表达uPA、tPA和PAI-1钙化的主动脉瓣

文摘

目的。和我们的physiopathological假设是u-PA,药t - pa, PAI-1释放由钙化主动脉瓣和扮演一个角色在这些阀门的钙化。方法。六十五收集钙化主动脉瓣主动脉瓣狭窄患者解除痛苦。每个阀门在培养基培养24小时。上层清液是用来测量u-PA、t-PA PAI-1浓度;使用双光子吸光测定法评价心脏瓣膜钙化。结果。主动脉瓣狭窄阀门表达正常的纤溶酶原活化剂浓度和过表达PAI-1物(和PAI-1意味着u-PA,药t - pa,浓度,分别地。1.69 ng / mL±0.80, 2.76 ng / mL±1.33和53.27 ng / mL±36.39)。之间没有相关性u-PA和PAI-1 (),但t-PA和PAI-1彼此有紧密的关联()。过度的PAI-1阀门的钙含量成正比。结论。我们的结果显示一个一致的增加PAI-1钙化成比例。PAI-1的过度表达可能是有用的作为一个主动脉瓣狭窄患者的预测指标。

1。介绍

主动脉瓣狭窄(AS)是最常见的瓣膜病在许多西方国家和代表一个重大医疗负担(1- - - - - -4]。它与显著的死亡率和发病率。患病率随着年龄的增加,使其影响大约3%的老年人口,瓣膜置换,它是最常见的原因(5,6]。这些病理的主要生物学特性观察主动脉瓣钙化和相当重塑的细胞外基质(7(ECM)。ECM重塑是参与各种生理和病理8)流程和取决于不同类型的蛋白酶的激活包括血纤维蛋白溶酶、纤维蛋白溶解系统的关键酶(9]。

纤溶酶原激活物物在纤溶系统,组织类型纤溶酶原激活物(t-PA)和urokinase-type纤溶酶原激活物(u-PA)负责丰富的细胞外的转换酵素原纤溶酶原转化为物活性蛋白酶血纤维蛋白溶酶,纤维蛋白溶解的关键酶(10]。循环t-PA主要参与激活纤溶酶原在循环血液凝结物的溶解纤维蛋白(10]虽然u-PA,分泌的正常和肿瘤细胞来源的多样性,结合其特定的细胞受体(u-PAR) [11)并生成血纤维蛋白溶酶在细胞表面,这一过程促进ECM降解和细胞迁移/入侵[12]。

纤溶酶原激活物物(PAs)似乎主要参与pericellular蛋白水解作用[13,14)和他们的表达相关的许多生理和病理过程(11,14- - - - - -19]。plasmin-generating活动t-PA和u-PA PAI的控制下不是生理抑制剂。PAI-1、PAI-2 PAI-3能够中和不是通过配体绑定和复杂的形成(11,20.]。PAI-1是纤溶酶原激活物物的主要生理抑制剂(21]。在大多数的生理条件和在各种情况下,生产PAI-1足以对抗和克服t-PA或u-PA,但在各种病理条件下,循环PAI-1可能增加的水平(22]。先前的研究已经报道水平的提高PAI-1在一些病理条件如乳腺癌23),myocard违规(24,25),和动脉粥样硬化26]。

本研究的目的是,首先,要确定u-PA, t-PA, PAI-1水平文化媒体孵化与主动脉瓣狭窄阀门使用不同的ELISA试剂盒,在第二步调查是否有相关性的不同演员纤溶系统,然后将他们的价值观与瓣膜钙含量。

2。材料和方法

2.1。阀组

六十五主动脉瓣狭窄阀门收集病人的心脏手术后立即Bichat-Claude伯纳德医院在巴黎(法国)依照法国道德法(L L 1235 - 2和1245 - 2的公共卫生立法)和作为一个正在进行的前瞻性研究(GENERAC-ClinicalTrials.gov,NCT00647088;伦理委员会的协议。0711662 (CPP巴黎巴黎1-Hotel-Dieu))。调查符合赫尔辛基宣言中概述的原则。

2.2。制备条件的媒体与主动脉瓣狭窄阀门

阀门在DMEM培养基孵化用抗生素(青霉素100 U /毫升,100 ng / mL链霉素,和0.05 ng / mL两性霉素B) (3 mL / g组织(湿重))24小时37°C公司5%₂-95%的空气氛围。的媒体和阀门被冻结在−20°C。

2.3。使用ELISA检测纤溶酶和抑制剂

尿激酶浓度和tissue-plasminogen活化剂(u-PA t-PA)以及纤溶酶原激活物inhibitor-1 valve-conditioned媒体(PAI-1)测量,用ELISA检测根据制造商的指示(连字符生物医学和Technoclone)。由于缺乏对照组,纤溶酶原激活物的水平和抑制剂的条件获得媒体的病理阀门比较每个蛋白质的正常范围根据设备使用的ELISA。和正常人血浆u-PA,药t - pa, PAI-1≤5 ng / mL,≤10 ng / mL,分别和≤25 ng / mL。

2.4。量化钙化的阀门

用(“双能x线吸收仪”)是一种非侵入性技术来确定人类或动物身体的成分。每个阀门的钙含量测定,体外骨基质的内容,这种技术使用PixiMus密度计(月球Corp .)、麦迪逊、WI)。

2.5。统计分析

结果报告为±标准差。u-PA水平之间的相关性分析,t-PA PAI-1,与主动脉瓣狭窄阀门的媒体,是由斯皮尔曼系数的计算。斯皮尔曼ρ()和概率()值修正关系表示。值高于0.5被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。组织的特点

收集六十五年主动脉瓣心脏手术后立即从主动脉瓣狭窄患者。病人手术的平均年龄是75年;62%的患者是男性,38%是女性。意味着BMC的阀门(表1)。


	总没有。	女	男性

数量的分	65年	22	43
平均年龄(岁)	75年	80年	72年
钙含量(g / g湿重)

3.2。和PAI-1 u-PA,药t - pa,条件媒体的阀门

样品的条件培养基与纤溶酶原激活物物的阀门进行分析微量滴定ELISA, u-PA和t-PA。u-PA和t-PA测量主动脉瓣狭窄患者之间的水平略有不同,范围从0.33到3.75 ng / mL, 0.84到6.93 ng / mL,分别。的平均浓度u-PA和t-PA整个研究条件媒体1.69 ng / mL±0.80和2.76 ng / mL±1.33,分别。

所有的阀门研究显示正常u-PA t-PA浓度(数字1(一)和1 (b))相比,正常的人血浆范围根据u-PA和t-PA ELISA设备(上限所示的水平线在5 ng / mL u-PA t-PA和10 ng / mL)。

(一)

(b)

(c)

图1

和PAI-1 u-PA浓度,药t - pa,条件与主动脉瓣狭窄阀门媒体。所有的主动脉瓣狭窄阀显示正常u-PA (a)和t-PA (b)的浓度,和45阀显示PAI-1水平升高(c)相比,正常的人血浆范围根据u-PA, t-PA, PAI-1微量滴定ELISA设备(上限是5点显示为红色水平线ng / mL, 10 ng / mL,和25 ng / mL, u-PA, t-PA,和PAI-1 resp)。。:主动脉瓣狭窄。

所有的媒体和阀门也分析了PAI-1微量滴定ELISA。条件媒体PAI-1之间显著不同水平之间的主动脉瓣狭窄患者,3.47和176.19 ng / mL。PAI-1的平均浓度在整个研究的媒体是53.27 ng / mL±36.39。

45六十五病态的阀门(69%)显示PAI-1水平升高(图1 (c))相比,正常的人血浆范围根据设备的PAI-1 ELISA(上限的水平线显示25 ng / mL)。

3.3。和u-PA的水平之间的相关性,药t - pa, PAI-1条件媒体的阀门

微弱的相关性被发现之间u-PA和PAI-1 (,)在媒体条件与主动脉瓣狭窄阀门(图2(一个)),然而,一个重要的相关性被发现t-PA和PAI-1之间相同的样品(,)(图2 (b))。

(一)

(b)

3.4。和钙PAI-1 u-PA,药t - pa,阀门

没有显著差异的平均浓度u-PA和t-PA不同群体之间的BMC阀门但PAI-1的平均浓度增加阀门的钙化程度的函数。的阀门和钙含量低于0.2 (g / g湿重)的平均浓度PAI-1 42.47 ng / mL±32个,增加到78.75 ng / mL 36±当钙离子浓度高于0.4(表2)。


数量的阀门	钙含量(g / g湿重)	u-PA (ng / mL)	t-PA (ng / mL)	PAI-1 (ng / mL)

65年
31日	< 0.2
31日	0.2 - -0.4
3	> 0.4

u-PA: urokinase-type纤溶酶原激活物;t-PA: tissue-plasminogen活化剂;PAI-1:纤溶酶原激活物抑制剂1。

4所示。讨论

主动脉瓣狭窄(AS)是最常见的西方国家和valvulopathy的第二个原因是冠状动脉旁路手术后心脏手术。65年人类主动脉瓣患有主动脉瓣狭窄进行分析研究。手术患者的平均年龄是75岁,这可能是缓慢的进化相关的病理变化。这个结果证实的高患病率的老人。手术患者是男性的百分之六十二,按照之前的临床研究结果与钙化的主动脉瓣疾病有关,显示男性与一个双重的风险增加有关27]。

阀门的特点是钙化和ECM重塑。ECM重塑取决于不同类型的蛋白酶的激活包括血纤维蛋白溶酶、纤维蛋白溶解系统的关键酶(9]。

纤溶系统的活性酵素原叫纤溶酶原。物后者可以激活纤溶酶原激活物物u-PA或者t-PA转化为胞浆素。血纤维蛋白溶酶可以降解纤维蛋白和ECM直接从纤维化和保护组织(11]。在所有纤维蛋白溶解组件,PAI-1在心血管疾病的病理生理学中起着核心作用。这是u-PA和t-PA的主要生理抑制剂。等离子体PAI-1调节血纤维蛋白溶酶级联的交互与t-PA或u-PA [28]。

在本研究中,我们证明了阀门释放酶的纤溶系统u-PA t-PA, PAI-1条件媒体24 h后的孵化。这些阀门表达正常的纤溶酶原活化剂浓度但过表达PAI-1(物和PAI-1 u-PA的平均浓度,药t - pa,所有的学习条件媒体,分别地。,1.69 ng / mL±0.80, 2.76 ng / mL±1.33和53.27 ng / mL±36.39)。尽管u-PA和PAI-1(没有联系,),t-PA PAI-1彼此有紧密的关联(,)。

本研究的一个限制是,我们没有控制阀门;因此,纤溶酶原活化剂和物抑制剂水平获得病理条件媒体的阀门比较每个蛋白质的正常范围根据设备使用的ELISA。

45六十五病态的阀门(69%)显示PAI-1水平升高。几组报道PAI-1过剩在人类动脉粥样硬化斑块26,29日,30.]。这些研究表明,PAI-1扮演重要的角色在动脉粥样硬化、心血管病理与阀门(几相似之处31日]。PAI-1表达的增加可以灭活t-PA在流通。因此,较低水平的t-PA抗原或t-PA / PAI-1复杂和自由u-PA反映大纤溶潜力和蛋白水解过程中阀门。

阀门的特点是一个重要的钙化和ECM重塑与炎症过程7,32,33]。这可能是所有这些扰动与更高水平的PAI-1相关联。此外,在纤溶系统的研究了酶,只有PAI-1钙化的浓度增加功能水平的阀门。这已经证明纤溶酶原抑制剂起着重要的作用在血管钙化物34]。除了纤溶系统的作用,PAI-1或serpin E1扮演了一个角色在许多人类血管疾病,和最近的研究显示,另一个serpin serpin E2也称为蛋白酶nexin-1 (PN-1)系统相对于PAI-1,是由大多数血管和血液细胞(35]。这个serpin significantcontribution凝固的监管对凝血酶和纤维蛋白溶解的行动活化剂的纤溶酶原和胞浆素物;因此,它可以影响血管病变的血管重建和发展(36]。然而这些serpins的确切作用在人类血管疾病的发展还不清楚。

几项研究已经报道,尽管增加PAI-1水平在不同病理条件下23- - - - - -26),第一次在这里,我们将演示一个一致的增加PAI-1水平的阀瓣钙化的速度成正比。

5。结论

总之,我们的结果显示一个一致的增加PAI-1内容与钙化和阀门的严重性。PAI-1的过度表达可能是有用的作为一个重要的预测在主动脉瓣狭窄患者的预后指标。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

Najlah Kochtebane接到INSERM-DGRSRT代码08 / M11公路的研究资助。阿卜杜拉Mossa m . Alzahrani和Aghleb Bartegi收到KFU资助科研院长职(130259)。作者要感谢约翰教授Michel接收Najlah Kochtebane m·p·雅各布博士在他的实验室和对她的帮助。

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