文摘
克制压力可能与自由基升高有关,因此,长期暴露于氧化应激可能引起组织损伤。几项研究已经报道,香芹酚(汽车)对氧化应激的保护作用。本研究旨在调查汽车限制的保护作用应力诱导氧化应激损伤大脑,肝脏和肾脏。慢性束缚压力,老鼠每天保持6小时的抑制剂,连续21天。动物收到系统性管理的汽车每天21天。评估氧化应激的变化参数约束应力后,丙二醛(MDA)的含量,减少谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR)和过氧化氢酶(CAT)活性测定的大脑,肝脏和肾脏。在强调动物收到车,MDA水平明显高于()、谷胱甘肽的含量和抗氧化酶都明显低于相应的动物()。汽车改善强调动物的变化与对照组相比)。本研究表明,汽车可以防止约束应力诱导氧化损伤。
1。介绍
植物产品及其衍生品已经被认为是一个治疗的起源来自古代的元素。今天,在精油有基础研究动机和提取从不同植物来源作为潜在的抗氧化材料(1- - - - - -5]。香芹酚(5-isopropyl-2-methyl phenol-CAR)是获得的精油的成分牛至属植物hirtum,野生佛手柑、pepperwort和其他精油,具有抗氧化和抗菌活动和特定的香味使它一个有吸引力的组件对于某些类型的食物(6]。车,或cymophenol, C6H3CH3monoterpenoid苯酚。特有的辛辣,温暖的气味牛至。汽车的理化特性和化学结构表1。汽车被认为是安全的消费和天然替代合成抗氧化食品添加剂(6]。多项研究表明,汽车有抗氧化,抗炎,抗肿瘤、镇痛,antihepatotoxic,抗菌和杀虫活动7]。汽车有强大的抗氧化性质,可以有效地预防和抑制的几种疾病(8]。
氧化应激是由一个失衡的一代又一代的活性氧(ROS)和解毒活性中间体通过生物系统的能力(2,3,9]。氧化应激是一种实质性的机制可能参与了细胞毒性引起的慢性压力(10]。压力感应交感刺激使呼吸率升高为组织创造更多可用的氧气。增加代谢率也会产生额外的自由基,导致活性氧生成和抗氧化系统失衡(10]。这些自由基物种导致氧化损伤细胞内不同的分子,如蛋白质、脂质、核酸(10]。
已经表明,补充天然抗氧化剂增加身体器官的性能在暴露在压力环境中(4,11,12]。汽车有很强的抗氧化活性(11]。汽车治疗显著增强谷胱甘肽(GSH),谷胱甘肽的维护水平基本上由汽车发生由于清除ROS通过其自由基清除效果(11]。也说明,汽车提出了总抗氧化能力水平在细胞培养和动物13]。其他调查发现了那辆车防止不同药理方面,包括anxiolytic-like,抗肿瘤,抗抑郁,antinociceptive,降血压药和抗糖尿病的活动14,15]。由于汽车是显示对自由基的功能有保护作用,我们假设政府的汽车可能阻止慢性压力通过防止氧化应激诱导组织损伤。
强有力的证据显示各种抗氧化剂的影响慢性克制或immobilization-induced应力模型(16]。因此,本研究旨在调查的影响汽车氧化应激相关的大脑的变化,肝脏和肾脏的固定压力。
2。材料和方法
2.1。试剂
所有纯化酶、辅酶、基质、标准,缓冲区,工具包,香芹酚和其他化学物质从Sigma-Aldrich购买化学(美国圣路易斯)和皮质甾酮伊丽莎工具包是购自Cusabio (Cusabio生物技术有限公司)。
2.2。动物
纯种白化大鼠(g)培育大学实验动物保健中心。动物是维持在标准环境条件下,免费获取标准啮齿动物饲料和水。
2.3。研究设计
老鼠被随机分成八个实验小组(每组8大鼠)如下:(1)车辆(阿明费)+没有压力(NS) (Veh-NS);(2)车辆+压力(Veh-S),(3)车(20毫克/公斤,IP) +没有压力(CAR20-NS),(4)车(30毫克/公斤,IP) +没有压力(CAR30-NS);(5)汽车(40毫克/公斤,IP) +没有压力(CAR40-NS),(6)车(20毫克/公斤,IP) +压力(CAR20-S),(7)车(30毫克/公斤,IP) +压力(CAR30-S)和(8)汽车(40毫克/公斤,IP) +压力(CAR40-S)。约束应力进行使用啮齿动物抑制剂制成的树脂玻璃密切适合老鼠的身体。慢性束缚压力,老鼠在抑制剂每天6小时连续21天。动物收到系统性政府车辆(二甲亚砜(DMSO)或汽车每天21天(16]。在实验周期的结束,动物被乙醚麻醉,血从retroorbital窦随后被收集。血液和血清被离心分离在5000 rpm为皮质甾酮测量5分钟。然后,大脑、肝脏和肾脏氧化应激标记测量被移除。切除后的组织,他们在寒冷的0.9%生理盐水洗,保持在−70°C,直到他们被用于制备匀浆均质器。每个组织都切碎和均质在50 mM磷酸盐缓冲剂,pH值7.4,离心机在10000 g×15分钟在4°C(贝克曼超速冷冻离心机)。匀浆和上层清液用于化验。
2.4。皮质甾酮评价
深麻醉下,血液收集retroorbital窦的老鼠。允许血液凝块和血清分离使用在5000转离心5分钟和储存在−80°C到使用。总血清皮质酮水平是衡量ELISA试剂盒(CORT酶联免疫试剂盒CSB-E07014r)。
2.5。测定脂质过氧化
丙二醛(MDA)的结果多不饱和脂质退化。生产这种物质被用作生物标记来衡量脂质过氧化水平。MDA与硫代巴比土酸反应(稍后通知)硫代巴比土酸活性物质(TBARS)形成1:2 MDA-TBA加合物,也就是在532纳米吸收。因此,数量TBARS MDA的数量成正比。浓度TBARS决定根据中山教授和历经甲级的方法。TBARS计算使用MDA标准曲线的浓度,并表示为nmol /毫克的蛋白质(17]。
2.6。估计谷胱甘肽
谷胱甘肽是由布鲁斯的方法等。18]。短暂,0.1毫升的样品,0.9毫升蒸馏水和1.5毫升的沉淀试剂添加(3.34 g偏磷酸、0.4 g EDTA和60.0克氯化钠)。管被动摇,允许在室温下站5分钟(°C)。混合物是离心机15分钟4000转4°C。在1.0毫升上层清液,4.0毫升的磷酸盐溶液(0.3米磷酸氢二钠)和0.5毫升5-50-dithiobis——(2-nitrobenzoic酸)(DTNB)(在1%柠檬酸钠80毫克)补充道。黄色的发展复杂的阅读立即在412 nm分光光度计。使用谷胱甘肽标准曲线制备和实验样本推断中谷胱甘肽浓度的标准曲线。谷胱甘肽浓度计算和表达μ摩尔谷胱甘肽/毫克的蛋白质。
2.7。测量的酶
SOD的活性测定的方法Marklund和g Marklund [19),使用抑制焦棓酸自氧化在pH值8。SOD的具体活动表示为单位每分钟每毫克的蛋白质。GPx活性的测定方法的屋和情人节20.]。GPx催化谷胱甘肽的氧化氢过氧化枯烯。在谷胱甘肽还原酶(GR)和NADPH氧化谷胱甘肽是立即转换为相应的简化型氧化NADPH辅酶ii。在340纳米测量吸光度下降。GR触媒作用减少谷胱甘肽在NADPH的存在,这是氧化辅酶ii。在340纳米测量吸光度下降。GPx的水平和GR表达为U /毫克的蛋白质。猫的活动被H化验2O2消费,Aebi(后21派普et al .()方法和修改22]。
2.8。蛋白质估计
蛋白质在亚细胞分数估计布拉德福德的方法(23使用牛血清白蛋白(BSA)作为标准。
2.9。统计分析
所有实验进行了至少一式两份。每组由八个老鼠。单向方差分析(方差分析)和图基执行事后测试是用于多个比较。统计分析使用InStat 3.0程序。表示为均值±SEM的结果。血清的结果源于分析。不同的被认为是重要的。
3所示。结果
MDA的含量、谷胱甘肽、SOD,猫,GPx, GR的大脑,肝脏和肾脏的所有组如表所示2,3,4。Veh-S集团在所有组织的MDA水平明显高于Veh-NS和三个CAR-NS组()。CAR40-S集团在所有组织MDA水平明显低于那些Veh-S集团()。我们的数据表明,有一个显著差异CAR40-S和CAR20-S组MDA水平在所有的组织()。MDA水平的CAR30-S大脑和肝脏明显低于CAR20-S集团()。此外,大脑中的CAR40-S MDA水平明显低于CAR30-S组()。
Veh-S集团在所有组织的谷胱甘肽水平明显低于Veh-NS和三个CAR-NS组(对大脑和肾脏;肝脏)。谷胱甘肽水平CAR40-S组的大脑,肝脏和肾脏组织的显著高于Veh-S集团(,,、职责)。我们的研究结果表明谷胱甘肽水平有显著区别CAR40-S和大脑和肾脏CAR20-S团体()。此外,大脑中的CAR40-S的谷胱甘肽水平明显高于CAR30-S集团()。
SOD的活动(对大脑和肾脏;对肝脏)、GPx (对大脑和肾脏;对肝脏),GR (对所有的组织),和猫(对大脑和肾脏;Veh-S组肝脏)在所有组织都显著低于Veh-NS和三个CAR-NS组。SOD (大脑;肝;对肾)、GPx (对所有的组织),GR (对所有的组织),和猫(大脑;肝;肾脏)活动CAR40-S组的所有组织都显著高于Veh-S组。此外,SOD和CAT在大脑活动CAR30-S组显著高于Veh-S集团()。目前的数据表明,SOD(有显著区别对于大脑,对肾)、GPx (在肾脏),猫(对于大脑,肾脏)活动CAR40-S和CAR20-S组织大脑和肾脏。显著性差异也观察到猫的活动CAR40-S和肾脏CAR30-S组()。
Veh-S组的血清皮质酮水平显著高于Veh-NS和三个CAR-NS组()。CAR30-S和CAR40-S组的血清皮质酮水平明显低于那些Veh-S集团(,、职责)。血清皮质酮水平的显著差异是观察到的CAR40-S和CAR20-S CAR30-S组(,职责。)(图1)。
4所示。讨论
目前的研究表明,慢性克制压力诱发氧化应激在大脑中,肝脏,肾脏和氧化应激损伤组织改善汽车的治疗。目前的数据显示,汽车是有效对抗氧化损伤引起的慢性压力的主要器官。在这次调查MDA,标记每个氧化脂质,展品的氧化损伤和减少抗氧化剂。抗氧化剂的水平包括谷胱甘肽、SOD、GPx, GR,和猫在大脑中进行评估,肝脏和肾脏的老鼠接触约束应力来确定汽车的抗氧化潜力。在未经处理的控制动物暴露在克制压力,大脑中有一个相当大的增加,肝脏和肾脏MDA水平,提出应力诱导脂质过氧化反应。显示数据的协议与以前的观测大脑中脂质过氧化物水平增加,肝脏和肾脏的老鼠暴露在克制压力(24]。组织MDA水平的提高治疗控制动物暴露在克制压力伴随着谷胱甘肽显著降低,SOD、GPx, GR,猫水平显示,生产过剩的自由基在固定压力。对待动物与汽车导致减少组织MDA水平,增加谷胱甘肽,SOD、GPx, GR,和猫活动水平,相比未暴露的动物。谷胱甘肽水平展览一个至关重要的角色,在解毒组织(25- - - - - -28]。在目前的研究中,谷胱甘肽水平降低组织的压力集团(29日]。压力降低了谷胱甘肽水平,导致增加活性氧的水平在大鼠组织(28]。强有力的证据已经表明,对过氧化氢酶的抗氧化防御系统(H2O2),这是组织的高毒物质,主要是由谷胱甘肽系统(4,25]。谷胱甘肽,谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的代数余子式,展品细胞防御系统的重要作用。硫醇化合物,谷胱甘肽抗氧化活性的细胞,降低H2O2和有机过氧化物的形成在与形成氧化脂质过氧化二硫化谷胱甘肽(GSSG) [30.]。在正常生理情况下,谷胱甘肽存在形式(谷胱甘肽)在细胞减少;然而,谷胱甘肽是变成氧化形式(GSSG)谷胱甘肽还原酶(GR)当细胞暴露于生产过剩的自由基(2,3,31日]。过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶氧化还原循环负责维护适当的谷胱甘肽浓度(32]。GPx活性和GR的变化可以打扰谷胱甘肽的浓度水平32]。在这项研究中,治疗车改善氧化应激诱导减少谷胱甘肽,SOD、GPx, GR,猫的水平。SOD是一个主要的抗氧化酶清除超氧化物阴离子。SOD的活性,减少大鼠肝脏、大脑和肾脏29日,33]在克制压力构成了一个重要的防御系统来清除活性氧在活的有机体内。
我们的结果证实了以前的研究,以便约束应力诱发自由基产量和降低抗氧化酶的活动。在生理方面,应力诱发氧自由基生成主要形成于线粒体中,过氧化物酶体、溶酶体、胞质,质膜在身体34]。然而,在生化视图中,一个失衡ROS的生成和清除了体内的抗氧化防御系统已经观察到大脑,肝脏和肾脏损害(28,35]。产生自由基的细胞代谢过程长期以来一直参与的细胞毒性35,36]。一个固定的压力反应导致自由基的生产过剩,导致脂质过氧化反应,尤其是在细胞膜(37]。脂质过氧化作用可以改变膜的完整性,然后导致组织损伤(10,36]。透光的发现表明在肝脏抗氧化酶活性降低,大脑和肾脏在动物(固定压力后38]。此外,所有组织特别是在大脑中的MDA含量增加(38]。同样,本研究表明,氧化应激诱导氧化损伤的大脑,肝脏和肾脏通过增加MDA水平,减少谷胱甘肽和抗氧化酶活性。我们也注意到,汽车改善这些修改。
在这项研究中,血清皮质酮水平在大鼠慢性应激后立即测量。根据目前的发现,慢性压力增加血清皮质酮和汽车大大减少皮质甾酮水平。糖皮质激素发挥不可或缺的作用,慢性应激诱导氧化损伤(39]。糖皮质激素可提高组织MDA强调大鼠血清皮质酮,这是一个直接关系和肝脏MDA水平(39,40]。此外,提高水平的糖皮质激素在克制压力可能影响动物抗氧化成分(39]。上述机制说明阐述了组织损伤诱导的氧化应激在当前的研究中。
目前的调查表明,长期的压力,改善汽车的有害影响治疗,建议这些药物对慢性应激的保护作用。汽车也可以防止脂质过氧化作用诱导SOD、GPx, GR和猫。汽车有效地进行清除自由基如过氧化氢自由基、超氧化物自由基、过氧化氢、一氧化氮(41,42]。汽车发挥抗氧化作用在体外和在活的有机体内及其抗氧化活性是由于羟基的存在()与芳环43,44]。在等离子体脂质过氧化水平的增加产品,肝脏,肾脏,肝脏和老鼠的酶和非酶的抗氧化剂含量的减少汽车治疗后恢复正常。汽车治疗抑制自由基的形成和脂质过氧化水平,进一步提高了膜流动性。汽车被发现作为游离基清除剂抑制脂质过氧化作用在活的有机体内和在体外。
总之,目前的研究表明,汽车可以抑制慢性应激诱导的氧化损伤大脑,肝脏和肾脏。因此,汽车应该富有成果的新的药理剂改善慢性应激诱导氧化损伤。
利益冲突
作者报告没有利益的声明。
承认
作者要感谢Neyshabur大学医学科学研究事务财政支持这项工作。