文摘

目标。确定的表达和临床重要性水平血清mir - 204和mir - 451患者的肺动脉高血压引起的先天性心脏病(CHD-PAH)。方法。从2019年7月到2021年1月,114婴儿先天性心脏病(CHD)青岛阜外心血管医院住院。他们分成类别:冠心病(53例)和CHD-PAH(61例)取决于是否有肺动脉高压(PAH)。此外,60岁健康儿童被选为对照组。所有儿童接受常规生化检查、超声心动图和肺动脉压力检查。通过使用酶联免疫吸附试验(ELISA),脑利钠肽(BNP)水平和非对称dimethylarginine (ADMA)测量血液中。此外,逆转录-聚合酶链反应(rt - pcr),用于确定mir - 204的表达水平和外周血中mir - 451。mir - 204之间的相关性,mir - 451,法国巴黎,ADMA,肺动脉平均使用皮尔逊相关分析研究。结果。因此,TC,法国巴黎,ADMA血清水平相当高的冠心病和CHD-PAH组比对照组( ),而法国和ADMA CHD-PAH组的血清水平明显高于冠心病组( )。rt - pcr数据显示,mir - 204的表达水平和mir - 451儿童外周血的冠心病和CHD-PAH组显著降低( )与对照组相比。mir - 204的表达水平和mir - 451在儿童外周血CHD-PAH组显著较低( )冠心病组中。值得注意的是,ROC曲线的结果显示,曲线下的面积(AUC) CHD-PAH诊断mir - 204和mir - 451仅为0.737和0.725,分别和联合诊断的AUC为0.840,这是比单一的诊断( )。患者CHD-PAH mir - 204水平较低和mir - 451的血,这是发现与法国巴黎,ADMA,肺动脉平均,皮尔逊相关分析。结论。儿童CHD-PAH可以诊断基于异常的表情mir - 204和外周血血清mir - 451。此外,CHD-PAH可以诊断如果mir - 204和mir - 451作为生物标志物检测,具有较高的诊断价值。

1。介绍

先天性心脏病(CHD)是最常见的出生缺陷。多种原因可导致心脏和大血管的异常发展在胚胎发育或不完全关闭出生后新生儿心脏频道(1]。冠心病是一个日益增长的负担医疗体系,中国的统计数据显示,冠心病的发病率约为2.9‰(2,3]。最常见的一种致命的副作用的冠状动脉疾病(CAD)是一个条件称为肺动脉高血压(PAH)。多环芳烃是一个血流动力学和病理生理条件肺动脉压力增加超过某个阈值。它的特点是独特的改变导致的肺小动脉右侧心脏衰竭,增加肺动脉压力,和高死亡率4]。根据一项研究,大约47.5%的冠心病患者在中国有多环芳烃5]。没有自然的方式修补CHD-PAH,需要手术矫正畸形;然而,多环芳烃的存在使程序更具挑战性。儿童的术后恢复时间很长,很容易导致心脏腔和胸腔积液等并发症,甚至导致呼吸衰竭的儿童(6]。因此,儿童CHD-PAH必须得到及时诊断和治疗。没有传统的临床体征CHD-PAH的早期阶段,因此找到特定指标诊断和治疗是至关重要的。

小分子核糖核酸(miR)是一种高度保守的内生非蛋白编码RNA分子,参与多种重要基因的表达和细胞进化的过程中,它可以通过绑定3调节基因转录后的表达 - - - - - -UTR mRNA (7]。microrna能扮演重要角色在心血管疾病的发病和进展协调各种疾病的途径。mir - 204是一个新发现的microrna与多个对心血管疾病的保护作用[8]。已经发现mir - 204可以保护心肌细胞缺血/再灌注损伤通过调节细胞凋亡,和血清mir - 204表达大大减少患者的慢性阻塞性肺疾病(COPD)伴随着PAH (9,10]。据报道,在动脉粥样硬化斑块组织和血液样本,mir - 204 - 5 - p的表达水平明显下调。此外,mir - 204 - 5 - p的过度也可能减少人类血管平滑肌细胞(hVSMCs)增殖和迁移而增加hVSMC凋亡[11]。另一项研究证实,mir - 204在缺血脑病(HIE)表达下调(12]。mir - 451主要是心肌细胞动作电位表达和调节在PHA病人和低氧诱导PAH鼠模型,和其血清含量变化影响肺动脉平滑肌细胞的功能(13]。长等人发现mir - 451表达降低的患者血清中CHD-PAH [14]。

确定新的目标和更好的CHD-PAH的诊断和治疗的理论基础,本研究旨在评估mir - 204的表达和mir - 451 CHD-PAH及其临床意义。

2。数据和方法

2.1。通用数据

进行前瞻性分析114例冠心病承认儿童青岛阜外心血管医院从2019年7月到2021年1月。入选标准如下:(1)证实了冠心病常规检查,心脏听诊,超声心动图;2有经验的临床医生和有经验的超声波检验师进行检查,最后诊断是通过讨论;(2)完善临床资料;(3)儿童家庭接受了参与学习和完成了知情同意;和(4)CHD-PAH组符合诊断标准对多环芳烃15]: ,肺血管阻力 ,和平均肺动脉压力(肺动脉平均)取决于正确的心脏导管 。排除标准如下:(1)多环芳烃由其他病因引起的,(2)患者复杂的恶性肿瘤,患者(3)其他重要器官的功能障碍(肝、肾等),和(4)病人的家庭成员不同意参与这项研究。根据复杂的多环芳烃,孩子们被分为两组:冠心病( )和CHD-PAH ( )。有27个男性和女性冠心病组,26日年龄在2到62个月,平均年龄 个月。CHD-PAH组的平均年龄 33个月,男性和女性年龄在28日3 - 66个月。此外,作为对照组,60性别和年龄匹配的健康儿童聚集在我们医院的体检部门,由30个男生和30个女生,年龄在2到70个月,平均年龄 个月。青岛阜外心血管医院医学伦理委员会批准了这项调查。

2.2。方法
2.2.1。生化指标

6毫升的空腹静脉血收集从每个个人和离心机的三组(3000 rpm, 10分钟)在60分钟的EDTA真空脉管系统。上血清被冻结在-20°C,存储。生化指标如血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血尿素氮(BUN)、丙氨酸转氨酶(ALT)、血清肌酐(SCr)是衡量自动生化分析仪(贝克Mancoulter)、AST和其他。不对称的血清水平dimethylarginine (ADMA)和脑利钠肽(BNP)进行评估通过酶联免疫试剂盒(上海Jianglai生物技术有限公司)。

2.2.2。超声心动图和肺动脉压(PAP)

所有的孩子都受到超声心动图证实先天性心脏病的类型,包括室间隔缺损(VSD)、动脉导管未闭(PDA)和心房间隔缺损(ASD)。所有的孩子都被右心导管检查了下基本的麻醉。测量肺动脉平均和PCWP, PVR是计算。

2.2.3。血清mir - 204和mir - 451表达PT-PCR的检测

6毫升血液被三个禁食组的主题和放置在EDTA真空脉管系统内离心60分钟(3000 r / min, 10分钟)。上血清拍摄和冻结在-80°C进行测试。血清的总RNA提取使用试剂盒技术严格按照操作说明的RNA提取工具包(英杰公司公司,美国)。根据逆转录工具包的指令(从豆类购买公司,日本),1μ相反g总RNA转录成cDNA并存储在冰箱使用的-20°C。rt - pcr试剂盒(Tiangen生物科技(北京)有限公司)是用来确定mir - 204的相对表达水平和血清mir - 451的孩子。rt - pcr反应体系20μl在体积,包括2μl模板,1μl上游引物1μl下游引物,10μl SYBR绿色预混料,6μl双重蒸馏水。rt - pcr反应条件如下:predenaturation进行5分钟的95°C,变性在95°C 15年代,60年代退火在62°C,扩展是在72°C 12 s总共35周期。在这项研究中,U6作为内部参考。Sangon生物工程有限公司已经开发和合成引物和内部参考表表示1。此外,2- - - - - -ΔΔCt被用来确定mir - 204的相对表达水平和mir - 451。研究过程的示意图如图1。

表1
引物序列。

图1
原理图的研究过程。
2.3。统计分析

统计分析,采用SPSS 22.0程序。表达的计算数据 (%),组间比较 测试。测量数据符合正态分布的形式表达 。的 - - - - - -独立测试样本被用来比较两组之间的数据,和单向方差分析是用来检查在三组之间的差异数据。的诊断效用mir - 204和mir - 451 CHD-PAH使用ROC曲线进行了研究。mir - 204的相关性和mir - 451法国巴黎,ADMA,肺动脉平均是调查使用皮尔逊相关分析的统计学意义 。

3所示。结果

3.1。比较病人的一般资料

ASD冠心病组,22例,房间隔缺损19例,12例PDA。CHD-PAH组26例ASD, 21例房间隔缺损,14例PDA。没有明显差异在冠心病类型、年龄、血清TG、性别、AST、ALT、包子,可控硅在三组(所有的水平 ),表明可比性。冠心病和CHD-PAH组,有统计学意义(所有 )肺动脉平均差异PCWP, PVR。表2表明,血液中的TC、巴黎银行和ADMA在冠心病和CHD-PAH组显著高于对照组( ),而血清BNP和CHD-PAH ADMA水平组明显高于冠心病组( )。

表2
比较通用的数据包括主题。
3.2。比较血清mir - 204和mir - 451三组儿童水平

最终,rt - pcr表明,mir - 204的表达和mir - 451外周血的冠心病和CHD-PAH组与对照组相比显著降低(两者 )。作为显示在图2,mir - 204的表达和mir - 451的外周血CHD-PAH组显著较低( )比冠心病组。


图2
比较血清mir - 204和mir - 451三组儿童水平。注意:与对照组相比, , ;与冠心病组相比,# , # # 。
3.3。诊断价值mir - 204和mir - 451在CHD-PAH单独或联合检测

曲线下的面积(AUC)诊断CHD-PAH mir - 204仅为0.737,95%可信区间为0.702 ~ 0.787,见ROC曲线,而敏感性和特异性分别为73.48%和70.29%,分别;mir - 451的AUC诊断CHD-PAH为0.725,95%可信区间为0.698 ~ 0.752,敏感性和特异性分别为71.40%和60.26%,分别;结合诊断的AUC为0.840,95%可信区间0.803 - -0.882,敏感性和特异性分别为86.79%和68.85%,分别。作为显示在图3,差异具有统计学意义(所有 )。


图3
ROC曲线mir - 204和mir - 451为诊断CHD-PAH单独或结合在一起。
3.4。mir - 204的相关分析,mir - 451水平

根据皮尔逊相关分析,mir - 204水平和mir - 451患者的外周血CHD-PAH不利与BNP, ADMA和肺动脉平均( ),显示在表3。

表3
相关分析mir - 204和mir - 451与BNP水平,ADMA,肺动脉平均CHD-PAH病人。

4所示。讨论

冠心病是儿童最常见的心血管疾病,~ 40000婴儿出生在美国每年与先天性心脏病(CHD),和三分之一的这些新生儿需要手术或catheter-based治疗期间的第一年生活(16]。多环芳烃是一种最普遍的后果在婴儿先天性心脏病和特点是微小的改造肺动脉和提高肺动脉压力,这可能会导致右心衰竭甚至死亡,如果不及时治疗(17,18]。microrna的已被广泛研究的异常表达在很多疾病。近年来,研究发现,microrna发挥重要的监管作用在肺血管疾病的进展,和多环芳烃密切相关的病理生理学各种microrna的微分表达式(19]。

心血管系统是受最近发现microrna的保护,即。,microrna - 204。研究表明,mir - 204可以调节心肌细胞的自噬功能,参与后心肌细胞缺氧损伤的保护机制(20.]。慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者伴有PAH, Dauriz等人发现血清mir - 204表达显著降低,与合成mir - 204治疗可能减少PAP (21]。饮剂等人发现mir - 204的差别,对这些基因的多环芳烃肺动脉平滑肌细胞引起proliferation-apoptosis失衡,导致远端肺动脉血管重建。mir - 204表达长期以来一直被称为一个关键球员在PAH远端肺动脉血管重建,特别是通过NFAT和HIF-1激活在肺动脉平滑肌细胞(22]。李等人发现,mir - 204水平负相关与巴氏在COPD患者复杂的多环芳烃(23]。本研究的结果表明,mir - 204水平CHD-PAH患者外周血的消极与肺动脉平均水平,这与先前的研究是相一致的。microrna - 451与缺血再灌注损伤、氧化应激、心血管损伤和肺损伤。mir - 451表达显著抑制在颈动脉粥样硬化的病人,和老年病mir - 451可以减轻内膜的增厚在血管损伤后大鼠(24]。在burn-induced急性肺损伤大鼠模型,mir - 451肺内皮细胞表达增加,促进肺内皮细胞的通透性的增加,抑制肺内皮细胞的血管生成,显示潜在的烧伤治疗(25]。长等人发现,降低血清mir - 451的表达CHD-PAH病人,与法国巴黎,ADMA和疾病严重程度(14]。Muscularization迄今为止nonmuscular动脉和肺血管重塑是多环芳烃的两个主要特征(26]。这个过程的一个主要类型的细胞与平滑肌细胞,和表型失调PASMC增殖和迁移导致了复杂的重构多环芳烃。mir - 451的过度增加肺动脉平滑肌细胞迁移,按授予et al。27]。本研究的目的是调查的临床重要性mir - 204与PAH-CHD儿童和mir - 451表达。mir - 204的表达和mir - 451在CHD患儿外周血和CHD-PAH大大低于对照组(两种 )。mir - 204的表达和mir - 451的外周血CHD-PAH组相当低( )冠心病组相比。TC和TG是心血管疾病的重要危险因素。他们参与动脉粥样硬化的变化,密切相关,高血压、冠心病、脑血管疾病和促进心血管和脑血管疾病的发生和发展28]。法国是主要由心室细胞合成和分泌。它参与调节血压,血液体积,土壤水盐平衡。,,更重要的是,它可以反映心脏功能(29日]。ADMA是一种内源性一氧化氮合酶抑制剂,这可能导致内皮功能障碍,并扮演着重要的角色在心血管疾病的发生和发展的一个新的危险因素(30.]。TC水平的研究显示,法国巴黎,ADMA,肺动脉平均冠心病和CHD-PAH组显著高于对照组( ),ADMA, BNP水平与肺动脉平均CHD-PAH组均明显高于冠心病组( )。与文献研究的结果一致,mir - 451水平的外周血CHD-PAH患者BNP水平负相关,ADMA和肺动脉平均。

目前,右心导管术是现在CHD-PAH诊断的金标准31日]。然而,有些入侵,在新生儿临床应用有限。寻找有效的无创性早期生物标志物识别CHD-PAH儿童仍然是至关重要的。诊断的实用性mir - 204和mir - 451,结合CHD-PAH在本研究调查。单独诊断的AUC CHD-PAH mir - 204和mir - 451是0.737和0.725,分别虽然联合诊断的AUC为0.840,表明结合诊断有较高的AUC比单独的诊断( )。这表明结合诊断有较高的诊断价值。mir - 451的AUC PAH的诊断是0.710在文学研究中,这是与我们的结果(32]。我们的研究结果表明,检测血清mir - 204的表达水平和mir - 451一起可能儿童CHD-PAH的诊断提供依据。

总之,mir - 204的低表达和mir - 451 CHD-PAH儿童血液中可能增加CHD-PAH的诊断效率,可以用作生物标记CHD-PAH诊断和评估。microrna的检测是非常简单和方便,和损害的风险极低,这有利于大规模筛选和改进诊断和治疗的效率。主要医院,更实用和可操作性。然而,我们没有调查的过程在CHD-PAH mir - 204和mir - 451。如前所述,血清mir - 204表达显著降低COPD患者的复杂的多环芳烃,和合成mir - 204治疗降低肺动脉压力。mir - 451促进肺动脉高压通过调节ABCA1的表达。在这项研究中,mir - 204和mir - 451在CHD-PAH显著下调。因此,我们假设CHD-PAH发生和发展的可能与mir - 204的表达减少,和mir - 451的表达下降可能在CHD-PAH发挥补偿和保护作用。此外,它是一个单中心临床研究样本量相对较小,缺乏多环芳烃组作为一个在这个临床试验比较。这些都需要进一步的体内和体外研究。

数据可用性

标签数据集用于支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。