Prooxidant-Antioxidant平衡脐带血的婴儿羊水胎粪染色

文摘

客观的。使用新颖的试验称为prooxidant-antioxidant平衡(帕布)试验来确定prooxidant-antioxidant平衡脐带血的婴儿与羊水胎粪染色(MSAF)。通过在羊水胎粪与新生儿死亡率和发病率的增加。这种并发症发生在大约15%的婴儿和更广泛的在postterm新生儿。大约1.5%的新生儿与MSAF开发胎粪吸入综合征。方法。血清29脐带血的婴儿MSAF和32个健康婴儿(嗨)收集。两组不抽烟和不含酒精的母亲没有疾病。帕布被测量。结果。有显著增加的帕布值(香港)在婴儿的脐带血MSAF嗨(相比香港)()。帕布价值之间没有显著的相关性和年龄的母亲。结论。帕布增加价值与MSAF表明,这些婴儿婴儿暴露于氧化应激。进一步的研究需要更大的人口证明氧化应激与MSAF婴儿。

1。介绍

胎便由脱屑从小肠和皮肤细胞,胃肠道粘蛋白,胎毛头发,脂肪物质从胎儿皮脂,羊水,肠道分泌物。它还包含血液类属特异性的糖蛋白,胆酸(脱氧胆胆,鹅去氧胆,石胆),铜、锌、镁、铁、钙磷、血浆蛋白如alpha1-antitrypsin和磷脂酶A2。墨绿色胎粪的颜色是由于胆汁色素的存在(1,2]。驱逐的胎粪肠内腔进入羊膜腔的结果增加肠道蠕动和迷走神经刺激造成的肛门括约肌松弛3]。

Meconium-stained羊水(MSAF)可能会导致机械阻塞气管和肺部的空气泄漏,肺炎,肺血管的血管收缩,表面活性剂和失活效应可能导致肺部炎症和细胞凋亡。7%到20%的交货术语在羊水胎粪,这将达到40% postterm交货(4]。5%的婴儿通过MSAF开发胎粪吸入综合征(MAS)这是一个真正威胁世界各地的新生儿,病死率为5%(40%),除了MAS短期和长期肺和神经发育后遗症发生(5,6]。

在人类,有众多prooxidants (POX)和抗氧化剂(AO),和一个微妙的平衡之间的生产和消除痘。氧化应激(OS)被定义为一个失衡痘和AO痘。痘(H₂O₂,哦⁻等)从代谢过程或来自外部来源和可能与人体自身的分子反应。AO吸收过剩的痘之前损坏的基本分子。AO包括可溶性抗氧化剂(维生素C,尿酸盐等),脂溶性抗氧化剂(维生素E,等等),以及酶的抗氧化剂(过氧化氢酶、过氧化物酶、歧化酶等)(7]。

痘或AO的浓度可以测量一个接一个在单独的个人分析。例如,Ochi和卡特勒发明了一种诊断情节来源于82年的测量分析,描述氧化应激和抗氧化概要文件(8]。然而,prooxidant的效果或血清中抗氧化剂分子是一个累加效应,可能导致不正确的测量。因此,各种方法已经发展为了测量总氧化剂(TOC和TOS化验等)或抗氧化剂(如收紧和氧自由基吸收化验),分别。在这种背景下,帕布试验开发同时测量氧化剂和抗氧化剂之间的平衡在一个实验中,给一个氧化还原指数(7,9,10]。

越来越多的证据表明,慢性和急性病理生理的条件下生产过剩的痘是统一组织损伤和细胞凋亡的机制。一些研究表明,有一个在MSAF氧化应激,但使用不同的方法需要更多的研究来证明MSAF帕布。

我们所知,这是第一次,prooxidant-antioxidant平衡测量与MSAF婴儿的脐带血。

2。方法

2.1。化学物质

三甲粉(3、3′,5、5′-Tetramethylbenzidine,丙烯酰胺),过氧化物酶酶(A3791 Applichem: 230 U /毫克,0005年,达姆施塔特,德国),三水合氯胺T (Applichem: A4331,达姆施塔特,德国)、过氧化氢(30%)(默克公司)。分子生物学试剂级使用,准备在双重蒸馏水。

2.2。主题

血清29脐带血的婴儿MSAF和32收集健康婴儿。收集的样本是在2013年7月至12月完成的。两组不抽烟和不含酒精的母亲没有任何特殊的疾病。帕布被测量。研究协议的临床研究伦理委员会批准的马什哈德大学医学科学(妈妈)。

2.3。收集的血清

收集血液样本每个主题从婴儿的脐带,然后发送到实验室血清分离。样本在1500 g离心机在室温下15分钟获得血清。溶血样本被排除在分析之外。血清是储存在−80°C。

2.4。方法

帕布试验是唯一可用的测试,可以同时测量氧化剂和抗氧化剂之间的平衡在一个实验中。它使用两种不同的反应:一种是一种酶反应的色原三甲被氧化,颜色由过氧化物阳离子,第二个是一个化学反应,减少了三甲阳离子的无色化合物抗氧化剂(7,8,11]。然后光度吸光度与吸光度由一系列的标准解决方案,是由混合不同比例(0 - 100%)的过氧化氢与尿酸(7]。帕布值意味着抗氧化剂存在低浓度大于氧化剂,而帕布价值高意味着更多的氧化剂存在比抗氧化剂。标准的解决方案是由混合不同比例(0 - 100%)的250毫米过氧化氢与3毫米尿酸(10毫米氢氧化钠)。三甲粉(60毫克)在10毫升DMSO溶液溶解。准备三甲阳离子的溶液,400毫升的三甲/ DMSO溶液添加到20毫升的醋酸缓冲(0.05缓冲,pH值4.5),然后70毫升新鲜的氯胺T(100毫米)的解决方案是补充道。的解决方案是混合好,孵化2小时在室温下在一个黑暗的地方,然后25 U的过氧化物酶酶解是补充道。这个混合物是分发到存储在−1毫升整除和20°C。三甲的解决方案是通过添加200准备的μL三甲/ DMSO 10毫升的醋酸缓冲(0.05 M缓冲,pH值5.8)和工作准备的解决方案是混合1毫升三甲阳离子溶液10毫升三甲的解决方案。这个解决方案是孵化工作2分钟在室温下在一个黑暗的地方,立即使用。10毫升每个样本、标准或空白与200年(蒸馏水)涨跌互现μL在每个工作解决方案的96孔板,在一个黑暗的地方,然后孵化37°C或12分钟。100年,在孵化的终结μL 2 N HCl是添加到每个好,和光学密度(OD)与ELISA测定读者在450 nm,参考波长为620或570海里。标准曲线生成值的标准样品。帕布测定的值表示在任意单元,基于标准溶液中过氧化氢的比例。未知样本的值,然后根据计算所得的值生成的标准曲线。

3所示。统计数据

社会科学统计软件包(SPSS) 16.0版本是用于统计分析。所有参数都给出均值±金丝组比较被独立的评估t以及皮尔逊相关性也被用于相关的年龄和帕布的价值。显著性水平被认为是小于0.05和95%的置信区间。

4所示。结果

嗨的帕布值组和MSAF组(香港单元)分别为(香港单位)(图1)。香港是一个任意单位使用的帕布方法的发明者(哈米迪和Koliakos) (7]。有显著性差异(值= 0.027)之间的帕布HI组和MSAF集团的价值。帕布价值之间没有显著相关,母亲的年龄(表1)。

5。讨论

在这项研究中,我们发现有一个操作系统增加婴儿的脐带血MSAF相比健康的小组使用一种称为帕布测定的新方法。

有两种主流的理论机制在羊水胎粪通道,postterm婴儿:一是胃肠道的正常成熟导致胎粪通道,另一种是通过缺氧病理过程,如压力或一些胎儿感染会引发胎粪。先前的研究已经显示,增加操作系统与提升产品在缺氧胎儿和新生儿呼气的脂质过氧化反应,血清丙二醛、血清isoprostanes,血清总氢过氧化物,高级氧化蛋白质产品,增加血清中非蛋白结合铁。低水平的抗氧化剂也被观察到红细胞(12,13]。

只有一个研究显示,婴儿与MSAF高浓度的8-iso-prostaglandin F2alpha在新生儿脐带血,脂质氧化的标志,表明这些婴儿暴露在操作系统(14]。

这是证明有一个增加促炎细胞因子如il - 1的水平β、白介素、肿瘤坏死因子(TNF)α,引发新生儿MASF [15]。在另一方面,有一种强烈的促炎细胞因子和操作系统之间的相关性在不同的疾病,如心血管疾病(16)、糖尿病(17),炎症性肠病(18,肥胖19),(老年痴呆症20.),和酒精性肝病21]。操作系统会导致增加细胞因子生产许多不同的机制。痘水平增加,类似的第二信使,是众所周知的调解炎症信号通过激活物等各种蛋白激酶PI3 K, PKC和PLC。这些激酶可以刺激氧化还原敏感的转录因子等统计,分子,NF -κB AP-1 NFAT, ATF2通过一系列信号转导由其他事件像MAPK激酶,ERK和木菠萝。转录因子的激活,导致炎性细胞因子(TNF的转录激活α、il - 1、il - 6、引发的地震,等等),趋化因子(化学引诱物蛋白1,等等),和生长因子(转化生长因子-β、单核细胞、结缔组织生长因子等)可以放大炎症并发症通过自分泌和旁分泌途径(22]。此外,它表明,抗氧化剂可以下调促炎细胞因子通过两种可能的机制;首先,通过他们的影响受氧化还原状态的转录因子,其次通过影响PGE2合成,Th1反应中发挥着关键作用和监管促炎细胞因子(23]。因此,它是合理的结论,促炎细胞因子和操作系统可以互动和相互引发,导致一些疾病的发展和进展。

我们早期结果表明,婴儿与MSAF暴露与操作系统。然而,需要更多的人口来证实这些早期的结果。此外,进一步的研究将需要精确确定促炎细胞因子和操作系统之间的相关性与MSAF婴儿。

缩写

AP1:	激活蛋白1
物:	c-Jun n端激酶
PI3K:	磷脂酰肌醇3-kinase
NF -κB:	核因子-κ结合蛋白质
MAPK:	增殖蛋白激酶
PKC:	蛋白激酶C
公司:	磷脂酶C
兵:	细胞外signal-regulated激酶
木菠萝:	Janus激酶
统计:	信号传感器和转录的激活
NFAT:	核转录因子激活的t细胞
ATF:	激活转录因子
PGE2:	前列腺素E2
IL2:	白介素2
分子:	营反应元件结合蛋白
肿瘤坏死因子α:	肿瘤坏死因子α
PGE2:	前列腺素E2
目录:	总氧化剂能力
服务条款:	总氧化剂状态
收紧:	等离子体的铁还原能力
氧自由基吸收:	氧自由基吸收能力。

确认

作者感谢副总理的马什哈德大学医学科学研究的资助和支持。本文的结果论文女士的默罕默德·哈桑Arjmand(生物化学硕士,生物学系,科学学院Payam努尔大学马什哈德,伊朗)。作者感谢Nasoti Afsharpour和夫人太太的协作在这项研究。

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