文摘
目标。这项前瞻性研究旨在观察鼻痒、打喷嚏在老鼠的数量从宏观水平和检查鼻粘膜的病理变化,Th1和Th2-related细胞因子和Treg / Th17维生素D3政府从微观层面,以探讨维生素D在过敏性鼻炎的作用,为预防和治疗提供理论指导。结果。之间有显著差异在鼻痒、打喷嚏管理组和阳性组。同时,Th1和Treg管理组增加,而Th2和Th17下降,表明Th1 / Th2平衡修正。我们的研究显示,维生素D3对过敏性鼻炎的预防和治疗效果,为实际应用提供理论指导。
1。介绍
这是保守估计,变应性鼻炎(AR)影响到全世界超过5亿人,已成为影响人类健康问题(1]。过敏性鼻炎是一种非感染性炎症,包括一群症状,主要影响鼻粘膜(2]。过敏性鼻炎的发病机制不是很清楚。目前,Th1 / Th2平衡被认为是主要原因,和没有根本治疗过敏性鼻炎(计划3- - - - - -6]。
免疫疗法被认为是长寿命的标准治疗方法缓解过敏性鼻炎的症状。最近的研究已经确定了维生素D作为一个潜在的免疫调制剂,它可能影响治疗的结果(7- - - - - -11]。维生素D可以影响T细胞、B细胞、单核细胞、巨噬细胞和调节DCs的活动。此外,维生素D可以抑制DCs在单核细胞的分化和成熟和表达下调相关刺激分子的表达,从而减少T细胞活动和产生免疫耐受。维生素D缺乏会导致TH2-biased过敏性疾病的发生,这可能与失衡Treg / Th17细胞。
一些研究表明,严重缺乏维生素D的发病率在过敏性鼻炎患者明显高于正常人,和一些研究表明,儿童过敏性鼻炎可以减少过敏性鼻炎的症状或分数维生素D-assisted治疗花粉季节。虽然已经有一些争议的功效的维他命D,最近的研究表明维生素D的有益影响的过敏性疾病(12- - - - - -14]。然而,许多这些研究集中在过敏性鼻炎的症状,但维生素D治疗过敏性鼻炎的机理仍不清楚。
本研究旨在观察鼻粘膜的病理变化,Th1和Th2-related细胞因子和Treg / Th17变化致敏小鼠通过鼻滴剂和口服维生素D,维生素D的原因,探索治疗过敏性鼻炎的微观结构水平,为预防和治疗提供理论指导。
2。材料和方法
2.1。材料
卵白蛋白、PMA和1,245 - dihydroxyvitamin D3取自Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。氢氧化铝凝胶,FOXP3单克隆抗体,IL-17单克隆抗体购自热费希尔科学(上海,中国)。CD4单克隆抗体和CD 25单克隆抗体购自英杰公司(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德)。
2.2。实验动物
46岁男性在SPF级BALB / c小鼠加权18 - 20 g买来解放军战略支持医学中心的特征。他们根据不同的治疗方法随机分为5组,每组和再次被随机分为两组。所有实验按照制度动物保健和使用委员会的指导方针(IACUC)解放军战略支持医学中心的特征。
2.3。治疗方法
鼠标由卵白蛋白过敏性鼻炎模型和氢氧化铝15,16]。(一)悬架准备:悬架是由振动卵白蛋白和氢氧化铝凝胶的振荡器两分钟。每个鼠标的剂量是20μ300年g卵白蛋白μL氢氧化铝凝胶(b)致敏阶段:100μL新配置的悬架(总共300μL为每个)进入腹部皮下注射,左边和右边的每个鼠标1天,8,15(c)刺激阶段:自22天,老鼠与超声雾化器雾化吸入2%卵子的解决方案,每次30分钟7天(d)治疗:6小鼠没有任何被视为治疗组1,6过敏性鼻炎没有其他治疗的小鼠被视为组2 8小鼠过敏性鼻炎用维生素D3治疗鼻内被命名为组3,花药8治疗过敏性鼻炎鼠腹腔内注射维生素D3的命名为集团4和8过敏性鼻炎老鼠收到PBS注入被视为组5。药物管理建模的C阶段前30分钟,然后再次雾化
2.4。鼻症状
打个喷嚏和鼻按摩是在30分钟内计算的刺激以来第一个刺激。
2.5。炎症因子检测
血液收集通过使用热原质,endotoxin-free试管和离心机3000 rpm 10分钟快速分离血清和红细胞和仔细。IL-5 il - 4水平,il - 10, IgE,正无穷γ上层清液中检测到酶联免疫试剂盒根据指令。
2.6。包含IHC染色
CD80、CD86干扰素-γ,il - 10在鼻黏膜免疫反应性的老鼠被他和包含IHC染色评估。首先,样本患者通过乙醇为20分钟的过程,90%乙醇为2 - 3分钟,80%乙醇2 - 3分钟,70%乙醇为2 - 3分钟。样本与PBS洗3次然后由过氧化物酶灭活在室温下10分钟。用PBS洗净之后,样品被封锁在37°C 1 h。接下来,样本在37°C主要抗体孵育2 h和第二抗体37°C 1 h在序列。民建联和苏木精为5分钟在室温下添加根据订单。
2.7。电子显微镜
样品被4%多聚甲醛固定,然后沉浸在戊二醛在一夜之间在4°C。之后,样品浸泡在30%,50%,75%,90%丙酮溶液10分钟根据订单,然后浸泡在丙酮5分钟(重复三次)脱水。样品制备后,他们通过TEM观察。
2.8。统计分析
所有数据分析进行GraphPad Prism 8.0软件。 被认为是一个统计学意义。
3所示。结果
3.1。鼻症状
鼻痒、打喷嚏数量的结果见表1。可以看到,鼻痒、打喷嚏的组3和4是显著不同组1、2,5 ( ),虽然组织3和4之间几乎是相同的,表明鼻内政府可能有效的腹腔内管理。
3.2。炎症因子检测
如图1、il - 4和IL-5水平组3和4中几乎是一样的5组2和组,而il - 10水平组3和4组略高于2,这可能代表Th2炎性因子的分泌,从而促进B细胞增殖和分化,诱导IgE合成,并加速呼吸道重塑。干扰素-γ水平组3组略低于5,表明Th1略与维生素D3政府表达下调。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
此外,Treg Th17细胞标记进行了测试,结果表明,CD25 + FOXP3 +水平组3和4是高于组2,而CD4 + IL-17 +水平组3组明显低于2。这个结果表明,维生素D3治疗组,细胞分化的趋势Treg细胞增强,但Th17细胞分化的能力削弱。
3.3。包含IHC染色
包含IHC染色显示强度的cd - 80 cd - 86,干扰素-γ蛋白质,il - 10在鼻粘膜。如图2四个蛋白的表达在小鼠鼻粘膜显示不同组之间无显著差异。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
3.4。电子显微镜
鼻黏膜的形态特征在不同组透射电镜检查。如图3,鼻粘膜细胞的胞浆内空泡5组2和组显著高于其他组,表明炎症反应的存在。然而,他们显示第1组之间没有显著差异,组3和4组,这意味着政府的维生素D可以抑制小鼠过敏性鼻炎。
4所示。结论
过敏性鼻炎是一种最常见的儿科疾病的高发病率在世界范围内(17- - - - - -20.]。近年来,过敏性鼻炎和一些呼吸道疾病的发病率显著增加,空气污染和环境恶化的加剧。治疗过敏性鼻炎有效和安全吸引了越来越多的关注。为了解决与过敏性鼻炎相关的问题,在这项研究中,我们成功地建立了一个模型,过敏性鼻炎用高度敏感的蛋白质,卵白蛋白。
先前的研究表明,血清维生素D的水平(主要是维生素D 3)在过敏性鼻炎患者通常是低21- - - - - -23]。另外,维生素D被用作免疫调制器在多种自身免疫性疾病24- - - - - -26]。然而,大多数以前的研究主要集中在动物或人类macromanifestations验证维生素D治疗过敏性鼻炎的疗效,而机制尚未深入研究。这可能导致有限使用维生素d。因此,在这项研究中,我们测试了维生素D3的角色管理发展的过敏性鼻炎。过敏性鼻炎患者增加了水平的各种促炎的因素也促进疾病进展(27,28]。从明显的监测数据,我们的研究表明,鼻痒、打喷嚏的数量组3和4(维生素D3管理组)明显低于从组2和5(过敏性鼻炎组和积极干预组)。从微观的角度来看,炎症因子的水平进行评估。维生素D3组的il - 10水平组3和4略高于组2,而干扰素-水平γ组3组略低于5,表明Th1水平增加,Th2水平下降,导致Th1 / Th2-balance纠正(29日- - - - - -32]。维生素D3治疗组,细胞分化的趋势Treg细胞增强,但Th17细胞分化的能力被削弱(33- - - - - -35]。同时,TEM的结果表明,小鼠的鼻粘膜炎症组显示明显的炎症反应,而没有显著区别维生素D3管理组和对照组。虽然我们使用两种管理方式在本文中,实验结果表明,几乎没有区别的功效口服或腹腔内注射。因此,在我们的未来可能的研究,我们可以更加关注背后的机制有效性。
总之,维生素D已证实对过敏性鼻炎有影响,可减轻炎症。
数据可用性
使用的数据集和分析在当前研究可从相应的作者在合理的请求。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
宝威李和小李张同样这项工作做出了贡献,分享第一作者。