尼日利亚索科托儿童轮状病毒感染的临床症状观察

摘要

轮状病毒已被确定为婴儿腹泻的最重要原因之一，特别是在发展中国家。本研究的目的是确定在尼日利亚索科托市选定的城市医院中出现不同程度腹泻的儿童中出现人轮状病毒疾病的发生率和临床症状。收集了200名5岁以下腹泻儿童的腹泻样本，并使用一种市面上可买到的DAKO轮状病毒ELISA试剂盒进行了检测，该试剂盒可检测人类a组轮状病毒的存在。根据世卫组织通用规程为每个儿童完成了一份调查表，以产生初级数据。在采集的总样本中，发现51例人A组轮状病毒阳性，表明索科托州的患病率为25.5%。对与该病相关的症状进行了分析和讨论。

1.介绍

据报告，腹泻病一直是所有死亡的六大原因之一，是传染病造成死亡的三大原因之一，在考虑到生命损失年数时，是两大死亡原因之一[1- - - - - -3.]。轮状病毒被确认是造成这些死亡的20%的原因[4]。此外，有报告显示，卫生中心39%的腹泻病例为轮状病毒阳性[5，6]。

轮状病毒是呼肠孤病毒科的一个属，具有典型的轮状外观(即Rota在拉丁语中是轮的意思)。内衣壳包含病毒基因组的11段双链RNA编码6种结构蛋白和6种非结构蛋白[7]。病毒粒子的结构蛋白被描绘成三个同心圆，在dsRNA基因组周围形成相同数量的层(三层粒子)[8]。是nonenveloped三分层二十面体病毒组成的一个核心,其中包含蛋白质VPl VP2、VP3编码段1 - 3,中间衣壳蛋白VP6、由基因编码段6和外部衣壳由VP7壳蛋白VP4飙升编码段7,8或9,和4分别7]。病毒的外层是不连续的，看起来像海绵，因为VP4突刺的多个小扩展[9]。

轮状病毒毒株根据VP6蛋白上的抗原位点被分为8个主要(A-H)血清型(或血清型)[10]。由于A血清群（GARVs）是儿童和各种家养哺乳动物和鸟类急性感染性腹泻的重要原因，因此最具毒性和最常见的分离菌株属于A血清群（GARVs）。

事实上，据报道，A组轮状病毒是世界范围内幼儿和动物严重胃肠炎的主要原因，几乎影响到从鲸鱼、蛇到奶牛和猪的所有动物[11，12]研究还表明，到两岁时，几乎所有儿童都感染了轮状病毒，与发展中国家相比，工业化国家的儿童首次感染轮状病毒的年龄相对较大[5，13]。

在尼日利亚，儿童腹泻的高发病率估计占每年5岁以下儿童死亡总数的16万以上，其中约20%与轮状病毒感染有关[14]。虽然腹泻、呕吐和脱水经常与该疾病有关，但有必要全面评估与轮状病毒疾病有关的症状和体征，特别是因为已查明各种病原体，包括病毒和细菌，可导致严重腹泻疾病。因此，这项研究旨在提供关于轮状病毒疾病一般症状的基线信息和见解，并确定尼日利亚索科托儿童中可能与该疾病显著相关的症状。

2.研究区域

这项研究是在索科托州的三所城市医院进行的，即索科托Usmanu Danfodiyo大学教学医院(UDUTH)、索科托专科医院和索科托妇女儿童医院。这些城市医院还为该州所有地区，包括邻近各州的农村社区提供服务。索科托州位于东经11°30 '至13°50 '和北纬4°至6 '之间。该州位于尼日利亚西北部的大草原地带，男性和女性的平均寿命分别为51岁和52岁。人均国民生产总值是320美元。

２.１.抽样方法

本研究采用简单随机抽样的方法，每个儿童都有均等的机会被选中。这种抽样技术为研究人群的现实概括提供了机会。根据世卫组织通用规程编制了一份调查表，以产生初级数据和样品瓶，在样品瓶中获得了关于每个儿童的充分信息。收集了识别号码、地址、入院诊断、入院日期和症状等患者信息。为提高问卷的效度，本研究采用效度和信度两种检验方法对问卷进行验证。问卷的有效性由研究专家对问卷的评价决定。调查表的修改是根据专家的意见和建议进行的。通过将修改后的问卷发放给本研究所选医院的部分护士长，确定问卷的信度。研究结果为问卷的最终修改提供了依据。

3.数据分析

3.1.样本收集

采用社会科学统计方案(SPSS17.0)对数据进行分析。数据采用简单推理统计分析。发现的频率和它们所代表的百分比被突出显示在表格、图表和图表上。此外，卡方分析用于绘图推理的显著性检验。

在获得父母同意之后，从5岁以下的所有腹泻儿童收集腹泻样品。该研究中的腹泻定义为24小时内比正常粪便超过3次膨胀的通道。粪便样本被无菌地收集，无菌商用毕嘴瓶，充分标记（患者ID和收集日期），并在冰上运输到乌斯曼丹菲省大学的兽医微生物实验室，Sokoto，他们储存在-20°C之前直到它们在加纳的Accra，加纳的尼古奇医学研究所（NMIMR）纪念研究所被运输，在那里它们储存在-20°C直到它们被测试。在实验室中保留了一个凳子标本日志，定期检查有关所有腹泻儿童的信息，并与调查问卷中的信息匹配，以确保正确输入信息。此外，用于分析轮状病毒性腹泻的数据形式与WHO通用协议进行了一些修改。

4.ELISA法测定轮状病毒抗原

根据制造商的说明，使用DAKO轮状病毒ELISA试剂盒检测粪便样本中是否存在人类A组轮状病毒 μL)将制备的10%粪便悬液各加到提供的轮状病毒兔多克隆抗体预包被的96孔微滴板中，除空白对照、阴性对照和阳性对照的前三孔外，其余各孔均加到每孔中。将试剂盒中所含的两滴共轭物加入每个微孔中，并在桌面上旋转，轻轻混合。然后在室温下孵育1小时。然后把里面的东西扔掉，然后把盘子倒扣在纸巾上，把井里的液体都吸走。然后用新准备的洗涤缓冲液溢出水井，并丢弃其中的内容物。盘子被倒扣在纸巾上以除去多余的洗涤缓冲液。洗涤重复5次。将试剂盒中所含的底物滴两滴加到每个微孔中，室温孵育10分钟。在孵育后10-20分钟内观察结果。最后加入停止液(H₂所以₄)在Multiskan ELISA阅读器（Multiskan Plus，Labsystems Oy，Pultitie 8，P.O.Box）上停止反应后30分钟内，最终通过分光光度法读取结果，00881赫尔辛基，芬兰），波长450 纳米。

5.结果的解释

5.1.目视观察

所有阴性对照均为无色或淡蓝色，而比阴性对照更强烈的蓝色则为阳性。与阴性对照的颜色相同或更少的样品被视为阴性。

5.2。光度测定/阅读

阴性对照或阴性对照的平均值应小于0.15个吸光度单位。通过将0.100个吸光度单位添加到阴性对照值来计算截止值。吸光度值高于截止值的所有样品均被读取为阳性，而吸光度值低于截止点的所有样品均被读取为n消极的。

6.结果

6．1.尼日利亚索科托儿童轮状病毒检出率

在采用ELISA法检测的200个人腹泻粪便中，51个样本中检出轮状病毒，表明患病率为25.5%。

6.2。索科托地区儿童轮状病毒腹泻的粪便分析

数字1显示了根据粪便性质检测轮状病毒频率的数据总结。数据显示，带血的水样便检出率高(58.3%)，提示可能与其他寄生虫混合感染。粪便与黏液混合的病毒检出率为36.8%，进一步支持混合感染的可能性。

6.3。索科托地区儿童轮状病毒腹泻持续时间分析

结果显示，51例轮状病毒阳性患儿腹泻持续时间以2天为主(43.1%)。然而，据观察，27.5%的轮状病毒阳性儿童腹泻可持续7天。只有少数病例(2%)腹泻持续时间达到10天(见表)1）.

6.4。索科托地区儿童轮状病毒腹泻呕吐分析

结果显示，超过78.4%的轮状病毒腹泻病例出现呕吐，22.6%的病例没有呕吐(见表)2）.卡方分析显示轮状病毒腹泻和呕吐之间存在显著相关性(）.51例轮状病毒阳性儿童的呕吐持续天数显示，大多数病例发生在1-2天内(90%)，极少数病例发生在7天内(7.5%)(见表)3.）.

6.5。Sokoto儿童Rotavirus腹泻脱水分析

索科托轮状病毒腹泻阳性儿童脱水水平的数据显示，7.8%、37.3%和45.1%的儿童无脱水、轻度脱水和严重脱水，如图所示2．结果表明，大多数患轮状病毒腹泻的儿童脱水程度严重。卡方分析也显示轮状病毒腹泻和脱水之间有显著的统计学关联(）.

6.6.Sokoto儿童轮状病毒腹泻的其他症状分析

数据显示，大多数感染轮状病毒腹泻的儿童有发烧(72.5%)或发烧和呼吸道症状(11.8%)。有呼吸道症状但无发热的儿童中轮状病毒腹泻患病率为3.9%(表1)4）.卡方分析未显示轮状病毒腹泻和这些症状之间有任何显著关联(）.

7.讨论

世界卫生组织(WHO)估计，在全世界1060万5岁以下儿童死亡总数中，有42%发生在非洲地区[15]。尽管这些儿童的死亡率在全球范围内有所下降，但非洲的情况却截然不同[16]。这是因为非洲地区5岁以下儿童的死亡率据说比欧洲地区高出7倍[16]。此外，Cunliffe等人的早期报告[5]显示，在撒哈拉以南非洲每年出生的2 500万儿童中，430万(约六分之一)将在5岁前死亡，其中约五分之一(850万)将死于腹泻。有趣的是，轮状病毒被确认为与住院病人和门诊病人腹泻病例相关的最重要的单一病原体[5]。

在这项研究中，在接受检测的200名腹泻儿童中，51名(25.5%)轮状病毒呈阳性，149/200名(74.5%)轮状病毒呈阴性。因此，在索科托大都会医院就诊的五岁以下儿童腹泻病例中，轮状病毒腹泻占25.5%。

这项研究的结果与非洲地区基于哨点的轮状病毒监测系统和基于医院的研究结果一致[17]。

然而，有趣的是，早期在尼日利亚北部不同地区进行的研究报告称，患病率很低。Pennap和Umoh [18]报告了尼日利亚东北部出现腹泻症状的儿童(0-60个月)中轮状病毒感染流行率为15.6%。Aminu等[19在尼日利亚北部的一家医院中，腹泻儿童的轮状病毒感染率为18%，非腹泻儿童的轮状病毒感染率为7.2%，在同一地区的一项基于社区的研究中，5岁以下儿童的轮状病毒感染率为9%。同样，其他研究人员报告说，北部地区的感染流行率较低[20.]。以社区为基础的研究报告的低流行率预期是由于以医院为基础的研究更有可能遇到较高的轮状病毒感染流行率，因为轮状病毒阳性病例通常很严重，很可能在医院出现[21]。然而，一般来说，来自尼日利亚南部的研究表明，轮状病毒的流行值高于尼日利亚北部的[22- - - - - -25]。不同研究人员记录的患病率差异归因于样本收集时间、筛查样本方法、研究地理位置的差异，或多年来轮状病毒疾病负担变化趋势的差异[26]。

较早的研究表明，轮状病毒腹泻的粪便是不带血的，一般缺乏粪便白细胞，约20%的病例可发现粪便黏液[27，28]。但令人惊讶的是，这项研究的结果显示，带血的水样便中检出轮状病毒的频率很高(58.3%)。这也与最近的观察结果相反，即血染腹泻在轮状病毒感染中很少见[18]。然而，观察到血水样便中轮状病毒高流行可能是其他病原体混合感染的结果，如志贺氏杆菌因为在索科托等发展中地区，由于卫生条件差、免疫力低、缺乏治疗、饮食不平衡和营养不良，肠道病原体和合并感染的传播率很高。本研究中粪便与黏液混合的病毒检出率为36.8%，这进一步支持了混合感染的可能性，尽管曾有报道称轮状病毒感染的粪便中往往含有大量黏液[29]。

轮状病毒腹泻儿童发生呕吐的结果显示，超过33%的轮状病毒阳性儿童出现呕吐，而13.8%的病例没有呕吐。呕吐与轮状病毒腹泻()。事实上，呕吐一直是轮状病毒腹泻的常见现象，据报告，在大约一半的轮状病毒腹泻病例中，呕吐先于腹泻[30.]。在轮状病毒阳性儿童中观察到的呕吐持续天数显示，大多数病例发生在1-2天内(90%)，极少数病例发生在7天内(7.5%)。这与Pennap和Umoh的观察结果一致[18]。但是，一般来说，轮状病毒疾病通常是自限性的，持续4 - 8天，症状的总体持续时间据报道在2 - 22天之间[31]。最近的报告显示，在轮状病毒严重的病例中，儿童可能会出现肠胃炎的症状长达9天，然后康复[32]。

轮状病毒通常与严重脱水有关，而严重脱水实际上会导致与感染相关的死亡[33]。此外，脱水的儿童患轮状病毒腹泻的可能性是正常儿童的两倍[6]。在本研究中，在无脱水、轻度脱水和严重脱水的儿童中，轮状病毒腹泻的患病率分别为15.9%、17.8%和42.4%。结果表明，大多数患轮状病毒腹泻的儿童脱水程度严重。卡方分析也显示轮状病毒腹泻和脱水之间存在显著相关性(）.结果与Pennap和Umoh的报告一致[18]。的确，轮状病毒感染与严重腹泻和呕吐有关，这经常导致婴儿和幼儿严重脱水[33]。

对索科托儿童轮状病毒腹泻所观察到的其他症状的分析表明，大多数轮状病毒腹泻儿童要么有发热(26.8%)，要么有发热和呼吸道症状(25%)。有呼吸道症状但无发热的儿童中轮状病毒腹泻患病率为21.1%。卡方分析未显示轮状病毒腹泻和这些症状之间有任何显著关联(）.单纯考虑发热或合并呼吸道症状时，51.8%的病例出现发热。这与许多报告一致，这些报告显示，约45%-84%的轮状病毒腹泻患者存在发烧[34- - - - - -37]25%病例出现呼吸道症状的观察结果也与早期报告一致，早期报告表明存在各种上下呼吸道感染，包括轮状病毒疾病期间的中耳炎、喉炎、咽炎和肺炎[38- - - - - -40]。

8.结论

轮状病毒检出率在血染水样便的儿童中最高，提示在该环境中发生混合感染的可能性很大。呕吐和脱水症状与轮状病毒腹泻显著相关，而发烧和/或呼吸道症状等其他症状单独或联合出现在轮状病毒腹泻中，但与该疾病无显著相关。

利益冲突

作者声明，本论文的发表不存在利益冲突。

致谢

作者希望感谢加纳大学医学研究所Noguchi Memorial Institute for Medical Research (NMIMR)为进行实验室分析提供了空间。

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