全称异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒缺乏检测hiv - 1的淋巴瘤患者

文摘

嗜异性小鼠白血病病毒相关病毒(XMRV)是一个gammaretrovirus报道与人类前列腺癌和慢性疲劳综合症。因为逆转录病毒导致各种癌症,XMRV病毒复制可能通过合并感染hiv - 1,我们问到某些艾滋病淋巴瘤患者感染了XMRV病毒。分析PMBCs和血浆从26患者未能发现XMRV PCR、ELISA、免疫印迹,说明缺乏XMRV和AIDS-associated淋巴瘤之间的联系。

1。介绍

全称异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒gammaretrovirus, (XMRV),最近被发现并报道与人类前列腺癌(PC) (1]。在最初的报告在PC患者,发现XMRV之间有很强的相关性和先天免疫基因的遗传缺陷RNASEL(1]。然而,后来的研究在PC患者显示没有这样的协会(2]或很少或根本没有证据的XMRV病毒感染(了3])。兴趣XMRV病毒被发现,增加高百分比的慢性疲劳综合症(CFS)患者以及一些无症状的患者感染了XMRV病毒(4]。然而,其他研究未能发现这样一个协会(综述(3])。XMRV病毒可以感染外周血单核细胞(PBMCs)和CD4 + T细胞在体外,表明XMRV病毒可以感染hiv - 1相同的靶细胞([4)和数据未显示)。然而,我们最近的研究表明,生产PBMC的XMRV病毒复制和传播文化是由APOBEC3严格限制蛋白质或其他宿主防御机制(5]。但仍有可能,靶细胞感染hiv - 1可能会提供一个有利的环境消耗XMRV病毒复制的细胞宿主APOBEC3G等限制因素,以抑制XMRV病毒感染(6,7]。几个因素让我们探索的可能性,某些艾滋病淋巴瘤患者可能是感染了XMRV病毒。Gammaretroviruses可能导致其他物种(综述[淋巴瘤8),它被假定艾滋病毒相关淋巴瘤的病例数可能是由一个至今未得到确诊病毒引起的(9]。同样重要的是要注意,艾滋病毒感染患者与其他病毒感染的患病率较高,及其免疫功能不全的状态可能允许更有效的其他病毒的复制,包括XMRV病毒(9]。因为高度关注的关于潜在的XMRV病毒感染和传播在人类人口,我们试图调查XMRV是否可能出现在艾滋病毒相关淋巴瘤患者的一个子集。

2。分析和结果

总核酸从PBMCs孤立(血液DNA试剂盒迷你工具包)26日之前被诊断为hiv - 1感染患者AIDS-associated淋巴瘤(表1)。这项研究是由国家癌症机构审查委员会批准,和所有的病人和捐助者给书面知情同意。使用一个实时定量PCR (qPCR)测定,采用特定的引物一个独特的XMRV 24-nucleotide缺口呕吐(引物和探针序列报告,10]),500 ng在每个反应病人的DNA测试使用罗氏LightCycler 480调查掌握混合。循环条件使用LightCycler 480罗氏的仪器(罗氏诊断)95°C 30秒之后,50周期在95°C 15秒和60°C,持续60秒。从22 r XMRV-expressing细胞系基因组DNAv1(写明ATCC)被用来生成一个标准曲线XMRV(~ 20前病毒的复制/单元)。标准曲线上升了500 ng 293 t DNA,以确保类似的放大效率作为患者样本。qPCR检测灵敏度的< 5 XMRV副本/ 75757细胞。的质量和数量输入DNA经检测人类GAPDH qPCR。使用这种分析,所有26个hiv - 1淋巴瘤患者XMRV病毒测试呈阴性呕吐序列(图1)。

病人血浆也筛选了ELISA (Bagni蛋白表达实验室SAIC-Frederick Inc . NCI-Frederick,未发表的结果)抗体XMRV病毒衣壳(CA)和信封(跨膜,TM)蛋白质(图2)。由于缺乏明确的XMRV病毒阳性患者控制样本,从猕猴血清实验前后XMRV病毒感染担任控制基线和积极反应(Lifson Del Prete,艾滋病和癌症病毒程序,SAIC-Frederick, Inc .,未发表的结果)。短暂,血浆样本收集前和接种后(119天)从两个辫子猕猴接种4.8×10⁹XMRV病毒RNA等价物来自22 rv1细胞上清液(很多SP1592,生物制品的核心、艾滋病和癌症病毒程序,上汽弗雷德里克,Inc . NCI-Frederick)。样品被认为是反应如果他们至少50%活性相对于猕猴样品后XMRV病毒感染(积极控制血清)。没有一个26 hiv - 1淋巴瘤病人,还是10个健康的捐赠者,阳性CA(图2(一个)(图)或TM蛋白质2 (b)),尽管2/26的病人有轻微的反应TM(星号,图2 (b))。评估这两个患者,免疫印迹分析评估是否TM-reactive ELISA试验反映出XMRV病毒的免疫反应。端点稀释分析表明,1:2000稀释的积极猕猴血清生产可再生的积极乐队免疫印迹高信号噪声比(Lifson Del Prete,艾滋病和癌症病毒程序,SAIC-Frederick, Inc .,未发表的结果)。从患者血清(稀释1:50或1:200)和积极的猕猴(稀释1:2000)的血清测试XMRV病毒溶菌产物经22 rv1细胞系。TM-reactive患者的血清(10 - 40倍的浓缩比猕猴)未能检测衣壳,TM,或其他XMRV病毒蛋白质(数据未显示),这表明TM-positive ELISA测试最可能是由于crossreactive非特异性抗体的存在。

3所示。讨论

我们的研究显示缺乏XMRV和AIDS-associated淋巴瘤之间的联系和补充其他的研究未能发现XMRV PBMCs,等离子体,或从hiv - 1感染患者精浆11- - - - - -16]。XMRV和癌症之间潜在的联系是假设在gammaretroviruses可能导致肉瘤和白血病在啮齿动物,猫科动物,灵长类动物(了8])。然而,目前尚不清楚XMRV病毒感染与前列腺癌或其他人类癌症。800年和539年的一项调查PC样品从美国和德国,分别显示没有联系XMRV [17,18]。134年的一项调查显示前列腺癌患者血浆样品通过我们和我们的合作者也未能发现任何证据的XMRV(卡尼et al .,正在审查这个问题的进展病毒学)。最近的一些研究报道,污染人类与老鼠的DNA样本可能导致XMRV的报道与人类疾病(19- - - - - -22]。Garson et al。23)也报道,两个整合位点序列,以前来演示XMRV融入患者DNA,可能是污染的结果相同的集成网站从感染DU145细胞相同的实验室报告的。此外,我们的最近的研究提供了令人信服的证据表明XMRV是通过重组产生的两种内生小鼠白血病病毒在通过电脑在裸鼠异种移植,因此所有的XMRV检测人类样本可能是由于污染源于这个重组事件(24]。被假定这lab-derived病毒可能已经逃离实验室,现在人口的循环。然而,我们未能发现XMRV HIV-1-associated淋巴瘤患者,连同> 10个不同的患者人群的研究由独立调查,反对这种可能性。

总之,我们无法发现XMRV病毒DNA或XMRV-specific抗体PBMCs或血浆从HIV-1-associated淋巴瘤患者,进一步支持缺乏XMRV和人类癌症之间的联系。

确认

作者感谢Wei-Shau胡在整个项目中有价值的输入和批判性阅读手稿和凯蒂·梁和埃里森·米德的技术援助。该出版物的内容并不一定反映的观点或政策卫生和人类服务部也没有提及贸易名称、商业产品,或组织意味着美国政府支持的。投资者没有参与研究设计、数据收集和分析,决定发表,或准备的手稿。这部分工作是支持校内研究项目,美国国立卫生研究院,国家癌症研究所癌症研究中心和基础研究到临床应用奖Vinay帕沙克。

引用

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