文摘
如何选择正确的计划是治疗的关键,而这必须考虑当地的根除幽门螺杆菌,幽门螺旋杆菌的耐药性。为了更好地根除幽门螺杆菌,在当前临床治疗过程中,大多数人使用三重药物的综合治疗,但治疗效果仍不理想。此外,许多研究都集中在改变药物的种类和剂量,但他们尚未取得了良好的结果。本文结合实验研究分析耐药幽门螺杆菌和获得通过胃镜检查患者的胃粘膜标本培养临床分离株幽门螺旋杆菌。此外,本研究使用了Kirby-Bauer药敏片技术来确定幽门螺旋杆菌临床分离株的敏感性一系列定期临床抗生素的使用,以及一组幽门螺旋杆菌抗生素耐药性的实例。最后,本研究结合实验分析和各种成功根除治疗计划提供一个独特的根除治疗策略。
1。介绍
幽门螺杆菌(幽门螺旋杆菌)是一个螺旋状,microaerobic革兰氏阴性细菌。幽门螺杆菌是公认的病原体人类的慢性胃炎、消化性溃疡、胃mucosa-associated淋巴组织(麦芽)淋巴瘤和胃癌的发生密切相关。有许多幽门螺旋杆菌的耐药机制,主要原因如下。一个是相应的耐药基因的突变,从而产生耐药性通过更改摘要或针对网站修改药物作用和降低细胞膜的渗透性。二是积极细胞内的药物泵出细胞通过射流泵。细菌射流泵的输送系统,可以从细菌排出有害的基质。他们可以流出各种药物和代谢物有毒的细菌。这是一个细菌适应周围环境的结果。此外,射流泵在细菌和随处可见有一个广泛的底物,和他们的表达至关重要的细菌耐药性的主要和次要。射流泵主要使用以下两种方法使细菌产生耐药性。 One is to enable bacteria to survive successfully at a certain concentration of antibiotics through the function of efflux antibiotics. The second is to provide surviving bacteria with further opportunities for specific drug resistance (such as drug target mutations) [1]。与细菌耐药性相关的外排泵系统主要由以下五个家庭(2):(1)转运蛋白的磷酸腺苷磁带(ABC类型),(2)总科的主要主持人(MFS类型),(3)总科药物和代谢物的转运蛋白(DMT类型),(4)挤压的许多药物和有毒化合物(配偶类别),(5)家族resistance-nodulation-division (RND类别)3]。除了美国广播公司,它是由ATP,和伴侣,通过Na +交易药品,其他三种转运蛋白是由质子驱动力和作为质子和药品的逆向转运。在运输过程中,质子和制药、质子药物进入细胞而开除外,后者是原核生物的主要类型。
有几个活跃的流出转运蛋白对抗生素。在这些中,只有革兰氏阴性细菌有RND射流泵的家庭。AcrAB-TolC外排泵是主要原因的多重耐药性革兰氏阴性细菌多。许多革兰氏阴性细菌,如鲍曼不动杆菌和大肠杆菌,获得耐药性,尤其是多药耐药性,通过主导流出系统。它能够与多种底物反应,包括四环素、氯霉素、红霉素、以及B-lactams嘌呤霉素、利福平、氟喹诺酮类原料药、氧化剂、有机溶剂、和基本染料。三个组件组成AcrAB-TolC流出系统:AcrB、肢端,TolC。AcrB是射流泵蛋白AcrAB-TolC流出系统,俗称内膜转运体,可能排泄的药物使用质子驱动力。TolC的外膜通道蛋白AcrAB-TolC流出系统,形成的三个子单元;肢端的膜融合蛋白AcrAB-TolC流出系统,和它的主要目的是加入AcrB TolC创建一个三合会复杂。从外膜孔蛋白是一种蛋白质,周质。 The extracellular end of TolC is an open structure to provide an open outlet for the substrate, while the intracellular end is closed in a cone shape, and part of the protein is in the form ofα螺旋。它进入周质,与肢端结合诱导卷曲螺旋结构的变化在底部,从而打开底部打开,允许衬底顺利进入孔蛋白并出院。在射流过程中,AcrB捕捉细菌的有害物质。当底物结合,TolC结合AcrAB并打开其内部通道泵有害物质的细菌。
本文结合实验研究分析耐药幽门螺杆菌和根除结合实验分析提出一个具体的治疗方案提供理论参考后续治疗幽门螺杆菌。
2。相关工作
文献[4)使用proton-dynamic解偶联剂carbonylcyanide-m-chlorophenylhydrazone (CCCP)治疗ARHp80应变没有基因敲除。发现率和水平的溴化乙锭积累ARHp80应变处理挺明显高于未经处理的ARHp80应变。证实,幽门螺杆菌,像其他革兰氏阴性细菌,具有射流泵,导致多药耐药性和抗生素耐药性可能扮演一个角色。文献[5]表明,AcrAB-TolC射流泵参与甲硝唑和克拉霉素的抗幽门螺旋杆菌。文献[6)插入突变同时摧毁一个或两个基因产生外膜通道蛋白(hefA和hefD) metronidazole-resistant应变幽门螺杆菌l061体外生成的。此外,它利用基因测序的影响排除rdxA metronidazole-specific抗性基因的突变和frxA耐药性。证明AcrAB-TolC外排泵是参与了甲硝哒唑抗幽门螺杆菌。文献[7)透露,metronidazole-resistant幽门螺杆菌菌株显示高水平的hefA hefD,增加在应对甲硝哒唑曝光。此外,甲硝哒唑表达上升随着甲硝哒唑浓度的增加,表明甲硝哒唑可能产生高水平的AcrAB-TolC流出系统,导致耐药性。此外,文献[8]表明,幽门螺旋杆菌菌株,易受甲硝哒唑可能产生耐药性时暴露于低剂量的甲硝哒唑overexpressing hefA。此外,所有这一切发生之前减少甲硝哒唑硝基还原酶的活动,暗示的过度AcrAB-TolC流出系统第一阶段建立甲硝唑抵抗。文献[9]表明AcrAB-TolC射流泵是增强15对克拉霉素耐药幽门螺杆菌菌株。克拉霉素的麦克风幽门螺杆菌与外排泵抑制剂治疗后下降phenyl-arginine-naphthylamide(锅),浓度和锅。这表明AcrAB-TolC射流泵发挥了至关重要的作用在幽门螺旋杆菌耐克拉霉素。最近,研究人员已经识别的影响AcrAB-TolC射流泵在幽门螺杆菌体外产生多药耐药性使用幽门螺旋杆菌耐多药菌株。文献[10)检查幽门螺旋杆菌耐多药菌株产生的氯霉素和发现hefA的表达的增加,射流泵的AcrAB-TolC射流泵。此外,hefA基因沉默或管理挺和质子泵抑制剂可能大大降低一系列的麦克风抗生素对幽门螺旋杆菌耐多药菌株。提出,hefA AcrAB-TolC的外排泵基因导致幽门螺旋杆菌多药耐药性的发展,抑制射流泵可能扭转阻力。
目前,研究细菌射流泵主要是集中在大肠杆菌和鲍曼不动杆菌,很少强调幽门螺杆菌。此外,幽门螺旋菌的研究主要集中在实验创造了幽门螺旋杆菌耐药性菌株体外,尤其是氯霉素引起的耐药菌株。这些菌株和自然耐多药菌株的耐药机制与临床病人并不相同,研究结果可能不适用于临床幽门螺杆菌根除治疗(11]。同时,大多数研究基因的表达产生幽门螺杆菌流出pump-related蛋白质只验证了这些基因的一个子集,没有揭示改变有关抗生素抗性基因。的AcrAB-TolC流出pump-related蛋白质编码基因是不固定的,创建了一个外排泵系统,根据其他革兰氏阴性细菌的研究,尽管交叉配血是可能的(12]。结果,只是认识的一部分基因产生AcrAB-TolC流出pump-related蛋白质不提供全面的照片AcrAB-TolC射流泵。射流泵的表达和功能的改变在细菌,包括大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、空肠弯曲杆菌,和改变目标基因,还都是在最近的研究与细菌耐药性。(13]。特别是研发射流泵中发挥着重要作用的“self-mutation和收购”抵抗革兰氏阴性细菌(14]。因此,深刻理解的作用和机制抗幽门螺杆菌的射流泵,有必要观察h . pylori-resistant外排泵基因的表达菌株和相应的抗生素抗性基因的突变。
氟喹诺酮类三联疗法是使用PPI +阿莫西林+左氧氟沙星。氟喹诺酮类抗生素是一类广谱抗生素,广泛应用于医药和水产养殖。这个方案建议第一个治疗失败后的二线治疗方案。PPI CYP2C19主要在肝脏代谢的细胞色素P450 (CYP450)的家庭。不同CYP2C19基因型的人口将会导致相同的PPI在不同的患者有不同的代谢影响,它分为slow-metabolized, fast-metabolized,中间15]。它已经在文献中报道,氟喹诺酮类抗生素可以减少生物转化过程受CYP2C19通过竞争性抑制作用,可减少PPI的疗效的差异引起的不同CYP2C19基因型,和与PPI药物有协同效应16]。然而,左氧氟沙星也有高电阻率。一些研究使用莫西沙星而不是左氧氟沙星。用兰索拉唑的研究已经发现,当包含克拉霉素或使用奥美拉唑三联疗法,PPI的功效受到CYP2C19基因多态性。然而,没有显著的影响在使用雷或唑(17]。雷可能与它的非酶的代谢有关,不受CYP2C19基因多态性的影响。唑可能与它的纯S-isomer,但具体机制尚不清楚,目前尚无共识的最佳PPI选择(18]。利福平的三联疗法是PPI +阿莫西林+利福平。公开作为一种传统的药物,利福平不常选为治疗幽门螺杆菌感染,考虑它的负面影响。此外,越来越多的临床试验证实,该方案包含利福平有良好的治疗效果在幽门螺杆菌感染19]。无药敏试验的前提下,多伦多共识成人的治疗幽门螺杆菌感染列表作为唯一第四道治疗(20.]。
3所示。实验方法
研究对象是患者胃镜检查。胃粘膜组织的胃窦幽门得到的2 - 3厘米的标本与协议的患者胃镜下基于特定的包含和排除标准。获得许可后,我们利用活检钳咬一块胃粘膜组织2 - 3厘米的幽门胃腔。我们迅速转移标本成EP管充满了布氏肉汤和密封使用一次性无菌针(EP管打开和关闭之前用酒精擦EP管)。所有标本必须浸在液体和封锁的环境。我们把EP管垂直为泡沫盒子装满冰块并将标本与以下基本信息:姓名、性别、年龄、重大投诉,微观诊断、药物的历史之前,收集日期,并为住院病人住院人数。
在四个小时内,胃粘膜标本必须被感染。我们从冰箱里移除幽门螺旋杆菌分离介质和把它在室温下。在生物安全柜,我们拿起一次性无菌针的标本和粘膜表面进入联系媒体文化。之后,利用同行梯度单向涂片接种方法,我们使用无菌接种环完全传播培养基上的标本(锯齿形条纹方法)。下,我们倒注入的幽门螺旋杆菌分离介质在密封的文化,增加了一个microaerobic气体袋和一个小数量的无菌水,并把它放置于恒温瓶组在37°C 3 - 7天。
我们移除幽门螺旋杆菌培养基从冰箱里,把它在室温下。在生物安全柜,我们采用无菌接种环选择殖民地被认为是临床分离株幽门螺杆菌和接种使用密集3-zone裸奔技术在幽门螺杆菌亚文化媒介。在明确密闭培养箱,我们把感染幽门螺杆菌亚文化中颠倒,添加了一个microaerobic气体袋和一个小数量的无菌水,并把它放置于恒温瓶组37°C 3 - 7天。
我们拿出幽门螺杆菌非耐介质并在室温下放置它。我们使用一次性无菌棉签挑选纯殖民地在生物安全柜和混合在无菌生理盐水来生成一个齐次细菌的解决方案。细菌的浓度的解决方案 cfu /毫升,相当于0.5号麦当劳浊度的浊度管。我们更换一个棉签浸泡在细菌悬液,挤压管壁上的多余的液体,并涂抹均匀在3个不同方向上形成一层均匀接种3倍药物敏感介质。介质后干一点,Kirby-Bauer药敏报告将在15分钟内根据药敏试验的要求。我们使用无菌滤纸片相同的大小和厚度纸张作为空白对照组药物敏感,放置在一个恒温瓶在37°C 3 - 7天。之后,我们观察是否存在一个明显的抑制区在培养基中,测量和记录的直径与游标卡尺抑制区,并根据指令读取和记录结果的非纸张制造商。
确认幽门螺旋菌对抗生素的敏感性,再次进行药物敏感性试验。电性能测试方法被用来检测8抗生素的麦克风(CH, MZ, LE, TC, MX, RI,和AZ)对幽门螺旋杆菌。电性能测试方法是直观的和直接的原则相结合的定量技术扩散和稀释方法细菌敏感性测试。有一个preprepared抗生素试验片的背面,和它的浓度不断增加,指数增长。正面都带有麦克风的特定值,单位为μ克/毫升,可以直观地读取的值。根据美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)标准,判断细菌耐药或敏感。 μg / ml被定义为阿莫西林耐药性, μg / ml被定义为甲硝唑抵抗, μg / ml被定义为克拉霉素耐药性, μg / ml被定义为左氧氟沙星阻力。 μg / ml被定义为四环素耐药性, μg / ml被定义为莫西沙星抵抗, μg / ml被定义为利福平耐药性, μg / ml被定义为阿奇霉素阻力。药敏测试执行与标准菌株HP11637同时作为质量控制,以及药敏试验重复3次。进行特定的操作方法是按照美国临床实验室标准化操作流程,和实验步骤如下。(1)我们使用无菌接种环刮幽门螺杆菌在对数生长阶段为EP管包含1毫升无菌生理盐水。(2)我们用比浊计调整细菌溶液的浓度为2.0麦克唐奈的浓度。(3)我们用吸管吸移管1毫升细菌液体的浓度调整到消毒小塑料杯。(4)我们使用螺旋机吸200μl的细菌在塑料杯和把它平铺在Muller-Hinton (MH)琼脂培养基板直径150毫米。(5)我们将琼脂板几分钟,让它自然干。(6)我们使用无菌镊子把电性能测试试验片琼脂培养基的表面。(7)我们把它在一个three-gas孵化器和文化为48 - 72 h microaerobic环境中。(8)的琼脂板被观察,和每个抗生素对细菌的麦克风。麦克风是椭圆形的规模在十字路口抗菌环和测试地带。压力被国家列为敏感或耐药临床实验室标准委员会(NCCLS)。
我们使用K-B方法检测幽门螺旋杆菌的敏感性呋喃唑酮(FR)。贴一张滤纸K-B方法包含一个定量抗菌药物琼脂表面已经接种测试细菌,和药物的纸在琼脂扩散。随着扩散距离的增加,抗菌药物的浓度减少对数,从而形成浓度梯度在纸上。药物扩散,抑制浓度范围内的测试细菌在纸上不能生长,同时抑制浓度范围外的压力继续增长,从而形成透明的抑菌区周围。因为药物的扩散速度的影响在琼脂,各种抗菌药物的抑菌圈的宽度可能会有所不同。带抑制的程度可能代表测试细菌的敏感性测试药物和反向连接药物的最低抑制浓度(MIC)的细菌进行了测试。较低的麦克风,抑菌圈越大。毫米单位用于解释抑制区。细菌被归类为耐药或敏感根据美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)。抑制的直径 mm是呋喃唑酮阻力。药敏测试执行与标准菌株HP11637同时作为质量控制。进行特定的操作方法是按照美国临床实验室标准化操作流程,最后,解释结果,抑菌圈的直径用卡尺测量,然后进行阅读,药敏试验重复3次。
4所示。结果
敏试验发现幽门螺旋杆菌临床分离株的八个药物,包括灭滴灵、左氧氟沙星、克拉霉素、阿莫西林、莫西沙星、呋喃唑酮、四环素、和利福平,在本研究中进行研究。耐药性是计算,结果如表所示2- - - - - -9。
从上面的分析,可以看出,幽门螺旋杆菌的临床分离株耐甲硝哒唑、左氧氟沙星、克拉霉素。然而,它的耐阿莫西林,莫西沙星,呋喃唑酮、四环素、和利福平很低。它可能被用作在临床治疗指南。例如,幽门螺旋杆菌临床分离株的电阻率可以假定为100%灭滴灵,和不可以归因于菌株污染。幽门螺旋杆菌临床分离株的电阻率阿莫西林,莫西沙星,呋喃唑酮、四环素、和利福平可能假定为零,不可以归因于菌株污染。幽门螺旋杆菌有苛刻要求的增长环境,仍然很难经常文化体外在目前的技术条件。可靠性、操作安全和经济效益的药物敏感性实验,通常用于临床实践还有待研究。结果,我们可能采用经验性治疗新治疗的患者根据建议,之前用药历史,和已知的抗生素耐药性知识以确保抗生素组合,给出了合适的数量,在完成疗程。有理由彻底治疗患者抗幽门螺杆菌感染谁没有第一个治疗,第二个治疗失败,或失败的三个或更多的治疗方法。范围内患者的经济和心理承受力,激进的治疗建议基于药物敏感性实验的结果。
5。结论
未来领域研究的成功率增加临床幽门螺杆菌感染包括以下几点:(1)是至关重要的监测患者根治手术,之前记录他们的用药历史,接下来的治疗计划,和过程的结果。(2)应定期进行大规模的临床研究目标人口,证实该地区抗幽门螺旋杆菌的抗生素。(3)疫苗研究和发展必须维护。(4)重要的是创造一个安全、低成本、高效、可靠、简单、快速的方法来评估抗幽门螺旋杆菌在广泛的范围内。与传统的培养方法从胃粘膜幽门螺杆菌,然后进行药物敏感性测试,这种方法可能与开发基因检测技术集成。已经有大量的研究幽门螺杆菌基因突变的机制导致耐药性,并有许多临床研究报告使用PCR基因芯片检测幽门螺杆菌感染,PPI代谢酶的基因型和耐药性的获得信息。最新MaastrichtV共识推荐可以基于基因检测结果幽门螺旋杆菌耐药性的个性化的抗生素治疗。相信检测幽门螺杆菌感染和耐药性的研究结合芯片技术是未来发展的方向。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。