XMRV的性传播:一个潜在的感染途径

文摘

尽管XMRV病毒传播在人类是一个有争议的问题,选择患者的前列腺似乎港XMRV,让人质疑其潜在的传播途径。我们建立了一个模型与XMRV病毒感染恒河猴接种。尽管静脉接种,所有被感染的猕猴展出容易检测到XMRV信号在所有4 1男性和女性的生殖系统在急性和慢性感染阶段。XMRV显示在急性前列腺腺泡的爆炸性增长而不是慢性感染。在精囊、附睾和睾丸,发现XMRV病毒蛋白的生产在间隙感染或上皮细胞。女猴子,子宫颈和阴道上皮细胞也呈阳性XMRV插科打诨。准备发现XMRV雄性和雌性猕猴感染生殖道的静脉注射XMRV表明潜在的性传播。

1。介绍

嗜异性小鼠白血病相关逆转录病毒(XMRV) gammaretrovirus,最初是在一项研究中发现,使用前列腺癌组织和后来在一项研究中,使用血液的慢性疲劳综合症患者(1,2),尽管其他实验室无法在这类患者检测出XMRV [3]或表明,大部分的发现基于核酸扩增技术与老鼠的DNA(二次污染4- - - - - -7]。此外慢性疲劳的链接最近严重质疑(8]。然而,选择前列腺癌的发现XMRV是并非所有基于使用核酸扩增方法,虽然XMRV病毒感染对癌症的病因作用仍不确定,XMRV代表小说伽马逆转录病毒能够感染几个人类宿主细胞系(9),因此,潜在的人畜共患的代理。事实上,人类感染这种病毒可能导致人畜共患从老鼠传染给人(1)类似于与考拉逆转录病毒跨物种传播报道,一个gammaretrovirus XMRV[密切相关10]。尽管细胞相关和游离XMRV病毒的传播都已报告(2和潜在的呼吸有间接证据11)或性(12)传播,传播的具体途径或机制仍然没有解决。为了更好地理解XMRV病毒的发病机理,我们实验室最近建立了一个用恒河猴XMRV病毒感染的动物模型。这项研究最近发表的结果,明确表明,XMRV是灵长类动物的传染性,诱导持续感染,给正确的上下文,可能重新激活体内(13]。在这些动物的组织学分析,人们意识到,尽管广义感染,XMRV似乎表现出偏爱组织和器官的生殖系统在这个模型中,提出潜在的性传播。

2。材料和方法

2.1。动物

九成人健康恒河猴(5 infected-4男性和1女1和4控制男性和女性)的印度裔从5—17岁被用于这项研究。这些猕猴被安置在埃默里大学耶基斯国家灵长类动物研究中心在BSL-2 +住房条件和维护按照指令的实验室动物保健和使用委员会研究所的实验动物资源,国家研究理事会,和美国公共卫生署(小灵通)的指导方针,指导实验室动物保健和使用的。

2.2。XMRV病毒接种

五个猴子注射TCID₅₀交付的XMRV前列腺癌细胞生长在DU145静脉注射(13]。安乐死和验尸的前3个猴子进行了6天,7(急性感染,RLm-1 ROu-4,职责),和144年π(RLq-10) single-XMRV后感染。最后2动物(RYl-10和RIm-10) reinoculated感染后158天(pi)TCID₅₀sucrose-purified XMRV(先进的生物技术公司,哥伦比亚,医学博士,美国再次交付第四。这两只猴子被安乐死天291/133π(小学/中学后感染,职责。)。尸体剖检,从雄性生殖组织(前列腺、睾丸、精囊和附睾)和女性(子宫颈和阴道)被收集在10%中性缓冲福尔马林固定24小时。控制动物(三个男人,一个女性)没有XMRV病毒感染,但在类似的住宿安置和关心,但不是在同一个房间。三个非传染性的控制被牺牲的原因,和一个(男)是慢性感染猴免疫缺陷,但没有临床发展成艾滋病。

2.3。免疫组织化学

在4的formalin-fixed石蜡包埋组织被切割μ米厚度和幻灯片准备。deparaffinization之后,幻灯片水化和抗原检索由微波治疗经过淬火的内源性过氧化物酶。部分是孵化1:100稀释的一只老鼠anti-SFFV抗体可交叉反应的XMRV病毒(1]其次是生物素化的antirat多克隆抗体和ABC试剂(向量实验室)。病毒检测的发展显色底物3、3′-diaminobenzidine (Dako)与苏木精复染色。每次运行和执行相关的正面和负面的控制。使用一个奥林巴斯BX-41光学显微镜幻灯片被宣读。荧光原位杂交(FISH)如前所述执行XMRV病毒核酸(1,13]。尽管最近的一些报告,建议XMRV检测在从人类患者采集的标本可能使用rt - pcr实验室污染的结果(4- - - - - -7),生成的数据在我们的研究中并没有依赖于包括PCR扩增技术。

这里使用的技术(包含IHC和鱼)不容易污染错误,我们实验室不与啮齿动物的组织,而组织集合从每个动物都是在不同的时间,嵌入和幻灯片准备处理一批。

3所示。结果与讨论

详细分析的XMRV病毒感染,病毒传播,和抗体反应在这些猕猴发表在其他地方(13]。在这里,我们的分析集中在病毒分布在生殖系统及其性传播的潜在含义。简单,没有受感染的动物呈现出明显的临床症状为整个9个月的跟踪,根据活动水平,食物摄入量、血液、血清化学发现。受感染的动物被牺牲在感染后不同时期获得组织的代表急性和慢性病毒传播和清晰的分离。控制和XMRV-infected组织,然而,嵌入式和分块并行,化验批次。所有组织都是淋巴器官脾、淋巴结,肠道固有层和nonlymphoid器官如肺、脑、肝、骨髓细胞包含积极的XMRV包含IHC和/或鱼的半定量的分析(13]。值得注意的是,一些组织如中枢神经系统、心脏、肾上腺、胆囊、肾脏和膀胱被包含IHC -只有一种罕见的鱼单一信号(13]。相比之下,有一个没有信号的所有器官感染控制恒河猴运行在同一批次样本XMRV病毒感染猴子。

没有明显的总值或组织学病变观察所有动物的生殖系统除了单核细胞浸润在前列腺组织的存在13),尽管这些发现并不少见的年龄匹配控制。在急性XMRV病毒感染(第6 - 7天π)广泛的XMRV病毒疫源地,正面的腺泡上皮细胞中检测到这些猴子的前列腺。(数据1(一)和1 (d))。数据1(一)和1 (c)(箭头)显示积极的多个病灶染色的概述在前列腺腺上皮细胞的两个严重感染的动物。XMRV的存在在前列腺上皮细胞与周围基质消极在急性感染,腺腺泡细胞间传播,也表明,前列腺是一个偏好网站早期XMRV病毒感染。尽管XMRV不再包含IHC检测的前列腺感染在慢性阶段(图1 (e)猕猴(图),类似于控制1 (f)),XMRV病毒核酸信号仍使用鱼(图观察1 (g))。这表明缺乏复制,一个不合适的环境,或某种形式的主动控制病毒复制的仍有待确定。

其他组织显示阳性染色的男性生殖系统包括精囊(图2(一个)和2 (d)急性(图)和睾丸2 (e))和长期(图2 (f)被感染的动物。的附睾慢性感染动物(图2 (g))发现频繁的积极的上皮细胞。感兴趣的,细胞的形态表达XMRV病毒蛋白质变化在前列腺腺体上皮细胞,精囊,附睾睾丸的间质细胞。值得注意的是,即使是只雌猴的生殖组织样本包含在我们的研究显示积极的XMRV染色在9个月后感染。偶尔在宫颈上皮粘膜上皮细胞(数字3(一个)和3 (b))和粘膜下细胞,成纤维细胞,(图3 (c)在阴道黏膜下层XMRV gag蛋白表达。病毒蛋白检测一直消极的生殖系统控制雌性恒河猕猴(图3 (d))。

我们的研究使用静脉注射的病毒模式管理,确保感染。但是,尽管使用这条路线,病毒出乎意料的迅速集中在较低的男性和女性生殖道猕猴,建议性的传播方式的潜力。贷款支持这个假设先前的报道显示XMRV病毒RNA在人类前列腺分泌物的检测(12),发现XMRV病毒复制是增强了雄激素由于糖皮质激素的反应元素的存在(GRE) [7]。此外,人类精液或阳离子淀粉样原纤维、前列腺酸性磷酸酶的降解产物,已被证明能够促进传播艾滋病毒和XMRV体外(12,14,15),暗示另一个潜在的促进体内粘膜传播机制。尽管最近的报告表明,XMRV检测在从人类患者采集的标本可能使用rt - pcr实验室污染的结果(12),生成的数据在我们的研究依赖于技术(包含IHC和鱼),不包括基因扩增,因此而不受样品污染。此外,负面的控制研究是一贯-使用这些技术。

总之,我们的研究表明XMRV病毒蛋白表达实验的生殖道感染恒河猴感染后随时支持潜在的性传播病毒。

作者的贡献

埃里克·a·克莱恩,罗伯特·h·西尔弗曼,和弗朗索瓦•约翰•哈克特Villinger设计研究。布勒沙玛,毒打苏皮亚达,罗斯·j·莫里纳罗Nattawat Onlamoon,肯尼斯·a·罗杰斯和弗朗索瓦Villinger进行研究和分析数据。布勒Sharma写道。

承认

这些研究是由雅培诊断和NCRR支持耶基斯NPRC DRR000165。

引用

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