Bp-13解放军₂:净化和神经肌肉活动的新Asp49毒素隔绝具窍蝮蛇属pauloensis蛇的毒液

文摘

一个新的计划₂(Bp-13)纯化具窍蝮蛇属pauloensis蛇毒后一个色谱步骤的产物μ-Bondapak C-18。氨基酸分析显示高疏水性的内容和基本氨基酸和14 half-cysteine残留。氨基端序列显示高度的同源性与基本Asp49解放军₂myotoxins从其他具窍蝮蛇属毒液。Bp-13显示变构酶的行为和pH值8.1,最大活动36°-45°C。满Bp-13解放军₂活动所需的钙^{2 +};它的人民解放军₂活动由Mg抑制^{2 +}、锰^{2 +},老^{2 +}和光盘^{2 +}Ca的存在和缺席1毫米^{2 +}。在鼠标膈nerve-diaphragm (PND)准备,麻痹浓度(50%的时间)。Ca的替代^{2 +}由老^{2 +}和温度降低(24°C)抑制Bp-13解放军₂全身twitch-tension封锁。Bp-13解放军₂抑制收缩反应直接电刺激curarized老鼠患产后抑郁症的准备确凿的挛缩的效果。在二腹肌cervicis准备,Bp-13诱导不可逆twitch-tension封锁和氯化钾诱发挛缩是部分,但值得注意的是,抑制()。这个新的Asp49解放军的主要作用₂的具窍蝮蛇属pauloensis毒液对肌肉纤维肌纤维膜、禽流感的准备是减少响应比啮齿动物准备。研究提高生化及药理特性b . pauloensis毒液。

1。介绍

磷脂酶一₂属于一个扩大总科的酶催化酯键水解的sn-2位置1,2-diacyl-sn-3-phosphoglycerides并生成花生四烯酸。根据分子分类学、细胞内和分泌解放军₂s目前分类在6到12组(1]。分泌解放军₂s是十三至十八的酶与5 - 8 kDa活动需要毫克分子Ca的二硫键^{2 +}浓度(2]。

尽管各种各样的局部和全身性病理生理效应,如myotoxicity、神经毒性,抗凝,溶血,低血压,抑制血小板聚集,杀菌和促炎的活动,人民解放军₂组显示高度保守的分子区域和类似的三维结构(3]。大多数这样的地方和系统性效应所致具窍蝮蛇属sp.表面变质往往是由于人民解放军₂活动(3- - - - - -5]。尽管通常忽视临床神经毒性效应,期间观察到的在体外实验和经常与解放军有关₂bothropic毒液(6- - - - - -14]。

b . pauloensis在潮湿和凉爽地区中部和西南部的圣保罗州[15,16),在季节性干旱的热带稀树草原的巴西塞拉多(17]。从292年通知事故所致具窍蝮蛇属蛇,18%(52例)所致b . pauloensis(18),从而证明,这种蛇的毒液物种的研究可以医学相关性。在这项工作中,我们描述一个高度隔离和酶特性的基本计划₂毒液的pauloensis。我们也调查了是否这个孤立的解放军₂具有毒害神经的活动。

2。材料和方法

2.1。毒液和试剂

毒液从西格玛化工有限公司购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。

溶剂(高效液相色谱级),4-nitro-3-octanoyloxy-benzoic酸,测序年级牛胰腺胰岛素和其他试剂也从西格玛化工有限公司(圣路易斯,密苏里州,美国)。

2.2。反相高效液相色谱(rp)

Bp-13解放军₂从b . pauloensis毒液被反相高效液相色谱纯化,根据描述的方法Ponce-Soto et al。19),微小的变化。短暂5毫克的整个毒液于200年解散μL缓冲组织(0.1%)和离心机在4500克;浮在表面的被应用到μ-Bondapak C18柱(0.78×30厘米;水991 - pda系统),以前平衡缓冲了15分钟。的蛋白质洗脱之后,使用一个线性进行梯度(0 - 100%,v / v)的缓冲区B(66.5%乙腈在缓冲区)以恒定流量1.0毫升/分钟。色谱运行监控在280 nm的吸光度。纯度和解放军₂根据部分活动监控2.3和2.6。所有分数筛选了冻干,然后储存在−20°C进行进一步的生物化学和药理试验。

2.3。电泳

Tricine在不连续sds - page凝胶和缓冲系统是用来估计Bp-13解放军的分子质量₂,在减少和nonreducing条件下20.]。分子量标记用于kDa的磷酸化酶B:白蛋白:94年~ 67年,卵白蛋白:43岁的碳酸酐酶:30,大豆胰蛋白酶抑制剂:20日和α乳清蛋白:14(通用电气医疗集团)。

2.4。氨基酸分析

氨基酸分析进行Pico-Tag分析仪(水系统),所述Heinrikson和梅雷迪思(21),微小的变化。Bp-13解放军₂样例(30μg)在105°C水解为24小时,在6 M盐酸(皮尔斯测序年级)含1%苯酚(w / v)。粉反应是20μL derivatized溶液(水:乙醇:三乙胺:phenylisothiocyanate, 7: 1: 1: 1, v / v)在室温下一个小时。之后,PTC-amino酸被识别和量化通过高效液相色谱法,通过比较他们的保留时间和峰面积与标准氨基酸混合物(Sigma-Aldrich)。

2.5。质谱分析

分子质量完好的原生和烷基化Bp-13解放军₂分析了MALDI-TOF质谱使用Voyager-DE PRO MALDI-TOF装置(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)配有脉冲氮激光(337 nm、脉冲4 ns)。1的数量μL组织样本的0.1%和2μL sinapinic酸矩阵(3 5-dimethoxy-4-hydroxycinnamic酸)。矩阵是准备与30%的乙腈和0.1%的组织及其质量分析在下列条件:25 kV加速电压、激光固定在2890年μJ /厘米²、300 ns的延迟和线性分析模式(22]。

从头测序的n端,第一个52 Bp-13解放军的氨基酸₂烷基化胰蛋白酶的肽分离,rp,手工收集,冻干,resuspended 80% H₂O, 20%的乙腈和0.1%的组织。分别介绍了肽进入质谱仪使用注射泵源500 nl /分钟流量。之前执行一个串联质谱,ESI / MS质谱(TOF MS模式)收购为每个高效液相色谱分数在400 - 2000的质量范围m / z,旨在选择感兴趣的离子。随后,这些离子分散在碰撞细胞(TOF MS / MS模式)。使用了不同碰撞能量取决于质量和电荷的离子状态。由此产生的生产光谱是TOF分析仪和deconvoluted使用MassLynx-MaxEnt 3算法(水域)。单电荷光谱是使用PepSeq应用程序包含在MassLynx手动处理。

2.6。中国人民解放军₂活动

中国人民解放军₂活动是衡量使用试验被曹和Kezdy [23]和霍尔泽Mackessy [24修改96 -孔板。标准测定混合物含有200μL的缓冲区(10毫米Tris-HCl, 10毫米CaCl₂100毫米氯化钠,pH值8.0),20μ(合成显色底物L 4-nitro-3) - octanoyloxy苯甲酸3毫米,20μL的水,和20μL的解放军₂分数(1毫克/毫升)或整个毒液(1毫克/毫升)在260年的最后一卷μl .添加样品之后,混合物是孵化长达40分钟37°C,吸光度阅读每隔10分钟。表达的酶活性,反应的初速度(),计算了基于20分钟后吸光度的增加。

解放军的pH值和最佳温度₂测定孵化的四个反应缓冲区不同pH值从4到10,在不同的温度下,分别。底物浓度的影响(40、20、10、5,2.5,1.0,0.5,0.3,0.2,和0.1毫米)酶活性是由20分钟后测量吸光度的增加最佳pH值和温度。不同浓度的钙的影响^{2 +}在Bp-13解放军₂酶活性测试通过preincubating酶与不同离子浓度(0.005,0.025,0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,和0.5米)在37°C标准实验前30分钟。此外,不同的二价离子(Sr的影响^{2 +}、镁^{2 +}、锰^{2 +}和光盘^{2 +},5毫米)进行测试(1毫米)或缺乏Ca^{2 +}。最后的影响尿素酶活性(4米)是测试preincubating Bp-13 30分钟37°C。

化验都是一式三份和425海里的吸光度测量使用VersaMax 190多井板读者(分子器件、桑尼维尔,美国)。

2.7。公元前,患产后抑郁症,EDL肌肉紧张准备

男性瑞士老鼠(亩骶)重达20 - 30 g和8-day-old小企鹅(Hy W36行)被用于twitch-tension研究Bp-13解放军的存在₂。老鼠和小企鹅被吸入氟烷牺牲。偏侧膈(PND)及趾长伸肌肌腱牵向前(EDL)肌肉分离小鼠和二腹肌cervicis肌肉(BC)隔绝小鸡被安装根据Bulbring [25]和Ginsborg和Warriner [26),分别。

患产后抑郁症,EDL哺乳动物准备暂停在一个恒定的静息张力5 g / cm和0.5 g / cm,分别在5毫升(PND)和3.5毫升(EDL)器官含充气(95%啊₂-5%的公司₂)Tyrode解决方案,其组成137年mM是氯化钠,氯化钾2.7,CaCl₂1.8,MgCl₂0.49,不₂阿宝₄0.42,NaHCO₃11.9,11.1和葡萄糖,pH值7.4,37°C。一个超大的脉冲(0.1赫兹,0.2 ms)由草S48电子刺激器(美国马草仪器有限公司,昆西)是通过电极放置在汽车应用膈神经(PND)和肌腱(EDL)。准备,等长肌肉紧张都被记录使用力-位移传感器测压元件BG 50克(Kulite半导体产品公司,顶级,新泽西,美国)耦合到一个physiograph(古尔德RS 3400年,克利夫兰,哦,美国)。患产后抑郁症的准备工作可以稳定至少20分钟之前添加Bp-13毒素在不同浓度:0.71μ米(10μ1.42 g / mL)μ米(20μ3.56 g / mL)μ米(50μ7.12 g / mL),μ米(100μg / mL)。反伊斯兰教英国防御联盟准备孵化了Bp-13毒素为3.56μM。

一些curarized患产后抑郁症的准备(d-tubocurarine 10μ1.42 M)孵化与Bp-13毒素μM和3.56μM浓度和抽搐的反应被记录在超大的肌肉直接刺激脉冲的70 V, 0.1赫兹在2女士持续时间。二价离子的影响,毫克^{2 +}、锰^{2 +},老^{2 +}和光盘^{2 +}(10毫米),Bp-13解放军₂活动是由更换Ca^{2 +}(1.8毫米)的营养Tyrode解决方案;更换Ca^{2 +}由老^{2 +}(4毫米)也化验。温度的影响(5 - 60°C)在20分钟阅读在425海里。

的二腹肌cervicis (BC)准备暂停在5毫升器官含柠檬酸溶液(4.69 118.6作文mM:氯化钠,氯化钾,CaCl₂1.88,KH₂阿宝₄1.17,MgSO₄1.17,NaHCO₃25.0,11.65和葡萄糖),充气carbogen (95% O₂-5%的公司₂在37°C)。双极电极铂环被周围的肌肉肌腱,在其中运行电机神经干。字段使用草S48刺激刺激器设置在0.1赫兹,0.2毫秒,4 - 6 V应用和肌肉收缩和挛缩physiograph通过力-位移传感器记录的同分异构地耦合。肌肉反应体内应用乙酰胆碱(哦,110μ米)和氯化钾(13.4毫米)被记录在缺乏领域刺激毒素除了前和实验结束时(120分钟)。BC制备稳定至少15分钟前添加Bp-13(50 3.56的浓度μ和7.12 g / mL)μ米(100μg / mL)。结果与控制BC准备孵化与克雷布斯独自解决方案。

2.8。统计分析

结果报告为±SEM。差异意味着由单向方差分析评估,其次是Mann-Whitney测试比较两组。被认为具有统计显著性差异。

3所示。结果

3.1。纯化和表征

分离的b . pauloensis通过反相高效液相色谱法(图毒液118)显示,洗脱主要分数:Bp-1 Bp-18。Bp-13,筛选了39分钟,特点是没有描述的解放军₂活跃的毒素(图2(一个))。这个峰值的纯度确认通过rechromatography产物分析μ-Bondapak C18柱和显示一个峰值(图1插入)。

Tricine sds - page和MALDI-TOF质谱分析表明,Bp-13解放军₂提出了一个~ 14 kDa的分子质量(图2 (b)Da(图14035.628)和3),分别。氨基酸分析显示以下成分:Asx / 9日Glx / 5, Ser / 4 g / 13日/ 2,Arg / 5,刺/ 7,阿拉巴马州/ 6,Pro / 11,酪氨酸/ 14,Val / 4,半胱氨酸/ 14日Ile / 3,列伊/ 11日检/ 3,赖氨酸/ 12高内容基本和疏水性氨基酸和14 half-cystine残留。52岁的氨基端序列最初的残留物是如下:DLWQFGKMIL KENGKSPFSF YGAYGCYGGW GGRRKPKDKT TDRCCFVHDC CR。这样的氨基酸测序Bp-13解放军₂股95%序列与其他bothropic解放军身份₂年代(图4)。

3.2。酶Bp-13解放军的表征₂

解放军Bp-13₂活动测量通过合成基质4-nitro-3-octanoyloxy-benzoic酸和1 - 20毫米^{2 +}2毫米后表明,催化活性表达^{2 +},但解放军最大₂活动达到了10毫米^{2 +}(图5(一个))。的条件测试,Bp-13解放军₂显示一个离散allosteric-like行为,主要是在低基质浓度(图5 (b))。估计11.6 nmol /分钟/ mg和吗是11.8毫米(图5 (c))。发展的最佳pH值和温度的最大酶活性(图8.35 (d)(图)和~ 38°C5 (e)),分别。添加锰^{2 +}、镁^{2 +},老^{2 +}和光盘^{2 +}(10毫米)的低^{2 +}浓度(1毫米)降低酶的活性;Ca的替换^{2 +}由锰^{2 +}、镁^{2 +},老^{2 +}或光盘^{2 +}(10毫米)在缺乏Ca^{2 +}(0毫米)也减少了解放军₂活动(图5 (f))。此外,预培养和尿素(4米)的酶活性没有显著影响Bp-13(数据没有显示)。

3.3。神经肌肉活动

分析研究Bp-13解放军的神经肌肉活动₂进行了使用禽流感BC准备和啮齿动物的患产后抑郁症和联盟准备。毒素诱导时间和浓度和不可逆转的twitch-tension封锁。在患产后抑郁症的准备,所需的时间瘫痪在应对7.12 50%μ米(),3.56μ米(),1.42μ米()Bp-13解放军₂是18±1分钟,28±3分钟,和120±4分钟,分别为();Bp13 0.71μM浓度诱导瘫痪后25%相对于控制(120±2分钟)(图6(一))。Bp-13解放军的催化活性₂相似的1或10毫米的营养浴患产后抑郁症的准备。添加毫克^{2 +}、锰^{2 +},老^{2 +}和光盘^{2 +}(10毫米)营养缺乏Ca Tyrode解决方案^{2 +}或1毫米的Ca^{2 +}显示重大损失的催化活性的毒素,表明这些二价离子代替不了Ca^{2 +}中国人民解放军的发展₂催化活性。更换1.8毫米Ca^{2 +}由老4毫米^{2 +}在Tyrode解决方案阻止Bp13解放军的屏蔽效果₂(3.56μ米)自twitch-tension响应显示83.7±14%后120分钟的振幅孵化并没有不同于控制制剂(图的基线6 (b))。这一发现表明,calcium-dependent Bp-13的神经肌肉阻断作用。

温度的影响(5°C-60°C)的催化活性Bp-13解放军₂表明最优酶活性发生在38°C(图6 (c)插入)。神经肌肉阻滞是防止温度孵化时设置在24°C;120分钟后,twitch-tension反应是37.4%比90%在37°C,人物6 (c)。患产后抑郁症的准备之前接受d-Tc (10μ米)和直接电刺激下显示Bp-13(1, 42岁和3.56μ米)能引起显著的挛缩其次是封锁的收缩反应(73±7%和14±6%,分别,,图6 (d))。

在反伊斯兰教英国防御联盟准备,所需的时间50%瘫痪在3.56μM Bp13解放军₂浓度是120分钟±2分钟(图7)。作为显示在图中7反伊斯兰教英国防御联盟准备的收缩反应,保持稳定的60分钟期间,无论反伊斯兰教英国防御联盟在正常Tyrode解决方案或孵化Tyrode Ca的解决方案^{2 +}(1.8毫米)被老所取代^{2 +}(4毫米)。Bp-13 (3.56μ米)除了引起显著的封锁的抽动张力达到90%后80分钟的毒素除了正常Tyrode解决方案。更换1.8毫米Ca^{2 +}由老4毫米^{2 +}也完全避免这种毒素引发的神经肌肉阻滞(3.56μM)是持续到最后的观察(180分钟,,)。同样,温度下降至24°C预防抽搐张力的封锁反伊斯兰教英国防御联盟准备(没有显示)。

关于禽流感的准备工作,这是表明,他们表现出更低的感性Bp-13解放军₂哺乳动物的准备工作。Bp-13解放军₂(3.56和7.12μ米)诱导不可逆转但轻微抽搐张力的减少21±6%,28±2% 120分钟后,分别(图8(一个))。对乙酰胆碱的反应(哦,110μ当Bp-13解放军M)是重要的₂浓度是7.12μ米()。相比之下,Bp-13解放军₂不管浓度,3.56或7.12μ米,不干涉氯化钾(13.4毫米)诱导挛缩(图8 (b))。

4所示。讨论

Bp-10和Bp-11 (K49解放军₂同源Bnsp 6和Bnsp7) [8),Bp-14和Bp-15 (Asp49解放军₂NeuTX-I和NeuTX-II) (12),和Bp-12 (Lys49解放军₂)[11)已经证明了的b . pauloensis蛇粗毒液。有趣的是,另一个Asp49解放军₂Bp13,相同的具窍蝮蛇属物种毒液现在孤立和生化反应和药物。这样一个计划的多样性₂亚型的毒液同一物种证据开发有效的方法净化的必要性和识别不同的亚型毒液分数,否则被认为是均匀的。更适合反净化Bp-13解放军₂比其他传统方法之前描述其他毒素的毒液,因为它只需要一个色谱步骤(19,22,27]。

Bp-13解放军的纯洁性₂证实了rechromatography产物分析μ-Bondapak C18柱。sds - page显示Bp-13的单体的性质和相对分子质量的~ 14 kDa,它证实了MALDI-TOF质谱的分子质量达14035.628。MALDI-TOF / MS蛋白质分子质量测量的精度达0.1%;因此,这种特性使我们能够证明Bp13是另一个计划₂同种型中具窍蝮蛇属pauloensis毒液,就像其他bothropic解放军₂亚型(19,22,27- - - - - -32]。

Bp-13解放军的氨基酸组成₂表明这解放军₂是一个基本的蛋白质,因为它拥有更基本的残留物(Arg,他和赖氨酸,总19)比酸残留(Asx / Gnx,总13),14 -半胱氨酸一半,也因为这种蛋白质显示高含量的残留酪氨酸,Pro,通用电气,和赖氨酸是一篇作文,其他催化活性bothropic myotoxins如6 - 1解放军₂并以中国人民解放军₂亚型的b . jararacussu或BaTX,一个基本的计划₂从b .虫(22,27]。

在Asp49解放军₂,守恒的氨基端螺旋区域形成一个疏水通道涉及L2,第四季度,F5, 19。相反,解放军之间身份的水平₂s是非常高的^{2 +}循环序列YGCXCGXGGRG 24到34(残留物)和活性部位(残留42-54 DRCCFVHDCCYXK) (22,33- - - - - -35]。G30,守恒的残留至G32、Asp49, H48, Y52 Bp-13解放军直接或间接相关₂催化。的n端氨基酸序列的第一个52 Bp-13解放军的残留物₂显示了这些地区高度保守的和与催化活性直接相关。

Bp-13解放军₂文中分析显示一些重要的突变的存在n端序列(52残留物)。因此,Bp-13解放军₂显示K7 - > Q7、N13 - > T13, F20 - > R34 - > G34,日元和F46 - > Y46战略位置表达式的催化活性。在Bp-13 K7解放军的存在₂表明这种残渣可以有助于保持疏水腔氨基地区的构象。氨基通道出现在人民解放军₂酶是高度保守的,为解放军提供访问脂质衬底₂催化部位。Bp-13也显示在位置13刺残渣的缺乏通常发现在其他人民解放军₂年代酶;然而,BnpTX-I (A13 - > T13)和NeuTx-I (A13 - > T13)也显示突变为极地残留在这个位置,这表明这个职位并不守恒和解放军的结构特征₂的b . pauloensis。观察相同的16个位置,但在这种特殊情况下这个位置保存其疏水性。尽管变化,Bp-13仍然保持催化活性,表明这些残留没有Bp-13活动的重要作用[33,36]。

Breithaupt [37)报道,Crotalus中国人民解放军₂显示经典Michaelis-Menten行为。然而,人民解放军₂活动的Bp-13b . pauloensis显示了一个离散allosteric-like行为,这个活动是增强的存在甚至低的Ca^{2 +}浓度。中国人民解放军₂从c .什麽terrificus毒液展品典型的解放军₂活动,因为它水解合成基质在位置2和优先攻击基质胶束状态(24,37]。同样,Bp-13解放军₂展品与别构行为11.6 nmol /分钟,11.8毫米。

然而,在低浓度的合成基质,Bp-13解放军₂显示一个s形的动力学行为;这种现象被观察到的其他Crotalinae解放军₂年代(2,22,38- - - - - -40),这表明这些酶的变构行为。酶的变构术语最初是使用动态属性改变配体的存在(感受器)不显示任何衬底结构相似。别构酶显示数量的属性,区分nonallosteric的。s形动力学速度衬底的曲线,效应物的存在,以及聚合物结构的一些真正的变构酶的性质。对于Crotalinae D49-PLA₂,sds - page没有减少代理显示弱乐队在~ 28 kDa [2,40表明一些分子的数量这些酶二聚的形式存在,可以观察到酶的行为负责。

Bp-13解放军₂耐高温和酸是解放军₂年代从Crotalus d cascavella(38,41),c·d·collilineatus,拉克西斯问好问好(42]毒液;Bp-13最佳活动在酸碱8.3和灭活在高于9,像解放军₂从c . mitchelli皮拉斯(24),c·d·terrificus(43),而b . neuwiedi(44蛇的毒液。最大酶活性发生在~ 38°C和持续60°C,表明热稳定酶。

药物,对于其他类型的解放军₂,Bp-13解放军的活动₂被证明是完全Ca^{2 +}端依赖(45]。coincubation Bp-13解放军₂与其他二价离子(毫克^{2 +}、锰^{2 +},老^{2 +}和光盘^{2 +}Ca)在1毫米^{2 +}或者在Ca^{2 +}没有酶活性降低或取消。

Ca^{2 +}替换老4毫米^{2 +}废除了神经肌肉封锁。众所周知,钙离子是必不可少的代数余子式的有毒和无毒的磷脂酶的酶活性₂(46]。几个二价离子,包括老^{2 +},可以绑定到相同的Ca的网站^{2 +},使神经肌肉传导;然而,这种离子不替代Ca^{2 +}在催化过程47- - - - - -50]。因此,观察神经肌肉效果Bp-13 Ca^{2 +}端依赖表明,酶活性可能贡献等影响neuwieditoxin我和neuwieditoxin II, Asp49解放军₂从b . pauloensis(12]。同时,降低孵化浴的温度24°C废除Bp-13表明,酶活性的神经肌肉效果有一个角色在患产后抑郁症的神经肌肉动作和联盟准备。这样的发现是类似于一个观察到Galbiatti et al。14)与Bmaj-9解放军₂从b . marajoensis毒液,也是Asp49解放军₂。同样,高催化活性被发现在neuwieditoxin-I和——Asp49解放军₂年代,还与温度有关的的神经肌肉阻断剂(12]。Ca的依赖^{2 +}和需要的温度等于或超过30°C Bp-13确定酶活性的毒素作为一个典型的Asp49解放军₂。

Bothropic表面变质不会引起神经毒性临床症状,但是一些实验研究表明,一些物种的毒液引起神经肌肉阻滞在体外(8,11- - - - - -14,32,51,52)和诱导外周肌肉无力[迹象6,53]。

Borja-Oliveira et al。54)报道,b . pauloensis粗毒液的直接诱发肌肉收缩引起局部封锁BC的准备工作;2007年,作者建议neuwieditoxin-I和——(Asp49解放军₂年代)b . pauloensis毒液可能是负责毒液突触前神经毒性在体外。然而,结果表明,此BC准备显示低响应Bp-13(少于30%的神经肌肉阻滞)相比,原油毒液。这可能意味着这个新的Asp49解放军₂从b . neuwiedi毒液占肌肉动作,因此不同于neuwieditoxin-I的突触前神经毒性作用和——Asp49解放军₂年代称为Borja-Oliveira et al。12]。

综上所述,这些研究结果确定Bp-13隔绝具窍蝮蛇属pauloensis蛇毒作为Asp49解放军的新成员₂家庭。建议解放军Bp-13₂催化活性可能导致神经肌肉的效果已经报道粗毒液的啮齿动物的准备。建议的主要效应Bp-13毒素似乎在纤维肌纤维膜、突出的老鼠准备。在公元前的准备,解放军Bp-13₂显示小神经肌肉的效果。这项研究是一个额外的贡献对理解造成的毒性作用具窍蝮蛇属pauloensis粗毒液。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢p . a . Baldasso先生和g·b·雷特先生的技术支持。这项工作得到了巴西研究机构(CNPq FAEPEX,和)的支持。乔治娜Sucasaca-Monzon从CNPq奖学金的获奖者。玛丽亚爱丽丝da Cruz-Hofling研究员从CNPq IA(水平)。

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