慢性肾脏疾病的不同阶段的影响和肾脏替代疗法在尿毒症患者Oxidant-Antioxidant平衡

文摘

似乎氧化应激参与路径生理学心血管并发症的慢性肾脏疾病(CKD)。在这项研究中,我们确定CKD的不同阶段的作用和替代疗法在氧化应激。一百六十七例(年龄:年;男/女:76/91)与CKD被分成6组根据国家肾脏基金会的分类。Prooxidant地位是评估分析硫代巴比土酸活性物质,氢过氧化物和蛋白质羰基。抗氧化防御是由分析超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶,谷胱甘肽还原酶、维生素E、铁和胆红素。TBARS法律流程外包和更高的HD患者比其他组(),而蛋白质羰基更增加了PD患者。抗氧化酶的拒绝已经在CKD的严重阶段,他们拒绝特别是HD患者()。类似的观察发现了维生素E、铁、胆红素,我们观察到显著减少大多数学习小组,特别是在HD患者()。CKD的进化与提升操作系统。高清强调了脂质,而PD加剧蛋白质氧化。然而,抗氧化酶的活性被受损的肾功能改变,由透析治疗。

1。介绍

心血管疾病(CVD)是发病率和死亡率的主要风险在慢性肾脏疾病(CKD)患者(1,2]。尿毒症患者既有传统心血管风险因素(CV)(即。,old age, hypertension, diabetes, smoking, dyslipidemia, heart failure, and physical inactivity) and nontraditional CV risk factors, including malnutrition, anemia, hyperhomocysteinemia, neuropathy, hyperparathyroidism, and chronic inflammation [3- - - - - -5]。终末期肾病(ESRD)患者进行肾脏替代治疗(RRT)、血液透析(HD)或腹膜透析(PD),可能会面临一些低分子量的部分损失等离子体(即因素。维生素A, C, E) (6,7),通常与炎症中和活性氧(ROS) (8]。事实上,后者是增加两个治疗期间(9]。氧化剂因素生成一个失衡在抗氧化和氧化应激(OS)增加炎症状态已经存在于这些病人。

近年来,操作系统已被假定是心血管疾病的重要危险因素(10]。操作系统之间不平衡的结果prooxidant和抗氧化防御机制与水平的提高prooxidants导致组织损伤(10]。抗氧化剂可分为细胞内和细胞外的抗氧化剂。胞内酶的抗氧化剂是超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-GPx),将基板(超氧化物阴离子自由基和过氧化氢)更少的被动形式。各种细胞外的抗氧化剂,如减少谷胱甘肽(GSH)、胆红素、尿酸,和铁(Fe),防止自由基(FR)反应通过隔离过渡金属离子螯合在等离子体10]。

许多研究证明增加OS CKD患者,包括活性羰基化合物的积累的标记蛋白升高过氧化反应(10- - - - - -12)和硫代巴比土酸浓度的增加活性物质(TBARS)、丙二醛(MDA)和氢过氧化物(法律流程外包)作为标记的高脂质过氧化作用[13,14]。

操作系统在病人接受特别有害的高清每次透析会话后,由于接触血液透析膜,面临着慢性赤字在抗氧化防御系统12]。

因此,这项研究是为了确定CKD的不同阶段的影响,血液透析、腹膜透析和脂质过氧化作用,蛋白质氧化和抗氧化防御。

2。对象和方法

2.1。病人

这项研究是167年进行的CKD患者。病人被分成6组根据国家肾脏基金会的分类(NKF) [15]。他们包括肾小球滤过率(GFR)患者28等于86.28毫升/分钟(CKD 1),肾小球滤过率(GFR)患者28等于46毫升/分钟(CKD 2),肾小球滤过率(GFR)患者28等于20.31毫升/分钟(CKD 3),肾小球滤过率(GFR)患者18等于10.75毫升/分钟(CKD 4), 40血液透析(HD)患者,25腹膜透析(PD)患者(表1)。

我们排除在研究患者临床症状的感染(乙型肝炎和丙型肝炎)、恶性肿瘤、活跃的免疫性疾病,和免疫抑制或免疫调节和抗炎药物(即。隐藏细胞因子释放的条件)。我们也排除糖尿病和肾病综合症患者因为糖尿病可以引起炎症反应和操作系统。没有一个病人服用降脂药物或抗氧化补充剂。病人服用抗高血压药物、钙、维生素D和促红细胞生成素。

慢性肾病的病因研究包括高血压(66%),囊性肾脏疾病(14%),肾小球肾炎(6%)、前列腺阻塞(3%),和肺结核治疗(1%),10%的人不清楚。

我们从血清肌酐计算肌酐清除率,通过下面的估计公式:Cockroft和Gault [16肾小球滤过率(GFR)]公式[(1/4)(140−年龄)BW×1.23 / creatinin]。在女性,这个值是乘以0.85。HD患者标准碳酸氢盐使用聚砜膜。患者透析从14到109个月,每周3次,每次持续4 h。PD患者在透析从05年到49个月,使用一个标准的过程(四个交流:3等张1.36%葡萄糖溶液,然后一个高渗葡萄糖3.86%)。我们注意到病人的营养含有少量的蛋白质和磷酸盐。

所有患者治疗肾脏学奥兰的大学医院的病房。本研究的目的是向受试者解释和调查进行了同意。实验研究委员会批准的协议是奥兰的人体试验。

2.2。化验

在所有患者中,12小时后都抽取了血液样本在一夜之间迅速从肘前的静脉穿刺在尿毒症和PD患者和HD患者的透析瘘。我们使用真空采血管管不同抗凝剂在血液样本。管含有肝素锂用于生化实验,这些含有乙二胺四乙酸(EDTA)(8%)用于血液学分析。我们收集等离子显示技术低速离心3000×g在4°C,持续15分钟。新鲜血浆移除,整除,储存在−20°C。

2.2.1。过氧化脂质和蛋白质

脂质过氧化作用估计通过测量硫代巴比土酸活性物质(TBARS)和氢过氧化物(法律流程外包)。TBARS浓度测定的方法Quintanilha et al。17),使用tetramethoxypropane (Prolabo)作为前体的丙二醛(MDA)。一毫升血浆稀释(蛋白质含量约2毫克/毫升)加入2毫升的硫代巴比土酸(0.017最终浓度,更易/ L)和丁羟甲苯(浓度、3.36更易/ L)和孵化15分钟在100°C。冷却和离心后,上清液的吸光度测量在535海里。数据表示为更易产生的TBARS /毫升的样品。

等离子体也化验,以确定从开曼群岛法律流程外包的分析工具化学(猫。不。705003);增长率在500 nm的吸光度成正比的法律流程外包生产。

通过测量金属羰基合物浓度氧化蛋白质估计。分析了后者在等离子体从开曼群岛化学分析工具(猫。不。10005020);样品的吸光度测量板的读者之间的360和385海里。

2.2.2。抗氧化剂的测量

抗氧化酶活性测定红细胞。超氧化物歧化酶(SOD);EC 1.15.1.1)活动确定了σ化学用品(猫。不。19160)在450 nm通过测量超氧化物自由基的歧化作用生成黄嘌呤氧化酶和次黄嘌呤。一个单位被定义为所需的酶产生抑制p-iodonitrotetrazolium率降低50%。

过氧化氢酶(CAT);EC 1.11.1.6;2 h₂O₂氧化还原酶)活性测定与分析工具从开曼群岛化学(猫。不。707002)。猫参与过氧化氢的解毒(H₂O₂)。CAT酶活性可以确定使用peroxidatic猫在540 nm的函数。

谷胱甘肽过氧化物酶(氧化酶;EC 1.11.1.9)酶活性测定与分析工具从σ化学(猫。不。CGP1)。氧化酶活力测定间接耦合反应与谷胱甘肽还原酶(GSH-GR)。氧化谷胱甘肽(GSSG),在减少氧化酶有机氢过氧化物的产生,由GSH-GR回收到减少状态,NADPH。NADPH的氧化是nad +伴随着吸光度下降在340 nm和GSH-GPx活动的象征。

谷胱甘肽还原酶(GSH-GR;EC 1.6.4.2)酶活性测定与分析工具从σ化学(猫。不。GRSA)。GSH-GR催化减少GSSG减少谷胱甘肽(GSH)。GSH-GR活动可以通过测量吸光度下降造成的氧化NADRH在340 nm或吸光度的增加引起的减少DTNB 412海里。

维生素E(维生素E)我们测量等离子体从开曼群岛化学分析工具(猫。不。10010621)。样品的吸光度测量板的读者之间的405和420海里。血浆胆红素的浓度和铁(Fe)估计HumaStar 600自动分析仪(德国人)。

2.3。统计分析

使用SPSS 20.0统计分析(IBM SPSS统计;美国)。数据表示为均值±SD(标准差)。变量的分布相比了分析。算术平均值的差异由方差分析评估,调整的多重比较。根据变量的常态分布,对比组进行使用单向方差分析或Mann-Whitney(方差分析)以及当nonparametrically分布结果。所有统计测试是正反,a值低于0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。氧化状态

结果表明,脂质氧化产品的水平(TBARS和法律流程外包)和蛋白质羰基在HD和PD患者相比,显著提高CKD的他人的阶段()(表2)。的确,在高清TBARS浓度高出2.4倍,在帕金森病患病率,CKD4的1.5倍高于CKD1患者()。法律流程外包也高出5倍高清,在PD高4.2倍,4.3倍高CKD4比CKD1患者()。在高清羰基高出3.3倍,3.4倍高于PD和CKD4的2.4倍高于CKD1患者()。我们的结果显示增加了相当大的PD患者的蛋白质羰基。事实上,重要的是要注意,后者的水平产品已经增加CKD的第三阶段和第四阶段。

3.2。抗氧化状态

我们的结果在表抗氧化剂状态报告3。我们的研究结果表明,SOD活性下降了高清−60%,−−64% PD, 66%在CKD4 CKD1患者()。猫的活动也显著减少了高清−76%,在PD−82%,比CKD1 CKD4−81%患者()。减少氧化酶活力在HD−52%指出,在PD−64% CKD4−65%相比CKD1 ()。相似的结果观察GSH-GR活动,减少−57%高清,−−66% PD, 62%相比,CKD4 CKD1病人()。

服用维生素E浓度在所有组低,尤其是HD患者,降低−36% CKD1 ()。铁和胆红素浓度也获得了类似的结果,他们两人减少各学习小组在HD患者尤其如此。铁浓度减少了HD患者相比CKD1 (−73%),而胆红素浓度减少−65%左右在HD和PD患者相比CKD1患者()。事实上,严重患者和晚期CKD的抗氧化物酶的浓度显著降低。病人也减少了维生素E铁和胆红素。进一步,这减少在HD和PD患者更为明显。

4所示。讨论

比较研究在CKD患者为了评估脂质过氧化作用,蛋白质氧化和抗氧化防御在慢性肾病的进展和评估透析治疗对氧化还原状态的影响。

病例对照研究同意,CKD患者增加了操作系统之间的不平衡所产生的职业——和抗氧化能力18,19]。这个操作系统负责过氧化脂质和蛋白质等大分子造成重大损害。一些病理生理的解释一直声称;有些人把它归因于营养不良和低白蛋白血症有在这些情况下低可用性的“硫醇”;别人“尿毒症”本身与溶质保留可能支持他们的致病性;协会和其他共病因素,如高龄、糖尿病、炎症和感染现象(20.,21]。此外,当这些尿毒症患者接受治疗一个extrarenal纯化的技术,如高清,操作系统是由几个原因其中低的使用可以使合成膜的生物相容性和缺少超纯透析水脱颖而出22]。

操作系统是高度在CKD患者,这可能有助于内皮激活这早熟的动脉粥样硬化在这些患者有利。仍然需要进一步的调查,以评估抗氧化和氧化剂之间的不平衡因素,特别是有必要调查不同RRT是否达到类似水平的操作系统(18),特别是高危患者心血管疾病发展。此外,不同的RRT氧化状态的影响而undialyzed不同阶段的CKD患者没有被清楚地描述。

在这项研究中,我们发现标记的脂质过氧化作用,增加生产的TBARS和法律事务外包已经明显高于在CKD的严重阶段。此外,我们注意到显著增加蛋白质氧化的生产。羰基增加已经在CKD及其生产的严重阶段加强HD和PD患者。我们的结果与之前的研究相一致,相关的脂质过氧化水平的增加与CKD患者冠状动脉粥样硬化的严重程度(23]。

自由基脂质过氧化作用源于氧气的来源,并对他们的第一道防线是草皮。它的功能是催化转换超氧化物自由基过氧化氢(H₂O₂)。事实上,降低SOD活性在我们的研究中,特别是在HD患者,表明超氧化物阴离子自由基的积累可能负责增加脂质过氧化作用[24]。谷胱甘肽是一种tripeptidic硫醇发现里面的所有的动物细胞和可能是最重要的细胞抗氧化剂。氧化谷胱甘肽(GSSG)是剧毒细胞,使机体往往通过谷胱甘肽还原酶减少GSSG谷胱甘肽。因此,确定GSH-GR被认为是一个可靠的估计程度的移动操作系统(25]。此外,氧化酶负责最分解脂质过氧化和保护细胞免受有害的过氧化物的影响(24]。H₂O₂在足够的猫活动将被转化为无害的H₂O, O₂。我们的病人减少了4个酶的水平;这种减少是HD和PD患者更重要。因此我们的结果解释的原因增加TBARS和法律外包水平。

维生素E的抗氧化作用,保护组织免受氧化损伤(26]。我们的调查证实了先前的研究发现显著降低水平的维生素E在晚期CKD患者尤其是高清(27]。

等离子体浓度基本金属的铁(Fe) HD患者显著低于其他组研究的人口。我们发现病人之间有很强的联系增加等离子体系统和减少铁的浓度。长期HD患者有明显降低血药浓度的铁,和可能的损失的原因这些基本金属研究[28,29日]。事实上,积累FR陪同减少组织的铁浓度和诱导氧化损伤脑组织(30.]。

此外,胆红素浓度是主要的防御系统在细胞外液的结果,生成在体内正常的新陈代谢或介绍饮食消费的产品富含抗氧化剂(29日]。知道我们的HD患者饮食限制摄入肾保健的一部分,这种不平衡的饮食导致重要的操作系统。

此外,在高清人口,透析膜和血液之间的交互可以触发释放oxygen-FR和氧化剂,如超氧化物阴离子、过氧化氢、髓过氧物酶。反过来,这些分子的氧化脂质产品,蛋白质和核酸。这种氧化有几个病理生理学后果,包括增强atherogenicity Ox-LDL,和循环红细胞的加速灭亡,导致寿命短(31日,32]。

我们的患者接受常规治疗PD视为bioincompatible。重复和长期暴露在传统葡萄糖基PD液体等的发病机制中起着重要的作用腹膜膜的功能和结构都发生了变化。低pH值、高葡萄糖浓度、高渗透性和热杀菌代表低生物相容性的主要因素(33]。Bioincompatibility PD的解决方案似乎发挥核心作用的增加活性氧的生产(34]。

总之,我们的研究表明,受损的肾功能和透析治疗的持续时间是增加操作系统。因此减少了抗氧化剂防御导致促进营养不良、炎症和动脉粥样硬化(MIA综合症)。我们的数据表明,病人接受RRT需要新方法旨在减少intradialytic操作系统,如将抗氧化剂治疗纳入透析膜、hemolipodialysis,使用electrolyte-reduced水透析液,或使用一个超纯透析液系统减少急性期炎症。

利益冲突

作者宣称他们没有利益冲突有关的出版。

引用

1. e . l . Schiffrin m . l . Lipman和j·f·e·曼“慢性肾脏疾病:对心血管系统的影响,“循环,卷116,不。1,第97 - 85页,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. g . Tsirpanlis”细胞衰老、心血管风险和CKD:回顾建立和假设之间的联系,“美国肾脏疾病杂志》上,51卷,不。1,第144 - 131页,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. 问:姚明,j . Axelsson p Stenvinkel, b . Lindholm“慢性透析患者全身炎症:更新原因和后果,”ASAIO杂志,50卷,不。6,pp. l3-l7, 2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. y Nishizawa h .小山,“内源性分泌晚期糖化终产物受体和心血管疾病终末期肾病,”肾营养学杂志,18卷,不。1,第82 - 76页,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. h . f . Tbahriti d . Meknassi r·穆萨维et al .,“炎症状态在慢性肾功能衰竭:homocysteinemia和促炎细胞因子的作用,“世界肾脏学杂志》,卷2,不。2,31-37,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. t . p . Lim e . Chan陆et al .,“亲脂性的抗氧化剂和铁状态ESRD患者的血液透析,”肾元,卷86,不。4、428 - 435年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. a . Uzum o . Toprak m . k . Gumustas s·西森和美国,“维生素E治疗对氧化应激的影响和红细胞渗透脆性腹膜透析和血液透析的病人”肾脏学杂志》,19卷,不。6,739 - 745年,2006页。视图:谷歌学术搜索
8. n . d . Vaziri”角色的氧化应激和抗氧化治疗在慢性肾病和高血压,”目前看来在肾脏学和高血压13卷,第99 - 93页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. m·莫雷纳,s . Delbosc a Dupuy称:"现在b . Canaud和j . Cristol“生产过剩的活性氧在终末期肾病患者:hemodialysis-associated炎症的一个潜在的组成部分,“血液透析国际,9卷,不。1,37-46,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. m . Annuk m . Zilmer, b . Fellstrom”Endothelium-dependent血管舒张和氧化应激在慢性肾功能衰竭:对心血管疾病的影响,“肾脏国际,补充卷。63年,S50-S53, 2003页。视图:谷歌学术搜索
11. f,右路放倒b . Canaud k .时候,p . Stenvinkel c . Wanner)和c . Zoccali“氧化应激在终末期肾病:一个新兴的治疗病人的结果,“肾脏透析移植,18卷,不。7,1272 - 1280年,2003页。视图:谷歌学术搜索
12. l . Lucchi s Bergamini a Iannone et al .,“红细胞对慢性肾功能衰竭患者的氧化应激在不同替代治疗,”人造器官卷,29号1,第72 - 67页,2005。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. r·拉莫斯和a . Martinez-Castelao Lipoperoxidation和血液透析,”新陈代谢卷,57号10日,1369 - 1374年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. d . r .苏雷什、美国戴尔芬和r·阿加瓦尔”生化标记物的氧化应激在predialytic慢性肾功能衰竭患者,”香港肾脏病学会》杂志上,10卷,不。2、69 - 73年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. a·s·利维j . Coresh大肠犹豫et al .,“国家肾脏基金会慢性肾脏疾病的实践指南:评估、分类、分层,”内科医学年鉴,卷139,不。2、137 - 147年,2003页。视图:谷歌学术搜索
16. b . Trollfors k Alestig, r . Jagenburg”预测血清肌酐的肾小球滤过率,年龄、性别和体重,”学报》Scandinavica,卷221,不。5,495 - 498年,1987页。视图:谷歌学术搜索
17. a . t . Quintanilha l .封隔器j·m·戴维斯t . l . Racanelli和k·j·戴维斯,“膜的影响缺乏维生素E:生物能量学和表面电荷密度的研究骨骼肌和肝脏线粒体”纽约科学院上卷。393年,32-47,1982页。视图:谷歌学术搜索
18. m . Dirican e . Sarandol z Serdar: Ocak,和k . Dilek“氧化状态和流行的心血管疾病治疗的慢性肾功能衰竭患者血液透析,”临床肾脏病学会,卷68,不。3、144 - 150年,2007页。视图:谷歌学术搜索
19. m·冈萨雷斯Rico m . j . Puchades r·加西亚雷蒙·g·塞斯,m . c . Tormos和a·米格尔“慢性肾功能衰竭患者氧化应激的影响,“Nefrologia,26卷,不。2、218 - 225年,2006页。视图:谷歌学术搜索
20. 黑川纪章t Miyata k、c . de Strihou”相关的氧化和羰基应激长期尿毒症并发症,”肾脏国际,补充卷。76年,S120-S125, 2000页。视图:谷歌学术搜索
21. a·c·Maritim r·a·桑德斯和j·b·沃特金斯”糖尿病、氧化应激和抗氧化剂:复习一下,”生化和分子毒理学杂志》上,17卷,24-38,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. p c .郭c . Wang Chen和t·杨”链接的一些微量元素,外周血淋巴细胞,炎症和氧化应激在接受血液透析或腹膜透析的患者,”腹膜透析国际没有,卷。31日。5,583 - 591年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. c·h·郭,w . s . Ko, p . c . Chen g .徐善慧c . y .林和c·l·王,“改变微量元素和氧化应激的尿毒症患者痴呆,”生物微量元素研究卷。131年,24里面,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. b . Cestaro a·朱利安尼f·法夫里,c . Scarafiotti”自由基、动脉粥样硬化、老化和相关dysmetabolic病态:生化和分子方面,“欧洲癌症预防杂志》上》第六卷,附录1,S25-S30, 1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. j . Valentini g·c·施密特,d .石窟et al .,“人类红细胞δ-aminolevulinate脱水酶活性和氧化应激在血液透析患者中,“临床生物化学,40卷,不。9 - 10,591 - 594年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. r . Kutlubay e·O·Oǧuz, b可以,m . c . Guven z . Sinik, O。l . Tuncay“维生素E保护睾丸损伤引起的腹腔内铝、”国际毒理学杂志》上,26卷,不。4、297 - 306年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. f . Montazerifar m . Hashemi m . Karajibani和m .德里“血液透析改变血脂水平、总抗氧化能力和维生素A、E和C浓度对于人类来说,“杂志的药膳,13卷,不。6,1490 - 1493年,2010页。视图:谷歌学术搜索
28. m . Tonelli n . Wiebe b Hemmelgarn et al .,“在血液透析患者微量元素:系统回顾和荟萃分析,“BMC医学第二十五条,卷。7日,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. d·洛克,r . Thadhani和m . Tonelli“微量元素状态在血液透析患者中,”研讨会在透析,23卷,不。4、389 - 395年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. m . Rambod c·p·Kovesdy, k . Kalantar-Zadeh”相结合的高血清铁蛋白和低铁饱和度在血液透析患者:炎症的作用,“临床美国肾脏病学会杂志》上,3卷,不。6,1691 - 1701年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. n . Malliaraki d . Mpliamplias m·康帕k . Perakis a . n . Margioris大肠Castanas,“总,纠正hemodialyzed患者的抗氧化能力。”BMC肾脏学第四条,卷。4日,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. m·A·索萨e . m .犹豫j .刘et al .,”的效果的系统评价Excebrane渗析膜脂质过氧化反应的生物标记,”肾脏透析移植,21卷,不。10日,2825 - 2833年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. s . Muller-Krebs l . p . Kihm b Zeier et al .,“葡萄糖降解产物导致心血管毒性肾功能衰竭大鼠模型,”腹膜透析国际,30卷,不。1、35 - 40,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. d . c . Tarng t·w·陈黄t . p . c . l . Chen t . y . Liu黄懿慧魏,“增加氧化损伤在慢性腹膜透析患者外周血白细胞DNA,”美国肾脏病学会杂志》上13卷,第1330 - 1321页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2013 Hadja法蒂玛Tbahriti等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。