文摘
客观的。胞内的本地化翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)研究了癌细胞。方法。TCTP的表达和定位是发现在12 h, 24 h, 48 h, 60 h时间点的文化人类肝癌细胞HepG2行,人类宫颈癌细胞系海拉,和人类正常肝细胞株hl - 7702免疫荧光。结果。TCTP在正常和肿瘤细胞表达,在不同时间点及其定位的变化。TCTP主要是表现在细胞质从24小时至48 h表示在细胞核和细胞质在hl 60 h - 7702细胞。而在HepG2细胞,TCTP第一次本地化细胞膜在24 h在细胞核和细胞质48 h - 60 h;TCTP局部细胞核和细胞质在海拉细胞从12 h - 60 h。结论。细胞内表达的易位TCTP在正常和肿瘤细胞在不同时间点可能铺平道路TCTP角色的研究在肿瘤的生长。
1。背景
翻译控制肿瘤蛋白(TCTP),一个高度交谈蛋白(1,2),也称为组胺释放因子(HRF) [3),被建议作为一种肿瘤相关抗原和广泛表达于哺乳动物以及各种其他生物的动物,植物王国(4]。mRNA和蛋白表达水平往往高于直肠癌(crc) [5和肝细胞癌6),比相应的正常组织。TCTP被发现中最引人注目的是表达下调肿瘤回归(7]。此外,TCTP水平回复突变体从其他三个主要固体癌症、结肠癌、肺癌、和黑色素瘤细胞系,相同的结果(5,8,9]。此外,转染的antisence TCTP减毒的恶性肿瘤v-src-transformed NIH3T3细胞。最近,TCTP吸引了越来越多的研究者的关注感兴趣的各种生物和医学相关流程。这主要是由于这一事实TCTP水平高度调节响应范围广泛的细胞外刺激(10,11]。一系列最近的报告强调了TCTP对细胞周期进程和恶性转化的重要性(12,13]。TCTP也显示一个细胞外函数作为一个组胺释放因子和凋亡活动(14]。
TCTP的胞内定位仍然是争议。它是由阿库里在细胞质本地化et al。15由李等)和核。14),分别。TCTP可以分泌和tumor-suppressor-activated pathway-6 (TSAP6)促进TCTP通过模的分泌途径通过液突显出TCTP TSAP6协会在细胞质16]。我们的研究的目的是确定本地化TCTP表达式的两个人类癌症细胞系和一个正常的细胞系。我们应用细胞免疫荧光检测TCTP在不同时间点的蛋白表达这三个细胞系。我们发现TCTP局部细胞质和细胞核及其易位各种正常和肿瘤细胞之间的线在不同的时间点。
2。材料和方法
2.1。细胞培养
人类肝癌细胞HepG2行,人类宫颈癌细胞系海拉,和人类正常肝细胞细胞株hl - 7702购自中国科学院(上海),生长在杜尔贝科修改鹰介质(DMEM)(美国表达载体GIBCO)补充10%的边后卫(Genetimes ExCell,中国),维持在37°C,湿度95%,5%的二氧化碳。
2.2。试剂和抗体
TCTP兔多克隆抗体,为TSAP6兔多克隆抗体,山羊兔多克隆二级抗体IgG-H & L (FITC)从Abcam购买。多聚甲醛和Tween20从Sigma-Aldrich购买。4,6-Diamidine-2-phenylindole盐酸盐(DAPI),牛血清白蛋白(BSA)、不变色安装介质,和磷酸盐从罗氏公司购买,Solarbio, Beyotime,分别和中山金桥生物技术。
2.3。免疫染色和显微镜
间接免疫荧光法、HepG2 hl - 7702,和海拉细胞培养在盖玻片和4%多聚甲醛固定后12小时,24小时,48 h,和60 h文化,分别,然后用0.2% permeabilized渐变20日封锁1% BSA 1 h,并孵化与兔多克隆TCTP(1: 500)和TSAP6(1: 200),分别在一夜之间在4°C,加上二次抗体在4°C 6小时。DAPI染色细胞核。免疫荧光染色图像被使用激光共焦扫描显微镜(LCSM)。
3所示。结果
3.1。的本地化TCTP
如图1,TCTP蛋白主要定位于细胞质和细胞膜从12 h 24 h,然后在细胞核和细胞质从48到60 h HepG2细胞(图1(一))。在hl - 7702细胞,TCTP蛋白质的定位显示“nucleus-cytoplasm-nucleus”模式在不同的时间点(图1 (b))。TCTP本地化在海拉细胞的细胞核和细胞质在每一个时间点(图1 (c))。
(一)
(b)
(c)
4所示。讨论和结论
先前的报道从阿库里的小组15)展示了本地化TCTP蛋白质在人类前列腺癌和前列腺癌细胞使用免疫组织化学和免疫荧光染色。中表达的蛋白质主要是分泌腔的上皮细胞和基底细胞层。大量的蛋白质存在于前列腺液体。前列腺上皮细胞亚细胞分布研究表明,蛋白质局部细胞质在间期和与有丝分裂过程中微管蛋白。李的集团(14)表明,TCTP在场的胞内定位主要在海拉细胞的细胞核与外生TCTP表达质粒转染后。Amson等人,Ohgami等人发现TCTP通过内质网/ Golgi-independent或模途径分泌,分泌TCTP起源于既存池。TSAP6, p53-inducible 5 - 6跨膜蛋白(17,18),被发现与TCTP他们部分与液,一些vesicular-like结构在质膜和原子核周围。功能,TSAP6持续的过度导致增强内生和体内的分泌表达TCTP [16,17]。我们开始工作,问是否可以转移并TCTP表达式是分泌水平和功能之间的关系。第一次,用免疫荧光染色的方法,我们发现TCTP本地化在细胞内不同部分通过几个实验。如上所述,TCTP蛋白表达可能改变以及细胞生长。
有趣的现象,我们的结果是,TCTP本地化不同细胞系同时点之间,TCTP并未改变其在海拉细胞细胞定位,可以解释如下。(1)细胞系的不同特点。首先,海拉细胞被感染的是不朽的,因为人类乳头状瘤病毒(HPV)。不像海拉,HepG2细胞和hl - 7702细胞有不同的细胞周期和很容易死。其次,不同的细胞系有不同的细胞周期,TCTP起着关键的作用。(2)不同的TCTP表达水平。TCTP凋亡和守恒的蛋白质。众多研究表明,TCTP肿瘤中表达水平高于相应的正常组织,抑制TCTP表达式可以减弱恶性表型(7),表明TCTP在肿瘤发生有重要的作用。因此,亚细胞在不同时间TCTP易位可能反映其生物功能,和底层机制需要进一步调查。
总之,我们报道的定位和动态易位TCTP在不同的细胞系。TCTP局部细胞质和细胞核和易位到不同亚细胞单位细胞增长。我们的发现提供了更多证据显示TCTP定位和功能之间的关系,改善我们的理解的重要作用TCTP在癌症的形成。
作者的贡献
Y.-P。马进行了实验和cowrote纸;w l。朱指导研究和cowrote。所有作者阅读和批准了期末论文。
承认
作者要感谢杨Wan-cai博士在受托人的伊利诺斯州大学辅助语言。