阿昔洛韦和丙种球蛋白对行为结果的影响后,HSV1感染中枢神经系统

文摘

1单纯疱疹病毒(HSV)脑炎(HSE)有严重的神经系统并发症,包括行为和认知障碍,造成严重的发病率和降低生活质量。我们表明,HSE的结果提供中枢神经系统(CNS)的炎症反应。我们假设中枢神经系统炎症是随意参与行为异常HSE和无环鸟苷治疗后,汇集人类免疫球蛋白(丙种球蛋白),一种免疫调节药物,将改善结果相比,老鼠接受磷酸缓冲盐(PBS)或无环鸟苷。焦虑水平高HSV-infected PBS和ACV-treated老鼠和老鼠用无环鸟苷+丙种球蛋白治疗相比,符合报告暗示炎症引起的焦虑脂多糖(LPS)或压力。女性,而不是男性,接受pbs老鼠认知能力受损,出乎意料地,无环鸟苷保护,而包含丙种球蛋白引起意外无环鸟苷的有利影响。不同的血清蛋白质组学概要文件为雄性和雌性小鼠,观察和无环鸟苷和丙种球蛋白的拮抗效应行为被类似的平行的血清蛋白质组的变化无环鸟苷,无环鸟苷+ IVIG-treated老鼠。我们得出结论,炎症和其他因素调解HSV-induced行为障碍和无环鸟苷和丙种球蛋白对行为涉及到小说的影响机制。

1。介绍

单纯疱疹病毒1型是一种高度传染性的亲神经的α疱疹病毒潜伏感染的全球发病率估计超过85%,60岁及以上人群(1]。潜在的HSV驻留在感觉神经节的神经元和其他synaptically连续的中枢神经系统神经元在当时,转录被压抑的状态。HSV是一种由贪婪导致的散发性脑炎的主要原因原发性感染在新生儿和/或重新激活潜伏病毒的成年人。而大大改善了诊断程序结合安全有效的抗病毒疗法有显著提高的结果,死亡率(~ 25%)和神经系统衰弱残疾的发生率在幸存者仍高得令人无法接受2- - - - - -4]。通常,HSE焦点,涉及内侧颞叶,它通常是急性课程(5]。结构上和功能上,长期损害从HSE通常局限于边缘系统虽然原因尚不清楚,但猜测是,它与HSV进入中枢神经系统通过嗅球和/或三叉神经或一些特定的放任或边缘皮层的亲和力HSV (6- - - - - -8]。鼻内接种的老鼠后,疱疹病毒通过嗅觉和三叉传播路线的梨状皮层,丘脑,杏仁核,和内侧下丘脑核组成大脑的边缘地区,支持多种功能包括记忆,情绪,行为,和嗅觉9- - - - - -13]。重要的是,炎性病变和长期炎性浸润在这些大脑区域与未经处理的小鼠记忆损伤幸存的HSV感染(13),建立这个模型的效用的HSE探索免疫调节治疗可以改善人类长期的神经赤字长期抗病毒治疗未能改善结果(14]。

我们已经明确表明,中枢神经系统病理基础HSE起源于夸张的中枢神经系统炎症反应而不是直接病毒细胞病理学。重要的是,与无环鸟苷抑制HSV复制后中枢神经系统炎症反应启动无法阻止死亡,因为这未能抑制炎症反应(升级15,16]。相比之下,丙种球蛋白治疗24小时后感染(π)阻止了HSE在所有受感染的老鼠显示机制取决于丙种球蛋白的强有力的抗炎和免疫调节活动,而非病毒中和(17]。除了被用作替代疗法治疗免疫缺陷,主要和次要使用丙种球蛋白已经扩大到包括各种自体免疫和炎症性疾病的治疗。丙种球蛋白是食品和药物管理局(FDA)批准用于治疗免疫性血小板减少症(ITP),川崎病、格林-巴利综合征和慢性炎性脱髓鞘多神经病。IVIG的利益这些疾病来源于其强大的抗炎和免疫调节活动,也占显著增加标示外使用包括多发性硬化症(MS)和阿尔茨海默氏症(在讨论18,19])。丙种球蛋白似乎有多个机制(s)的行动可能是特定疾病的。最近的小说《他乡机制提出sialylated免疫球蛋白(里)出现在限制数量的丙种球蛋白优先DC-SIGN或SIGNR1人类c型凝集素受体结合,鼠标同系物。SIGNR1绑定抒发IL-33生产从巨噬细胞/ DCs导致il - 4由嗜碱粒细胞分泌的抑制导致upregulation货代γIIb激活货代的先天差别随对这些细胞,导致保护抗炎反应在某些自身免疫性疾病小鼠模型(20.- - - - - -24]。

符合HSE作为炎性疾病,我们报道了HSE的丙种球蛋白预防发展施加强有力的IL-10-dependent免疫调节的作用,包括调节生产和Ly6C浸润^高炎症性单核细胞进入中枢神经系统,诱导调节性T细胞群(17]。值得注意的是,我们表明,丙种球蛋白保护独立HSV-neutralizing抗体和收藏界,进一步讨论了低剂量丙种球蛋白是保护(17]。基于这些结果,我们设计实验来验证假设治疗抗病毒治疗合并丙种球蛋白HSV-infected老鼠的组合,一个强力的广泛使用,FDA-licensed抗炎生物,会导致显著提高神经功能仅在幸存者老鼠用无环鸟苷治疗相比,标准治疗。我们的结果显示惊人的丙种球蛋白施加有益和有害的影响,而无环鸟苷是有益的或中性的根据行为的性质赤字。这些意想不到的结果表明,无环鸟苷和丙种球蛋白的影响是复杂的,可能包括调制的生理途径影响行为。

2。材料和方法

2.1。老鼠、病毒和病毒接种

所有动物程序进行符合希望的城市制度动物保健和使用委员会(IACUC)和框架内的指导实验室动物保健和使用的。在C57BL6小鼠/ J背景(B6.129 (cg) gt (ROSA) 26琼^{tm4 ACTB-tdTomato-EGFP罗}/ J小鼠)获得杰克逊实验室、巴尔港,缅因州,在动物园饲养在城市的希望。

掌握股票的HSV1应变17⁺由只有cell-released病毒的准备和效价使用mycoplasma-free会阴单层细胞如前所述[25]。一次性整除的病毒在汉克斯平衡盐溶液补充2%胎牛血清是储存在−80°C。雄性和雌性老鼠,6 - 8周的年龄,HSV1感染17⁺neurovirulent应变。小鼠镇静与氯胺酮(60毫克/公斤)和甲苯噻嗪(5毫克/公斤)HSV接种前角膜划痕。在一只眼睛129小鼠接种3200微升(相当于10×LD₅₀),而双边B6小鼠接种1×10⁵空斑形成单位(PFU)和每天监测如前所述[25]。传染性病毒在三叉神经节(Tg)、大脑、脑干(BS)匀浆是由空斑实验(25]。简而言之,稀释的匀浆游离镀在维洛细胞;的板块在37°C的环境生长培养基补充2%的人类血清包含HSV-neutralizing预防继发性血小板抗体的发展。孵化后3 - 4天在37°C允许斑块生长层与结晶紫染色和可视化斑块在显微镜下计数,它允许病毒效价计算空斑形成单位/毫升。

增加的敏感性检测脑组织感染病毒的单层膜中消极的初始屏幕收获和冻融3次释放胞内感染HSV和浮在表面的游离被重复空斑实验然后再筛分。

2.2。阿昔洛韦和静脉注射免疫球蛋白

Schuamburg,无环鸟苷从应用程序获得药品,在50毫克/公斤体重的腹腔内注射(ip)每天7天开始一天4π,和PBS是根据相同的时间表来控制老鼠。丙种球蛋白(Carimune NF)获得CSL贝林(美国宾夕法尼亚州普鲁士王)给出了ip作为单个0.5毫升剂量(25毫克/鼠标)天4π结合7天的无环鸟苷根据方案图1(一)。

2.3。隔离BS HSV1-Infected小鼠的单核细胞

CNS-derived单核细胞分离(如前所述)(17]。短暂、大脑、脑干(BS)将分别从小鼠灌注与PBS、剁碎并与胶原酶消化和DNAse离心前30分钟(800 g×30分钟)两步Percol梯度。是指整个大脑-脑干。中枢神经系统浸润CD45包含的丰富的人口^高白细胞,CD45^int小胶质细胞和CD45^负的中枢神经系统神经胶质细胞。CD45^高细胞由约5 - 8%的总单核细胞与BS 129天真的野生型小鼠(WT)。细胞生存能力大于95%台盼蓝染色所显示的。

2.4。流式细胞术

单细胞悬浮体分离,大脑,BS,脾脏,或颈部淋巴结(CLN)被封锁的混合10%正常老鼠,老鼠和马血清,老鼠anti-mouse CD16/32 (2.4 g2, BD PharMingen) 15分钟前孵化与抗体(Abs)来确定细胞表面表达的各种标记。藻红蛋白(PE)、FITC和allophycocyanin-conjugated Abs专门针对F480 (BM8) CD11b (M1/70) CD8(53 - 6.7),和CD4 (RM4-4)获得eBioscience (CA)圣地亚哥。FITC、PE和PerCP-conjugated Ly6-G (1 a8) Ly6-C (AL-21)和CD45 (30-F11)获得BD PharMingen (CA)圣何塞。同形像控制都是来自eBioscience。确定细胞表面表达,antibody-labeled细胞获得在BD Fortessa分析仪(BD生物科学,圣何塞,CA)和流式细胞术分析使用FlowJo软件(树明星Inc .)。内裤被排除在活细胞群。CD45被用来区分来源于CD45的骨头^高白细胞,从CD45^intCD11b⁺小胶质细胞和CD45^负的神经胶质细胞。白细胞子集,计算生活CD45的一小部分^高浸润人口BS,用百分比表示。

2.5。检测细胞因子和趋化因子

血清样本收集7天从两个男性和两个π雌性老鼠在每个PBS,无环鸟苷和无环鸟苷+丙种球蛋白组汇集( )和分析细胞因子和趋化因子使用ProCarta获得小鼠细胞因子和趋化因子36丛luminex multibead数组工具使用Bio-Rad Bio-Plex100信托基金系统(eBioscience Inc .,圣地亚哥,CA)在临床免疫生物学相关研究实验室核心城市的希望,Duarte, CA。

2.6。定量蛋白质组学利用串联质标记(TMT)方法

2.6.1。老鼠组织和血清样本

从以下组血清C57BL / 6小鼠实验中使用:0天(感染之前),雄性雌性2和3;第二天(感染)后,雄性雌性2和3;第七天(无环鸟苷治疗),3男2女;第七天(无环鸟苷+丙种球蛋白治疗),3女性和2男性;和第七天(PBS,模拟治疗),2男性和3女性。每组的血清池分别为每个性,导致5池从男性和5从雌性老鼠池。

2.6.2。血清损耗

白蛋白和免疫球蛋白分别从汇集每个使用Qproteome性别组小鼠血清白蛋白损耗工具包(试剂盒Inc .,瓦伦西亚,CA)根据制造商的协议。简单地说,25的整除μL血清被应用于每个消耗列和在室温下培养5分钟。离心收集的血清是耗尽500 g×10秒。枯竭的血清样本的蛋白浓度测定和布拉德福德化验(Bio-Rad实验室Inc .,大力神,CA)。

2.6.3。串联质量标签(TMT)标签

200年μg耗尽每组血清蛋白沉淀在20%三氯乙酸(TCA)在4°C。蛋白质颗粒是通过离心(13500 rpm),用冰冷的丙酮洗净,和100毫米resolubilized triethylammonium碳酸氢盐(TEAB)和2,2,2-trifluoroethanol (TFE)。蛋白质与10毫米减少三羟甲基氨基甲烷(2-carboxyethyl)磷化氢液(TCEP) 1小时37°C和烷基化与30 mM碘乙酰胺(IAA)在黑暗中在室温下1小时。2.5μg质量规范等级胰蛋白酶/ lysC (Promega,麦迪逊,WI)被用来消化肽在一夜之间在37°C。

消化肽是量化使用皮尔斯™定量比色肽测定(热科学,罗克福德,IL)。100年μ克从每个特定的样本标记肽与热科学™TMTsixplex等压大规模标签加注工具包(分别为男性和女性池:天与TMT 0⁶-126年,与TMT第二天⁶-127年,第七天与TMT无环鸟苷⁶-128年,第七天无环鸟苷+与TMT丙种球蛋白⁶-129年,第七天与TMT PBS⁶-130)根据制造商的协议。TMT的⁶-131标签作为参考,包含20μ克从每个五肽样本。所有六个labeled-peptide混合物被合并成一个管,混合,分次使用热科学皮尔斯高pH值反相肽分离设备。九分次样本使用SpeedVac集中器和干resuspended在1%甲酸质/ MS分析。虽然这个工具通常只使用八个分数高达50%乙腈洗脱步,我们添加了九分之一的分数在75%乙腈洗脱。

2.6.4。质/ MS分析

样本分析的Orbitrap融合™Tribrid™质谱仪的热EASY-nLC™离子源,75μm×2厘米赞誉®PepMap100 C18捕获列,和75年μm×25厘米PepMap®RSLC C18分析柱(热)。列温度维持在45°C,和肽筛选了300 nL /分钟的流量在130分钟梯度,从3 - 30%溶剂B(100分钟),30 - 50%溶剂B(3分钟),50 - 90%溶剂B(2分钟),和90%溶剂B(2分钟)。溶剂甲酸0.1%的水和0.1%的甲酸乙腈溶剂B。

全女士调查扫描(m / z 400 - 1500)在Orbitrap收购一个分辨率为120000和一个自动增益控制(AGC) 2×10的目标⁵。女士扫描的最大注射时间是50 MS。选择单一同位素的前体离子电荷状态2 - 7和70年代动态排斥±10 ppm质量窗口。的女士²扫描(m / z 400 - 2000)都使用了线性离子阱的CID碰撞能量设置为35%。离子阱扫描率设置为“快速”,AGC 4×10的目标³和最大注入150毫秒的时间。从每个女士十碎片离子²实验为女士随后被选中³实验。的女士³扫描(m / z 100 - 500)执行生成TMT记者离子的线性离子阱使用HCD碰撞能量的55%,快速扫描速率和AGC 5×10的目标³,最大注射时间250毫秒。

2.6.5。数据分析

MS / MS谱都是搜索使用蛋白质组发现者(版本2.1.0.81,热科学)和搜索引擎Sequest-HT反对亩骶数据库序列(57952)。的搜索进行以下参数:5 ppm对前体离子质量和Da对碎片离子质量的0.6倍。静态修改设置包括carbamidomethyl半胱氨酸残基,和动态修改包括氧化蛋氨酸、赖氨酸TMT6plex修改ε氨基酸组和肽N-termini,多肽n端乙酰修改。target-decoy数据库搜索被用来获得一个错误发现率(罗斯福)的1%。记者离子集成公差是0.5哒。记者离子为蛋白质的总强度计算是基于检测到的总和记者离子相关的肽的蛋白质。记者之间的比率离子和记者离子(TMT的引用⁶-131)被用来估计每个蛋白质的丰度。

确定使用差别upregulation蛋白质进行评估和对这些截断值≥1.5折的变化。基因本体论(去)和KEGG通路富集分析使用的数据库执行注释,可视化和综合发现(大卫)v6.8软件(协议,2009)。去KEGG通路富集分析与Benjamini-Hochberg确切概率法和修正过程。只有通路显示纠正值≤0.05被认为大大丰富。

2.7。神经行为评估

B6小鼠感染双边HSV1和PBS处理,无环鸟苷,或无环鸟苷+丙种球蛋白在天4π监控一个月之前被运送到加州大学戴维斯分校neurobehavior测试(年龄在10周)。男性和女性( )健康小鼠没有包含在每组HSE的症状。本研究的设计是用于启用发现大量性效应,但它不适合检测小性影响。

2.7.1。高+迷宫(EPM)

老鼠测试焦虑用EPM如前所述(森林,Yasui)。EPM装置由两个开放(30×5×0.25厘米³)和两个封闭(30×5×6厘米³)武器来自中央平台(5×5厘米²)+形状。装置是由白色塑料和高的高度离地面60厘米。简单、测试老鼠被放置到中央平台+ 5分钟的自由探索的迷宫。鼠标行为被摄像机记录下昏暗的红光(索尼数码数码摄像机)和分析使用智能跟踪系统(圣地亚哥仪器、圣地亚哥、钙、美国)。距离,条目的数量,和持续的时间开启和关闭武器都被记录下来。两个未受感染的(联合国)老鼠被排除在分析之外,因为他们莫名其妙地未能在测试过程中移动。

2.7.2。莫里斯水迷宫

空间学习和记忆在莫里斯水迷宫测试使用房间线索(如前所述)[26,27]。老鼠群4测试在同一时间使用直径90厘米(0900 - 1200)用21°C水舱。每天四个90年代试验进行了5天4天(男性)或(女性),因为空间学习女性低。释放指定起点后,小鼠90秒找到6×6厘米²平台1厘米低于水面与无毒透明漆粉。达到90年代后平台或运行后,鼠标保持在30年代的平台,然后被笼子里变暖10 - 15分钟intertrial区间。培训之前是可见的试验测试(90年代),其次是第一天探针试验(90年代)第五天视频跟踪使用智能系统(V3.0, PanLabs、美国分销商),记录到平台和时间延迟和距离在每个平台象限。此外,浮动时间是估计的测试人员。测试人员是盲目的治疗组小鼠。

2.7.3。行为数据的统计分析

分层的方法被用来确定HSV感染引起的行为障碍是否与治疗可以逆转的。首先,统计分析(JMP SAS研究所)相比HSV-uninfected(联合国)组和HSV-infected-untreated (PBS)集团,以确定哪些行为端点是敏感的感染。这些端点也筛查性影响。不同的治疗组被单独相比PBS组在这些端点是否HSV效应可以逆转。所有成对(群)进行单向方差分析和比较F以及使用一般线性建模(JMP SAS研究所)。

3所示。结果

3.1。小鼠模型在老鼠身上幸存的HSE评估行为

我们之前报道,无环鸟苷保护易感129 s6(129)小鼠减少治疗时发起又一天2π因为无环鸟苷未能遏制不断升级的中枢神经系统炎症反应(28]。相比之下,丙种球蛋白在24小时π保护所有老鼠一样无环鸟苷(17]。然而,有一个急剧下降的保护当这些药物有逐步后次感染,这样生存丙种球蛋白范围从15%到25%无环鸟苷在天4π(图S1 (17和图428),职责)。保护的无环鸟苷降低随着时间的推移,主要因为它未能抑制中枢神经系统炎症反应(图S1升级(28])。相比之下,IVIG-mediated保护拒绝由于先天免疫细胞渗透到中枢神经系统炎症前临时IVIG政府(图。4 (17])。这些数据表明,保护无环鸟苷和丙种球蛋白对HSE主要取决于政府的药物的时机后感染。

B6小鼠是高度耐药,通常不会发展HSE单边眼部接种后(17,25,29日,30.]。然而,双边B6小鼠接种感染根据方案图1(一)与1×10⁵每眼微升,导致中枢神经系统炎症和HSE症状的老鼠。只有~ 65%的老鼠在PBS组幸存下来,而小鼠存活率100%无环鸟苷治疗单独或无环鸟苷+丙种球蛋白从天4π(图1 (b))。因此,延迟管理无环鸟苷或无环鸟苷+丙种球蛋白HSV-infected老鼠直到天4π允许中枢神经系统炎症发展,但不是在某种程度上,导致过度的HSE的死亡率。我们也调查了单眼接种,但老鼠没有开发HSE或明显的中枢神经系统炎症,即使相同总剂量的病毒感染(2×10⁵空斑形成单位/鼠标)作为双边接种的老鼠。因此,我们使用双边接种B6小鼠行为测试,因为它促进了PBS -之间的比较,无环鸟苷、和无环鸟苷+ IVIG-treated老鼠经历了中枢神经系统炎症。

我们评估炎症B6小鼠脑干的双边接种根据方案如图1(一),我们包括单方面接种接受pbs老鼠进行比较。脑干(BS)的渗透所有免疫细胞子集分析在第七天π在双边(双眼:)接种小鼠相比,单方面(一只眼睛:SE)接种小鼠,在%和绝对CD45^嗨手机号码(数字2(一个),2 (b),2 (c),2 (d)),符合双边接种小鼠更容易HSE。接受pbs老鼠相比,联合无环鸟苷+丙种球蛋白治疗减少了BS炎症在更大程度上比单独无环鸟苷,特别是Ly6C的涌入^高炎症性单核细胞在第七天π(图2 (c)),一个模式,坚持21天π(数字3(一个),3 (b),3 (c))。有趣的是,CD4细胞的渗透⁺和CD8⁺T细胞也增加了丙种球蛋白在第七天π(数字2 (e)和2 (f))和浸润CD8 ~ 40%⁺T细胞是HSV1具体由四聚物染色天21π(数字3 (d)和3 (e);代表网上流式细胞仪图补充图1所示https://doi.org/10.1155/2017/5238402)。因此,无环鸟苷+丙种球蛋白的结合给予抗病毒和免疫调节活动。

3.2。在老鼠身上幸存的HSE行为评估

探索性行为表型出现HSV感染的影响和应对无环鸟苷和丙种球蛋白治疗。潜伏性感染B6雄性和雌性老鼠( )处理PBS、无环鸟苷或无环鸟苷+丙种球蛋白根据图中概述的计划1(一)老鼠都被转移到加州大学戴维斯分校生物学程序表现型核心-天在45 - 50天的ππ和评价焦虑(EPM测试)和空间学习和记忆使用标准化的协议(微波加工测试)。测试参数,测试的时间表,和端点测量提供了材料和方法。

行为端点首次HSV-induced赤字的筛查F以及判断测试是否敏感HSV感染。一般水平的焦虑,反映在更少的时间花在EPM的张开双臂,高感染PBS -和ACV-treated B6小鼠(图4)。使用更严格的单向方差分析(两两比较),无环鸟苷+丙种球蛋白和PBS组也明显不同( )。重要的是,组合用无环鸟苷+丙种球蛋白治疗抑制焦虑的发展呈现的老鼠和未受感染的老鼠。

HSV1对空间学习和记忆的影响(LM)测定在潜伏感染阶段(> 45天π)使用微波加工,广泛支持的证据作为一个有效的措施hippocampal-dependent空间导航和参考记忆31日- - - - - -33]。(图与焦虑4),无环鸟苷治疗预防学习赤字雌性老鼠在雄性老鼠缺席,揭示性别偏向的HSV对行为的影响(图5)。令人惊讶的是,引起的丙种球蛋白的有利影响雌性小鼠的无环鸟苷(图5(一个)),也无环鸟苷+丙种球蛋白的结合导致贫穷微波加工学习男性(图5 (b))。

一只眼睛角膜接种后,HSV1扩散到三叉神经节(Tg)和BS但不扩散到B6小鼠的大脑(34]。然而,由于我们使用双边接种,确定很重要HSV1传入大脑。传染性病毒没有从雄性和雌性老鼠的大脑在一天4π和缺席或出现在非常低的水平(1 - 3微升)在两性6π,通过天8π由空斑实验(35]。

3.3。血清细胞因子/趋化因子和蛋白质组的变化

一个Luminex bead-based测定血清样本收集的2 M和2 F老鼠在7天π透露微分表达式PBS,一些细胞因子和趋化因子的无环鸟苷、和无环鸟苷+ IVIG-treated老鼠组,其中一些涉及到出口的中性粒细胞和单核细胞从骨髓和贩卖网站炎症在这项研究中观察到(数字6(一),6 (b),6 (c)和补充图)。这些包括处于受控(Gro -α)、CCL2 CCL7 (MCP-1 MCP-3)和CCL5(咆哮),它也被卷入各种行为障碍包括焦虑,抑郁,和LM (36- - - - - -38]。LM的最近的一项研究在不同年龄大鼠血清处于受控/ Gro -α岁和CCL5 /咆哮水平显著升高,记忆减退大鼠相比,“精英时代人”;因此,他们被认为是可行的候选生物标志物与年龄相关的记忆丧失(39]。有趣的是,处于受控/ Gro -α在PBS和高架ACV-treated老鼠而被抑制无环鸟苷+ IVIG-treated老鼠(图6(一))。这是符合增加IM和嗜中性粒细胞浸润和ACV-treated PBS -组。然而,CCL5 /咆哮水平升高的无环鸟苷+ IVIG-treated老鼠相比无环鸟苷,接受pbs老鼠(图6 (c)),这符合BS的T细胞浸润增加无环鸟苷+ IVIG-treated老鼠(数字2 (e)和2 (f))。高浓度的处于受控/ Gro -α、g - csf和il - 6、TNFα,CCL2 / MCP-1(补充图)建议在接受pbs小鼠骨髓炎性表型与CD11b增加整合⁺和Ly6C^高IMs在PBS老鼠的BS(数字2 (b)和2 (c);只代表功能相关的细胞因子图所示6)。

关于300和500相匹配的蛋白质亩骶数据库中发现男性和女性的血清样品,分别。正常化后数据未受感染的老鼠(0),约16%的雄性小鼠血清总蛋白和总蛋白的7%雌性老鼠在每组差异表达。确定使用差别upregulation蛋白质进行评估和对这些截断值≥1.5折的变化。基因本体论(去)和KEGG通路富集分析使用的数据库执行注释,可视化和综合发现(大卫)v6.8软件(协议,2009)。去KEGG通路富集分析与Benjamini-Hochberg确切概率法和修正过程。只有通路显示值≤0.05被认为大大丰富。共有21个男只有一个女去生物过程类别丰富相对于未受感染的小鼠血清蛋白质(0天,补充表)。

几个类别,比如急性期反应,免疫系统过程中,胆固醇代谢和补体的激活在男性丰富而只有一个急性期反应的类别在雌性老鼠丰富(图7)。然而,雄性老鼠主要富集在炎症类别“急性期反应,通过调节血清淀粉样蛋白和触珠蛋白(图8)。此外,KEGG路径分析显示一致的浓缩凝血和补体级联的雄性和雌性老鼠(图9)。有趣的是,补充组件C6, C7、C8和制备过程,负责膜攻击复杂地层,在雄性小鼠有显著调节第二天和无环鸟苷治疗后,但无环鸟苷+丙种球蛋白表达下调和不做团体(PBS)。相比之下,那些相同的补充蛋白表达下调在雌性老鼠在第二天和无环鸟苷治疗后相比,无环鸟苷+丙种球蛋白治疗组。此外,蛋白质α1-antitrypsin 1 - 5前体(A1AT, GI: 6678087),一个重要的促炎的蛋白质,显著调节在雄性老鼠在第二天和无环鸟苷治疗后相比,无环鸟苷+丙种球蛋白或没有治疗后(PBS)。然而,A1AT下调在雌性老鼠在第二天和无环鸟苷治疗后(图9)。

急性和长期激活补体蛋白(C3a C3b, C5 ca5)在HSE患者CSF但不健康对照组(40]。值得注意的是,只有接受pbs感染雄性老鼠死亡(图1),符合我们的性别差异报告基因抵抗HSE (41]。补充C3a涉及记忆丧失在中枢神经系统感染西尼罗河病毒的模型(42),有趣的是还可以刺激神经发生在成年小鼠和促进缺血性脑损伤后功能恢复快43,44),表明双有害和保护的作用。

重要的是,无环鸟苷和无环鸟苷+丙种球蛋白有相反的影响表达的一些补充蛋白在雄性和雌性老鼠第七天π相对于PBS,例如,补充C7前体(图9)。雌性小鼠的血清淀粉样4蛋白前体缺席但高度调节男性无环鸟苷,接受pbs老鼠相比,无环鸟苷(图+ IVIG-treated老鼠8)。

急性血清淀粉样蛋白(A-SAA)蛋白质是危险信号,作为TLR2和TLR4的内源性配体。HSV1感染诱导的快速表达A-SAA导致强炎症反应(45];因此,A-SAA和补充蛋白质是HSE的候选生物标志物。尽管我们无法辨别特定蛋白质可能与LM赤字在F M老鼠从这个分析,数据往往折扣加剧炎症反应蛋白质的表达与HSE相关(比F > M)是参与。这些观察到的性别改变上述血清蛋白伴随观察到的差异,雄性和雌性老鼠的行为在HSV感染和治疗。

4所示。讨论

大多数患者(> 60%)幸存的HSE受到神经障碍包括损失的气味(嗅觉缺失症)和演讲(失语症),焦虑,学习和记忆障碍,可以严重尽管抗病毒治疗(3,46]。相比之下,~ 70%的新生儿存活HSV1感染遭受永久性的神经损伤,表现出不同的症状包括运动异常如轻偏瘫和痉挛性四肢瘫痪,延迟的演讲中,视觉障碍或失明,反复发作,microencephally [47,48]。诸多病理生理学机制中负责神经功能障碍后HSV1感染中枢神经系统在很大程度上是未知的。然而,发现不良的神经状况高度与延迟无环鸟苷治疗已经被解释为证据,随便viral-replication-triggered事件涉及(2]。

我们利用延迟抗病毒和/或抗炎药物管理局开发新颖的小鼠模型,以促进研究,以阐明机制的神经功能障碍造成HSV1感染中枢神经系统。双边眼部感染后,所有抗性B6小鼠发达HSE和脑干炎症症状明显缺席单方面对小鼠接种相同剂量的病毒。虽然,目前,我们在发病机理无法解释这种差异,双边接种B6小鼠仍然允许我们地址的作用中枢神经系统炎症HSV1-induced神经赤字。

老鼠组合无环鸟苷+丙种球蛋白治疗是免费的焦虑ACV-treated相比,接受pbs受感染的老鼠表现出高水平的焦虑使用高架迷宫+测试确定。开放的现场试验来评估焦虑为女性而不是男性发现了类似的趋势,但是考虑到低每个性别的老鼠数量( ),从来没有达到统计学意义(没有显示)。IVIG-mediated防止焦虑与降低脑干炎症特别是Ly6C流入^高炎症性单核细胞在急性感染(第七天π),我们之前报道的是随意参与HSE (17]。这种相关性是一致的外围抑制Ly6C的最新报告^高炎症性单核细胞浸润到中枢神经系统在一些大脑区域减轻神经炎症炎症和焦虑的发展模式和心理社会应激诱导行为异常(49]。事实上,证据来自其他啮齿动物模型,包括重复社会失败模型,印证了单核细胞贩运到大脑是随意参与建立焦虑行为应对慢性压力(50]。最近的报告基因,或者antibiotic-mediated Ly6C损耗^高单核细胞减少神经发生和记忆保留表明Ly6C^高单核细胞人口基本对大脑内稳态和可塑性51]。因此,Ly6C^高单核细胞可以产生有害或有益的影响取决于宿主炎症状态,与炎性Ly6C^高单核细胞产生破坏性的影响,虽然有利于病原体间隙可引起宿主组织的破坏,如果不严格控制17,51- - - - - -55]。

观察到的性别偏向的HSV对学习和记忆的影响和有利和不利影响,分别,无环鸟苷和丙种球蛋白的行为很难把脑细胞的HSV感染的直接影响。海马体是主要的大脑区域参与学习和记忆(56,57]。HSV1-inflicted海马神经元损害的折扣是学习和记忆的赤字的原因是因为感染HSV缺席或只在非常低但同等水平的雄性和雌性老鼠的大脑在急性感染。因此,这些数据提出了几个重要的问题包括(i)为什么学习和记忆障碍仅限于雌性老鼠吗?(2)无环鸟苷如何防止认知能力下降,鉴于这是一个鸟嘌呤核苷核苷类似物,据称优先抑制病毒DNA复制?(58,59)和(3)如何丙种球蛋白对抗无环鸟苷的影响,我们已经表明,它是排除在大脑和行为外围地发挥抗炎活动,防止HSE (17]。在最近的三期临床试验的390名被试,Gammaglobulin阿尔茨海默氏症(GAP)合作研究中,丙种球蛋白治疗未能达到减缓认知和功能下降的主要端点经过18个月的治疗,但没有负面影响的行为报告(60]。更昔洛韦(GCV),核苷药物前体模拟无环鸟苷,最近报道是一种小胶质细胞增殖的有效抑制剂,有效地抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎(运算单元)通过减少CD11b的渗透⁺CD45^高Iba⁺巨噬细胞和T细胞在中枢神经系统(61年]。在我们的研究中,无环鸟苷治疗从第四天π单核细胞尤其是Ly6C的渗透^高子集到脑干,但是否抑制中枢神经系统小胶质细胞增殖发生需要进一步研究。

早先研究涉及,HSV1诱导炎症和皮质和脑干病变的发展严重的雌性小鼠的空间记忆障碍(13]。没有其他行为特征进行的研究,也排除了雄性老鼠,这是不幸的,因为它仅仅是啮齿动物的研究,直接测量HSV1对学习和记忆的影响。摄动的神经干细胞(NSC)海马齿状回神经发生的是越来越多的与认知障碍有关,包括空间记忆,尤其是长期记忆保留在莫里斯水迷宫测试(62年,63年]。最近的研究表明,一些外围的疾病和代谢疾病以及衰老导致慢性炎症与行为障碍相关联,包括焦虑、抑郁,以及学习和记忆赤字与神经发生中断(56]。感兴趣的在这种情况下最近的报告,HSV1感染,导致慢性炎症在大脑35,64年,65年),会导致受损神经发生(66年,67年]。一个有趣的观察是,激活HSV1-specific CD8 T细胞可以抑制NSC增殖在体外通过交互分泌干扰素- coculturesγ干扰素-γR nsc (68年]。我们和其他记录长期持久性HSV1-specific激活T细胞与干扰素的生产——有关γ在感觉神经节和老鼠和人类的大脑,这就带来了一种可能,受损的神经发生在延迟可能参与HSV1-induced认知能力下降(35,64年,69年]。海马学习和记忆最近取决于Wnt信号,和Wnt信号通路是受到压力和对性激素的反应(57,70年];因此,nsc Wnt信号可能参与学习和记忆有性别偏向赤字HSV1-infected老鼠。作为无环鸟苷似乎目标激活增殖细胞在特定的大脑区域61年),这将是重要的决定在将来的研究中如果对学习和记忆的保护作用赤字B6雌性老鼠涉及对小胶质细胞/ CD45渗透的影响^高细胞。

总的来说,从这个探索性研究最重要的发现是无环鸟苷可以防止认知障碍即使给定4天π其作用机理尚不明确,可能小说。有趣的是在最近的一次临床试验,长期口服剂量的无环鸟苷(6个月)后标准14天静脉无环鸟苷据报道,显著改善神经结果与HSV新生儿中枢神经系统参与(47]。相反,在最近的一个试验的基础上,成功的新生儿,延长Valacyclovir成人HSE患者的治疗没有好处,甚至恶化认知结果对一些病人来说(14]。焦虑,在与学习和记忆相关的中枢神经系统炎症,从而减轻丙种球蛋白的抗炎作用。组合用无环鸟苷+丙种球蛋白治疗的负面影响学习和记忆是有趣和重要的广泛的临床使用丙种球蛋白联合无环鸟苷(GCV接受造血干细胞移植的患者对血液恶性肿瘤(71年]。尽管如此,这项研究的结果提出的问题多于答案,我们的实验老鼠HSE模型是理想的无环鸟苷和丙种球蛋白如何影响认知调查时单独或结合在一起。此外,敌对的无环鸟苷和丙种球蛋白对学习和记忆的影响提供了一个机会来确定生物分子,积极的还是消极的影响行为。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项工作是由美国国家卫生研究院,格兰特R21NS085501,授予爱德华m . Cantin。

补充材料

引用

1. k . j .检查员a . s .解决m . t . et al .,“全球和区域的估计和事件1型单纯疱疹病毒感染流行2012年,“《公共科学图书馆•综合》,10卷,不。10篇文章e0140765 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. m·j·布拉德肖和a .文卡特斯”成人单纯疱疹脑炎virus-1:病理生理学,诊断和管理,“神经病治疗,13卷,不。3、493 - 508年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. d . Kimberlin”管理HSV脑炎在成年人和新生儿:诊断、预后和治疗,”疱疹,14卷,不。1,p。11日,2007。视图:谷歌学术搜索
4. p·g·e·肯尼迪和a·乔杜里“单纯疱疹脑炎、”《神经学、神经外科、精神病学,卷73,不。3、237 - 238年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. 单纯疱疹脑炎m . m . Esiri。”immunohistological研究大脑内的病毒抗原的分布”神经科学杂志》上,54卷,不。2、209 - 226年,1982页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. l·e·戴维斯和r·t·约翰逊,”解释为单纯疱疹脑炎的本地化吗?”神经病学年鉴,5卷,不。1,2 - 5,1979页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. n . Kapur s .巴克·e·h·洞穴et al .,“单纯疱疹脑炎:长期磁共振成像和神经心理档案,“《神经学、神经外科、精神病学卷,57号11日,第1342 - 1334页,1994年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. a·r·达马西奥和g·w·范Hoesen边缘系统和单纯疱疹脑炎的本地化,”《神经学、神经外科、精神病学,48卷,不。4、297 - 301年,1985页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. r·s·克劳克兰”简要回顾边缘系统的解剖学和生理学,”加拿大神经科学杂志》上,36卷,补充2,S84-S87, 2009页。视图:谷歌学术搜索
10. c·m·费舍尔“轻度躁狂的症状由单纯疱疹脑炎引起的,”神经学卷,47号6,1374 - 1378年,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. c b章、f . g . Wouterlood和m . p .喋喋不休,“什么的解剖组织内嗅皮层告诉我们什么?”神经可塑性ID 381243条,卷。2008年,18页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. h . Eichenbaum和p . a .立顿”向内侧颞叶的记忆系统的功能性组织:旁海马和内嗅皮层区域的角色,”海马体,18卷,不。12日,第1324 - 1314页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. a·g·Armien s, m . r . et al .,“慢性大脑皮层和皮层下病理学相关神经赤字随后的实验疱疹脑炎,”大脑病理学,20卷,不。4、738 - 750年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. j . w . Gnann b . Skoldenberg j·哈特et al .,“单纯疱疹脑炎:缺乏长期的临床好处Valacyclovir疗法,”临床感染疾病,卷61,不。5,683 - 691年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. p . Lundberg h .奥彭肖m . Wang h·j·杨和e . Cantin“致命的脑炎和CXCR3信号对发展的影响角膜和眼周的皮肤疾病HSV-infected老鼠mouse-strain依赖,”调查眼科及视觉科学,48卷,不。9日,第4170 - 4162页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. g . Barraza-Sandoval j . Casanova-Molla, j . Valls-Sole”痛苦的神经病变的神经生理学评估。”专家审查的神经病治疗,12卷,不。11日,第1309 - 1297页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. c室利罗摩克里希纳,a . n . Newo y . w .沈和e . Cantin“被动管理汇集人类免疫球蛋白产生il - 10的抗炎作用,防止致命的HSV脑炎、”PLoS病原体,7卷,不。6篇文章e1002071 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. j·r·鲁尼和j·哈金斯,”使用静脉注射免疫球蛋白G(丙种球蛋白),”临床血液学最佳实践与研究,19卷,不。1,3-25,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. b . Kotlan d . f . Stroncek, f . m . Marincola“静脉immunoglobulin-based免疫治疗:患者和科学的阿森纳的可能性,”免疫疗法,1卷,不。6,995 - 1015年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. r·m·安东尼·T .小林f . Wermeling和j . v . Ravetch静脉gammaglobulin通过小说T抑制炎症_H2通道。”自然,卷475,不。7354年,第113 - 110页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. r . Clynes“丙种球蛋白的保护机制”,当前舆论免疫学,19卷,不。6,646 - 651年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. d . Leontyev y Katsman, x z .妈,s . Miescher f . Kasermann和d . r .分支,“Sialylation-independent机制参与改善小鼠免疫使用静脉gammaglobulin血小板减少症,”输血,52卷,不。8,1799 - 1805年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. r . Bazin r . Lemieux, t . Tremblay“逆转免疫小鼠血小板减少症的高亲和性单克隆抗体交联人类免疫球蛋白G,”英国血液学杂志》,卷135,不。1,第100 - 97页,2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. a . r .乌鸦,美国歌曲,j·弗里德曼et al .,“IVIg-mediated改良的小鼠通过FcγRIIB独立于SHIP1 ITP, SHP-1,和对活动,杀人案”血,卷102,不。2、558 - 560年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. p . Lundberg c室利罗摩克里希纳,j·布朗et al .,“1型单纯疱疹病毒感染的免疫应答在易感小鼠中枢神经系统病变的主要原因导致致命的脑炎,”病毒学杂志,卷82,不。14日,第7088 - 7078页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. r·伍兹,r . o . Vallero m . s . Golub et al .,“长寿后生围产期PBDE暴露和Mecp2308突变之间的相互作用,”人类分子遗传学,21卷,不。11日,第2411 - 2399页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. d . j . Speca理事长绪方g d Mandikian et al .,“删除Kv2.1延迟整流钾通道导致神经和行为兴奋过度,”基因,大脑和行为,13卷,不。4、394 - 408年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. c室利罗摩克里希纳,h .奥彭肖和e . m . Cantin”的免疫调节方法在治疗HSV脑炎、”未来的病毒学,8卷,不。3、259 - 272年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. c·洛佩兹,“自然抗疱疹病毒感染小鼠,基因”自然卷,258年,第153 - 152页,1975年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. l . f . Kastrukoff a s Lau, m . l . Puterman”基因的自然抗单纯疱疹病毒1型潜伏性感染周围神经系统的老鼠,”《普通病毒学杂志》上第4部分,卷。67年,第621 - 613页,1986年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. c . v . Vorhees和m·t·威廉姆斯,“价值评估的水迷宫空间和自我中心在啮齿动物学习和记忆的基础研究和监管研究,“神经毒理学和畸形学,45卷,第90 - 75页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. k . Bromley-Brits y邓,w .歌曲,”莫里斯水迷宫测试在阿尔茨海默病模型小鼠学习和记忆赤字,”《可视化实验,没有。53岁的e2920条,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. n . Sousa o . f . x阿尔梅达,c . t . Wotjak“漫游指南行为分析实验室啮齿动物,”基因,大脑和行为5卷,5-24,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. f·l·f·Kastrukoff a s Lau武井et al .,“冗余的免疫系统限制1型单纯疱疹病毒的传播在中枢神经系统(CNS) C57BL / 6小鼠,”病毒学,卷400,不。2、248 - 258年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. e . m . Cantin d·r·辛顿j . Chen和h .奥彭肖“γ干扰素表达在急性和潜在的神经系统感染单纯疱疹病毒1型,”病毒学杂志,卷69,不。8,4898 - 4905年,1995页。视图:谷歌学术搜索
36. 副检察官,大肠Marciniak博士审查大肠,p . Dutar et al .,“趋化因子MIP-1α/ CCL3损害小鼠海马突触传递、可塑性和记忆,”科学报告5卷,第15862条,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. X.-M。Wang b . Walitt l . Saligan a . f .女子c·w·张,和z . j .,“化疗脑:一个评论和因果假说与化疗相关的细胞因子和表观遗传重编程之间的联系,“细胞因子,卷72,不。1,第96 - 86页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. s . a . Ballendine Greba, w . Dawicki x张j·r·戈登和j·g .霍德兰”行为改变老鼠的后代后怀孕期间母体免疫激活和ELR-CXC趋化因子受体拮抗:对神经发育的影响精神疾病,”Neuro-Psychopharmacology和生物精神病学的进展57卷,第165 - 155页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. r·b·Scheinert a .同王妃,a·库马尔·t·c·福斯特,和b·k·奥梅罗德”一些激素、细胞因子和趋化因子水平变化在男性寿命随认知状态费舍尔344只老鼠,”大脑、行为和免疫力49卷,第232 - 216页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. c·e·埃里克森,m . Studahl和t . Bergstrom“急性和长期补体激活中枢神经系统在单纯疱疹脑炎,”神经免疫学杂志卷,295 - 296,130 - 138年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. p . Lundberg p . Welander h .奥彭肖et al .,“6号染色体鼠标轨迹,确定抗单纯疱疹病毒也会影响复活,而雌性老鼠的分离位点增加阻力,”病毒学杂志,卷77,不。21日,第11673 - 11661页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. m . j . Vasek c·加伯·d·多尔西et al .,“complement-microglial轴驱动器突触损失在占据记忆障碍,”自然,卷534,不。7608年,第543 - 538页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. y Rahpeymai, m·a . Hietala Wilhelmsson et al .,”补充:基底的小说因素和ischemia-induced神经发生,”在EMBO杂志,25卷,不。6,1364 - 1374年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. a . Stokowska a·l·阿特金斯j·莫兰et al .,“补充肽C3a刺激实验性脑缺血后神经可塑性,”大脑,卷140,不。2、353 - 369年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. m . Villalba m . Hott c·马丁et al .,“单纯疱疹病毒1型诱发同时激活的toll样受体2和4和表达的内源性配体血清淀粉样蛋白在星形胶质细胞,”医学微生物学和免疫学,卷201,不。3、371 - 379年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. 美国许可,岩石,a·莫特和HSV脑炎研究小组,“单纯疱疹病毒脑炎:临床表现,诊断和结果106年成人患者中,“临床病毒学杂志,60卷,不。2、112 - 118年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. d . w . Kimberlin r·j·惠特利w . Wan et al .,“新生儿疱疹后口服阿昔洛韦抑制和神经发育。”新英格兰医学杂志》上,卷365,不。14日,第1292 - 1284页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. k . l . e .鸿y . c . Tsang l . c . Chan et al .,“脑炎在儿科重症监护室的结果。”印度儿科杂志》,卷83,不。10日,1098 - 1103年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. x郑,s .妈,a康et al .,”Ly6C化学抑制^嗨外围国家的单核细胞产生抗抑郁效应在老鼠身上,“科学报告》第六卷,第19406条,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. e . s . Wohleb d·b·麦金j·f·谢里丹和j.p. Godbout“单核细胞贩运到大脑应激和炎症:一种新型轴immune-to-brain沟通影响情绪和行为,“神经科学前沿,8卷,p。447年,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. l . Mohle d·加尼姆Ly6C m . m . Heimesaat et al。。^嗨单核细胞之间提供一个链接antibiotic-induced改变肠道微生物群和成人海马神经发生,”细胞的报道,15卷,不。9日,第1956 - 1945页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. b . Schumak k . Klocke j . m . Kuepper et al .,“特定的Ly6C损耗^嗨炎症单核细胞防止免疫病理实验脑型疟疾。”《公共科学图书馆•综合》,10卷,不。4篇文章e0124080 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. r·特里·d·r·Getts c . Deffrasnes c . van Vreden i l·坎贝尔和n . j .国王,“炎症性单核细胞和病毒性脑炎的发病机制”,《神经炎症,9卷,不。1,p。270年,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. a . Biswas d . Bruder Ly6C s . a .狼et al。。^高单核细胞控制脑弓形体病。”《免疫学,卷194,不。7,3223 - 3235年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. w .江、美国圣皮埃尔·罗伊b . j . Morley j .郝CCR2和a。r . Simard渗透⁺Ly6C^高促炎的单核细胞和中性粒细胞进入中枢神经系统调节烟碱乙酰胆碱受体的多发性硬化症的典范,“《免疫学,卷196,不。5,2095 - 2108年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. 诉Chesnokova、r . n . Pechnick和k . Wawrowsky“慢性周围炎症,海马神经发生,和行为,“大脑、行为和免疫力卷,58页1 - 8,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. a . m .堡垒和k·m·弗里克”海马Wnt信号:内存管理和激素的相互作用,”神经学家,22卷,不。3、278 - 294年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. h·h·贝尔福”,抗病毒药物,“新英格兰医学杂志》上,卷340,不。16,1255 - 1268年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. p·d·格里菲思”,在移植设置抗病毒药物,”抗病毒研究,卷71,不。2 - 3、192 - 200年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. n . Relkin“静脉注射免疫球蛋白对阿尔茨海默氏症,”临床和实验免疫学补充1卷。178年,27 - 29,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. z叮,诉Mathur, p . p . et al .,“抗病毒药更昔洛韦,小胶质细胞增殖的有效抑制剂,神经炎症”《实验医学杂志》上,卷211,不。2、189 - 198年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. h . g . Ko, d . j .张成泽j . et al .,儿子“切除海马神经发生的影响上下文恐惧记忆的形成和灭绝,”分子的大脑,卷2,p . 2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
63. j . t . Goncalves s t·谢弗,p.h.计“成年海马的神经发生:从干细胞的行为,”细胞,卷167,不。4、897 - 914年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. t·刘问:唐,r·l·亨德里克斯“炎性浸润后三叉神经节的单纯疱疹病毒1型角膜感染,”病毒学杂志,卷70,不。1,第271 - 264页,1996。视图:谷歌学术搜索
65. 通用Verjans r .问:Hintzen j·m·范Dun et al .,“单纯疱疹病毒特异性T细胞的选择性保留潜伏性感染人类的三叉神经节,”PNAS,卷104,不。9日,第3501 - 3496页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. j . h . Rotschafer s, m .小m·埃里克森w·c·低,和m . c . Cheeran”调制的神经干细胞/祖细胞增殖实验期间单纯疱疹脑炎是由微分FGF-2表达式在成年人的大脑,”疾病的神经生物学,卷。58岁的没有。0,144 - 155年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. a . j . Chucair-Elliott c . Conrady m .郑c·m·克罗尔·t·e·莱恩·d·j·卡尔,“Microglia-induced il - 6可防止神经元损失1型单纯疱疹病毒感染的神经祖细胞后,“神经胶质,卷62,不。9日,第1434 - 1418页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. 美国,j . h . Rotschafer j . r . Lokensgard CD8和m . c . Cheeran”激活⁺T淋巴细胞抑制神经干细胞/祖细胞增殖:移行细胞的作用。”《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。8篇文章e105219 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
69. m . van Velzen l .京公元Osterhaus, a . Sette d . m . Koelle通用Verjans,”当地CD4和CD8 t细胞反应性1型单纯疱疹病毒抗原文档广泛的病毒蛋白表达和免疫能力在人类三叉神经节潜伏性感染,”PLoS病原体,9卷,不。8篇文章e1003547 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
70. f . Matrisciano c . l . Busceti d Bucci et al .,“Wnt拮抗剂Dickkopf-1参与应激诱导海马损伤,”《公共科学图书馆•综合》》第六卷,没有。1,文章e16447, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
71. 诉Erard, a·瓦尔德·科里,w . m . Leisenring和m . Boeckh”使用的长期抑制造血干细胞移植后无环鸟苷:对单纯疱疹病毒(HSV)疾病的影响和耐药HSV疾病,”《传染病杂志》上,卷196,不。2、266 - 270年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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