文摘
作为眼科的临床经验处方、复合菊花已逐渐使用,对眼睛疲劳有很好的效果。然而,antiasthenopia的详细机制还没有研究。为了澄清的机制复合菊花治疗眼疲劳、网络药理学实验研究相结合。总共有593个基因和39个活跃的化学物质被确定,并且都被认为是必不可少的眼疲劳研究的进步。分子对接的结果分析表明一定PRKACA之间的亲和力,PRKCA, PRKCB,及其相关化合物;分子动态模拟评估这些受体和配体的稳定性。复合菊花提取物对睫状肌的影响研究在体外和体内。通过MTT试验、复合菊花提取物(100,200,400,和800 g·mL-1)没有影响的扩散rCSMCs 24和48小时。它提高了一氧化氮和降低了Ca2 +睫状肌细胞中分离出老鼠的眼球。此外,复合菊花提取直接影响放松孤立的大鼠胃平滑肌减少收缩张力。此外,体内实验结果表明,相比于白炽lamp-irradiated老鼠(模型组),SD大鼠治疗复合菊花提取物(660 mg·公斤1和1320 mg·公斤1,口头)显示相当收回学生并没有增加内容。还发现,复合菊花提取物可以表达下调的mRNA表达PKA和PKC钙信号通路。总体而言,我们的研究结果表明,复合菊花提取物可能通过多个组件减少视觉疲劳,多个目标,和多个通路。
1。介绍
眼疲劳是一种最常见的眼疾在眼科。后利用眼睛长时间的一段时间,它可能会导致症状像视觉干扰和眼睛不适。在严重的情况下,它甚至可以恶化到系统性症状(1- - - - - -4]。临床上来说,视觉疲劳是归类为一种综合症,因为这可能会由于地方发展,系统性,精神或心理的原因5,6]。症状的主要表现包括发红、疼痛、瘙痒,溢出的泪水,复视,头痛、眼睛干涩、异物感,恶心(7- - - - - -9]。
复合菊花(CC)组成Chrysanthemi红花,Cassiae精液,地骨果实,Polygonati根茎,Ligustri Lucidi果实,Ecliptae草。这是一个临床处方证明已被广泛用于眼科和具有良好的治疗效益。菊花和地骨果实作为中国传统草药,总是光明的眼睛和缓解眼疲劳的影响(10]。研究已经证明,菊花有很强的抗氧化作用,可以减缓视网膜损伤(11]。在日本,这两个草药也广泛用于治疗眼睛疲劳(12]。2 o -β-D-glucosyl-L-ascorbic酸地骨果实可以提高氧化损坏镜片的抗氧化能力和减缓伤害的镜头来维持晶状体的透明度(13,14]。等活性成分黄酮类化合物、萜类化合物和有机酸在菊花药理作用在缓解疲劳,保护肝脏,调节免疫等。15- - - - - -19]。菊花也可以抑制泪腺腺泡细胞的凋亡,泪腺管细胞和完善基本眼泪的分泌液体维持泪膜的稳定性。可能的机制之一菊花提高干眼症的症状(20.]。Cassiae精液含有多种活性成分,如蒽醌类和多糖,具有保护肝脏的影响,清除自由基,提高免疫力(21,22]。多糖、黄酮类化合物等活性成分地骨果实提供药理作用,如肝脏和肾脏的保护和缓解疲劳23- - - - - -26]。青光眼和其他眼部疾病的病理变化也适应它(27]。的主要组件Polygonati根茎多糖、蒽醌类、生物碱、甾体皂苷、等,具有调节免疫的影响,抗肿瘤,抗疲劳,抑制细菌。Ligustri Lucidi果实有丰富的常用药用和类黄酮,具有潜力antiasthenopia。已经有多项研究表明WedelolactoneEcliptae草在抑制肝细胞凋亡过程中发挥作用和肝损伤28- - - - - -31日]。
近年来,计算机技术已被广泛用于解决医疗问题(32,33];后我们发现可能的目标对于某些疾病,如登革热、肺结核(34,35)等,我们可以用分子对接技术预测活性化合物的结合能和潜在的目标;分子动力学仿真技术可以模拟活性化合物的影响和潜在目标后绑定。这些计算机技术可以帮助我们更有效地探索药物治疗疾病的机制(36,37),但实验验证是至关重要的。
在这项研究中,我们使用网络药理学研究机制和信号通路的CC眼疲劳。随后,亲和力、稳定性的目标活动CC化合物利用分子对接和分子动态预测。此外,细胞和动物实验的结果表明,CC不能增加生产,减少钙的含量2 +,减少mRNA的PKA和PKC的表达,从而达到放松睫状肌的治疗效果。整个研究设计的流程图如图1。
2。材料和方法
2.1。化学药品和试剂
QijuDihuang口服液(QJDHOL)购买来自湖北Dongxin药业有限公司有限公司其他草药从浙江中医药大学中药煎煮购买件有限公司有限公司rCSMCs购自上海秦城生物技术有限公司,有限公司澳大利亚胎牛血清和RPMI 1640年从热费舍尔Scientific-CN购买。格里斯试剂购自上海原液生物技术有限公司,有限公司普朗尼克F127和Fura-2 / (5um)购买从上海逸生生物科技有限公司有限公司MonScript™RTIII超级混合dsDNasekit和MonAmp™SYBR®绿色qPCR混合设备中存在的从单细胞生物生物技术有限公司有限公司(武汉,中国)。RNAeasy™+动物套装购买Beyotime生物技术研究所(江苏,中国)。其他化学物质是来自天津永达化学试剂有限公司,有限公司
2.2。网络Pharmacology-Based分析
2.2.1。筛选有效成分和CC的潜在目标
中国传统医学系统药理学数据库和分析平台(TCMSP,https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php)是利用筛选活性成分的CC用“几”,“Juemingzi”,“Gouqizi”,“Huangjing”,“Nvzhenzi,”和“Mohanlian”作为关键词,与标准 和 (38]。具有良好的胃肠吸收((GI)吸收)功能在药物动力学列和至少两个巴黎druglikeness列前五个条件,获得组件进行了分析使用SwissADME数据库(39]。随后,瑞士目标预测平台生成基于活性物质筛选相关的目标。
2.2.2。预测潜在目标的眼疲劳
使用“眼疲劳”、“眼睛疲劳,”和“视觉疲劳,”作为关键词,asthenopia-related收集的目标是GeneCards数据库(https://www.genecards.org/),在线孟德尔遗传在人(人类)数据库(https://www.omim.org/),治疗目标数据库(运输大亨)(http://db.idrblab.net/ttd)。通过导入CC活性成分的目标和视力疲劳相关的目标到VENNY2.1 (https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/),他们共同的目标是获得(40]。
2.2.3。构建蛋白质相互作用(PPI)网络和主动Compound-Disease目标网络
的帮助下在线软件搜索工具检索的基因/蛋白质相互作用(字符串)(https://string-db.org/),PPI网络。人类物种被选中,信心值设置为最高的信心参数设置(41]。随后,PPI网络可视化Cytoscape 3.7.0软件,和每个节点的分数计算使用CytoNCA Cytoscape插件。据中间性核心网络检测中心(BC)值,生成和前50名的基因被认为是中心的基因;构建核心网络,目标蛋白质之间的相互作用的可信度增加分数。同时,构造一个活跃的compound-disease目标网络的活性化合物导入Cytoscape CC和相关的目标。
2.2.4。去KEGG通路富集分析
基因本体论(去)分析是用来描述生物功能的目标包括三个方面:生物过程(BP),分子功能(MF)和细胞组件(CC)。基因和基因组的京都百科全书(KEGG)是一个数据库有能力执行功能富集分析能力。R clusterProfiler软件包的平台被用来进行去KEGG功能富集分析,考虑阈值 (42]。
2.2.5。分子对接
利用分子对接分析、蛋白质和小分子的绑定情况可以预测。的重要基因,PRKACA、PRKCA PRKCB,选择进行分子对接。我们获得的晶体结构PRKACA (PDB ID: 2 gu8), PRKCA (PDB ID: 2 gzv),和PRKCB (PDB ID: 2 i0e)的蛋白质数据库(PDB)数据库结构生物信息学研究合作实验室(RCSB)。首先,减少靶蛋白与Chem3D自由能,目标蛋白质被引入AutoDock-Tools(版本:1.5.7),水分子和原始配体在目标蛋白质被移除,和氢原子被添加,然后对接框一代在40与原来的配体为中心。的活性成分可以绑定到这些目标是作为配体,和3 d分子构象的成分被从PubChem获得化合物数据库(43]。随后,对接实验的帮助下实现AutoDock七弦琴半柔性的方式和发现工作室软件被用来可视化结果。
2.2.6款。分子动力学模拟(MDs)
分子对接后,发现Studio 2019是用于验证结果的可靠性。使用高分子复合物是第一个结构化自动工具,包括构建循环和使质子化。receptor-ligand复合物被放到CHARMm力场时,选择和明确的周期性边界模型;与此同时,0.145 M氯化钠添加到系统中和。随后,运行“标准动态级联”模式中,这个过程包括五个步骤:最小化,最小化2,加热、平衡和生产。具体参数设置如下:系统温度从50 k到300 k,上升500 ps为平衡目标温度,10000 ps生产;上面所有的时间步骤2 ps;其余的参数保持默认值(37,44]。
2.3。实验验证
2.3.1。制备的药物
干燥提取得到的最优回流过程和干燥过程根据我们实验室的初步研究,含有乙醇提取物和水提取物。克雷布斯的解决方案是使用准备液体药物浓度为21.75 mg·毫升143.5 mg·毫升1,87 mg·毫升1。
权衡根据复合菊花的处方药材,然后煎两次与十倍的蒸馏水。混合药物溶液干燥成精。准备煎剂浓度为43.5 mg·毫升1克雷布斯的解决方案。根据药品说明,每日剂量的1.8毫升·公斤1老鼠QJDHOL是成人剂量的转换。稀释溶液的浓度为0.075 mg·毫升1通过添加一定量克雷布斯的解决方案。
2.3.2。细胞生存能力
rCSMCs镀在 96 -孔板和复合处理菊花提取物的浓度(CCE) 50, 100, 200, 400, 800μg·毫升124小时和48小时。然后,20μL MTT的解决方案在5毫克·毫升的浓度1被添加到每个。孵化后4小时37°C, 200μL DMSO溶液添加到每个盘子的吸气式浮层。细胞生存能力测量吸光度在490 nm enzyme-labeled仪器摇晃后约15分钟。使用下列公式计算生长抑制率:
2.3.3。确定没有生产
NaNO2解决方案与浓度(0)、20、40、60,80,100,120,140,160,180,200μ摩尔·L1准备建立一个没有的标准曲线。对数生长期的rCSMCs对待CCE在200年,400年和800年μg·毫升124小时和48小时后缺少4 h。的水平没有通过检测亚硝酸盐的生成,一个稳定的副产品与格里斯试剂没有互动,在上层的文化。使用一个微型板块读者,反应产物的吸光度为540 nm测定亚硝酸盐的浓度。
格里斯试剂一个解决方案:0.1% N-1-naphthalene乙二胺盐酸盐水溶液。
格里斯试剂B解决方案:1% sulfaphosphoric酸水溶液, 。
2.3.4。Ca测量2 +
在对数生长期rCSMCs孵化与玫瑰37°C 60分钟缓冲区包含Fura-2 / AM (5μ米)和普朗尼克f - 127(0.001%)与熟知的缓冲区被冲洗后3次。然后,上层清液吸气,和消息灵通的缓冲和rCSMCs冲洗3次,这是紧随其后的是CCE治疗(200、400和800μg·毫升1100年代)确认Ca的变化2 +内容。使用激发波长340 nm和380 nm和发射波长510 nm,标仪是用来测量细胞的荧光强度。Fura-2 / AM作为Ca的荧光标记2 +,荧光强度比值表示Ca的内容2 +在rCSMCs。
2.3.5。测量肌肉紧张
胃的雄性SD (SD)大鼠解剖中,浸泡在克雷布斯的解决方案保持其活性。的纵向肌肉的胃被削减了载玻片渗透与克雷布斯的解决方案。胃肌条标本约2.0厘米长,0.3厘米宽被削减了其两端打结缝合后消除粘膜层。标本被放置在一个恒温水和洗澡15毫升克雷布斯的解决方案和氧气。固定在一个细杆的一端,而另一端连接到一个张力传感器。肌肉紧张的变化是衡量MPA2000 Biosignal定量记录和分析系统。
新鲜克雷布斯的解决方案是更换到水浴每15分钟稳定标本1 h。肌肉紧张(X)之前政府记录之后标本是稳定的。5分钟后,6毫升克雷布斯”解决方案,QJDHOL CCE,汤被添加到不同的水浴锅,确保最终的浓度的阳性对照组,CCE低剂量组CCE中等剂量组CCE高剂量组和汤组在水浴0.0214 mg·毫升16.2 mg·毫升112.4 mg·毫升124.8 mg·毫升1和12.4 mg·毫升1。肌肉紧张的变化观察和记录5分钟后的药物作用。肌肉紧张的变化率的公式如下:
2.3.6。Antiasthenopia CCE体内的效果
雄性SD大鼠( )由上海提供汉堡王公司(质量证书号码是SYXK(哲)2018 - 0012)被分成6组根据重量,自适应地喂了7天与正常水和食物的温度25°C和相对湿度 。对照组给予蒸馏水3天没有眩光,和模型组辐照与白炽灯(100 w) 15分钟没有管理。阳性对照组收到QJDHOL 3天剂量的1.8毫升·公斤1。CCE的口服药物在330毫克公斤1,660 mg·公斤1,1320 mg·kg13天,然后老鼠辐照与白炽灯(100 w),持续15分钟。的状态下观察老鼠的眼球后裂隙灯照明。
瞳孔直径和老鼠的眼睑直径测量,和叫瞳孔直径的比例/眼睑直径计算。牺牲后,老鼠的眼球在PBS立即阐明和清洗。纤毛平滑肌仔细分离在冰和体重。上层清液均相,离心机,然后格里斯试验被用来量化的数量没有纤毛平滑肌。
2.3.7。实时定量PCR(存在)
总RNA提取SD大鼠按照设备的指令。接下来,样本反向转录成RNA cDNA,用作PCR扩增的模板。PCR扩增使用下列条件:在95°C predenaturation 30秒,40个周期95°C 10秒的变性、退火60°C,持续30秒。GAPDH内部参考。分析的数据方法(45,46]。
2.3.8。统计分析
使用SPSS 20.0软件进行统计分析,结果被表示为 。组间差异分析方差分析单向方差分析。统计学意义是 和 。
3所示。结果
3.1。活性化合物的识别和潜在目标
使用TCMSP数据库和ADME数据库,39个活性化合物在CC(表获得1)。图2(一个)CC属于显示11Chrysanthemi红花,8Cassiae精液5,地骨果实4,Polygonati根茎3,Ligustri Lucidi果实,6Ecliptae草。基于39活性化合物,749年的目标是发现在瑞士目标预测数据库。此外,从GeneCards 12004眼疲劳目标聚集,人类,和运输大亨数据库。然后,删除重复的目标,6724年潜在目标。通过在线工具Venny 2.1.0的软件,一个十字路口的compound-related目标和疾病有关的目标是保持,包含593个目标(图2 (b))。
(一)
(b)
3.2。PPI网络分析
识别核心目标,我们构建了一个PPI网络,全面阐明CC治疗眼疲劳的可能机制。有593个节点,2293网络中的边缘(图3(一个))。根据他们的中间性中心值,前50名的节点被选来构建一个子网(图3 (b));可以看出,SRC的中间性中心值(298.3),HSP90AA1 (283.6), STAT3 (219.0), DRD2(212.6),和ESR1(168.6)是最大的,这很可能是中心目标进展的眼疲劳。
(一)
(b)
3.3。Compound-Disease目标网络
主动compound-disease目标网络构造更好地理解眼疲劳CC的可能机制。如图4,网络与3330年有632个节点的边缘。网络显示潜在的目标化合物之间的相互作用和疾病,这揭示了CC治疗眼疲劳的可能机制。通过这个网络,我们能够获得39眼疲劳相关的活性化合物,平均度值为85.38。根据公元前价值,前5活性化合物是薯蓣皂苷配基,Lucidusculine, 24-Ethylcholest-4-en-3-one,大黄酸和Truflex OBP。
3.4。去富集分析
去富集分析被用来发现潜在的基点,CCs, MFs的593年目标蛋白质(图5)。结果表明,这些蛋白质生物学过程相关的有3552。其中,peptidyl-tyrosine磷酸化,peptidyl-tyrosine修改和抗生素的反应和细胞钙离子稳态排名前四名。有195细胞成分,膜筏,膜microdomain膜区域,神经元胞体主要是相关的。的分子功能,共有333 MFs,顶部MFs明显丰富的蛋白质酪氨酸激酶活性,神经递质受体的活动,跨膜受体蛋白酪氨酸激酶活性,蛋白质的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。
3.5。KEGG富集分析
KEGG途径分析了593年的目标蛋白质,和186 KEGG途径极大地丰富。排名前20的信号通路选择视觉显示(图6(一))。所示的中心目标是在中的刺激神经组织的交互,大大丰富了PI3K-Akt信号通路,钙信号通路,这表明CC可以通过调节这些信号通路治疗眼疲劳。钙信号通路如图6 (b)。
(一)
(b)
3.6。验证通过分子对接
为了提供进一步说明活性化合物如何绑定到目标,PRKACA, PRKCA PRKCB,相关活性化合物被选中进行分子对接受体和配体(图7)。PRKACA PKA家族的一员;与此同时,PRKCA和PRKCB PKC家族的成员。三个中心基因富含钙信号通路和顶级排名PPI网络。有氢键相互作用, - - - - - - 相互作用和疏水主要是涉及受体和配体之间。183年Obtusin的绑定,用力推,大黄酸和ASN 31日GLN 91年Glycitein 371年赖氨酸,GLU 390年,483年ASP,大黄酸和ASP 484法485年,665年Wedelolactone和GLU, SER 664氢,所以他们的亲和力高。亚麻酸乙酯和活性位点残基之间的相互作用是一个烷基链,所以对接分数很低,同样的情况也发生在Mandenol PRKCA。表2表明,配体受体的结合能几乎小于-5.0千卡/摩尔,成功地证明了相关活性化合物可以绑定PRKACA, PRKCA, PRKCB。
(一)
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(c)
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(e)
(f)
(g)
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(我)
(j)
(k)
(左)
3.7。MDs
进一步调查protein-ligand复杂,最好的三个配合物分子对接结果选择分子动力学分析;结果显示在图8。均方根偏差(RMSD)可以评估稳定的轨迹,轨迹是陡峭的,它表明系统经历了某种暴力变换,当轨迹平滑,它表明系统达到平衡状态。在最初的时期,RMSD protein-ligand复合物的差异;PRKACA-Obtusin复杂的RMSD值稳定在1.5 ns;至于PRKCA-Rhein和PRKCB-Rhein,稳定时间大约是5 ns,表明在这一点上,复杂的稳定构象(图8(一个))。均方根波动(RMSF)是一个指标来评估运动的原子的程度;RMSF价值低意味着更少的漂移。数据8 (b)- - - - - -8 (d)证明了残留偏差很低。最重要的是,这些结果表明配合物的稳定性。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.8。实验验证
3.8.1。CCE的抑制作用rCSMCs扩散
CCE的抑制效果与不同浓度的扩散rCSMCs在不同管理时间如图9。当CCE的浓度是100,200,400,800μg·毫升1,它没有抑制作用的增长rCSMCs 24小时和48小时。
3.8.2。CCE rCSMCs在没有生产的影响
NaNO的浓度2解决方案是作为横坐标,OD值为纵坐标,进行线性回归。回归方程是 ( ),和线性范围是0 - 200μ摩尔·L1。CCE的影响没有生产rCSMCs如图10。CCE rCSMCs 24和48小时在剂量范围从0μg·毫升1到800年μg·毫升1。没有明显的变化在细胞生存能力后CCE浓度(图10 ())。因此,rCSMCs服用200、400和800μg·毫升1CCE决定不生产。与对照组相比,200年CCE的浓度μg·毫升1有显著增加的生产没有rCSMCs ( ),它有一个非常明显的影响的内容没有在400年和800年的浓度μg·毫升1当管理时间是24小时( )。当政府时间增加到48 h, CCE明显升高的生产没有在rCSMCs浓度的200年,400年和800年μg·毫升1( )(图10 (b))。
(一)
(b)
3.8.3。CCE对Ca的影响2 +在rCSMCs
CCE与不同浓度的影响2 +rCSMCs如图11。荧光强度比浓度显著降低CCE的作用下在200年,400年和800年μg·毫升1在一定的范围内,CCE的浓度越高,荧光强度比值越小。与对照组相比,CCE迅速减少Ca2 +在这些细胞水平。因此,Ca2 +浓度明显减少CCE剂量依赖性的方式。
3.8.4。肌肉紧张之前和之后的变化管理
图12显示了肌肉紧张的结果及其变化率之前和之后政府每组大鼠的胃肌条。在这种体外模型,SD大鼠在统计学上牺牲来获得足够的数据。从结果可以看出,没有明显减少肌肉紧张克雷布斯的组管理前相比,肌肉紧张,而其他组织的收缩张力明显降低。CCE中等剂量和以上对变异率有显著增强肌肉紧张的阳性对照组(QJDHOL组)。变异率没有显著影响肌肉紧张的汤组。因此,它表明一定浓度的CCE直接影响放松隔离大鼠胃平滑肌,可有效降低其收缩张力,其疗效优于煎煮。
(一)
(b)
3.8.5。Antiasthenopia CCE体内的效果
验证如果CCE追究体内的影响,我们研究了antiasthenopia CCE的影响(低剂量、中剂量和高剂量)在没有水平irradiation-induced视觉疲劳的动物实验。NaNO的浓度2解决方案是作为横坐标,OD值为纵坐标,进行线性回归。回归方程是 ( ),和线性范围是0 - 100μ摩尔·L1。老鼠扩张的学生尤其是对照组相比未辐照的老鼠,老鼠的学生在另一组接受CCE和QJDHOL收回了很多(图13)。上层清液的影响没有睫状肌匀浆的老鼠是如图(14日)。CCE中剂量和高剂量显著增加细胞内没有水平老鼠辐照与白炽灯相比,模型组。没有显著差异没有内容之间的低剂量组和模型组以及QJDHOL组。数据的分析表明,CCE不仅对老鼠的瞳孔收缩,但也一定影响增加的内容没有上层清液的大鼠睫状肌匀浆(图14 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
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3.8.6。基因中存在的验证中心
中心目标的表达(PKA和PKC)富含钙信号通路被评估使用中存在。如图15与对照组相比,PKA的mRNA表达在高剂量组显著降低,和PKC在中等剂量和高剂量组显著降低。这些结果证实CCE的治疗后,信使rna PKA和PKC的表达不同程度的抑制。引物的利用在我们的研究中被列在表中3。
4所示。讨论
眼疲劳是最常见的眼病之一。视觉疲劳的发病率近年来每年不断上升,和患了这个病的病人也越来越年轻,由于加速社会节奏和压力增加的工作,生活和其他方面。眼疲劳不仅会严重干扰视觉和生活质量也进一步导致了年龄相关性黄斑变性(AMD)、白内障、失明和其他疾病。临床研究表明,眼疲劳的形成一致的因素密切相关。眼睛的过度使用会导致睫状肌疲劳。下降的睫状肌的功能,眼睛的调节能力也会下降,导致眼疲劳。平滑肌钙离子的浓度是造成睫状肌收缩的主要因素之一。复合菊花是中国常用的临床治疗眼疲劳,但机制尚不清楚。网络药理学的出现提供了一种新的方法来研究药物和疾病的作用机制。在这项研究中,我们使用网络药理学的组合进行了系统性研究和实验验证研究的潜在机制和目标化合物菊花治疗眼疲劳。
本文经过十字路口的疾病基因和药物靶基因,39个活性化合物和593年目标基因被发现,治疗中发挥重要作用的视觉疲劳。通过PPI网络的分析,我们可以得到网络的基因,和SRC, HSP90AA1, STAT3, DRD2, ESR1确定中心的基因。一个活跃的compound-target网络构建;公元前按价值,薯蓣皂苷配基、Lucidusculine 24-Ethylcholest-4-en-3-one,大黄酸可能是活性成分在CCE治疗眼疲劳。去分析识别各种目标参与peptidyl-tyrosine磷酸化,膜筏、和蛋白质酪氨酸激酶活性。KEGG antiasthenopia效应的分析表明,复合菊花与神经调节和细胞信号转导,其中钙信号通路排名第三。最后,通过分子对接和分子动力学,证实PRKACA, PRKCA, PRKCB可以紧密地绑定到相关组件。
纤毛平滑肌放松是由cAMP-independent监管机制等氮oxide-mediated放松。因此,没有水平的增加可以导致平滑肌的眼睛放松(47]。一氧化氮合成从精氨酸合成酶和已知血管平滑肌放松通过cGMP的海拔,反过来,调节放松反应(38,48- - - - - -51]。没有合酶被发现在睫状肌和其他眼部组织(52]。没有在调节视觉调节中起着重要作用,限制睫状肌放松。此外,先前的研究已经表明Ca2 +培养平滑肌细胞浓度是影响平滑肌收缩的主要因素。为了保持平衡在平滑肌收缩和放松之间虽然是静止的,Ca2 +必须严格控制在适当的范围内。Ca2 +是一个无处不在的胞内信号在所有真核生物,细胞信号的一个重要组成部分,如神经活动和参与多样性影响,细胞活性等。53]。
在目前的工作,MTT法是用于治疗rCSMCs CCE的一系列不同的浓度。结果表明,CCE的生长没有影响rCSMCs这些浓度和可能增加生产和减少Ca的内容2 +。此外,我们发现,一定浓度的CCE鼠胃平滑肌放松平滑肌的体外测试。此外,根据体内antiasthenopia测试的结果,这是证实CCE压缩的影响SD大鼠和可能增加的学生没有内容在匀浆上清液的老鼠睫状肌。PKA的mRNA表达和PKC钙信号通路被发现存在;CCE实现治疗效果降低的mRNA表达两种蛋白质。
5。结论
网络药理学的帮助下,我们发现39活性化合物和593年目标是密切相关的影响复合菊花治疗眼疲劳。验证了预测的活性化合物进行分子对接和分子动力学模拟与目标。KEGG分析表明,丰富途径中的相关刺激神经组织的互动,PI3K-Akt信号通路和钙信号通路。在体外实验中,实验证明,CCE的安全性,初步证实CCE放松纤毛平滑肌通过增加的浓度没有和减少钙的浓度2 +治疗眼疲劳。体内实验中,复合菊花不仅限制学生的老鼠也增加了内容的;与此同时,PKA的mRNA表达和PKC抑制不同程度。我们的研究提供了一个新的想法治疗眼疲劳。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
俊杰邱和郑Biying同样这项工作。
确认
这项研究是由浙江的深加工项目真正药用菊花的材料研究和发展的视力发泡粒子,格兰特(LGN18H280004)数量和浙江省重点实验室的药理研究与中药治疗高血压及相关疾病,(2012号e10002)。