文摘

客观的。掌控试验进行探索的价值macrogene第二代测序诊断,药物使用,疗效监测感染性肺炎的早产儿。方法。一百三十八早产儿疑似传染性肺炎治疗在我们医院从2019年3月到2022年6月被选为主题。所有患者接受深痰提取和被随机分为两组。69例对照组治疗与一般的细菌和真菌的文化。灌洗液的其余69例观察组检测到宏基因组下一代测序(西班牙芒果)。与感染性肺炎诊断早产婴儿的数量是两组之间的比较,并分析了两种方法的诊断价值接受者操作特征(ROC)曲线。临床疗效的差异,抗菌新生儿重症监护室(NICU)使用时间、抗菌调整频率,NICU停留时间、住院时间、血清炎性因子两组之间的比较。结果。积极的西班牙芒果病原体检测的灌洗液中观察组为92.75% (64/69)。积极的文化灌洗液的对照组为52.17% (36/69)。ROC曲线分析表明,传统文化的中华民国AUC是0.752 ( - - - - - -0.894),0.934(跨国公司的 - - - - - -0.999)。观察组,35例细菌感染,真菌的20例,4例病毒、衣原体psittaci 5例。在对照组,26例细菌感染和真菌检测的9例;但无法检测到病毒和其他支原体。治疗2周后,观察组的有效率为95.31%,而对照组为69.44%。NICU使用时间,调整频率,NICU停留时间、抗生素和住院时间观察组明显低于对照组,差异具有统计学意义( )。治疗后,血清白细胞介素- 6 (il - 6)的水平,原降钙素(PCT)和hypersensitivity-C-reactive蛋白质(hs-CRP)观察组明显高于对照组,差异具有统计学意义( )。结论。西班牙芒果可以提高临床诊断感染性肺炎的效率在早产儿中,有效地提高病原体的检出率和早产儿的临床疗效。与此同时,它还可以帮助临床疗效监测和随时调整治疗方案。

1。介绍

传染性疾病是目前世界上发病率和死亡率最高的疾病。根据流行病学研究,最常见的一种感染性疾病是肺部感染(21.8%)1),这是传染病死亡的主要原因。然而,病原微生物也可以检测到常规病原体检测方法,和两个肺部影像学表现也相似,主要是渗出性变化。如果临床医生不能正确区分和诊断肺感染/非传染性的疾病,他们将错过最好的时间进行诊断和治疗,导致抗生素的滥用。因此,它是非常重要的指导临床医生正确和及时的肺部感染/非传染性的疾病的鉴别诊断和制定合理的治疗方案。有许多早产儿肺部感染的影响因素具有很大的复杂性和困难的临床预防和治疗。据报道,年轻的胎龄和降低早产儿的体重,早产儿的发展越糟糕。越来越多的组织和器官不发达(2]。

目前,下列诊断肺部传染病的检测方法,包括etiology-based检测方法,基于分子检测方法,immunology-based检测方法(2,3]。为了确保早产婴儿的健康和安全,护理或治疗程序,增加感染的风险应该避免(4]。虽然这些方法有自己明显的优势,但他们经常曝光一些弱点在处理复杂的传染病,比如乏味的检测过程,耗时,缩小检测范围。因此,传统的病原体检测方法的准确性是有限的(5]。由于生理功能的不完善发展和免疫能力差,早产儿肺部感染的风险很高时进行保护和治疗措施如侵入性检查和机械通风。它会对健康有很大的不利影响发展和早产儿的生命安全6),不能及时诊断和治疗(7]。因此,正确的检测方法的应用将有助于减少误诊和漏诊的临床医生和有效地进行对症治疗。

宏基因组下一代测序(西班牙芒果)可以直接检测所有潜在的pathogens-bacteria,病毒、真菌、和临床样本里没有隔离和文化(8]。总会有以下程序检测病原体,包括样本收集和输入:样本类型包括痰、鼻咽拭子,呼吸道吸入分泌物、支气管肺泡灌洗液,血液和组织。数据库应该有一个完整的微生物基因组序列,和分析过程包括数据质量控制9- - - - - -12]。与门店技术的不断进步,这种技术是实现更快、更全面的macrogenomic分析以较低的成本。它越来越广泛应用于临床。然而,很少有应用价值报告macrogene第二代测序技术的诊断,指导用药,疗效监测感染性肺炎的早产儿。本研究关注138早产儿疑似传染性肺炎在我们医院接受治疗。掌控试验进行探索的价值macrogene第二代测序诊断,药物使用,疗效监测感染性肺炎的早产儿。

2。材料和方法

2.1。一般信息

一百三十八早产儿疑似传染性肺炎治疗在我们医院从2019年3月到2022年6月被选为主题。所有患者接受深痰提取和被随机分为两组。69例的治疗与一般的细菌和真菌文化(对照组)和深痰提取剩余的69例检测到西班牙芒果(观察组)。没有显著差异在两组之间的通用数据( ),如表所示1。所有法定监护人的早产儿代表签署知情同意。

表1
138早产儿的临床数据 / %)。

下面是选择条件:(1)无论性别、所有病人伴随着持久体温过低或高烧、呼吸暂停或肺部湿罗音、呼吸困难和肺部听诊有湿罗音,异常白细胞和其他临床症状;(2) ;(3)诊断金标准:血培养和咽拭子涂片和文化表明感染和胸部x光检查显示片状浸润阴影;和(4)完整的临床资料。

下面是排除标准:(1)早产儿有严重心、肝、肾功能不全,和恶性肿瘤;(2)与肺结核早产儿,先天性支气管哮喘,和其他疾病;(3)监护人拒绝参加他们的孩子;(4)早产儿与其他严重感染;(5)早产婴儿无法治疗的药物过敏;(6)早产儿和严重的心血管疾病、心律失常、心力衰竭等疾病。

2.2。方法
2.2.1。诊断方法

所有患者进行支气管肺泡灌洗与支气管镜5年以上的经验。咪达唑仑被选为静脉镇静(而不是咪达唑仑0.1毫克/公斤),进行气管插管或鼻内窥镜检查,2%利多卡因用于局部麻醉气道粘膜和节段支气管。支气管镜的顶部是嵌入在支气管树的分支。注入生理盐水在37°C到支气管树在下列条件:1毫升/公斤/时间≤20毫升/时间, - - - - - -10毫升/公斤,在100毫米汞柱负压抽吸。回收率为40% -60%,恢复到消毒的容器清洗解决方案挤满了文化样本(痰1毫升,支气管肺泡灌洗液5毫升)。

痰液样本检测,至少2 - 3毫升唾液收集和发送到无菌容器西班牙芒果测试。600年μL痰样本和12μL收集痰集成电路和混合在一个2毫升离心管。混合后,墙上被打破的生物样品均质器(BioPrep-24、杭州Jieyi科技有限公司有限公司,中国)。之后,3分钟被12000 rpm离心机离心(lx - 200,海门麒麟钟乐器,中国),和400年μL上层清液的吸收基因组核酸提取或纯化工具包(MD013、杭州Jieyi生物技术有限公司,中国)。之后,试剂添加到墨盒,最后放入核酸自动检测反应体系建设系统(NGSmaster™图书馆准备,MAR002,杭州Jieyi生物技术有限公司有限公司)。在上述建设系统中,建立了DNA库后自动核酸提取、酶消化、修理结束,结束腺苷酸、节点连接,和其他程序。建立图书馆被实时PCR定量分析和总结(KAPA)。定量的DNA库测序illumina公司Nextseq系统(美国曼Inc .)和高吞吐量。测序获得的原始数据首先过滤低质量的序列,然后过滤来自人体的序列(GRCh38.p13),并将剩余的序列与参考微生物基因数据库(NCBINt、基因库和内部策划基因组数据库)来确定微生物物种和序列计数。

样品的检测支气管肺泡灌洗液、呼吸内科医生支气管镜下灌洗重点根据病人的肺部影像学表现和获得至少2 - 3毫升支气管肺泡灌洗液(BALF)为西班牙芒果无菌容器测试。灌洗液和刷样品送到实验室微生物检测在同一时间。此外,细菌和真菌涂片和文化的肺部感染患者的痰经常发现。1.2毫升支气管肺泡灌洗液和12个样品μL支气管肺泡灌洗液IC在2毫升离心管中混合,然后,破坏了长城生物样品均质器(杭州Ausheng BioPrep-24,中国)。之后,12000 rpm离心机3分钟(lx - 200,海门麒麟钟乐器,中国);吸收400μL上层清液的基因组核酸提取或纯化工具包(MD013、杭州Jieyi生物技术有限公司,中国),并添加其他相应试剂卡盒的要求,最后把它放到自动核酸检测反应体系建设系统(NGSmaster™图书馆准备,MAR002,杭州Jieyi生物技术有限公司,有限公司,中国)。在上述建设系统中,建立了DNA库后自动核酸提取、酶消化、修理结束,结束腺苷酸、节点连接,和其他程序。建立图书馆被实时PCR定量分析和总结(KAPA)。定量的DNA库测序illumina公司Nextseq系统(美国曼Inc .)和高吞吐量。测序获得的原始数据首先过滤低质量的序列,然后过滤来自人体的序列(GRCh38.p13),并将剩余的序列与参考微生物基因数据库(NCBINt、基因库和内部策划基因组数据库)来确定微生物物种和序列计数。

2.2.2。治疗方案

对照组的患者接受常规治疗,包括温暖,氧气吸入,吸痰,抗感染。头孢噻肟钠主要是选择抗感染。头孢噻肟钠的剂量是每次50毫克/公斤,和剂量的头孢噻肟钠可能增加到200毫克/(公斤·d)通过静脉滴注法每天3次严重感染患者。后疗效评估连续治疗2 - 3周。药物疗法可能会根据病人的情况不断调整。

在对照组的基础上,观察组患者调整抗感染治疗方案根据西班牙芒果的结果支气管肺泡灌洗液。由细菌引起的肺炎患者可以使用抗生素治疗,如氯氨苄青霉素、阿莫西林,阿奇霉素,meropenem,头孢呋辛。肺炎由病毒引起患者可以解毒和抗病毒药物治疗。肺炎支原体和衣原体引起的患者可以用红霉素治疗,meropenem,阿奇霉素。特定的药物治疗方案的病人在观察组应调整根据病人的病情的严重性,体重,药物过敏和其他索引。后疗效评估连续治疗2 - 3周。药物计划可以根据变化不断调整治疗期间患者的条件。

2.3。观察指标
2.3.1。体检的病原体

病原体的检测率和分布两组之间的比较。 。

2.3.2。临床疗效

三年级的标准被用来评估临床疗效。治疗两周后,根据京发布的标准(13),它被划分为三个层次,组成的明显有效,有效,无效,总有效总有效。 。28天死亡率的病人进行了计算。

2.3.3。抗菌NICU使用时间、调整频率之间的NICU停留时间,住院两组

在治疗结束时,新生儿重症监护室(NICU)使用时间,调整频率,NICU停留时间,住院时间两组比较。

2.3.4。细胞因子水平

IMMULITE / IMMULIE1000分析仪,免疫散射比浊法,三明治,和化学发光方法用于检测血清细胞因子(hs-CRP、PCT和il - 6)。检测过程是严格按照指令,治疗前和治疗后2周。所有的包都购自德国西门子公司。根据制造商的指示的业务流程,处理过的样品被送到检测分析仪。相应的细胞因子浓度被记录。

2.4。统计分析

SPSS23.0软件的数据进行了分析。正态分布的测量数据所表达的 ,一个 - - - - - -测试是用于对比组,频率方法用于计算数据, 测试是用于比较组和双边测试是用于所有统计测试。ROC曲线的测量指数,AUC值计算,每个参数的预测性能进行了分析和评估。据统计,AUC值是0.5 - 1的实际范围。AUC的诊断价值较低0.5 ~ 0.7时,温和的AUC 0.7 ~ 0.9时,和更高的时候 。Youden指数用于确定每个参数的最佳预测标准价值及其准确性,敏感性,特异性,PPV NPV, 。在统计学上有显著差异。

3所示。结果

3.1。分析两组早产儿临床资料

首先,我们分析了138早产儿临床资料。比较两组之间的临床数据如表所示1。没有显著差异在两组之间的临床数据( )。

3.2。诊断价值的传统文化和德国检测在早产儿感染肺炎

积极的西班牙芒果病原体灌洗液中观察组为92.75%(64/69)和52.17%(36/69),对照组。我们进一步分析了传统文化的诊断价值和跨国公司发现在早产儿感染肺炎的ROC曲线。结果表明,传统文化的中华民国AUC是0.752 ( ~ 0.894)和跨国公司的中华民国AUC是0.934 ( ~ 0.999)。所有的结果在图所示1。


图1
ROC曲线的传统文化和德国检测在早产儿感染肺炎的诊断。
3.3。传统文化的应用效果和mgc检测感染性肺炎的病原体检测早产儿

传统文化的应用效果和mgc检测感染性肺炎的病原体检测早产儿进行了分析。观察组35例细菌检测,其中肺炎克雷伯菌(15.63%)和鲍曼不动杆菌(12.50%)最高。有20例真菌,其中卡氏肺孢子虫的检出率最高(12.50%)。白色念珠菌的检出率和来自烟曲霉属真菌是7.81%。有4例病毒,其中人类sporovirus 5的主要类型病毒的检出率为3.13%。衣原体psittaci有5例,结核分枝杆菌的1例,1例堪萨斯分枝杆菌。26例细菌检测在对照组,鲍曼不动杆菌是最高的,其次是肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌,金黄色葡萄球菌,肺炎链球菌,粘质沙雷氏菌。9例真菌、白色念珠菌(13.89%),和来自烟曲霉属真菌(11.11%)未能发现病毒和支原体。所有的结果如表所示2。

表2
分析和比较两组之间的病原体体检( / %)。
3.4。比较两组之间的临床疗效

比较两组的临床疗效。治疗2周后,27例明显有效,30例有效,无效3例,观察组。的有效率为95.31%。对照组显著有效的10例,有效15例,无效11例。治疗有效率为69.44%,差异具有统计学意义( )。所有的结果在图所示2。


图2
比较两组之间的临床疗效。
3.5。抗菌NICU使用时间、调整频率之间的NICU停留时间,住院两组

比较NICU使用时间,调整频率,NICU保持时间,两组患者的住院时间,观察组明显短于对照组的NICU抗生素使用时间,调整频率,NICU保持时间,住院时间,差异具有统计学意义( )。所有的结果如表所示3。

表3
抗菌NICU使用时间,调整频率,NICU停留时间,住院两组之间( ]。
3.6。治疗后比较两组之间的细胞因子水平

治疗后,血清il - 6的水平,PCT和两组hs-CRP明显减少,差异具有统计学意义( )。观察组明显低于对照组,差异具有统计学意义( )。所有的结果如表所示4。

表4
治疗后两组之间细胞因子水平( ]。

4所示。讨论

早产儿的正常生理机制不能发挥有效的作用,外部环境的敏感度是很高。很难调整和适应,细菌和免疫能力差(14]。较低的呼吸功能是小管期肺表面活性物质的分泌,可怜的肺合规,不完美的独立呼吸(15,16]。需要建立人工渠道和机械通风和其他侵入性手段大大增加的风险在早产儿呼吸道感染,但也有抑制肺发展的风险,导致慢性呼吸道后遗症[17,18]。

传染性病原体的早期识别和有针对性的抗感染感染性肺炎的治疗是关键。病原体传统文化要求条件高、周期长、积极率低,抗生素的使用影响其文化。大量的临床资料表明,无法确定传染病的传染性病原体肺炎尽快高死亡率的一个重要原因是这种疾病(19]。未知病原体的感染严重影响[经验性抗感染治疗的效果20.]。因此,人们迫切需要新的检测技术快速、准确地找到传染性病原体,给准确的抗感染治疗。

在这项研究中,西班牙芒果致病菌的检出率灌洗液的观察组为92.75%,显著高于对照组的(52.17%)。本研究系统相比西班牙芒果和传统文化的方法,发现西班牙芒果在许多方面的优势。首先,德国具有较高诊断价值感染性肺炎的早产儿。ROC曲线分析表明,传统文化ROCAUC为0.752,显著降低ROCAUC0.934在跨国公司中发现。此外,西班牙芒果有一个明显的优势在检测病原体如克雷伯氏菌、厌氧菌、假单胞菌、病毒和支原体。这项研究的结果表明,观察组的病原体的比例是细菌、真菌、病毒和其他病原体从高到低。和大部分的细菌革兰氏阴性细菌。铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌是主要的革兰氏阴性细菌。金黄色葡萄球菌是主要的革兰氏阳性细菌。因此,anti-Pseudomonas绿脓杆菌β内酰胺类药物应考虑经验性抗感染的传染性肺炎在早产儿和万古霉素在必要时应该添加。观察组20例真菌检测。我们发现这些早产儿激素治疗的历史,所以我们应该经常提高G测试和通用测试和经验尽快抗真菌治疗。此外,观察组还发现罕见病原体如Nucasmella,结核分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌。西班牙芒果可以序列几十万到上百万的DNA分子在一个时间,可以检测可栽培的和unculturable微生物的基因序列,绕过微生物隔离和文化的过程。它有积极率高的特点,高速,高灵敏度病原体检测(21- - - - - -23]。这些病原体的传统文化条件很高,通常需要种植在结核病医院,这表明西班牙芒果可以提高罕见病原体的检出率。

在这项研究中,5早产儿重症肺炎终于被诊断患有衣原体感染psittaci西班牙芒果。据报道,肺炎衣原体psittaci占大约1%的社区获得性肺炎(24]。传统的血清学测试的敏感性和特异性或PCR测试并不高,和文化的病原体是极其困难的。在过去,大多数患者被忽视或误诊的现象是由于检测的限制条件。随着西班牙芒果科技的普及,疾病越来越多的报道(25,26]。病毒很难培养普通实验室的医院,以及病毒性肺炎的诊断一直是临床问题。临床诊断结合病史和胸部CT表现为经验诊断,准确的诊断和治疗的患者严重滞后(27- - - - - -30.]。在这项研究中,没有检测到病毒在对照组,表明西班牙芒果在病毒感染的诊断有很好的效果。

大多数患者肺炎的病原菌是未知的。重症肺炎患者往往需要长期、大剂量广谱抗生素。这种现象导致了病原菌的抗生素耐药性的速度不断增加,这是一个紧急的问题需要解决。我们的研究结果表明,早期识别病原体和及时调整治疗计划通过西班牙芒果可以减少调整频率和NICU的抗生素使用时间,这将为抗生素的管理提供一个新的方向。随着科技的进步,我们预计,西班牙芒果可以检测耐药基因和更好的指导临床抗感染治疗。同时,发现实验组的临床治疗有效率高。住院的停留时间和成本的降低,改善病人的预后,减少他们的经济负担。上面的数据分析表明,西班牙芒果发挥了积极作用在指导治疗早产儿的选择与传染性肺炎。限制西班牙芒果感染性肺炎的诊断方法,这种技术是影响医院的设备,因为一些医院不经常使用西班牙芒果感染性肺炎的诊断方法。本研究仍有一些缺点。 Firstly, the quality of this study is limited due to the small sample size we included in the study. Secondly, this research is a single-center study, and our findings are subject to some degree of bias. Therefore, our results may differ from those of large-scale multicenter studies from other academic institutes. This research is still clinically significant, and further in-depth investigations will be carried out in the future.

总之,西班牙芒果的高价值在早产儿感染肺炎的诊断。它可以显著提高检出率严重肺炎的病原体可以调整治疗计划根据西班牙芒果的病原体检测结果。它可以缩短时间的使用抗生素和调整频率和住院。

数据可用性

使用的数据集和分析在当前研究可从相应的作者在合理的请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。