文摘

亚急性硬化性全脑炎(SSPE),这是一种罕见的致命性疾病的儿童和年轻人由于持久性的麻疹病毒(兆电子伏)在大脑中,是由野生型(wt)兆电子伏。为什么兆电子伏疫苗株没有引发SSPE是完全未知的。假设这种表型差异可能由一个分子标记,我们比较糖蛋白和矩阵(M)基因从Moraten SSPE病例与疫苗株,寻找微分结构图案。我们观察到所有已知的SSPE病毒残留P64, E89,和A209(豌豆)的M蛋白而疫苗株的等效残留S64, K89, T209 Moraten或PKT (sk电讯)。通过兆电子伏的结构重组,我们获得的证据表明,wt MeV-M蛋白质豌豆的主题,特别是A209,与增加病毒传播。重要的是,为10 wt基因型(23)的M蛋白测序,9豌豆主题,例外是B3,宠物。有趣的是,SSPE病例由基因型B3尚未报道。总之,我们的研究结果有力地表明,豌豆主题是wt兆电子伏的分子标记在风险引发SSPE。

1。介绍

亚急性硬化性全脑炎(SSPE)是由麻疹病毒引起的(兆电子伏),属的一个成员麻疹病毒属在家庭中副黏液病毒科。包膜病毒粒子兆电子伏包含nonsegmented六段RNA基因组编码结构蛋白:N, P, M, F, H, H和l .糖蛋白(血凝素)和F(融合)项目从病毒粒子膜峰值。H蛋白负责对细胞受体和F为顺向病毒膜融合蛋白与宿主细胞的质膜(1]。在受感染的细胞,在质膜糖蛋白积累他们相邻的未感染的细胞上受体与细胞导致信息融合(合胞体形成)。矩阵M蛋白被认为是线的内表面感染细胞的质膜与胞质尾交互的糖蛋白2,3]。兆电子伏的细胞受体而言,wt菌株大满贯(CD150)而使用疫苗和实验室菌株使用大满贯和CD46 [4]。尽管CD46是人体中广泛表达,表达的大满贯仅限于细胞的免疫系统4]。漫长的寻找第三个受体,nectin-4,最近发现5,6)允许通过上皮细胞感染兆电子伏。有趣的是,三个兆电子伏的受体,只有CD46表达在中枢神经系统7]。

SSPE是一种罕见的致命性疾病的儿童和年轻人由于持续兆电子伏大脑的感染。SSPE症状出现几年后一个明显平庸wt兆电子伏感染;SSPE病例由于疫苗株的兆电子伏从来没有被报道。尽管80多年以来已经过去了疾病被道森(8),没有机制负责SSPE的发病机制已确定(审查[9- - - - - -12])。然而,从SSPE兆电子伏神经组织具有多个突变H F和M蛋白的病毒信封,削弱其功能(13- - - - - -16]。麻疹包涵体脑炎(MIBE)也会感染人类的大脑,但由于wt和疫苗株的MV (17,18]。此外,相比之下SSPE, MIBE只发生在免疫力低下的人,如艾滋病患者,并提出在数周内的感染,而不是几年。

在先前的研究中,我们表明,疫苗/实验室菌株兆电子伏都敏感,像wt兆电子伏菌株,积累突变在H F和M蛋白免疫压力下(19]。然而,看起来不像wt兆电子伏,他们缺乏一个表型标记允许传播和中枢神经系统的持久性。

本研究的假设是这样传播的能力,坚持人类的大脑是内在wt兆电子伏。这可能是由于潜在与实验室/疫苗兆电子伏株序列差异。因此我们决定比较SSPE兆电子伏的主要序列基因组与疫苗株寻找分子标记共有SSPE兆电子伏菌株。最初,我们比较主要序列编码H蛋白但正如我们之前的研究(19)表明,F蛋白和M蛋白的突变会影响H我们扩展的三维构象搜索到主序列编码这些蛋白质。比较SSPE兆电子伏与兆电子伏Moraten疫苗株的基因组我们观察到一个triresidue主题豌豆(P64、E89 A209)总会出现M蛋白但是SSPE病例,分别sk电讯(S64, K89, T209) Moraten M蛋白的疫苗。此外,这些残留的身份是相同的所有疫苗/实验室菌株,除了在一些残留64是脯氨酸(PKT)。

我们假设引发SSPE wt兆电子伏应变(或wt兆电子伏基因型)应该有豌豆M蛋白的主题。通过咨询发表序列用于23 wt兆电子伏,我们发现只有10 M基因(包括序列的直接从脑组织(rt - pcr扩增获得的20.])。有趣的是,所有有豌豆主题除了基因型B3,宠物。这个好奇的我们因为B3的最普遍的基因型在撒哈拉以南的非洲地区(21),尽管hyperendemicity兆电子伏,SSPE病例的报道流行出人意料地低(22]。尽管可能存在漏报SSPE病例在这一地区,B3病例发生在世界其他地方,包括美国。重要的是我们的假设,尽管广泛搜索文献中,我们找不到一个SSPE案件这一基因型。

意外地是,两个B3基因型菌株可在我们的实验室,Lys-1 [23]和G954 [24),所以我们可以比较他们的能力和信息融合和病毒生产、豌豆motif-containing D4基因型病毒,Lys05/06。结果表明,B3基因型菌株产生不如豌豆motif-containing病毒基因型菌株,但要确认这是由于M蛋白的性质tri-residue主题,我们转向反向遗传学。

兆电子伏重组从而构建在wt豌豆图案的元素被引入疫苗株的sk电讯在M蛋白的基因编码图案。通过比较这些不同的重组的表型对其能力和信息融合和病毒装配,我们获得的结果强烈支持假设M蛋白triresidue主题豌豆对wt MV的传播很重要,因此SSPE发病机理。

2。材料和方法

2.1。细胞

维洛细胞和维罗/ hSLAM(维洛细胞持续表达人类大满贯)是维护在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)补充10%胎牛血清的边后卫,2毫米谷酰胺,100 U /毫升青霉素,链霉素0.1毫克/毫升、玫瑰和10毫米。CHO / hSLAM(中国仓鼠卵巢细胞持续表达人类大满贯)维持F12培养基中含10%胎牛血清的边后卫,100 U /毫升青霉素,链霉素0.1毫克/毫升,1 x人不必要的氨基酸。人类的“助手”稳定细胞系293-3-46 N和P蛋白表达和T7 RNA聚合酶是维持与10%的边后卫DMEM培养基,2毫米谷酰胺,1.2毫克/毫升G418,消息灵通的10毫米。

2.2。病毒

三个wt兆电子伏在这项研究中的应用:Lys-1和G954 (B3基因型),Lys05/06 (D4基因型)。八重组构建和使用Moraten获救疫苗株反向遗传学系统(一种礼物罗伯托·均)。

2.3。生产Moraten M基因的突变体

突变残留64、86、89和209 M基因的Moraten应变介绍了兆电子伏的单独或结合使用QuickChange工具包(Stratagene)根据制造商的指示。这些突变引入基因编码MeV-M克隆到一个穿梭质粒p588包含N, P, M, F基因(Moraten兆电子伏。然后M基因的质粒克隆,克隆工具使用在融合高清(Clontech)到另一个质粒,p698,包含的全部Moraten基因组除了删除M基因。这个质粒重组病毒的生产中使用。所有突变被DNA测序验证。

2.4。生产Moraten重组

293-3-46细胞培养在6-well组织培养板与10转染μ克p698包含突变基因,与质粒pEMC-La 40 ng,合成L兆电子伏聚合酶蛋白质,使用Promega转染工具包(哺乳动物转染系统、磷酸钙)。16 h转染后,媒介是antibody-free介质所取代。1小时后,293-3-46细胞受到热冲击在42°C 3 h。48小时后,细胞被squidging轻轻地分离使用介质和添加到100毫米包含维罗/ hSLAM细胞培养容器。2到3天后,合胞体覆盖维罗/ hSLAM细胞被单独挑选和维罗/ hSLAM细胞单层膜转移到75厘米²烧瓶。最后,我们获得了6重组病毒命名根据氨基酸占领triresidue主题(aa 64、89和209年)的M蛋白:sk电讯(S64, K89, T209);PKT (P64 K89, T209);集(S64、E89 T209);平方公里列阵(S64 K89, A209);宠物(P64 E89, T209);和豌豆(P64 E89和A209)。建造了两个额外的重组和获救:年代(R) KT (S64, R86、K89 T209)和P (R)等(P64, R86、E89 T209)。应该注意的是,剩余86 K的重组病毒sk电讯,PKT,集,平方公里列阵,宠物,和豌豆。M基因的重组是测序确认诱变。

2.5。病毒扩增和滴定法

病毒股票在第二段放大:细胞2毫升的介质被冻结在−80°C一夜之间在感染后2 - 3天当大多数的细胞显示融合/合胞体形成。然后中解冻,收获病毒滴定。96孔细胞组织培养板注射1/10连续培养基稀释样品1 h在37°C。然后,接种物被移除,新媒体是添加到每个。4天之后,受感染的油井数量统计,组织培养(TCID感染剂量的50%₅₀)和点状单元(PFU)计算。

2.6。大满贯,CD46-Dependent融合分析

每个病毒研究,以确定其能力诱导融合在大满贯或CD46使用CHO / hSLAM细胞或细胞受体的维洛细胞(CD46 +),分别。6-well盘子被感染的细胞在一个邮件。我是0.01。信息融合在感染细胞是量化如前所述25]。短暂,30-36 h后感染,十显微镜领域的图像被随机和合胞体核的比例相对于原子核的总数是通过计算确定。

2.7。病毒和细胞相关游离病毒滴定

维洛细胞或CHO / hSLAM细胞被感染的邮件。我0.1的重组病毒。感染后48 h,培养基是收获,在3000转离心5分钟在4°C,并存储在−80°C,直到被用于进一步分析确定cells-free病毒。此外,感染细胞也被冻结在一夜之间−80°C。然后他们被解冻,收获和上层清液用于确定细胞相关病毒的水平。此后,颗粒病毒和细胞内病毒引起的滴定的如上所述。

2.8。共焦显微镜研究定位兆电子伏的蛋白质,H, F和M

维罗大满贯细胞种植在盖玻片12-well文化板块重组病毒感染在37°C 1 h。然后包含anti-MeV融合的媒介与媒介改变了三肽工厂检验计划(26]。细胞受到感染后免疫荧光24小时。三个抗体,anti-H马伯BH129, anti-F马伯Y503,和anti-M mAb8910(微孔)。抗体标记使用Zenon老鼠免疫球蛋白标记包(分子探针)。Anti-H马伯BH129沾Alexa萤石488年,anti-F马伯Y503 Alexa萤石555和anti-M mAb8910 Alexa萤石647。细胞首先用PBS 1 x。然后活细胞孵化只有标签anti-H和anti-F 1 h在4°C。接下来,细胞用PBS、固定与3% PFA,和permeabilized 0.1% Triton x - 100 10分钟rt,随后,细胞被洗屏蔽解决方案(BSA渐变20 0.2%,2%,和5%甘油在PBS)和孵化屏蔽解决方案10分钟。细胞被第一次孵化贴上anti-M 1 h在4°C,然后幻灯片准备共焦显微镜研究。633年561氩激光,激光,激光用于H, F和M,分别。 The specimens were studied in two steps, H and M in one step and F in another step to avoid interference between the emission signals of H, F, and M.

3所示。结果

3.1。识别潜在的分子制造商wt MeV-M SSPE的蛋白质

本研究的出发点是SSPE的观察导致只有wt兆电子伏,从未被兆电子伏疫苗(27]。这表明wt兆电子伏菌株表型标记疫苗株缺乏。假设这样一个表型标记可以表示为一个相关的分子标记,我们决定比较H F和M序列从SSPE病例与疫苗株寻找微分结构图案。我们无法确定任何类型的分子标记,分化SSPE糖蛋白疫苗同行除了差异在H蛋白残留481年和546年,已经被证明可以扮演一个角色在允许疫苗株使用CD46受体除了大满贯(28,29日]。然而,比较五SSPE病例的M蛋白主要序列与Moraten Rubeovax疫苗M蛋白(30.)透露的triresidue主题在64年残留物,89年和209年出现分化SSPE和疫苗M蛋白(图1)。所有五个SSPE病例有残留脯氨酸,谷氨酸,和丙氨酸(豌豆)在这些位置而疫苗株M蛋白有丝氨酸,赖氨酸和苏氨酸(sk电讯)。扩展我们的搜索的全部发表SSPE序列我们无法找到一个单一的情况下,M蛋白不包含豌豆的主题。然而,在做一个类似的疫苗M蛋白我们搜索发现,他们都有sk电讯或PKT主题。

现在的减毒兆电子伏疫苗株是由使原始wt Edmonston应变及其衍生物在各种nonhost动物细胞系(31日]。不幸的是,最初的wt Edmonston应变不再可用,所以我们只能推测triresidue图案的M蛋白是豌豆。然而,它至少可以得出结论,这个主题是宠物,因为这是主题的性质在wt Edmonston最小通道”。“有趣的是,修改triresidue主题似乎配合衰减。尽管间接,这可能表明,替代的豌豆或宠物主题与sk电讯,至少在某种程度上,失去毒性。

3.2。B3的基因型Lys-1兆电子伏应变降低病毒的生产能力

有趣的是,虽然所有SSPE病例似乎是由于wt兆电子伏的豌豆主题M蛋白,并不是所有的wt兆电子伏豌豆。23 wt兆电子伏的基因型只有10 M基因测序(表1)。都有豌豆主题除了B3基因型,宠物。B3基因型的图案宠物对我们是极大的兴趣,有两个原因:(i) B3是撒哈拉以南非洲地区的流行基因型21),(2)它已被观察到22),由于未知的原因,很少有SSPE病例通知在这广阔的地区。的兆电子伏是省级行政区呈高度流行)

假设的宠物主题可能减少的能力B3在人体基因型传播,我们比较两种B3基因型病毒(Lys-1和G954)与豌豆motif-containing D4基因型病毒(Lys05/06)和疫苗株Moraten (sk电讯)的信息融合和病毒生产能力。信息融合是而言,我们发现四个病毒(图小区别2(一个))。虽然的融合能力的一个宠物motif-containing B3菌株(G954)相比降低了17%的豌豆motif-containing D4基因型病毒Lys05/06(图2(一个)),这不是统计学意义。用于生产的细胞相关病毒,这三个wt菌株产生不到疫苗Moraten株(图2 (b)),比较与D4菌株B3菌株,比Lys05/06 G954减产了13%,但这不是统计学上重要的减少。然而,对于Lys-1 B3减少细胞相关病毒相比Lys05/06为32% ()。此外,尽管只有G954略有减少(7%),有显著减少(82%;)在病毒产生游离Lys-1 B3应变相比Lys05/06 D4(图2 (c))。

总的来说,这些结果表明,生产表型Lys-1 B3应变有低于Lys05/06 D4应变,但这不是G954 B3的压力。既是B3菌株含有M蛋白的宠物主题,这可能表明,M蛋白的宠物主题没有影响表型wt兆电子伏株的病毒生产。然而,在测序基因G954我们发现残留86,三残留E89上游,是精氨酸(R)而不是赖氨酸(K)。这种变化都增加残渣的正电荷8632),介绍了阳离子-的可能性π与芳香残留(33],可能起到补偿作用,如果之前已经建议(34),K89E突变废除M蛋白之间的静电相互作用和胞质尾有利于病毒的糖蛋白组装。

实际上,我们的结果表明,Moraten应变,sk电讯M蛋白的图案,表现出更高的病毒生产水平比宠物或豌豆motif-containing wt菌株(数字2 (b)和2 (c))。但这种差异与豌豆/宠物图案吗?显然,与病毒装配疫苗和wt兆电子伏菌株之间的差异的身份triresidue主题M蛋白,当变化也存在于其他兆电子伏蛋白质,尤其是H是纯粹的投机。因此我们进行了建设兆电子伏重组调查潜在的作用,如果有的话,M蛋白主题豌豆生产在wt兆电子伏。

3.3。生产Moraten重组病毒的不同根据Triresidue图案的M蛋白的性质

Moraten病毒重组建成和拯救triresidue sk电讯图案出现在M蛋白疫苗株的系统取代了wt主题豌豆(图中的元素3)。这些重组病毒命名根据氨基酸占领triresidue主题(aa 64、89和209年)的M蛋白:sk电讯,PKT,集,平方公里列阵,宠物,和豌豆。两个额外的重组了测试K86R突变的影响:S (R) KT和P (R)(图3)。这些不同的表型重组进行了关于他们的信息融合和病毒组装能力。我们使用了Moraten反向遗传学系统做这项研究作为一个疫苗株提供测试融合的可能性和病毒装配能力重组的微分受体使用。

3.4。替换的sk电讯主题Moraten M蛋白与wt豌豆主题元素导致的增加和信息融合

的信息融合能力的不同的重组的不同排列sk电讯和豌豆图案使用CD46-expressing相比,他们的M蛋白是细胞(州立)和SLAM-expressing (CHO-SLAM)。令人惊讶的是,结果表明,三个特定的身份残留在M蛋白(职位64、89和209年)可以影响兆电子伏和信息融合的水平。结果如图4(一),比较各种重组获得的信息融合的水平,表明,每当一个元素(疫苗)的sk电讯主题被替换的一个元素(wt)豌豆主题,单独或组合,增加信息融合,即使我们发现这只是统计上重要的宠物(和豌豆)。有趣的是,最高的值都CD46-dependent信息融合和SLAM-dependent信息融合与兆电子伏了包含豌豆主题的M蛋白的重组。这尤其适用于CD46-dependent融合;的数量和信息融合产生的豌豆突变产生的两倍多,sk电讯变异(图4(一))。

作为一个较宽松的M蛋白间的相互作用,提出了H和F蛋白增加信息融合率(2,3),我们的结果的一个可能的解释是这些PEA-based替换Moraten M蛋白已经放松了与糖蛋白胞质尾的交互。替换S64P似乎并不造成任何增加信息融合比较sk电讯(PKT)但K89E替换当盟军S64P替换(宠物和豌豆)大幅增加CD46和SLAM-dependent融合。

3.5。的宠物主题Moraten M蛋白结果>细胞相关和游离病毒生产减少40%无论受体使用

我们下一个检查每个重组产生细胞相关的能力和游离病毒。紧M蛋白间的相互作用和支持病毒糖蛋白报道大会(2,3),使用这种分析应该表明每个重组这种交互的状态。CD46的结果——和SLAM-dependent细胞相关病毒生产在感染后2天(数字4 (b)和4 (d))表明,豌豆主题替换,但有一个例外,只有轻微的负面影响Moraten病毒组装。然而异常细胞相关的宠物重组病毒生产降低了40%以上(数字4 (b)和4 (d))。非常相似的结果为CD46 -和SLAM-dependent病毒游离生产(数据4 (c)和4 (e))。

宠物重组的结果是完全按照我们之前的观察,Lys-1 B3基因型病毒,使颗粒病毒(图的很少2 (c))。这强烈表明,宠物M蛋白的主题在B3基因型wt兆电子伏病毒对病毒产生负面影响,可能通过调制的组装。

我们还检测了P (R)重组,这不同于宠物重组只在K86R替换,以确定这样做是否负责更高级别的病毒生产观察G954 B3应变相比Lys-1 B3应变。

3.6。将突变K86R添加到宠物重组病毒增加生产,但会降低融合

我们发现P (R)等重组确实与宠物突变相比,高容量(颗粒和细胞内病毒引起的)生产SLAM-expressing细胞和CD46-expressing细胞(数字4 (b),4 (c),4 (d),4 (e))和较低的融合能力(SLAM-dependent和CD46-dependent)(图4(一);)。事实上,P (R)等重组融合和生产属性相同,父母的年代(K) KT Moraten病毒。另一方面,添加K86R sk电讯重组变异,S (R) KT,对病毒产生影响很小或信息融合(数字4(一),4 (b),4 (c),4 (d),4 (e))。如果之间的交互Moraten M蛋白和糖蛋白的细胞质反面K89E替换确实是放松的,人们很容易推测K86R突变恢复所需的水平基本电荷这种交互,这更严格的交互反映在增加病毒生产和降低信息融合。

3.7。共焦显微镜研究表明MeV-M蛋白质与H和F糖蛋白不管他们拥有Triresidue主题的性质

调查是否替换Moraten sk电讯主题元素的wt豌豆主题产生影响的colocalization M蛋白与H F蛋白,我们共焦显微镜研究。的colocalization Moraten M H, F蛋白并没有发现任何影响豌豆替换(图5)。这表明,即使特定豌豆替换效果减少或增加M蛋白之间的相互作用和胞质糖蛋白的尾巴,这些影响可能是微妙的,因为他们不是伴随着拓扑参与蛋白质的位移。

4所示。讨论

SSPE的原因造成完全由疫苗株wt兆电子伏,从不是未知的。然而,我们的研究结果表明,SSPE wt兆电子伏菌株引起结果的能力的提升能力,这是由于传播,至少部分triresidue图案,豌豆,在M蛋白。我们因此提出wt兆电子伏的豌豆图案作为一种分子标记,风险引发SSPE。

事实上,所有SSPE病例报告在文献中有豌豆主题的M蛋白,我们表明,取代了sk电讯主题与wt豌豆Moraten疫苗M蛋白主题增加融合而保持病毒生产能力。此外,改变这个主题通过单一突变宠物A209T导致显著减少病毒生产。重要的是,降低病毒生产会阻碍有效的病毒在中枢神经系统中传播。这种衰减可以减少B3的风险基因型病毒,携带宠物主题而不是豌豆主题,引发SSPE。此外,一般的减毒疫苗株的表型因此似乎排除他们从引发SSPE。

重要的是,我们的研究结果表明,triresidue主题sk电讯(PKT)的M蛋白可能导致疫苗株的衰减超过他们的能力采取行动对抗宿主先天免疫反应。但与sk电讯更多的减毒疫苗株比PKT吗?兆电子伏疫苗株(Moraten,施瓦兹,Rubeovax CAM70) M蛋白的sk电讯的主题,而另一些(AIK-C,萨格勒布,Leningrad16、Shanghai191 Changchun47) PKT。施瓦兹,Moraten Rubeovax AIK-C,萨格勒布改编自Edmonston-Enders株疫苗株,但不同的一段历史31日]。因为它已被证明,AIK-C和萨格勒布疫苗株比Moraten[毒性35),人们很容易推测,这是由于脯氨酸残基的存在位置64 M蛋白而不是丝氨酸。是有趣的确定P64S突变引入这些疫苗株的M蛋白会降低他们的毒性,从而增加他们的安全。

尽管尼日利亚有麻疹发病率和死亡率最高的国家(36),直到1999年该领域隔离的麻疹在这个国家,在非洲人口最多的国家,进行了研究[37)和B3基因型被发现普遍。现在B3基因型在撒哈拉以南非洲的主要基因型(21]。然而,尽管兆电子伏hyperendemicity,一些SSPE病例报告在这广大地区(22]。此外,尽管一个扩展搜索的文献和数据银行,我们一直无法找到一个SSPE病例涉及B3基因型wt病毒(38]。我们的研究结果表明,M蛋白主题宠物与B3基因型病毒的病毒生产Lys-1可能是因为效率低的组装。然而,现成的重组K86R负责显示额外的突变病毒生产的正常水平表现出其他B3基因型病毒,G954。虽然G954病毒及其等效成衣的重组展览相比降低了信息融合D4基因型病毒Lys05/06豌豆重组,我们预测,如果B3基因型病毒SSPE出现的情况下,它可能会拥有K86R突变除了宠物。发生这种情况的机会然而可能是轻微G954是唯一B3基因型病毒(四节)已被证明,然而,拥有K86R M蛋白的突变。

放松之间的交互的M蛋白和胞质尾H和F糖蛋白导致增加的信息融合和更少的病毒装配;紧缩这种交互导致较低的融合和增加病毒装配(2,3]。此外,在研究wt兆电子伏维洛细胞的适应性,引入一个M基因来自疫苗株(因此P64S、E89K A209T更改)为wt兆电子伏重组允许这些CD46 + /大满贯−细胞的增长,虽然输入效率低和没有信息融合39]。观察疫苗M的本质区别和wt 64是残留的身份,89年到209年,这些作者然后wt兆电子伏P64S重组,E89K, A209T改变现在可以单独使用,也可以组合。他们发现只有P64S E89K变化允许wt兆电子伏在维洛细胞生长良好;A209T没有效果。这是由PCR研究表明,当wt兆电子伏适应维洛细胞突变可以出现在P64 [40]和E89 [41),但没有报告A209突变。

在接下来的研究(39昭集团](贴现A209T)目前结果表明突变P64S和E89K替换允许M蛋白的强相互作用的胞质尾H蛋白,从而增强病毒装配信息融合为代价的。这很适合我们的结果,因为更换sk电讯与豌豆主题元素图案的影响增加融合虽然我们看不到病毒生产的大幅减少,当然除了宠物变异。使用共焦显微镜,我们没有获得任何改变的证据的colocalization H F和M蛋白在质膜上的突变。相比之下,昭团体研究[39)发现一些发生移位,但他们的结果似乎反映了拓扑的三个蛋白质在细胞内的膜而不是在质膜上。

似乎适应wt兆电子伏的维洛细胞和SSPE发病机制有很多共同之处。以超过25年,wt兆电子伏菌株能够适应维洛细胞(CD46 +但大满贯−),从而逐渐减少。病毒进入未知的机制和复制有效,但至少在一开始,就没有信息融合的迹象,尽管多个段落“盲”。这样坚持病毒已被证明有M蛋白的突变,在残留P64 [40]或残留E89 [41]。但是,在某些情况下信息融合突然出现。这是由突变引起H蛋白如N481Y [42),允许病毒使用CD46受体(28]。据推测,N481Y突变改变H蛋白的三维构象,允许使用这种受体的改变。我们推测,豌豆图案效果类似的机制。以前我们表明,M蛋白的突变会影响F和H糖蛋白的构象,从而促进抵抗中和anti-MV血清(19]。据推测,豌豆主题wt MV M蛋白的菌株诱发特定三维构象的糖蛋白,它允许一个高免疫逃逸,因此增加了潜在的持久性。

在SSPE的情况下,病毒进入大脑神经元细胞等,再次被一个未知的机制,坚持,积累突变,主要是在M蛋白还在H F糖蛋白。经过长时间的持久性通常持续几年,SSPE突然出现的症状。然而,也许不是在所有情况下,人们已经发现,通过尸体解剖检查,兆电子伏“通常”持续在健康人的大脑43]。我们假设这个事件的“触发”突变,打破之间的交互M蛋白和糖蛋白尾巴导致加速病毒的传播在大脑和合成破坏性炎症反应。这样的突变,截断的M蛋白和/或F蛋白胞质尾,被发现在大多数,如果不是全部,SSPE病例相关的序列是可用的(38]。可能不涉及融合macropinocytosis兆电子伏的条目。证据积累兆电子伏可以进入细胞的内吞作用的机制(44,45),但有趣的是,对维洛细胞适应和进入神经元,唯一已知兆电子伏受体是CD46可用。

考虑到triresidue MeV-M蛋白质主题豌豆似乎SSPE的分子标记,它似乎是一个优先顺序的M蛋白B1, B2, C1, D1, D2, D9, D10, E, F, G1, G2, H2,和这里wt兆电子伏的基因型,以确定他们的本质triresidue主题,使流行病学相关性SSPE病例根据循环基因型的频率。然而,潜在的分子机制,允许wt兆电子伏与豌豆M分子标记病毒慢慢侵入中枢神经系统,引起SSPE仍然未知。

5。结论

本研究旨在发现为什么SSPE总是由wt兆电子伏,从来没有通过疫苗兆电子伏。我们的研究结果表明,SSPE只能由兆电子伏菌株包含一个特定triresidue结构主题(豌豆)的主要序列M蛋白。只有wt MeV-M蛋白质包含豌豆的主题。建设电子伏重组的结果显示,没有这个主题,在所有兆电子伏疫苗株wt B3基因型,降低了兆电子伏传播的能力。因此,我们建议MeV-M蛋白豌豆主题作为兆电子伏的分子标记菌株这一风险引发SSPE。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢罗伯特均和帕特里夏·Devaux Moraten重组系统,为CHO-SLAM Yusuke昭的细胞,Branka霍尔瓦特的Lys05/06 wt兆电子伏的应变Inserm U758 CRB兆电子伏,奥利弗Duc和克利斯朵夫Chamot (SRF Platim显微镜设施生物科学Gerland-Lyon-Sud U58 / UM53444),以及Olivier雷诺建议共焦显微镜,费边野生有益的讨论,Inserm来融资。丹尼斯Gerlier和乔安娜·布鲁内尔ANR拨款支持的“Physico-Chimie du的场面”(ANR - 08 - pcvi - 0020 - 01)。伊芙马奈和罗宾·巴克兰CNRS科学家。