汉坦病毒的血清学调查居民来自巴西的热带和亚热带地区

文摘

巴西已报告1600多例汉坦病毒心肺综合征(HPS)自1993年以来,报道死亡人数的39%。使用重组核衣壳蛋白Araraquara病毒,我们进行ELISA检测汉坦病毒在人类血清免疫球蛋白抗体。本研究的目的是分析居民从热带地区汉坦病毒抗体水平(亚马逊地区)的朗多尼亚州和地区亚热带(大西洋雨林)在圣保罗,巴西。总共1310份血清样本被IgG-ELISA获得2003年和2008年之间和测试,和82个样本(6.2%),其中62来自热带地区(5.8%)和20从亚热带地区(8.3%),阳性。更高水平的汉坦病毒抗体的居民稠密的亚热带地区的观察而与巴西的热带地区。

1。介绍

汉坦病毒是新兴的病原体,获得了越来越多的关注在过去的几十年里1]。属汉坦病毒属于病毒之一的家庭,由啮齿动物传播给人类,可能由其他小型哺乳动物。40多汉坦病毒物种目前已知和22人被认为是对人类致病性(2]。在欧亚大陆发现的汉坦病毒(例如,Hantaan和首尔病毒)存在的啮齿动物鼠亚科和Arvicolinae亚科,导致肾综合症出血热(hfr)感染人类。另一方面在美洲发现的汉坦病毒(例如,犯罪的数量,Juquitiba,Castelo dos Sonhos)存在的啮齿动物Sigmodontinae亚科,导致汉坦病毒肺综合征(HPS)在人类3- - - - - -5]。

Manigold和瓶(2)写道,摩尔、鼩鼱和蝙蝠也越来越被描述为新成员的自然宿主汉坦病毒属(如黄陂南病毒,梁河病毒,龙泉病毒,Yakeshi病毒,Seewis病毒)。然而,这些病毒的致病性人类尚不清楚。同时,有报道血清反应阳性的国内动物,如狗和猫,这表明这些感染通过接触受感染的主要宿主。另一个有趣的研究新鲜发表(5),表明宠物老鼠和鲸鱼在联合王国。然而,没有证据表明这些物种疾病也作为人类感染的水库的作用。

在巴西HPS病例大多是由五个汉坦病毒的基因型:Juquitiba病毒(JUQV),Araraquara病毒(ARAV),拉古纳Negra-like病毒(LANV-like),Castelo dos Sonhos病毒(CASV)Anajatuba病毒(AJBV) (5]。数量明显高于HPS-associated死亡(50%)观察到中西部和西南部地区与其他地区相比,巴西的6,7]。HPS的血清学证据也被报道在巴西北部和东北部的汉坦病毒基因型是未知的(5- - - - - -10]。

在北美HPS的第一个确诊病例发生在1993年,六个月后,据报道在巴西5,11,12]。自那时以来,超过1600 HPS病例在巴西,巴西卫生部/ sv,大约39%是死亡(13]。

通常用于汉坦病毒诊断血清学方法,包括酶联免疫吸附试验(elisa),免疫荧光检测和免疫印迹分析。此外,汉坦病毒隔离州立E6细胞培养和检测anti-hantavirus通过蚀斑减少中和抗体也用于诊断。然而,这两种方法都需要劳动密集型、耗时和biosafety-level-three条件(6]。另一方面,rt - pcr等分子生物学允许分子特征(病毒基因型)和准确诊断(14]。

在这里,为了更好地理解和研究由汉坦病毒感染的分布在巴西,我们提出的血清学调查结果包括个人生活在亚马逊森林附近的城市和农村地区和亚热带地区附近的雨林退化的环境条件。血清的参与者通过IgG-ELISA测试(15从ARAV]使用重组核衣壳蛋白抗原(16]。

2。材料和方法

2.1。网站和人口研究

最小样本量的设计是按照指定的计算执行路易斯和Magnanini17]。基于野生啮齿动物与人类同居和HPS的发生情况下,四个研究地点选择血清学调查2003年到2008年之间。马查多河(从8°57 55′′′S / 62°03年20′′′W - 8°10′15′′S / 62 50°46′′′W)和Machadinho Oeste县(09年38°26′′′S / 61°58 53′′′W)都是在朗多尼亚州在亚马逊热带地区。2003年,435人生活在马查多河和从事自给农业研究注册并受血图(图1)。Machadinho做Oeste县633名居民,并在2005年被抽血。这些参与者住在市区被亚马逊热带森林(图1)。另外两个研究地点是位于2000多公里,附近圣保罗州的亚热带雨林。在Ribeira山谷,这些地区包括Jacupiranga县,65%的巴西大西洋森林仍然(24°54′30′′S / 048°08年01′′′W)。共有157名居民在香蕉或橘子农场和牛或鱼提高2007年参加Jacupiranga和接受血液吸引(图1)。特奥多罗·桑帕约县第四网站(70年22°22′′′S / 052°25 66′′′W)的嘴Paranapanema河,那里的土地被杂乱无章的职业和大规模的森林砍伐。目前,农场的口Paranapanema河流密集的农业活动(图1)。特奥多罗·桑帕约,85居民参加这项研究,2008年受到血液了。所有临床样本送到实验室在液态氮和存储−80°C。

2.2。道德的考虑

登记的参与者在这个道德委员会授权的血清学调查银行独立委员会/ USP(670/2005),并确保他们的个人信息的保密。采血的参与者只有签署知情同意后执行,符合伦理委员会的规则。参与者签署了同意书之后,调查申请评估风险因素,性别,年龄,教育,另一个方面的流行病学信息。

2.3。ELISA

血清被间接免疫球蛋白检测酶联免疫吸附试验(ELISA)使用N ARAV重组蛋白(recN)作为抗原,所描述的Figueiredo et al。15,16),做了一些调整。简单地说,96 -微型板块(PolySorp™美国Nunc 50)被涂上一层μL (ARAV recN蛋白质或各自的控制(0.5μg / mL)在湿室在4°C。两种抗原稀释在carbonate-bicarbonate缓冲区(0.05米,pH值9.6)。孵化项目都是由37°C 1 h,并与洗盘子都洗了6次缓冲区(磷酸盐(PBS) -0.1%渐变20)之间的每一个步骤。在第一步中,50μL屏蔽解决方案包含5%的牛血清白蛋白PBS(美国σ,旧金山,CA)被添加到每个好,板是2 h的潮湿的孵化室在37°C。接下来,50μL的血清样本稀释1:100或控制样品稀释1:1000稀释缓冲(PBS / BSA 1%)被添加/。在第三步中,井与50孵化μL (phosphatase-labeled反人类免疫球蛋白抗体(σ,旧金山,美国)。最后,1毫克/毫升的nitrophenyl磷酸酶底物(美国σpNPP)每口井的添加,和反应是停止20分钟后通过添加50μL (3 M氢氧化钠。吸光度测量在405 nm使用Multiskan女士(Labsystems,芬兰赫尔辛基)。建立了截止均值+ 2个标准差控制样品和显示截止光密度(OD)等于或大于0.500。

recN蛋白作为抗原和积极/消极控制虫媒病毒的实验室提供的样本请虫病毒圣保罗大学的医学院(Luis Tadeu m . Figueiredo博士,医学博士)。

2.4。数据分析

统计分析的结果进行棱镜(GraphPad软件)5.0版本。协会积极血清学测试的亚热带地区和人口和社会经济变量使用卡方检验进行分析,被认为是显著的。

3所示。结果与讨论

血清的1310名参与者在研究中进行了测试使用ARAV recN-ELISA,和82年(6.2%)显示积极的结果。马查多河组(先生),22(1.6%)的435名参与者进行了汉坦病毒的抗体免疫球蛋白。Machadinho做Oeste县40(3.0%)的633名参与者分析以前感染汉坦病毒。Jacupiranga县(RV)在巴西东南部,14(9.0%)的157参与者汉坦病毒的抗体免疫球蛋白。特奥多罗·桑帕约县(PP)在圣保罗州,6(7.0%)的85名参与者为汉坦病毒血清反应阳性的,如图2(一个)。

从Jacupiranga参与者,特奥多罗·桑帕约县东南部亚热带地区的巴西明显()更多的血清反应阳性的汉坦病毒(20/242,8.3%)比热带亚马逊地区的马查多河和Machadinho Oeste县(62/1068,5.8%)。

中汉坦病毒血清反应阳性的,60.9%是女性参与者,如图2 (b),包括877名女性和433名男性(50和32岁的职责。血清反应阳性的)。在Machadinho Oeste县,这是发现,3.63%的女性和2.68%的男性血清反应阳性的。在先生注意到,3.22%的女性和1.84%的男性血清反应阳性的。在房车,发现5.73%的女性和3.18%的男性血清反应阳性的。

那些血清反应阳性的汉坦病毒的年龄范围从5到82年,但包括大部分年轻人大于20岁,如图2 (c)。

汉坦病毒的血清阳性并不与教育水平、出生地、居留时间的学习网站,或其他危险因素评估流行病学分析。

在这项研究中,我们评估了居住地区汉坦病毒阳性率下降可能感染的高风险。高比例的汉坦病毒血清反应阳性的受试者中观察到的参与者从Jacupiranga县(9%)和特奥多罗·桑帕约(7%),这两个位于圣保罗州的亚热带地区。这个值明显高于1.6%的血清反应阳性的病例血清学调查在Ribeira河谷1993年执行(8,12]。

6%和8%的seroprevalence汉坦病毒中观察到目前的研究不是在标准范围内观察到文学,喜欢,例如,14%的速度在Jardinopolis县的人口在圣保罗(18在智利)和6.1%的,大概,ANDV [19]。想必,观察高seroprevalence基因型ORNV,阿根廷北部(20%),,据推测,基因型在巴拉圭查科LNV, 12.8%的城市人口和57%的土著居民被感染(20.]。

亚马逊热带地区的朗多尼亚,汉坦病毒的seroprevalence Machadinho做Oeste县(3%)和马查多河地区(2.8%)是相似的。亚马逊地区的其他研究都取得了不同的汉坦病毒seroprevalence率。调查的几个城市亚马孙州在2007年和2009年之间产生了一个seroprevalence率为0.6% (11),而另一项研究执行沿着公路穿过亚马逊地区从Cuiaba城市圣塔伦城seroprevalence 2.16%到9.43%的比例(21]。

根据纳瓦等描述。22),在Pontal Paranapanema,小丘做暗黑破坏神州立公园(特奥多罗·桑帕约,SP),这是一个森林地区,乡村包围定居点和大型私人性质。该地区是一个楔形区域有界北由力拓巴拉那河和南力拓Paranapanema。以及Ribeira河谷(Jacupiranga, SP),大西洋雨林在圣保罗州是剩下的最后一个重要区域,只剩下1.8%的原始自然植被和生物多样性被认为是一个热点。

血清反应阳性的比例明显高于个人观察汉坦病毒亚热带地区的巴西(圣保罗)相比,热带地区(朗多尼亚州)。有可能出现较高的汉坦病毒感染圣保罗州与当地环境的退化有关。圣保罗,巴西人口最稠密的州,有两个主要的生态系统:“塞拉多(草原)”在西部地区和热带大西洋沿岸热带雨林。这些生态系统维持Sigmodontinae啮齿动物和修改,分段,并受到广泛的甘蔗、大豆和咖啡种植、牲畜饲养,和快速城市化的混乱状况。这种退化景观与人畜共患病允许人类密切接触,导致增强的人类病原体的传播。环境退化喜欢投机取巧的啮齿动物物种的丰度(Necromys lasiurus, Akodonsp。Calomys惯常),这是汉坦病毒感染的危险因素。相比之下,亚马逊热带地区的环境和景观(Machado河地区和Machadinho Oeste县)是更好的保存和更高的啮齿动物的多样性。因此,参与者从这些研究站点较少感染汉坦病毒的生物多样性的丧失会增加病原体的传播。

本研究的限制之一是seroprevalence准确性的数据可以在这些领域结合完整的背景从本研究的参与者。也不可能分析汉坦病毒感染啮齿类动物来自同一研究网站,因为我们没有收集样本。可能比较血清阳性的汉坦病毒在人类和啮齿动物在研究不同的网站将有助于理解为什么感染发生在亚热带地区的巴西(圣保罗)多在热带地区(朗多尼亚州)。

4所示。结论

总之,我们的研究结果强调高seroprevalence率汉坦病毒抗体(免疫球蛋白)的人口在巴西,利率更高的亚热带地区(大西洋雨林)比热带地区(亚马逊森林)。退化生态系统允许人类密切接触与人畜共患病,导致增强的人类病原体的传播。特别是有关因为圣保罗州是巴西人口最稠密的国家之一。我们强调我们的发现提供了一个更好的理解汉坦病毒感染和循环在巴西,专门展示热点,要求公共卫生行动,以防止可能爆发。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

极其费利佩•阿尔维斯和亚历山大·佩雷拉同样这项工作。

确认

本研究得到FAPESP(05/01603-4)必须占州政府的财政支持。作者致以特别感谢前首相何塞•玛丽亚•洛佩斯(ICB技术专家/ USP实验室),帮助他们在样本收集。他们也感谢保罗美国da Costa,费尔南多·a·达·科斯塔Joao文图拉,和其他许多人在许多不同的方式帮助他们。

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