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体积 2013年 |文章的ID 594561年 | https://doi.org/10.1155/2013/594561

Chien-Yu Chao-Hung郭,苏菲s w . Wang,皇明,Fu-Chen郭,Bi-Chuang翁,Chun-Chieh Wu Chung-Jung Liu Pei-Yun Tsai Tsung-Cheng李,李伟,林莉Chang Kuang-Hung Cheng Deng-Chyang吴, 长期使用Probiotic-Containing酸奶是一种安全的方法来防止幽门螺杆菌:基于长爪沙鼠的模型”,生物化学研究国际, 卷。2013年, 文章的ID594561年, 7 页面, 2013年 https://doi.org/10.1155/2013/594561

长期使用Probiotic-Containing酸奶是一种安全的方法来防止幽门螺杆菌:基于长爪沙鼠的模型

学术编辑器:藤原Shibasaki
收到了 2013年5月09
接受 2013年10月19日
发表 2013年11月21日

文摘

背景。的抑制幽门螺杆菌(幽门螺旋杆菌)减少幽门螺旋杆菌有关的疾病。益生菌有抑制作用幽门螺旋杆菌目的。我们调查的影响,长期使用的酸奶幽门螺旋杆菌基于蒙古沙鼠”模型。材料和方法。酸奶(包含的补充嗜酸乳杆菌、双歧杆菌lactis等等。)使用。46个沙鼠被分成五组。所有组注射幽门螺旋杆菌5 - 8周。酸奶是如下:集团(Gr):从1到4周;Gr。B从5到8周;Gr。C:从17周牺牲;Gr。D:从第五周的牺牲。沙鼠牺牲在52周。组织学评估根据悉尼系统。结果。积极的利率幽门螺旋杆菌60% (Gr)、75% (Gr。B), 67% (Gr。C), 44% (Gr。D), 100% (Gr。E), Gr。D显示炎症得分较低。只有Gr。E(60%)有肠上皮化生。Gr。D显示更高的il - 10和降低TNF -α比Gr表达。E。结论。长期摄入酸奶可以降低幽门螺旋杆菌感染。酸奶的长期使用会是另外一个策略来管理幽门螺旋杆菌感染。

1。介绍

目前,幽门螺旋杆菌发现感染与慢性胃炎、消化性溃疡疾病,MALT-lymphoma,胃的癌前病变并(萎缩和肠上皮化生),和胃癌。致病机制主要从慢性活动性炎症的胃粘膜溃疡的发展,癌症,和淋巴瘤仍然知之甚少。所以合理利用动物调查可能的发病机制。渡边等。1)表明,幽门螺旋杆菌感染可能引起高分化腺癌根据蒙古沙鼠的模型。蒙古沙鼠可能代表一种有用的动物模型,从而提供一个很好的机会来改善我们的发病机制的理解幽门螺旋杆菌-人类胃疾病有关。

的临床结果幽门螺旋杆菌感染是受几个因素的影响,包括幽门螺旋杆菌应变、炎症的程度和密度幽门螺旋杆菌殖民(2]。因此,永久或长期抑制幽门螺旋杆菌应该减少开发的风险幽门螺旋杆菌有关的疾病(3]。

益生菌的定义是一个足够数量的活微生物物种可能有积极的影响来改变微生物群落的主机和改善卫生条件4]。益生菌已经被证明是有用的治疗急性感染性腹泻等胃肠疾病(5]。它的影响幽门螺旋杆菌-相关的胃肠疾病也感兴趣。先前的研究表明,乳酸菌双歧杆菌被添加到一些发酵乳制品和已知有抑制生长的影响吗幽门螺旋杆菌(6,7];然而,并没有研究调查的影响长期使用这些益生菌在动物模型中,以及益生菌是否摄入能改善炎症和萎缩状态讨论。

在这项研究中,我们调查的影响,长期使用酸奶含有嗜酸乳杆菌、双歧杆菌lactis,乳酸菌发酵剂,保加利亚和链球菌嗜热微生物幽门螺旋杆菌根据蒙古沙鼠感染的模型。

2。材料和方法

实验设计是通过动物研究委员会高雄医学大学。

2.1。动物和住房

8-week-old沙鼠的体重30 - 40通用购买从高雄医科大学实验动物中心,高雄,台湾。在平常时间,4到5沙鼠每笼被安置和维护标准的实验室条件下(室温23°C ~ 26°C;相对湿度55% ~ 65%;12/12-hour光/暗周期),免费获取商业啮齿动物的饮食和自来水。

2.2。酸奶的制备

AB酸奶(总统Corp .,台南,台湾)的补充嗜酸乳杆菌、双歧杆菌lactis,乳酸菌发酵剂,保加利亚和链球菌嗜热微生物含有酸奶,在这项研究中使用。酸奶含有至少 活的生物体/ 200毫升。酸奶拌了饮用水。

2.3。幽门螺旋杆菌接种

沙鼠被随机分配到五组根据随机数字。(安妮)。所有组注射幽门螺旋杆菌[CagA (+) / VacA(+)]在5日8周。酸奶是不同的时间组织模拟。A组:酸奶是美联储每天在1日至4日。B组:酸奶是美联储在8日星期5。C组:酸奶是美联储从17周的牺牲。D组:酸奶是美联储从第五周的牺牲。然后,所有组转向热压处理过的蒸馏水作为饮用水。52实验周,动物禁食24小时之前被牺牲了(图1)。

2.4。胃黏膜的组织学评价幽门螺旋杆菌来华的沙鼠

样品从每个沙鼠胃切除的胃粘膜的评估存在的H幽门和胃炎症使用染色和hematoxylin-eosin(他)染色组织学检查,分别。样品缓冲福尔马林固定在10%和嵌入在石蜡作为先前提到的方法8]。两个经验丰富的病理学家,不知道治疗,盲目进行组织学检查。标本得分根据更新后的悉尼分类体系和胃炎的分级9]。粘膜炎症的组织学特征和肠上皮化生评估每个标本在光学显微镜下根据悉尼的分类系统。炎性细胞浸润的程度和面积萎缩和肠上皮化生得分如下:0,正常;1、温和;2、温和;3、明显。

2.5。蛋白质的提取和分析il - 10和TNF - 在胃粘膜表达蛋白免疫印迹

冷冻胃组织中均质裂解缓冲(100更易Tris-HCl, pH值7.4,15%的甘油,2更易与EDTA, 2% SDS, 100更易与DDT)的1:20稀释的抑肽酶,1:50 100稀释更易PMSF。大约100毫克的细胞蛋白提取被加载到一个,分开electrophoretically 13.5% SDS聚丙烯酰胺凝胶和转移到Sequi-Blot TMPVDF膜(美国Bio-Rad大力神,CA) electroblotting。西方墨点法进行与多克隆老鼠反应anti-IL-10 anti-TNF - 从圣克鲁斯生物技术购买,而单克隆抗- 肌动蛋白抗体和GAPDH是来自σ。使用BM可视化通过化学发光免疫复合物的化学发光印迹基质(勃,曼海姆,德国)和发展膜被暴露在一个x射线胶片(柯达、威斯巴登、德国)。计算机辅助扫描测密度术(总实验室;亚伯)被用来分析免疫反应性的乐队的强度。

2.6。粪便收集和文化双歧杆菌属

我们收集了大约0.2克新鲜粪便的沙鼠酸奶后给出两个星期。粪便样本在4°C在冰箱里储存和转移双歧杆菌属在4小时内文化出版之前的方法(10]。简言之,湿的一部分粪便检测含水量的百分比在65°C真空炉。增加了3毫升的水和混合大力湿凳子的漩涡。然后在大约1000离心机管 g 5分钟。上层清液提供了到一个干净的管,和沉淀又洗了。每个上层清液汇集在一起。这个过程重复2 - 5倍。一个串行10倍稀释。最后文化,0.1毫升稀释样品分散在盘子的疾病控制中心(CDC)琼脂(美国),医学博士,正欲Cockeysville和孵化厌氧在35°C 48 - 72小时。双歧杆菌属通过菌落形态、革兰氏染色剂被发现。

2.7。统计分析

我们分析收集到的数据用统计软件包占据。Kurskal-Wallis测试是用于比较黏膜的组织学改变。我们还为多个应用Bonferroni调整比较。一个未配对t以及应用于确定不同的细胞因子表达的意义在两组之间。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

有46个沙鼠用于这项研究。沙鼠的数量在每组10 (A组),8 (B组),9 (C组),9 (D组)和10 (E组),分别。在我们的研究中,所有的沙鼠还活着直到实验结束的时候;没有显著差异在不同群体之间的存活率。沙鼠显示胃炎,但只有一个沙鼠在E组溃疡。我们没有找到任何在所有沙鼠肿瘤。所有沙鼠组A, B, C和D显示文化的积极成果双歧杆菌属。

的成功率幽门螺旋杆菌接种100%在e组52周,积极的幽门螺旋杆菌60% (6/10)(A组)、75% (6/8)(B组)、67% (6/9)(C组)和44% (4/9)(D组),分别(如图2)。的密度幽门螺旋杆菌进行调查。它揭示了 (Gr), (Gr。B), (Gr。C), (Gr。D) (Gr E)。这显示一个类似的趋势是积极的幽门螺旋杆菌和最低的密度是Gr之一。c。这表明,酸奶中使用我们的研究可能抑制经济增长幽门螺旋杆菌和Gr的效果明显明显。C ( ,95% CI: 2.09 ~ 0.40−−)和Gr。D ( ,95% CI: 1.82 ~ 0.18−−)。

我们也分析了沙鼠的粘膜炎症的严重程度根据悉尼分类。neutrocyte渗透是Gr的平均划分: Gr B: ,Gr C: Gr D: 和Gr E: ,分别。单核细胞浸润是Gr的平均划分: Gr B: ,Gr C: Gr D: 和Gr E: 分别(如图3)。Gr E显示更高的炎症评分和Gr D显示炎症得分较低。五组之间没有显著差异。然而,这一趋势似乎与积极的利率幽门螺旋杆菌在每一个组。

我们调查在每组(图萎缩的严重程度4)。我们认为萎缩超过2的得分明显萎缩的粘膜改变。明显的萎缩是Gr的百分比:70% (7/10),Gr B: 88% (7/8), Gr C: 78% (7/9), Gr D: 56%(5/9),和Gr E分别为90% (9/10)。萎缩是Gr的平均划分: Gr B: ,Gr C: Gr D: 和Gr E: ,分别。这些团体中没有显著差异。除此之外,我们并没有发现肠上皮化生组A, B, C, d .但60%(6/10)的Gr E肠上皮化生。它显示显著差异( ,95%置信区间CI:−1.30 −0.30)。

为了调查酸奶的影响的可能机制,我们对两组执行免疫印迹(Gr。D:酸奶和Gr的最长使用。E:没有使用酸奶)(数据5(一个)5 (b))。Gr。D显示il - 10水平显著高于Gr。E ( , )。但Gr。D显示一个明显的降低TNF的表达 Gr。E ( , )。

4所示。讨论

许多研究表明益生菌的影响导致减少炎症(11,12]。然而,这些先前的研究没有调查的长期影响益生菌幽门螺旋杆菌。在我们的数据中,我们首先显示的有利影响长期使用含益生菌的酸奶降低严重程度相关的慢性胃炎幽门螺旋杆菌感染。

发展的风险幽门螺旋杆菌相关的疾病可能会增加增加的水平幽门螺旋杆菌密度(13,14]。我们还发现,酸奶可以导致减少幽门螺旋杆菌负载是类似于先前的研究[15- - - - - -18]。所以它可能是合理的假设酸奶可以降低的发生率幽门螺旋杆菌有关的胃肠疾病。在我们的研究中,我们发现,长期使用酸奶的相关更明显降低密度的影响幽门螺旋杆菌

在以前的研究中,益生菌的管理就不会导致根除幽门螺旋杆菌。然而,我们的数据显示,治疗组用酸奶显示积极的利率更低幽门螺旋杆菌比对照组(Gr)。在我们的研究中,我们发现,长时间的酸奶相关使用积极的利率更低幽门螺旋杆菌。除此之外,它也显示这一趋势的早期消费酸奶可能有一些作用,抑制或消灭幽门螺旋杆菌

一般来说,给孩子益生菌不是有害的,但没有很多证明它确实好得多。所以我们设计小组A、B和D模型模拟益生菌用于小孩子。A和B组在我们的研究中模仿Sakamoto设定的模型等。19]。他们透露,恢复probiotic-containing酸奶可以提供好处双歧杆菌属种虫害/大肠杆菌比儿童和抑制幽门螺旋杆菌加载幽门螺旋杆菌来华的孩子。我们的研究也表现出类似的发现抑制的影响幽门螺旋杆菌在Gr更明显比Gr b .这证据显示这一趋势越早使用酸奶,更明显的好处幽门螺旋杆菌抑制。此外,D组代表益生菌长期用于小孩子,所以值得鼓励父母把酸奶给孩子。

胃粘膜屏障对病原菌的第一道防线。我们的研究显示,组A, B, C和D显示明显的影响减少炎症的严重程度。益生菌的机制减少胃粘膜炎症的严重程度还不清楚。有人建议,益生菌的摄入强化这一障碍通过产生抗菌物质,与竞争幽门螺旋杆菌粘附受体,刺激粘蛋白生产、稳定肠道粘膜屏障。某些乳酸杆菌抗胃低pH值,可能坚持和暂时性的居住在人类胃10,20.]。然而,我们没有发现残留的细菌在沙鼠胃。

几项研究使用小鼠模型表明,治疗不同乳酸菌菌株降低幽门螺旋杆菌或h .猫属殖民和减少Helicobacter-induced胃炎症(21- - - - - -26]。减少幽门螺旋杆菌密度和胃炎症也观察到在特定无菌鼠处理l .干酪乳杆菌应变(冻干23]。然而,这些模型有一定的局限性。一个是没有长期的治疗时期,所以他们无法证实长期使用的安全性和有效性。使用益生菌和严重感染病例发生在那些免疫妥协和已报告在文献[27- - - - - -35),所以我们也监控这个可能的副作用。幸运的是,没有严重的副作用的证据指出在这个研究。另一个原因是,蒙古沙鼠的模型是一个更合适的模型来测量幽门螺旋杆菌相关的临床结果甚至致癌,像其他动物模型没有透露类似的结果。在我们的研究中,我们的沙鼠的模型表明,长期使用酸奶是安全的和有效的减少通过抑制炎症的发展幽门螺旋杆菌。所以我们建议蒙古沙鼠是一个可靠的模型测量长期影响益生菌幽门螺旋杆菌有关的胃肠疾病。在进一步的研究中,致癌物质可能被添加在这些模型来调查保护作用的益生菌胃癌的致癌作用。

在大多数研究中,益生菌治疗水平的影响幽门螺旋杆菌感染估计间接的尿素呼气试验(UBT) [15- - - - - -17,36,37]。在我们的研究中,我们使用组织学结果作为评价的标准。我们认为这个方法可以反映出真正的酸奶的效果。

以前的动物研究表明,益生菌乳酸菌的影响可以通过免疫介导的监管,特别是通过控制促炎和抗炎细胞因子的平衡,这就会导致胃活动的减少和炎症(38,39]。然而,这些之前的研究都是短期的模型。我们的研究显示重要的信息关于长期使用益生菌的影响细胞因子的变化。在我们的研究中,长期使用的益生菌会导致增加il - 10的表达和降低TNF - 。这些变化会减少胃粘膜的炎症。它可能是更严重的炎症的原因的沙鼠胃粘膜yogurt-fed组。

我们没有引用的限制是益生菌用于沙鼠的数量是否在我们的研究中是否最优。除此之外,益生菌对免疫反应的影响很难推广。独特的益生菌菌株可能产生不同的免疫反应,这反过来,取决于宿主的免疫状态(40]。肠道微生物群和免疫儿童不同于成人的发展。这可能是原因,A和B组有明显的好处。

总之,我们的研究支持产品的效果,长期摄入含有益生菌菌株,即乳酸杆菌的物种,可以预防幽门螺旋杆菌蒙古沙鼠感染。提供了重要建议长期使用酸奶将人类预防安全有效的策略幽门螺旋杆菌感染和酸奶应该尽早使用。

确认

这项工作由拨款支持癌症研究中心卓越格兰特,doh102 - td - c - 111 - 002,卫生部,行政院,台湾,高雄医学大学医院(KMUH99-9R46 KMUH100-0I01),高雄市政Hsiao-Kang医院(立小港- 98 - 029),美国国家科学委员会(NSC 99 - 2314 - b - 037 - 052 - my3),和统一企业集团(B9802)。

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