次氏体项目,这个病人还包括进行调查,核实的存在r . helveticaCSF。

所有可用的诊断方法证实立克次体感染。直接免疫荧光法是一个有用的工具在这种情况下,由于脑脊液白细胞高度。与其他类似的化验,如果在脑脊液细菌负荷低,结果可能是否定的(数字1(一)和1 (b))。此外,它需要专业技术可靠的解释。

实时PCR分析CSF能够检测和诊断早期立克次体感染中枢神经系统,但传统PCR有助于进一步放大和序列物种鉴定的产品。在瑞典,一个斑疹热立克次氏体,r .猫属最近,也引起脑膜炎。区分这两个rickettsiae需要引物设计包含一个序列满足物种分化(4]。

血清学测试确认重要的anti-rickettsial抗体滴定度的存在,主要是急性期血清IgM滴定度更高,减少在恢复期。免疫球蛋白的滴定度更温和,但据报道,在原发性感染,个人接受抗生素治疗开始在发病后第一个星期显示强劲IgM反应在免疫球蛋白(没有明显增加24]。目前发现展示的重要性,其中包括一个IgM试验获得可靠的早期诊断血清学评估和更好的机会。

我们也孤立立克次体有机体。在这种情况下,条件是最佳的,因为之间的延迟时间的样本收集和接种到壳瓶只是一个时间的问题。之前的研究表明,所有文化样本接种比当天晚些时候的采样和举行4°C或室温呈阴性25]。隔离,因此需要获得专业实验室设施在一个合理的距离。

对病人没有皮疹或焦痂,立克次体诊断并不容易,不能完全建立在流行病学、临床和实验室标准标准。诊断得分,帮助医生评估的诊断SFR前所述了地中海斑疹热、非洲蜱咬热,和lymphangitis-associated立克次体病,但不是为其他少建立立克次体疾病(26]。建立了诊断实验室结果和流行病学,临床、细菌学和血清学标准给出一个分数等于25或更高。在这种情况下,使用相同的标准,隔离细菌的血清学调查结果提供了一个得分远高于25。的效用提出的标准应该进一步研究立克次体疾病的其他物种。

SFR的标准治疗方案包括强力霉素200毫克(口服或静脉注射),每日根据临床过程[7 - 14天27]。大多数病人将改善后第一个24小时内开始治疗,导致更短的建议方案,但治疗至少应持续到病人无热的24 h。显然,病人也感染了HSV-2。她没有以前的历史反复发作严重的头痛,以及重新激活了HSV-2感染的血清学调查结果暗示,在她的案子可能是无症状的。立克次体感染可能重新激活她HSV-2感染但相反也可能同时感染两个代理在同一时间。类似的合并感染r .粳稻EBV,另一个潜伏病毒,已报道的案件与肝衰竭(28]。有相似之处的典型症状Mollaret脑膜炎和立克次体感染,表明Mollaret脑膜炎的只要原因是未知的,它可能是感兴趣的调查SFR的病例可能已经暴露立克次氏体。

立克次体感染的早期诊断很重要,尽管瑞典,像其他欧洲国家一样,是一个流行区域r . helvetica的重要性,它是临床医生经常考虑立克次体感染,除了其他代理,发热或脑膜炎患者居住在流行地区旅行。由于立克次体感染治疗,适当的可用性和及时的诊断是至关重要的优化临床结果的影响。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项研究是支持部分由Uppsala-Orebro-Regional研究委员会(25021);临床研究中心达拉(9028);Signhild Engkvists基金会和大车Engkvist Byggmastare基金会(11877)。研究了经伦理委员会批准,瑞典乌普萨拉大学。

引用

1. d .拉乌尔和诉Roux Rickettsioses作为新的或新发传染病的范例,”临床微生物学检查,10卷,不。4、694 - 719年,1997页。视图:谷歌学术搜索
2. p . Parola c d围场,d .拉乌尔“蜱传播的世界各地rickettsioses:新兴疾病挑战旧概念,“临床微生物学检查,18卷,不。4、719 - 756年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. k·尼尔森,k . Elfving, c . Pahlson。”立克次氏体helvetica在瑞典脑膜炎患者,2006,“新发传染病,16卷,不。3、490 - 492年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. a . Lindblom k . Severinson和k·尼尔森。”立克次氏体猫属感染:在瑞典报告两例亚急性脑膜炎和文献之回顾,“斯堪的纳维亚传染病》杂志上,42卷,不。11 - 12,906 - 909年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. p . Parola b Davoust, d .拉乌尔,“蜱虫,立克次氏体蚤传播的新兴人畜共患病,”兽医研究,36卷,不。3、469 - 492年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. k . Severinsson t . g . Jaenson j·佩特森,k .福尔克和k·尼尔森检测和流行红孢子虫属phagocytophilum和立克次氏体helvetica在Ixodes蓖麻蜱虫在七个研究领域在瑞典,”寄生虫和向量,3卷,不。1,第66条,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. k·尼尔森,t . g . Jaenson i Uhnoo et al .,”表征的立克次氏体斑疹热群Ixodes蓖麻在瑞典是蜱虫。”临床微生物学杂志,35卷,不。1,第247 - 243页,1997。视图:谷歌学术搜索
8. k . Elfving b·奥尔森s Bergstrom et al .,“传播斑疹热立克次氏体代理在欧洲的候鸟,”《公共科学图书馆•综合》,5卷,不。1,文章ID e8572, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. p·e·弗尔涅f . Grunnenberger b . Jaulhac g . Gastinger和d .拉乌尔定律”的证据立克次氏体helvetica感染人类,法国东部,”新发传染病》第六卷,没有。4、389 - 392年,2000页。视图:谷歌学术搜索
10. s . Phongmany j . c . Rolain r . Phetsouvanh et al .,“立克次体感染和发热、万象、老挝、”新发传染病,12卷,不。2、256 - 262年,2006页。视图:谷歌学术搜索
11. h·尼尔森·e·弗尔涅彼得森i s h .连续加感,t . Ejlertsen和d .拉乌尔定律”,血清学和分子的证据立克次氏体helvetica在丹麦,“斯堪的纳维亚传染病》杂志上,36卷,不。8,559 - 563年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. m . Cinco r . Luzzati m . Mascioli r . Floris和p . Brouqui“立克次氏体感染的血清学证据林业在意大利东北部的流浪者”临床微生物学和传染病,12卷,不。5,493 - 495年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. k . Elfving a Lindblom和k·尼尔森,“Seroprevalence的立克次氏体种虫害感染tick-bitten患者和献血者在瑞典,”斯堪的纳维亚传染病》杂志上,40卷,不。1,第77 - 74页,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. k·尼尔森,o .林奎斯特和c . Pahlson”协会立克次氏体helvetica与慢性perimyocarditis心脏性猝死。”《柳叶刀》,卷354,不。9185年,第1173 - 1169页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. m·d·Baganz p . e .渣滓和j·a·莱因哈特“落基山斑疹热脑炎:发现,先生”美国神经放射学杂志》,16卷,不。4、919 - 922年,1995页。视图:谷歌学术搜索
16. g·冈瑟和m . Haglund蜱传播的脑病。流行病学、诊断、治疗和预防。”在实践中治疗,19卷,不。12日,第1032 - 1009页,2005年。视图:谷歌学术搜索
17. l·f·霍尼和d·h·沃克脑膜脑炎落基山斑疹热的主要表现,”南方医学杂志,卷81,不。7,915 - 918年,1988页。视图:谷歌学术搜索
18. m . Jensenius b . Myrvang g . Størvold a·布赫k·b·荷雷姆和a . l . Bruu“单纯疱疹病毒2型DNA检测脑脊液中9 Mollaret脑膜炎患者,”Acta Neurologica Scandinavica,卷98,不。3、209 - 212年,1998页。视图:谷歌学术搜索
19. j .速记员,s . r .坟墓,n . b .山区”的高度敏感和特定的实时PCR试验检测发现发烧和斑疹伤寒群rickettsiae,”美国热带医学和卫生杂志》上,卷73,不。6,1083 - 1085年,2005页。视图:谷歌学术搜索
20. 崔y . j . s . h·李,k . h .公园et al .,“评价pcr进行斑点热群立克次体病的诊断测定人血清样本,”临床免疫学和诊断实验室,12卷,不。6,759 - 763年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. m .莱特纳s Yitzhaki s Rzotkiewicz, a . Keysary“聚合酶链反应的诊断地中海斑疹热在血清和组织样本,”美国热带医学和卫生杂志》上,卷67,不。2、166 - 169年,2002页。视图:谷歌学术搜索
22. 诉面粉糊,大肠Rydkina、m . Eremeeva和d .拉乌尔“柠檬酸合成酶基因比较,系统发育分析的新工具,为rickettsiae及其应用,”国际期刊的细菌学卷,47号2、252 - 261年,1997页。视图:谷歌学术搜索
23. b . La斯科拉和d .拉乌尔的诊断地中海斑疹热的培养立克次氏体conorii使用centrifugation-shell瓶技术从血液和皮肤样本和检测r . conorii循环内皮细胞:6年随访。”临床微生物学杂志,34卷,不。11日,第2727 - 2722页,1996年。视图:谷歌学术搜索
24. 美国哈莉·g·a .其他,“使用敏感的微型板块回顾时,酶联免疫吸附试验实验室的血清学分析人口感染斑疹伤寒组rickettsiae风险,”临床微生物学杂志,12卷,不。3、343 - 350年,1980页。视图:谷歌学术搜索
25. 诉La斯科拉和d .拉乌尔定律”,实验室诊断Rickettsioses:当前新旧立克次体疾病的诊断方法,”临床微生物学杂志,35卷,不。11日,第2727 - 2715页,1997年。视图:谷歌学术搜索
26. p . Brouqui p . Parola p·e·弗尔涅和d .拉乌尔,“斑疹热rickettsioses在欧洲南部和东部,”《免疫学和医学微生物学卷,49号1到12,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. m . Jensenius p·e·弗尔涅,d .拉乌尔定律”Rickettsioses和国际旅行。”临床感染疾病,39卷,不。10日,1493 - 1499年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. m .近藤的黑川纪章i、k . i Yamanaka s Akachi和m . Nishii”日本斑疹热急性肝衰竭:与eb病毒相关吗?”国际皮肤科杂志卷,49号12日,第1405 - 1403页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2011肯尼斯·尼尔森等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。