隔离和宏基因组禽白血病病毒的识别与死亡率在肉用仔鸡有关

文摘

禽白血病病毒(ALV)属于家庭Retroviridae家禽业,造成相当大的经济损失。后爆发与高死亡率在马来西亚北部肉用鸡群,从影响鸡肾组织提交了病毒分离和鉴定鸡孵化蛋和MDCK细胞。病毒增长的证据显示出血在卵子和胚胎死亡率文化。当病毒在细胞培养中生长细胞病变效应的发展证明了这一点。隔离病毒纯化蔗糖梯度和标识使用负染法透射电子显微镜。进一步确认是通过下一代测序和核苷酸序列同源性搜索。分析病毒序列使用工具显示99 - 100%的NCBI BLAST和外生ALV病毒包膜蛋白序列的同源性。系统发育分析基于部分信封序列显示马来西亚隔离集群与台湾和日本ALV菌株,接近ALV群J, ALV群E,并重组/ E隔离。基于这些发现,ALV的结论是与目前的爆发有关。是建议进一步的研究应该进行分子流行病学和致病性的病毒隔离标识。

1。介绍

禽白血病病毒(ALV)是一个在经济上重要的逆转录病毒影响肉类和蛋鸡型鸡。病毒属于一个Alpharetrovirus在家庭Retroviridae属。基于包膜糖蛋白(gp85)是可能的外生ALV划分为不同的子组,也就是说,A, B, C, D, E,病毒囊膜糖蛋白和j .尤其是负责附件和受体特异性中和抗体的生产(1,2]。病毒子组的确定到目前为止,子组A, B和J被认为是最普遍和经济重要3]。子群J第一次被隔离在肉用型鸡1989年在英国,但目前全球家禽业[造成巨大破坏4]。除了它的免疫抑制效果,ALV通常与淋巴白血病,髓细胞的骨髓白血病、肾以及其他形式的肿瘤(5]。本研究报告一些病毒学和分子测序方法用于识别病毒引起的死亡率肉用鸡羊群在马来西亚。

2。材料和方法

后疑似疫情在肉用仔鸡农场容量约10000只鸟,组织样本,包括气管、肾、前胃,提交病毒学实验室,马来西亚Putra大学,病毒分离和鉴定。据报道,死亡率达到10%左右27-day-old群(30-day-old群)和20%以上()。鸡群健康项目包括疫苗接种NDV、炎症性肠病,IBV。尸检结果显示轻微瘀斑的前胃出血,肿胀明显肾(数据未显示)。之一样本处理和接种鸡胚蛋以及MDCK细胞然后监控病毒增长的证据。识别的病毒是由电子显微镜使用负染色方法,确认是由下一代测序使用MiSeq illumina公司测序平台。ScriptSeq v2 RNA-Seq库制备设备采用和使用根据制造商的指南(中心、美国)。

3所示。结果与讨论

禽白血病,尤其是群J起源,据报道之前在马来西亚6]。本研究调查病毒引起的死亡率在2013年在马来西亚北部肉用鸡农场。由于肾脏的参与,首次初步诊断集中在禽传染性支气管炎(7];然而接种肾悬挂在鸡的孵化蛋发现证据表明病毒增长严重出血和胚胎死亡率(图的特征1)。观察胚胎死亡率增加的使病毒增加通道3。具体地说,在通道2,有-100%的死亡率约70%的胚胎从第二天第三天postinoculation(π)。禽白血病病毒已报道导致严重出血和死亡的胚胎感染后4到5天内卵胚胎的5]。

同样,接种的MDCK细胞肾派生悬浮显示病毒生长的证据特点是细胞病变效应的存在,包括细胞膨胀,造粒,四舍五入,巨大的细胞构成,细胞分离从第三天开始π(图2)。尽管大多数alv产生不可见的形态变化在细胞培养中,感染鸡胚成纤维细胞等细胞病变alv菌株RAV-2据报道引起CPE和超然的细胞在感染后3天(8]。其他研究证实alv的取向和增长鸡胚胎成纤维细胞基于CPE的存在(9,10]。一般也知道MDCK细胞表达的受体等禽类病毒禽流感(11]。

(一)

(b)

(c)

(d)

病毒识别使用负染色电镜显示球圆形,病毒样颗粒与特征预测类似尖峰结构(图等3)。随后的分析比较表明,该病毒形态学观察研究报告类似的曾荫权et al。12]。

尽管证据表明病毒在鸡蛋胚胎生长和细胞培养,试图检测常见的病毒性疾病使用特定引物对NDV、AI, IBV未果(7];因此,新一代核糖核酸测序方法。测序后,分析生成的序列(加入基因库号:KX061539)使用NCBI BLAST透露与外生ALV病毒包膜蛋白序列同源性高地区。此外,使用整个信封系统发育特征序列(1230个基点)显示与外生身份密切ALV - tw - 3593来自台湾(100%)、ALV -港币026株来自日本(99%),和一个假定的内生ALV序列指定ALVE-B11 (99%)。的病毒群,确定当地ALV序列表现出亲密ALV J, ALV E和重组ALV A / E以及内生ALV的鸡(图4)。

的蛋白质序列,构成了苏受体结合域(gp85)和跨膜蛋白TM域(gp37),马来西亚ALV隔离系统集群与台湾分离(TW3593)和中国分离(WB11008e)以及日本隔离(港币026)(图未显示)。

鉴于逆转录病毒的本质,这是通常的突变和重组ALV可能影响病毒多样性和组织取向以及他们造成感染的严重程度(13]。这些因素可能占报告的高死亡率中观察到病毒的农场以及在使胚胎。

4所示。结论

基于研究结果中观察到的这份报告,得出结论,目前的疫情与ALV。研究进一步表明,ALV禽类中间继续流传在马来西亚虽然可能诊断。还需要群监测对ALV和包括ALV感染的可能性的差异相关疫情。建议进一步研究的分子流行病学和发病机理目前在马来西亚当地ALV应变。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

所有作者同样做出了贡献。

确认

作者要感谢支持实验室的疫苗和免疫治疗,生物科学研究所,芬欧蓝。类似的升值→Dilan博士Satharasinghe测序的技术援助。

引用

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