文摘

客观的。研究黄金GC之间的相关性和胃癌的生物学指标(GC)及其对预后的影响和关联的POT1-AS1 GC细胞增长,并探讨其影响过程的GC, GC医疗提供组织学依据。方法。从2019年9月到2021年12月,80对广汽标本和健康para-carcinoma组织立即被存储在多聚甲醛的解决方案。POT1-AS1水平在77年术后患者GC被免疫组织化学检测方法。上述指标的相关性和之间的关系索引和GC的生物学行为和预后进行分析。结果。POT1-AS1强烈显示在总署标本,并组之间的差异具有统计学意义( )。sh-POT1-AS1质粒转染后的相对表达POT1-AS1 mRNA在国网公司- 7901细胞nontransfection组相比非常低,和组之间差异具有统计学意义( )。POT1-AS1击倒后,国网公司- 7901增殖能力和国网公司- 7901的克隆数量显著下降。细胞周期蛋白D1的相对水平和细胞周期蛋白依赖性激酶4(到)国网公司- 7901年显著降低,而相对的表达细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1 (CDKI1A)显著增加,和组之间的差异具有统计学意义( )。积极的表达POT1-AS1在GC和基质细胞被发现。TIMP-1肿瘤基质细胞与肿瘤的最大直径( ),侵入深度( ),淋巴结转移( ),和临床阶段( )。TIMP-1对预后产生影响,而强阳性组预后不良。TIMP-1在GC细胞的表达并不是与GC的临床生物学行为和预后有关。GC的VEGF水平与肿瘤最大直径( ),入侵深度( ),和淋巴结转移( )与临床阶段和组之间的差异具有统计学意义( ),这与Ki67-LI呈正相关;相关系数为0.254 ,并没有相关的积极表达TIMP-1 GC细胞和间质细胞。VECF对预后有影响,积极组的结果更糟。结论。之间的相关性TIMP-1 POT1-AS1胃癌间质细胞的VEGF和ki - 67 -李表明TIMP-1由间充质细胞可以促进肿瘤恶化,导致预后不良通过促进肿瘤细胞增殖。VEGF可以加强肿瘤血管生成,促进肿瘤细胞增殖,对预后产生不利影响。ki - 67李是相关医学生物学行为和预后的肿瘤,反映了恶性肿瘤的过程。

1。介绍

胃癌(GC)是最被广泛接受的高度侵袭性恶性肿瘤,每年增加的死亡风险,分别居世界第四或第五(1]。据统计,每年有350000人死亡的GC在中国,其中大部分是由先进的远处转移(2]。目前,GC的发病机制仍然是有争议的,因为其特定的病因还不清楚。在诊所,患者生存时间的中位数GC常规药物小于15个月,所以GC患者的预后很差3]。整个人的健康被胃恶性肿瘤严重威胁。

因为GC的发病率是隐藏的,没有发现明显的临床症状在最初的阶段,早期GC的检出率很低,和大多数的GC病人已经显示在诊断进展(4]。尽管手术领域的重大进步,癌症治疗,免疫治疗,患者的五年寿命GC仍然很低,复发仍不满意。此外,血清生物标志物检测的GC仍有一些局限性在GC的早期检测5]。目前,上消化道活检仍是诊断GC使用,但其临床实用程序限制由于其致瘤性,大量的费用,和困难病人接受它。因此,迫切需要进一步阐明GC发现最低限度检测方法的发展机制和因素与高特异性或分子目标特异性更强,从而提高诊断、治疗早期GC的速率,病人的预后和存活率。

医学技术的快速发展,long-stranded非编码RNA (lncRNA),一度被视为转录“噪音”和“垃圾”,已经进入许多科学家的视野6]。研究表明,大约90%的人类基因组DNA转录成RNA,但是只有2%的核酸序列的90%是用于编码蛋白质,而非编码RNA (ncRNA),长期以来被认为具有非常低的编码能力或没有编码功能,占整个转录组的98% (7]。因为ncRNA的长度是不同的,它可以被分类根据其长度。当ncRNA < 200元被称为短链ncRNA lncRNA > 200元,它叫做长链ncRNA,和短链ncRNA可以分为microrna的核,piRNA [8]。长非编码RNA (lncRNA)是一种RNA位于细胞核或胞浆和没有编码蛋白质的功能。尽管lncRNA并不直接编码蛋白质,它可以调节基因的表达在许多水平然后重视肿瘤的过程9]。

lncRNA各级调节基因的表达可以从改变染色质的表观遗传状态调节蛋白质编码mRNA和重视各种生理系统,如细胞增长、发展和分化。更多证据表明长链ncRNA在特定的癌,正是这种特定的表达使lncRNA重视肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、血管生成、代谢异常、免疫逃避(10]。观察到lncRNA-MALAT1在甲状腺肿瘤细胞显著高于健康组织。体外,lncRNA-MALAT1能够鼓励甲状腺癌的增长和流动能力和减少细胞死亡,这使得有可能入侵,转移和甲状腺肿瘤的进一步恶化;lncRNA-MALAT1安静后,甲状腺癌的发展显著抑制,细胞凋亡的速度加快。机制可能是lncRNAMALAT1结合mir - 204增加IGF2B2的表达,它可以识别M6A修改MYC增加MYC基因的表达,并最终加速增长和侵袭性,从而促进甲状腺癌的进展和转移,表明lncRNAMALAT1可以采用一个充满希望的分子调节甲状腺癌(11]。另一项研究报道,lncRNAPOT1-AS1位于14号染色体上增加各种癌,可以促进开发癌症,已被证实为一个强有力的预测变量。POT1-AS1还可以抑制EMT和被认为是一个新的监管机构在癌患者12]。最终,lncRNA重视肿瘤的发生和发展。因此,进一步了解其作用筛选,预测的结果,和禁毒GC可能提供有潜力的想法准确的治疗能力和个人的GC疗法。

lncRNA参与发生、发展、和GC的耐药性。歌等人发现lncRNATMEM92-AS1可以调节下游靶基因CCL5结合蛋白1 (YBX1),然后影响GC的致癌作用,有致癌的特点通过促进GC增长(12]。它可以作为生物标志物预测寿命和disorder-free GC患者的生存。腾等人报道,lncRNA POT1-AS1直接目标mir - 145 - 5 - p和激活VEGFR-2信号途径调控的纤溶酶原激活物的表达inhibitor-1 (SERPINE1),因此GC细胞促进肿瘤进展和血管生成,表明POT1-AS1似乎是一个新指数和潜在的治疗目标13]。锅等人发现,GC lncRNALIFR-AS1通过miR-29a-3p COL1A2监管,促进细胞生长和迁移;建议lncRNALIFR-AS1是GC的存活率或目标的标志(14]。POT1-AS1 lncRNA,需要进一步研究这个主题。据报道,lncRNAPOT1-AS1位于一系列恶性肿瘤在异常高的水平,在癌基因和肿瘤抑制基因的作用,但是lncRNAPOT1-AS1表现概要文件和潜在的机制并不清楚。因此,本研究的目的是研究黄金GC之间的相关性和胃癌的生物学指标(GC)及其对预后的影响和关联的POT1-AS1 GC细胞增长,并探讨其影响过程的GC, GC医疗提供组织学依据。

2。患者和方法

2.1。材料收集

从2019年9月到2021年12月,80对广汽标本和健康para-carcinoma组织立即存储在多聚甲醛溶液;所有病例未接受辅助化疗之前的操作。组中的所有患者签署知情同意的形式。健康的胃粘膜上皮细胞GES-1和bgc - 823,国网公司- 7901,MKN45, mgc - 803年起源于希伯来文名字文化集合(昆山、中国)。这个实验是医学伦理委员会核准西安交通大学第一附属医院和李会理宁波医院医疗中心。

细胞培养和转染健康细胞GES-1和GC细胞系被放置在37°C, 5%的公司₂在DMEM培养基培养孵化器和含有10%的边后卫(批号:SH30022.01,美国HyClone公司)。当细胞增长约60%的融合程度,介绍了sh-POT1-AS1质粒为国网公司- 7901细胞根据指令Effectene转染试剂(批号:301425、试剂盒公司、德国),也就是说,POT1-AS1被撞倒了。

相对POT1-AS1 mRNA的表达被RT-qPCR评估方法。RNA GC组织隔绝,健康para-carcinoma组织,GC细胞系试剂盒。RNA复制到对面cDNA协议后由合成第一链cDNA工具包(试剂盒,德国)。PCR是根据指令进行qPCR工具包(瑞士罗氏公司)。引物序列GGCCATTACCCCTCCACTTG和反义TGTTGGGTATGCACCTCCAC。POT1AS1 mRNA表达的相对被2——计算ΔΔCt方法。

2.2。检测GC细胞的增殖能力

(1)CCK-8测试使用。国网公司- 7901细胞(包括POT1-AS1击倒组和non-knockdown组)注射浓度2000细胞/ 0,板材在24小时、48小时和3天。10μl CCK-8解决方案(批号:CX001M,上海丫酶生物技术有限公司有限公司)提供到每个在37°C 1 h。吸光度是在450纳米检测到酶标记工具(分子设备公司、美国);(2)板克隆试验使用。国网公司- 7901细胞(包括POT1-AS1击倒组和non-knocking组)接种(1000细胞/ 6-well板)和生长在恒温培养箱14天然后用甲醛溶液固定。

细胞周期相关蛋白的表达受到免疫印迹方法检测到。里帕采用溶菌产物提取蛋白质样本国网公司- 7901细胞(包括POT1AS1击倒组和non-knockdown组)和BCA定量工具(皮尔斯,罗克福德,IL)是用于检测蛋白质样品的浓度。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品(美国BIORAD公司)和转移到PVDF膜。10%脱脂牛奶是密封和孵化主要抗体和相应的二次抗体。最后,ECL光致发光的解决方案(批号:WBLUF0500,密理博公司,美国)是用于开发,软件和图像J(美国国家卫生研究院公司)采用分析图像。蛋白质表达的相对=(灰度值的蛋白质转染组乐队/灰色人参转染组乐队的价值/灰度值的蛋白质nontransfection组乐队/人参nontransfection组乐队的灰度值)。细胞周期蛋白D1、到和CD-KI1A和其他抗体是从英国Abcam公司购买的。批处理数据ab134175、ab108357 ab109520;β肌动蛋白抗体是从美国Proteintech公司买来的,批号66009 - 1 - ig。

GraphPad棱镜采用8.0统计软件进行统计处理。采用单因素方差分析对不同组,SNK-q测试采用成对,两个独立样本 - - - - - -测试申请与两组进行比较。 展出组之间的差异有统计学显著性。

3所示。结果

3.1。比较的相对表达POT1-AS1mRNA GC组织和正常组织之间相邻的癌症

POT1AS1 mRNA在CC组织的相对表达的患者显著高于正常组织相比邻,癌症,和群体之间的差异具有统计学意义(图1, )。

3.2。GC之间比较的相对表达POT1AS1mRNA细胞系和正常胃粘膜上皮细胞

的相对表达水平POT1-AS1 mRNA在GC细胞系bgc - 823, mgc - 803, MKN45,和国网公司- 7901均显著高于健康细胞GES-1,和组之间差异具有统计学意义(数字2和3, )。

3.3。POT1-AS1击倒效果在国网公司- 7901细胞的增殖

CCK-8测试表明SGC7901细胞的增殖能力POT1-AS1击倒组相比显著降低non-knockdown集团( );进一步验证板克隆试验表明,国网公司- 7901细胞克隆的数量POT1-AS1击倒组显著减少non-knockdown组相比,和群体之间的差异具有统计学意义(图4, )。

3.4。GC的POT1-AS1表达式和预后之间的关系

kaplan meier曲线采用GC分析POT1-AS1的表达式和总体生存率。结果表明,患者之间生存不同的速率显著不同POT1-AS1水平,和组之间差异具有统计学意义( ,图4)。

4所示。讨论

GC是一种消化道癌源于胃粘膜,已成为世界上最重要的疾病之一(14,15]。回顾GC的发病率和死亡率在过去的世纪,不难发现,虽然GC的发病率和死亡率稳步下降,由于人口老龄化,预计将会有更多的病例在未来GC。

近年来,虽然医学取得了快速发展,GC的发病机制仍不清楚(16]。大多数学者认为,GC是恶性肿瘤引起的综合多因素多步骤和行动。目前,它是认识到胃恶性肿瘤是一种消化道肿瘤引起的环境因素和遗传因素之间的交互。绝大多数的新病例的GC来自各种病原感染,包括幽门螺旋杆菌或EB病毒。幽门螺旋杆菌是目前被认为是一种致癌物质,预计感染全世界50%的人。幽门螺杆菌感染是最常见的病原感染的GC [17]。GC的其他原因包括家庭继承,不良的饮食习惯,吸烟,和大量的摄入的盐,而其他不良生活习惯也会影响GC的进展,如午夜吃零食,吃过热的食物,和不规则的工作和休息18]。

根据程度的入侵GC, GC可以分为初期,中期阶段,和后期19]。早期的GC只与肿瘤浸润深度有关,不超过黏膜和黏膜下层,但大小与淋巴结转移无关。当病变进一步发展,它被定义为中间GC侵入黏膜下层,肌层,当肿瘤进一步侵入浆膜下的层,甚至侵入周围的器官,或远处转移发生时,它被定义为先进的GC。中间和先进的GC统称为先进的GC [20.]。因为GC的发病率是隐藏的,没有明显的临床症状的早期阶段,早期GC的检出率很低,和主要GC在晚期病人诊断。尽管在治疗策略翻天覆地的改变,存活率仍然很低由于GC[转移和复发21]。此外,血清检测监管机构的GC的早期发现仍有一些局限性GC [22]。手术切除目前被认为只与激进的治疗。随着科学技术的进一步发展,在临床使用腹腔镜检查和达芬奇机器人手术切除更方便,更快,效率(23]。手术的进步方法、术前新辅助治疗及术后常规化疗,辅以靶向治疗,免疫治疗和放疗,可以极大地提高结果和生活品质。

全基因组测序技术的进一步发展,人们有了更深层次的了解生物转录组(24]。目前,相信90%以上的ncRNA在人类基因组中发挥重要的生物作用在人类生理和病理过程,和他们曾认为“转录噪音”或“转录浪费。“ncRNA可以分类根据其长度因其不同的长度。当ncRNA < 200元被称为短链ncRNA ncRNA > 200元,它被称为长链ncRNA [25]。长链ncRNA和短链ncRNA可以编码蛋白质编码由于缺乏能力(26]。根据不同的基因结构lncRNA, lncRNA可以分为五类27,28]:1。有一种感觉lncRNA,重叠基因编码的编码信使rna链。2。反义lncRNA,重叠基因非编码的编码信使rna链。3所示。双向lncRNA,股票编码基因的转录起始位点相对链。4所示。基因内区lncRNA,转录基因的内含子区域编码。5。的inter-gene lncRNA位于之间的编码基因。 According to the different molecular mechanisms, lncRNA can be further assigned into four subcategories: guided lncRNA, scaffold lncRNA, signal lncRNA, and decoy lncRNA. In recent years, it has been found that lncRNA can act as tumor suppressor gene and tumor promoting gene in the development of malignant tumor and involve powerfully in regulating cancerous biological systems. Studies have indicated that lncRNA has significant characteristics and the ability to mediate genomic various levels.

lncRNA的障碍不仅是相关的神经系统疾病,心血管疾病,疾病和发育也紧密相关的各种恶性肿瘤(29日]。一些lncRNA表示细胞和组织表达模式。因此,lncRNA可以被采纳作为早期诊断的分子标记和肿瘤治疗的新目标。例如,PCA3(前列腺癌相关3)一直被视为生物标志物在诊所作为辅助诊断前列腺癌。结果表明,lncRNA在以下三个方面可以调节基因的表达。lncRNA能够诱导染色质修饰或核糖核酸聚合酶相互作用诱导或抑制基因表达,充当micro-ribonucleic酸海绵。在转录后一边,lncRNA一直被视为一个海绵与mRNA microrna并形成稳定的双链RNA结构和调节翻译(30.]。此外,lncRNA能够结合蛋白质,以鼓励他们的稳定结构。在表观遗传学,lncRNA可以参与身体的调节通过阻止DNA甲基化。

作为主要组成部分细胞记录,lncRNA重视各种生物过程(31日]。近年来,lncRNA已经收到了广泛的关注,被认为是相关的发展和各种疾病的过程。越来越多的研究表明lncRNA专门在癌组织中表达,促进肿瘤的进一步发展。研究发现,lncRNA可以调节基因的表达改变染色质的表观遗传状态调节各级信使rna编码蛋白质,和重视许多恶性事件32]。更多的证据表明,长链非编码lncRNA异常显示在不同类型的恶性肿瘤33]。正是这个特定的表达使lncRNA重视癌症生物活动。高水平的lncRNA DANCR在肝细胞癌是高度与微血管的入侵和肝胶囊(34]。功能的研究表明,基因敲除lncRNA DANCR在肝癌细胞可以通过减少肝细胞瘤形成的能力β连环蛋白的信号。沉默lncRNA DANCR可以增加细胞的凋亡和阻止细胞周期G1期的进展。lncRNA DANCR可能导致肝细胞癌的发生通过激活mir - 216 - 5 - p和调节KLF12。

lncRNA的异常表达在大多数肿瘤已经紧密相关细胞增殖(35]。lncRNATUG1确认上调胆管癌。胆管细胞型肝癌细胞的lncRNATUG1耗尽时,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白质减少缓慢,然后还抑制肿瘤细胞的增殖。我们都知道,PCNA是核酸代谢的一个重要因素。

研究表明,lncRNA差异表达在肿瘤组织,这将使肿瘤生物标志物。此外,lncRNA表达水平的肿瘤也可能与临床病理的特点和整体生存,所以它可能作为预后标记(36]。简而言之,这些分子诊断和预后有很大的潜力。结肠癌相关transcript-1 (CCAT1)是11.88 kb-length lncRNA。lncRNACCAT1的结直肠癌有很强的表达。lncRNACCAT1重视大肠癌的进化,可能被视为一个结果生物标志物(37]。lncRNACCAT1在等离子体也被确认为结直肠癌筛查的预测标志。肝癌转移相关transcript-3 (CLMAT3)位于14号染色体上。体外研究表明,lncRNA-CLMAT3的表达明显增加,这可以影响细胞增殖和细胞凋亡通过阻断细胞周期38]。lncRNA-CLMAT3非常的高表达水平与肝转移的超表达lncRNA-CLMAT3能够整体存活率的下降,表明这种低表达基因被认为是一个independent-prognosis因素与大肠癌肝转移的患者。

一些报道表明lncRNAs增强肿瘤抑制活性的关键步骤,可有效抑制癌细胞的生物功能和治疗肿瘤具有重要意义[39]。最近,建议lncRNA强烈表达在人类大肠癌组织和细胞,与公爵的阶段、淋巴结转移和预后。在体外,lincR NAUC可以促进肿瘤发生和发展。此外,机制研究表明,lincR NAUC可能调节由争夺microrna的microrna的目标,这表明lincR NAUC似乎是一个有价值的分子结直肠癌的治疗。研究表明,lncRNA重视GC。IGF-2-As调节SHOX2通过吸附mir - 503,从而影响GC转移;通过miR-29a-3p / COL1A2 LIFR-AS1促进GC进步;LINC01667影响的扩散通过mir - 1385 p / CyclinE1 GC;LINC00641启动自噬通过mir - 5825 - p,影响GC细胞的抗铂。RPLP0P2促进GC细胞的增殖。

目前没有相关研究在GC POT1AS1的表达和功能,所以本研究做了相关探索。后sh-POT1-AS1质粒转染(POT1AS1击倒)POT1-AS1mRNA在国网公司- 7901细胞的相对表达显著低于nontransfection集团,差异具有统计学意义。CCK-8和平板克隆试验证实,POT1-AS1可能会阻止GC细胞增殖。探索POT1-AS1抑制扩散的途径,发现推倒POT1-AS1 GC细胞可以抑制到和CyclinD1蛋白质,增强CDKI1A蛋白质,阻碍了细胞周期的进展和抑制细胞增殖。这项研究有一些局限性。首先,本研究的样本量不大,它是一个单中心研究,所以偏见是不可避免的。在未来的研究中,我们将开展多中心、大样本的前瞻性研究,或可以得出更有价值的结论。

总之,在GC POT1-AS1mRNA的相对表达显著增加,并在GC推倒POT1-AS1细胞可能压制到和CyclinD1蛋白质和改善CDKI1A蛋白的表达,从而抑制细胞增殖。作者认为POT1-AS1可采用GC作为一种新型分子标记,具有重要的临床意义。然而,仍然有一些进一步的考虑。首先,虽然取得了一些成就lncRNA研究,实际lncRNA角色的作用机制尚不完全清楚。其次,lncRNA一直很可靠,因为迷你大小。此外,目前还不清楚如果异常lncRNA能够诱发肿瘤。然而,从长远来看,lncRNA的前景和临床意义不容忽视。lncRNA的显著特征之一就是其高特异性肿瘤,成为生物标志物。生物信息学和计算工具也打开了新的lncRNA遗传标记的发展途径。lncRNA解释,形成一个完整的知识,途径将有助于开发新项目以及新敏感生物标记的识别目标。

数据可用性

使用的数据集和分析在当前研究可从相应的作者在合理的请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。