八角提取物对禽病毒的抑制作用GydF4y2Ba - raybet雷竞app,雷竞技官网下载,雷电竞下载苹果

摘要GydF4y2Ba

这项研究旨在筛选的抑制活性GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba对禽呼肠孤提取物，传染性法氏囊病病毒（IBDV），新城疫病毒（NDV）和传染性喉气管炎病毒（ILTV）。3次提取，无水甲醇（100MOH），50％甲醇（50MOH），和水提取物的细胞毒性和抗病毒的动作（WA），用MTT法评价。该GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba提取物在三个攻击，preinoculation，接种后，和同时接种加入到培养的鸡胚成纤维细胞（CEF）与测试的病毒。三种提取物显示的抗病毒抑制活性与除100MOH和50MOH同时接种和preinoculation期间所有测试的病毒，其表现出抗IBDV没有影响，从而表明该提取物具有针对病毒上CEF预防作用。接种后期间，提取物显示出抗NDV和禽呼肠孤抑制作用，而抗IBDV没有影响记录，并且只有100MOH显示针对ILTV具有抑制作用。这项研究的初步结果表明，GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba可以是用于为抗病毒剂的天然替代源的候选者。GydF4y2Ba

一。介绍GydF4y2Ba

尽管在护理，用药和疫苗接种来控制传染病的手段巨大进步，但仍有家禽业一个显著的威胁。病毒是家禽疾病的最大的病原体之一，被认为是家禽业造成巨大的经济损失家禽业全球主要的风险。接种疫苗仍然是禽类疾病的战斗感染的重要策略。然而，感染性疾病发生，尽管对这些疾病的疫苗接种而在家禽疾病由于抗病毒化合物的毒性和高的成本[不使用抗病毒剂GydF4y2Ba1GydF4y2Ba，GydF4y2Ba2GydF4y2Ba]。因此，有必要寻找其他方法来控制病毒性疾病。GydF4y2Ba

目前，关注于寻找控制在人类和动物病毒性疾病新的有效和安全的化合物增加。若干调查进行了以针对流感病毒测试不同的植物提取物（H1N1）[GydF4y2Ba3GydF4y2Ba]，新城疫病毒[GydF4y2Ba4GydF4y2Ba]，轮状病毒[GydF4y2Ba五GydF4y2Ba，以及单纯疱疹病毒1型[GydF4y2Ba6GydF4y2Ba]。自然资源如药材及其提取物进行了调查为让他们的前景令人鼓舞的研究，以控制这种疾病的生物作用。八角（GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba）表示药材中的一个，尤其是它实现作为antiflu药物普及之后。被用于生产达菲[从八角的果实提取的莽草酸GydF4y2Ba7GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba植物是常绿植物，通常认定为中国八角，它具有星形水果和起源于中国和越南，实行传统的香料和草药。此外，它具有舒筋活血有显著的健康益处[GydF4y2Ba8GydF4y2Ba]。八角茴香提取物对人类免疫缺陷病毒的抗病毒活性（HIV）GydF4y2Ba9GydF4y2Ba]，单纯疱疹病毒1型（HSV-1）[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba]，单纯疱疹病毒2型（HSV-2）[GydF4y2Ba11GydF4y2Ba]，和牛疱疹病毒1型（BHV-1）[GydF4y2Ba12GydF4y2Ba]。然而，现有的关于其对禽流感病毒的活性的数据是有限的。这项研究计划从评估三种提取物的抗病毒活性GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba对抗四种禽流感病毒。GydF4y2Ba

2.材料和方法GydF4y2Ba

2.1条。植物GydF4y2Ba

八角GydF4y2Ba干果是从沙特阿拉伯利雅得当地的一家药店购买的。八角茴香的干果被磨成细粉。GydF4y2Ba

2.2。八角茴香提取物的制备GydF4y2Ba

中国八角的提取进行了使用三种溶剂：无水甲醇，50％甲醇和无菌蒸馏水。For each extract, 100 g of anise powder was added separately to 500 ml of the corresponding solvent and mixed well in tightly sealed flasks and then placed in a water bath at 37°C for 24 hours with intermittent shaking. The supernatant was collected and filtered (Whatman filter paper no. 1). The residue was kept in the flasks and the extraction process was repeated 3–5 times until a clear solution is obtained. After that, the extract solutions were collected and filtered again (Whatman no. 1). The extract was allowed to dry in the oven at 45°C. The dry extract was weighed and either diluted to a final concentration of 500 mg/ml or kept in fastened capped bottles in the refrigerator for subsequent usage. The diluted extracts were centrifuged and filtered through a 0.22 μGydF4y2Ba米微孔膜滤器（Whatman，肯特，UK）。GydF4y2Ba

2.3条。细胞和病毒GydF4y2Ba

鸡胚成纤维细胞（CEF）在该研究中，并从9至11日龄的小鸡胚胎制备细胞。病毒疫苗株，禽呼肠孤（S1133），新城疫病毒（克隆30），IBDV（D78），和传染性喉气管炎病毒（LT-IVAX）（英特威公司，奥马哈NE68103 USA），在这项研究被用来评估中国的抗病毒作用八角提取物。GydF4y2Ba

2.4。鸡胚成纤维细胞培养制备GydF4y2Ba

CEF细胞按照之前描述的标准程序从9-10天鸡胚组织起来[GydF4y2Ba13GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba

2.5。病毒的传播GydF4y2Ba

CEF单层在M199培养基中生长在补充有10％新生小牛血清，并温育在37℃，5％COGydF4y2Ba_2GydF4y2Ba. 当获得融合的CEF单层时，用胰蛋白酶/EDTA溶液对其进行继代培养。一旦新的CEF在T75烧瓶（康宁）中生长到85%的汇合度，移除生长培养基，并将1 ml每种病毒悬浮液接种到组织培养烧瓶中；将接种的烧瓶在37℃下孵育1小时，以允许病毒吸附。去除病毒悬液，加入5%新生小牛血清的M199，然后将接种的细胞在37°C和5%的培养基中培养GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba七天和使用倒置光学显微镜（Nikon，日本）每天测试的细胞病变效应（CPE）。将病毒传代五次，以确保领养CEF。病毒滴定按照Reed和Muench [方法完成GydF4y2Ba14GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba

2.6条。細胞毒性分析GydF4y2Ba

的细胞毒性GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba提取物中使用被称为MTT（3-（4,5二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑）法[细胞活力测定法在体外评估GydF4y2Ba15GydF4y2Ba]。在96孔组织培养板中的CEF细胞的汇合单层用不同浓度的孵育GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba提取物（250–0.48 mg/ml）用M199培养基稀释并在37°C下与5%的CO孵育GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba;细胞没有萃取液施加作为对照。温育72小时，20的后 μGydF4y2Bal of MTT solution (5 mg/ml PBS) (Sigma) was added to each well, the plates were further incubated at 37°C for 4 hours, and then, the medium was removed and 100 μGydF4y2Ba二甲亚砜（DMSO）的升加入到每个孔中。该plates were shaken in a microplate shaker for 5 minutes, and the absorbance was read at a wavelength of 570 nm using a microplate reader. The experiments were performed in duplicate and repeated three times.

2.7条。感染与病毒生长试验GydF4y2Ba

通过提取物对CEF细胞中病毒CPE的抑制能力，评价提取物的抗病毒抑制活性。根据细胞毒性实验结果，从最大的非细胞毒性浓度开始，用M199 (3.9-0.24 mg/ml)将提取物稀释至不同浓度。的抗病毒活性GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba采用Fan等人的方法，采用三种添加方法对禽呼肠病毒、NDV、IBDV和ILTV提取物进行了评估。[GydF4y2Ba4GydF4y2Ba]和Xu等人。[GydF4y2Ba16GydF4y2Ba]。在第一方法中，同时进行接种，100 TCIDGydF4y2Ba_50GydF4y2Ba病毒悬浮液与一起孵育GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba提取物细胞培养物的外侧进行1小时，在4℃，然后将处理过的病毒加入到细胞培养物中，并温育1小时，在37℃。在此之后，病毒悬浮液中除去和洗涤细胞用PBS和新M199加入到该板中，所有平板在37℃温育，用5％COGydF4y2Ba_2GydF4y2Ba阳性对照孔含有不含提取物的细胞和病毒，阴性对照孔仅含有培养基中的细胞，空白对照孔仅含有培养基。每天用倒置光学显微镜检查细胞。在预接种方法中GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba提取物与CEF细胞在37℃和5%CO下孵育2小时GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba，然后将萃取物取出并洗涤经处理的细胞用PBS，然后100 TCIDGydF4y2Ba_50GydF4y2Baof virus suspensions was incubated with the treated cells for 1 h. After that, virus suspensions were removed and maintenance medium was added to the plates, and the plates were incubated at 37°C in a humidified atmosphere and 5% CO_2GydF4y2Ba. 然后每天检查盘子是否有CPE。在后伤害法中，100 TCIDGydF4y2Ba_50GydF4y2Ba该病毒的用在96孔板的CEF单层的温育，并在37℃下温育1小时，以允许附接。After that, the medium was removed and the cells were washed with PBS, and then different concentrations of the extracts (3.9–0.24 mg/ml) were added to each well of the plates. The MTT assay was used to measure the livability of CEF, and the test is done when active control cells showed 80% CPE. The experiments were repeated three times. The virus inhibitory rate was calculated based on the following formula: virus inhibitory rate = ((extract + virus − virus control)/(cell control − virus control)) 100. The absorbance values and virus inhibitory rate were considered as indicators of antiviral activity.

2.8。统计分析GydF4y2Ba

数据通过ANOVA使用SAS®[的GLM模型分析GydF4y2Ba17GydF4y2Ba]。Duncan多重范围试验用于比较处理装置之间的差异（GydF4y2Ba ）GydF4y2Ba显著的时候。分析前百分比数据进行反正弦变换。所有实验重复三次。GydF4y2Ba

3。结果与讨论GydF4y2Ba

在使用MTT细胞毒性试验，细胞的吸光度值被用作活细胞的数目的指示符和与细胞生长[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba]，从而使高吸光度值的装置更活细胞。当处理过的细胞的吸光度值不大于小区控制显著降低，它表明该提取物对细胞无细胞毒性，和相应的浓度可以考虑为最大安全水平。的细胞毒性试验结果GydF4y2Ba八角GydF4y2Ba摘录列于表中GydF4y2Ba1GydF4y2Ba。该results showed that the 100MOH and 50MOH extracts at 3.9 mg/ml and WA extract at 1.9 mg/ml were not significantly lower than those of the cell control group. Therefore, these concentrations were considered as the maximal safety levels. The 100MOH and 50MOH extracts at high concentrations (62.5 to 7.8 mg/ml) were toxic to CEF as indicated by the lower value of absorbance compared to cell control. The aqueous extract at a concentration of 62.5 mg/ml showed no significant difference in comparison with cell control. The high absorbance value may be due to the darker color of the aqueous extract at this high concentration (62.5 mg/ml), but at the following levels (31.25–3.9 mg/ml), the absorbance values were significantly lower than the control group. On the other side, the aqueous extract at the concentrations 1.9 and 0.97 mg/ml exhibited significantly larger values ( ）GydF4y2Ba比对照组，其可以表明，该提取物能这些剂量范围内促进细胞生长[GydF4y2Ba4GydF4y2Ba]。For facilitating the comparison between the extracts at the same levels, the maximal safety concentration of the extracts was considered at 3.9 mg/ml.


浓度（mg / ml）的GydF4y2Ba	八角茴香提取物GydF4y2Ba^1GydF4y2Ba
浓度（mg / ml）的GydF4y2Ba	100年卫生部GydF4y2Ba	50MOHGydF4y2Ba	WAGydF4y2Ba

62.5GydF4y2Ba	0.152GydF4y2Ba^CGydF4y2Ba	0.198GydF4y2Ba^dGydF4y2Ba	0.379GydF4y2Ba^CGydF4y2Ba
31.25GydF4y2Ba	0.126GydF4y2Ba^dGydF4y2Ba	0.141GydF4y2Ba^ËGydF4y2Ba	0.293GydF4y2Ba^ËGydF4y2Ba
15.62GydF4y2Ba	0.108GydF4y2Ba^dGydF4y2Ba	0.124GydF4y2Ba^ËGydF4y2Ba	0.247GydF4y2Ba^FGydF4y2Ba
7.8GydF4y2Ba	0.116GydF4y2Ba^dGydF4y2Ba	0.258GydF4y2Ba^CGydF4y2Ba	0.127GydF4y2Ba^GGydF4y2Ba
3.9GydF4y2Ba	0.390GydF4y2Ba^{一个GydF4y2Ba}	0.361GydF4y2Ba^{一个GydF4y2Ba}	0.324GydF4y2Ba^dGydF4y2Ba
1.9GydF4y2Ba	0.382GydF4y2Ba^{一个GydF4y2Ba}	0.324GydF4y2Ba^bGydF4y2Ba	0.458GydF4y2Ba^{一个GydF4y2Ba}
0.97GydF4y2Ba	0.389GydF4y2Ba^{一个GydF4y2Ba}	0.327GydF4y2Ba^bGydF4y2Ba	0.410GydF4y2Ba^bGydF4y2Ba
0.48GydF4y2Ba	0.353GydF4y2Ba^bGydF4y2Ba	0.307GydF4y2Ba^bGydF4y2Ba	0.373GydF4y2Ba^CGydF4y2Ba
单元控制GydF4y2Ba	0.402GydF4y2Ba^{一个GydF4y2Ba}	0.380GydF4y2Ba^{一个GydF4y2Ba}	0.395GydF4y2Ba^{公元前GydF4y2Ba}
SEMGydF4y2Ba	0.007GydF4y2Ba	0.009GydF4y2Ba	0.009GydF4y2Ba
值GydF4y2Ba	<0.0001GydF4y2Ba	<0.0001GydF4y2Ba	<0.0001GydF4y2Ba