核酸、抗体和病毒培养方法检测嗜异性MLV-Related病毒在人类的血液样本

文摘

XMRV MLV-related逆转录病毒,最近被发现和报告有关前列腺癌和慢性疲劳综合症。马里兰州国家癌症Institute-Frederick (NCI-Frederick),我们开发了高度敏感的方法发现XMRV病毒核酸,抗体,病毒复制能力。XMRV-spiked分析样品和/或两个辫子的标本实验猕猴接种22 rv1细胞衍生XMRV证实的能力分析用于检测XMRV病毒RNA和DNA,和文化可隔离的病毒当礼物,连同XMRV活性抗体反应。使用这些化验,我们没有发现证据的XMRV病毒在血液样本()或前列腺标本(从两组独立的前列腺癌患者。先前的研究发现XMRV的前列腺组织。在目前的研究中,我们主要研究了XMRV的水平在血浆样品中收集的前列腺癌患者。这些结果说明当XMRV-related化验NCI-Frederick可以随时测量研制的XMRV病毒核酸,抗体,病毒和复制能力,没有发现XMRV的证据在前列腺癌患者的血。

1。介绍

嗜异性小鼠白血病病毒相关病毒(XMRV)是最近发现gammaretrovirus据说与前列腺癌和慢性疲劳综合症(CFS) (1,2]。发现XMRV源于研究调查潜在的病毒导致的疾病患者RNAseL基因变异。这个基因型,观察不同子集的前列腺癌患者群(1,3- - - - - -8),与损伤有关先天免疫反应的病毒感染(5]。寻求一个病因重大病毒感染与受损有关L核糖核酸酶端依赖反应,Urisman等人于2006年首次发现XMRV的前列腺癌患者(2]。XMRV的协会与前列腺癌,但不是其协会RNAseL变体,证实了Schlaberg等人(2009年9]。前列腺癌研究其次是Lombardi等人提出的一份报告的证据XMRV病毒感染严重的慢性疲劳综合症患者的67%,而只有3.7%的健康人(1]。这些高频率的XMRV病毒感染和假定的链接报告给衰弱疾病引发的担忧新的可能性,广泛的逆转录病毒流行和刺激进一步的研究对确定XMRV病毒感染的患病率在世界范围内不同人群。

一些研究支持盛行的XMRV病毒感染之后。例如,阿诺等人发现anti-XMRV抗体与前列腺癌(27%的人10),Schlaberg等人发现XMRV病毒核酸在23%的前列腺癌和4%的控制(11],能源部等人发现XMRV的22.8%的前列腺癌组织中提取人根治性前列腺切除术(12]。然而,争议出现在其他实验室不能证明类似发现在相似的群体不仅在美国(13但在德国(14)、荷兰(15),和英格兰16,17]。增加了争议,罗等人报道小鼠逆转录病毒序列的存在,但不是XMRV, 86.5%的慢性疲劳综合症患者(18]。他们宣称,这些发现支持了协会的XMRV病毒感染慢性疲劳综合症,使一个已经有争议的领域。

几个因素是大胆的提出为微分XMRV检测/ mlv不同的实验室。建议不一致发现XMRV / mlv患者样本可能导致各种感染的患病率在不同的人口,不同的病人选择、标准和不同的检测方法利用(19]。也提出,病毒可能是长期的低水平或在患者血浆或组织情景,使病毒检测困难(19]。增加了复杂性,发现XMRV的PCR极易受假阳性结果由于密切亲缘关系与内生mlv XMRV,污染的高患病率老鼠基因组DNA在许多标本(20.,21]。事实上,研究表明,XMRV检测实验室污染的结果从受感染的细胞系22- - - - - -25)或污染试剂(26]。进一步建议实验室污染后发表的一项研究Paprotka et al。25),表明XMRV起源于人类癌症细胞系生成使前列腺癌细胞通过小鼠免疫功能不全的。这个结果表明XMRV不可能进入人口直到最近,然而在相当大的一部分已经被报道为普遍的前列腺癌症。此外,它表明,大多数“XMRV-specific”检测化验,事实上,检测一个或其他的两个父母前病毒(PreXMRV-1和2)引发了XMRV和内源性近交和野生老鼠。在评估这种情况,很明显,排除假阳性结果和可靠地检测XMRV病毒感染,必须申请一个诊断方法结合已知的积极的和消极的控制。

NCI-Frederick,我们试图帮助澄清XMRV争议通过生成多个化验,包括严格的方法来衡量抗体通过ELISA-based XMRV方法,量化XMRV病毒DNA和病毒RNA定量PCR和rt - PCR方法,并测量传染性病毒的病毒隔离文化细胞系使用一个指标体系。我们为这些化验使用可用的积极的和消极的控制样本,包括飙升样本和两个辫子的标本实验猕猴接种XMRV病毒。然后应用这些方法两组的前列腺癌患者的标本来确定血液中XMRV的水平。总的来说,我们观察到高水平的一致性检测方法和能够排除假阳性结果运用多个在同一患者样本化验。应用这种方法,我们没有发现证据的XMRV病毒感染的前列腺癌patient-derived标本进行了研究。

2。方法

2.1。前列腺癌临床样本

XMRV检测化验NCI-Frederick研制的应用于样品收集来自两组的前列腺癌患者。总共134名患者进行了研究。血浆样本108例获得加州大学戴维斯癌症治疗中心。样本收集2006年至2010年间从前列腺癌患者新诊断,积极治疗,或者接受治疗后的监测。等离子体从所有108名患者进行了测试XMRV病毒RNA和抗体CA和TM。机构审查委员会(IRB)批准Biorepository从加州大学戴维斯分校获得癌症中心,所有研究对象提供书面知情同意。

样本额外26最近诊断前列腺癌患者经泌尿道的肿瘤学部门,国家卫生研究院临床中心,马里兰州贝塞斯达。所有26个血样检测存在的XMRV病毒RNA在血浆和全血的DNA。XMRV病毒DNA的测试也进行前列腺组织从19岁的26个人在这个群组根治性前列腺切除术。22 26血样检测抗体CA和TM。12个样品测试的子集由病毒拯救文化包括那些有积极的或不确定的结果通过X-SCA或ELISA酶标法和匹配负控制。NCI的研究是通过IRB, NIH,贝塞斯达,MD,所有研究对象提供书面知情同意。

2.2。XMRV病毒核酸测定XMRV检测单份化验(X-SCA)

类似于单份化验(SCA)人类免疫缺陷病毒(HIV) (27),定量实时PCR和rt - PCR检测发现XMRV,叫做XMRV单份化验(X-SCA),是量化XMRV病毒核酸在等离子体中,全血,细胞从血液或组织样本获得的悬浮液。化验使用扩增引物设计目标呕吐领导人之间的地区守恒的XMRV(以及PreXMRV-2 [25])和non-XMRV内生mlv(向前5-TGTATCAGTTAACCTACCCGAGT-3′,反向5-AGACGGGGGCGGGAAGTGTCTC-3′)。因此,有效实现放大两目标模板允许发现XMRV或mlv出现在患者样本。Taqman探针(5′fam-TGG AGT GGCTTT GTT GGG GGA CGA - tamra3′)用于检测放大产品旨在跨越一个签名24核苷酸缺失的XMRV (PreXMRV-2)呕吐领袖,这些有别于其他MLV序列(图1(一))。如果被X-SCA阳性样本,应该执行单基因组测序证实放大XMRV和没有污染的来源老鼠的DNA与类似的插科打诨删除,如PreXMRV-2。

XMRV病毒RNA提取血浆样品后超速离心法一样描述SCA[艾滋病毒27和基因组DNA提取和全血样品使用Promega基因组DNA提取工具包(猫没有。A1120)根据制造商的建议的协议。反应条件对合成互补脱氧核糖核酸RNA拷贝数和测量是艾滋病SCA(正如前面描述的27]。XMRV病毒拷贝数确定使用Lightcycler 480调查掌握(猫没有。04707494001)根据执行协议和45 95°C的周期为15秒,60°C 1分钟后最初的10分钟,95°C聚合酶激活步骤。试验结果验证了精确检测的XMRV X-SCA飙升人类血液制品(28),通过检测血液样本收集的XMRV病毒接种猕猴(Del Prete et al .,在准备)。猪尾猕猴XMRV病毒接种实验(~ 4.8×10⁹RNA复制等价物)准备22 rv1上层清液的细胞(很多SP1592,生物制品的核心、艾滋病和癌症病毒程序,SAIC-Frederick, Inc, NCI-Frederick)。等离子体和PBMC样本收集接种前和接种后119天。这些预处理和post-inoculation标本被用作参考控制样品在评估X-SCA XMRV检测的方法。猕猴感染的细节研究报告将在别处(Del Prete等人在准备)。动物被安置和照顾依照美国认证协会的实验动物保健(AALAC)标准AAALAC认证设施,根据协议和所有动物程序进行批准的机构动物保健和使用委员会的国家癌症研究所。检测MLV被老鼠基因组DNA提取从TA3合格。使用Promega Cyc-T1细胞基因组DNA提取工具包(猫没有。A1120)和执行在重复X-SCA稀释3000 - 0.03细胞的等价物。

X-SCA所有病人样本测试的重复或一式三份相同数量的没有模板控制(NTC)监测水平的假阳性由于病毒或者老鼠基因组DNA污染。水平XMRV病毒核酸的检测临床样本是由样本用于测试的体积(100μL - 3毫升)。因此,X-SCA灵敏度变化从0.6到20.6拷贝/毫升血浆和全血0.9 -10拷贝/毫升。因为频率高的假阳性污染老鼠的DNA,我们将声明一个样本阳性XMRV,严格标准要求检测的病毒序列复制PCR反应的样品被测试。这些标准导致最低检测1.8 - -41.2份XMRV病毒RNA /毫升血浆和2.7 -30 XMRV病毒DNA拷贝/毫升在全血积极X-SCA测试,根据被测样品的体积。如果不和谐的结果是获得重复或一式三份井,结果被认为是不确定的和重复足够的样本。

2.3。XMRV病毒血清学

XMRV病毒抗原蛋白表达中准备实验室SAIC-Frederick,医学博士,如前所述29日]。纯化XMRV病毒抗原被用来开发和优化ELISA-based协议(Bagni et al。,在准备)。简单,提纯CA和TM被发现到内消旋规模发现(MSD)(马里兰州)标准96 - 8点孔板μg / mL和2μ分别g / mL。样本稀释1:100和孵化与个别XMRV病毒抗原。人类使用生物素标记抗体检测反人类免疫球蛋白(杰克逊ImmunoResearch西树林,Pa)和MSD-proprietary Sulfo-tagged链霉亲和素检测试剂和阅读部门成像仪6000 (MSD)板读者。XMRV病毒血清学检测是合格的样品来自XMRV-inoculated猕猴(Del Prete et al .,在准备)。患者样本被认为是被动的,如果MSD electrochemiluminescent信号(ECL)至少50%相对于ECL猕猴积极控制血清的信号。低反应患者样本,至少2个标准差以上平均负人类样本被认为是不确定的。

2.4。XMRV检测文化

replication-competent XMRV的决心在细胞病毒拯救coculture试验使用指标指定DERSE(探测器外生逆转录病毒序列的元素)和使用的表达GFP记者读出。DERSE。LiGP细胞subclone LNCaP细胞(Francis Ruscetti博士的礼物,NCI)与pBabe稳定转染。iGFP-puro和筛查XMRV病毒感染的易感性(李在准备et al .,)。pBabe。iGFP-puro是一个intron-interrupted记者MLV前病毒的矢量编码绿色荧光蛋白基因和只是表示感染gammaretrovirus动员后的第二轮DERSE的感染。LiGP细胞。类似MLV向量只表达一个记者在传播感染的前面描述的使用HEK293细胞(30.]。DERSE。LiGP化验检测任何MLV-related病毒复制人类前列腺癌细胞的能力。可以检测到病毒复制监视GFP-positive细胞通过荧光显微镜和流式细胞仪分析。

DERSE。LiGP指标细胞保持在罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI)媒体1640(表达载体)补充15%胎牛血清的边后卫(Hyclone), 1 x笔/链锁状球菌/谷氨酰胺(100 U /毫升青霉素,链霉素0.1毫克/毫升、谷氨酰胺和0.292毫克/毫升、表达载体)和1μg / mL嘌呤霉素(Calbiochem)。DERSE。在1×10 LiGP细胞被镀⁵细胞/在24-well细胞培养板前一天感染。作为一个积极的控制,22 rv1细胞上清液稀释RPMI媒体和添加到细胞第二天在5μ克/毫升的聚凝胺(31日]。培养基被替换或刷新第二天分裂细胞在1:3比例取决于细胞密度。虽然可以检测到GFP在积极控制感染样品3天内,最大化的检测灵敏度低水平的病毒,DERSE。LiGP细胞暴露于临床标本中维护文化至少两周,荧光显微镜观察间隔。两周后,细胞resuspended 2%多聚甲醛(PFA)解决方案和GFP表达,流式细胞仪测定(FACSCalibur,正欲),指示性传播感染。而DERSE。LiGP细胞相对不敏感的肝素、血浆样本包含EDTA是有毒的文化。为了减轻毒性,200年μL (EDTA含有血浆样本分成埃普多夫管7.5毫米CaCl的存在₂中和EDTA和30 U /毫升肝素钠盐最小化样本凝固。管孵化了4小时在4°C分离血浆从剩余凝血。准确检测的XMRV病毒文化是验证使用一系列稀释的上层清液从22 rv1细胞和XMRV-spiked包含大约10人血浆样品⁷10份XMRV病毒RNA。使用XMRV-spiked样本,我们注意到检测灵敏度的损失3至5倍的EDTA含有血浆样本以上述方式处理。最近的一份报告的XMRV病毒失活由人类补可以解释部分传染性的损失后的等离子体(24]。前列腺癌样本通过X-SCA或ELISA酶标法与不确定的结果与负样本和测试盲病毒的文化分析。

我们要求样品检测呈阳性的XMRV病毒核酸(RNA或DNA)和至少一个其他检测方法(免疫测定或文化分析)宣布XMRV病毒感染阳性。

所有试剂开发NCI-Frederick和这里描述可用单位以外的研究社区通过美国国立卫生研究院艾滋病研究和参考试剂项目或艾滋病和癌症病毒程序,SAIC-Frederick, Inc .)、国家癌症研究所,弗雷德里克。

3所示。结果

3.1。区分XMRV和MLV X-SCA调查

X-SCA探针用于检测放大产品的跨越一个签名24核苷酸缺失的XMRV病毒(1]在PreXMRV-2 [32]呕吐领袖,这些有别于其他MLV序列(图1(一))。放大的XMRV 22 rv1 DNA和MLV从老鼠基因组DNA(从TA3提取。CycT1细胞)表明,探针的设计结果在一个低水平的高原荧光从non-XMRV MLV比从XMRV模板(图模板1 (b)),可能由于低效的绑定和/或退化的探针在MLV扩展相比,XMRV扩展。探针设计的结果是微分放大概要XMRV和MLV指示产品被发现在试验的比例每个如果检测到两个模板。确认结果,产品是一个琼脂糖凝胶(图上运行1 (c))。XMRV X-SCA产品长86元,MLV产品110元,容易区分2%琼脂糖凝胶。

3.2。排位赛XMRV试验检测能力与人类的样品

化验检测建立了XMRV病毒核酸和replication-competent使用XMRV-spiked样本作为积极控制标本。判断的准确性和灵敏度X-SCA发现XMRV病毒在人类血液制品的方法,我们测试了一个完整的小组飙升的血浆和全血样品是否掺入了XMRV来自22 rv1细胞。样本的面板是瞎了XMRV XMRV的积极和消极,提供给我们的XMRV科研工作组为测试X-SCA [28]。结果从飙升的盲板样本前面描述的西蒙斯et al。28),证明我们发现XMRV病毒RNA和病毒DNA使用X-SCA准确率达到了100%。的敏感性检测XMRV病毒RNA水平飙升等离子面板有限体积的样品进行XMRV检测(270μ3.3 L) RNA拷贝/毫升。水平的敏感性检测XMRV病毒DNA是一个XMRV-infected 22 rv1细胞全血样品。所有未加料的样本正确报告为负XMRV检测表明一个非常低的水平虚假的积极性。

DERSE的使用。L-iG-P细胞发现XMRV是验证使用22 rv1文化上层清液和XMRV-spiked人血浆。图2显示了病毒拯救实验的结果表现在以下条件下(我)22 rv1上层清液,(ii) 22 rv1上层清液CaCl对待₂和肝素,(iii) 22 rv1浮层上升到人血浆CaCl对待₂和肝素。DERSE。LiGP细胞治疗EDTA-containing独自人血浆不可行。比例GFP-positive细胞流式细胞仪探测到第四天,第八天感染后数据所示2(一个)和2 (b)。DERSE。LiGP细胞暴露于0.01μL 22 rv1上层清液是由显微镜GFP-positive感染(图。4天内2)展示的敏感性试验检测复制主管XMRV病毒。这个检测的灵敏度降低3-5-fold存在EDTA-containing血浆样品处理如上所述。这可以在一定程度上减少是由于人类补充最近报道的存在(24]。额外的天的文化GFP-positive细胞暴露于病毒的数量增加等离子体的存在与否。出于这个原因,文化感染人类标本进行了至少两个星期。

3.3。验证试验检测能力与XMRV-Inoculated猕猴的血液样本

验证X-SCA的特异性和ELISA,我们使用两个辫子的标本实验猕猴接种XMRV病毒。详细的猕猴研究结果将公布在其他地方(在准备Del Prete et al .,)。简而言之,由X-SCA显示峰值检测的样本实现病毒血症在接种后5天一个动物和在第二个(表13天1)。28天,等离子体的XMRV病毒RNA水平拒绝< 1拷贝/毫升在两种动物。PBMC-associated XMRV病毒DNA也X-SCA衡量。DNA水平见顶与类似的动力学血浆病毒血症但坚持23和645册/ 10⁶PBMC的两只动物分别跟踪期结束时,接种后119天。抗体反应XMRV病毒衣壳(CA)和跨膜蛋白(TM)用ELISA检测不到之前接种强劲,但积极之后(表2)(Del Prete et al。,在准备)。复制主管XMRV不能从猕猴等离子体或PBMC培养样本由于前病毒广泛hypermutation post-inoculation,可能是因为APOBEC蛋白质的影响(Del Prete et al .,在准备)。因此,XMRV-spiked人血浆被用来验证DERSE。L-iG-P细胞检测的XMRV病毒。

3.4。XMRV病毒核酸检测前列腺癌样本,抗体,可隔离的病毒

样本来自的两组前列腺癌患者化验首次XMRV病毒核酸(X-SCA)和抗体反应性对XMRV CA和TM蛋白(表3和4)。没有等离子前列腺癌或前列腺组织样本在NIH队列或加州大学戴维斯分校前列腺癌组阳性XMRV病毒核酸和抗体(表3和4)。然而,在美国国立卫生研究院两个血浆样本队列(0594、0771)不确定的XMRV病毒RNA。其中一个样本(0594)- ELISA,和其他(0771)有一个不确定的ELISA结果。另一个病人样本NIH队列(0781)不定的XMRV病毒抗体反应但不利于XMRV病毒核酸(表3)。所有这三个样品,连同9匹配负样本,被蒙蔽和测试使用DERSE复制病毒。L-iG-P化验。病毒不能培养这些等离子体样品时容易从积极控制样品(22 rv1-derived XMRV飙升到消极的人血浆)(图3)。因此,我们前瞻性地定义的标准,没有一个26患者样本的NIH队列被认为是XMRV病毒感染(核酸阳性、抗体和/或复制病毒)主管(表3)。所有108等离子前列腺癌患者的样本来自加州大学戴维斯分校化验了XMRV病毒RNA和抗体(表4)。所有样品都为阴性XMRV病毒核酸,只有一个除外(0739),这是不确定的。没有发现样品由我们的ELISA抗体反应条件(至少50%的活性相对于猕猴积极控制血清)。12的108个样本不确定的XMRV反应性CA或TM(2个标准差以上平均负人类样本),但对核酸(表不利4)。没有样本不确定的或积极的XMRV病毒核酸和抗体,因此,所有人都决心是负的XMRV病毒感染。

4所示。讨论

出版后XMRV Lombardi等人于2009年10月的研究表明可能与慢性疲劳综合症疾病协会和明显高得惊人seroprevalence XMRV甚至在健康对照组,研究人员NCI-Frederick着手开发严格的方法来评估XMRV病毒感染的患病率。在适当的地方使用控制样本,包括标本,我们开发了化验测量等离子体XMRV病毒RNA病毒血症,细胞相关XMRV病毒DNA的水平,和抗体XMRV CA和TM。因为Lombardi等人报道的存在文化可营救的replication-competent病毒从研究对象的血用coculture人类细胞系(LNCap),我们创建了DERSE细胞,衍生品的LNCap细胞荧光记者发现XMRV病毒复制。这些细胞广泛的复制和敏感地检测不同MLV-related gammaretroviruses,表现出人类前列腺癌细胞的取向。没有patient-derived明确的积极的和消极的控制标本,我们应用不同的试验方法获得的样品来自两个辫子猕猴接种实验之前和之后XMRV病毒。XMRV血浆病毒血症是2 - 3周后检测两种接种猕猴接种但拒绝检测水平(Del Prete et al .,在准备)。然而,XMRV病毒DNA PBMCs和血清抗体保持在可测量的水平在动物研究随访期间(Del Prete et al .,在准备)。评价样本接种猕猴可靠地证明了我们的方法的能力发现XMRV病毒感染血样的证据,表明XMRV病毒和抗体持续即使不检测病毒血症。

在XMRV病毒感染的诊断工具的发展,很明显,一个XMRV检测方法确诊是不够的,因为高频率的假阳性污染的PCR核酸(尤其是老鼠基因组DNA)和高背景反应被ELISA,即使在健康受试者的样本,可能反映了大。因此,我们建议多个试验的方法来确定患者样本的XMRV地位。我们建立诊断标准要求所有复制从X-SCA分析必须积极和血清抗体和/或复制病毒也必须检测在同一个病人为了积极报告病人XMRV病毒。样品PCR复制导致不和谐的结果报告为不确定的。尽管早些时候报道,发现XMRV病毒感染的证据在多达20%的前列腺肿瘤(2,10- - - - - -12),使用我们开发的化验,我们并没有发现XMRV的明确证据的血两组独立的前列腺癌患者)或前列腺组织的这些人的一个小子集()。基于之前报道的频率XMRV检测在前列腺癌患者中,如果XMRV病毒存在于感染者的血液,我们预计,大约27岁的134名患者在我们的研究将为XMRV病毒阳性。一个病人从美国国立卫生研究院队列(0771)有一个不定X-SCA结果(RNA) 2/3的反应是积极的。这个示例还CA和TM ELISA阳性反应。然而,没有发现XMRV病毒DNA在这个病人的全血,和复制能力的病毒不能从样本中恢复过来。综上所述,这些数据被认为是一个不确定的结果,我们的标准。没有其他的样品被不止一个积极的诊断方法。

偶尔积极X-SCA反应不是以上背景分析。我们定期运行96 -孔板的“不”模板控制使用我们X-SCA引物,引物针对脑池内的粒子(IAP) (20.,21,33),出现在高拷贝在小鼠基因组中为了监控污染小鼠DNA的水平在试剂和环境。我们发现大约5%的井是积极X-SCA底漆和IAP底漆的约20%。基于这些背景,我们希望检测到低水平的老鼠的DNA污染的样品测试,看到的是这个研究和其他(20.,21,33]。因此,我们要求所有复制的患者样本是正获得一个“积极的”X-SCA的结果。我们没有测试样品直接与IAP引物因为我们没有成功地发现了试剂和老鼠基因组DNA的环境,都是免费的(平均大约1/3000的老鼠基因组/ PCR反应)。

虽然我们偶尔不确定的XMRV病毒RNA的血浆样本研究结果,我们没有发现XMRV病毒DNA样本测试,尽管我们敏感的化验检测XMRV病毒DNA的能力控制样品和标本接种猕猴(28)(Del Prete et al .,在准备)。接种猕猴的结果表明,在实验感染,XMRV病毒DNA是容易衡量的血细胞即使血浆病毒血症没有检测到(Del Prete et al .,在准备),进一步表明这些病人血液中不带XMRV病毒。从以前的研究报告发现XMRV患病率上升在相似的人群2,11,12)通常涉及测试前列腺肿瘤。这些研究报道的XMRV检测血液样本或传染性病毒的隔离从临床标本,且只有一个测量反应性抗体的存在通过病毒中和试验(10]。检测的抗体反应特定的病毒蛋白ELISA或反应XMRV病毒免疫印迹没有评估。如果我们使用了更少的整体诊断建立在一个严格的标准,nonconfirmed测试,而不是要求所有复制产生相同的结果,那么我们两组明显,几乎可以肯定的是,在我们看来正确,报道XMRV病毒流行率约为12%。这些因素可以解释冲突之前报道的患病率XMRV和符合声称XMRV检测可能是实验室污染的结果(22,26,33,34]。尤其是考虑到潜在的假阳性结果在PCR和XMRV病毒血清学检测,我们的研究结果表明,应用多种诊断方法包括测量血液细胞的病毒DNA水平提供了一个更可靠的方法调查XMRV的患病率。这些结果也表明,XMRV病毒核酸和抗体是前列腺癌患者的血液中检测不到。

确认

作者感谢瓦莱丽·博尔茨有用的讨论和康妮Kinna,苏珊•乔丹和苏珊汤姆斯行政支持,和杰里米·斯梅德利,朗达麦卡利斯特,和仁慈Gathuka为动物保健专家。他们感谢XMRV科研工作组提供样品用于验证X-SCA方法。江铃汽车是美国癌症协会的研究教授,与调频Kirby基金会的支持。资助这项研究是由美国国家癌症研究所提供校内的艾滋病研究癌症研究中心和办公室和部分联邦基金的国家癌症研究所HHSN261200800001E下合同。这项工作的部分也支持由基础研究到临床应用v . k .总裁奖。该出版物的内容并不一定反映的观点或政策卫生和人类服务部的部门,也没有提及贸易名称、商业产品,或组织意味着美国政府支持的。

引用

1. v . c . Lombardi f·w·Ruscetti j·d·古普塔et al .,“XMRV检测感染逆转录病毒,慢性疲劳综合症患者的血液细胞,”科学,卷326,不。5952年,第589 - 585页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. a . Urisman r·j·莫里纳罗:费舍尔et al .,“识别小说gammaretrovirus前列腺肿瘤的患者为R462Q RNASEL变异纯合子,”Plos病原体,卷2,不。第三条e25, 211 - 225年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. 艾萨克斯j . Carpten n . Nupponen s . et al .,“在L核糖核酸酶基因的种系突变与HPC1家庭显示链接,”自然遗传学,30卷,不。2、181 - 184年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. g·凯西,p . j .内维尔s·j·普卢默et al .,“RNASEL Arg462Gln变体是涉及到13%的前列腺癌病例,”自然遗传学,32卷,不。4、581 - 583年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. k . Malathi j . m . Paranjape大肠Bulanova et al .,”一个转录信号通路在干扰素系统由2 ' 5 ' -oligoadenylate L核糖核酸酶的激活,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷102,不。41岁,14533 - 14538年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. h·雷纳尔特,d . Bercovich A·休伯特et al .,“小说创始人RNASEL基因突变,471 delaaag,在德系犹太人与前列腺癌有关,”美国人类遗传学杂志》上,卷71,不。4、981 - 984年,2002页。视图:谷歌学术搜索
7. a . Rokman t . Ikonen e·h·Seppala et al .,“生殖系RNASEL基因的改变,候选人HPC1基因1 q25,与前列腺癌患者和家属,”美国人类遗传学杂志》上,卷70,不。5,1299 - 1304年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. s . k . l . Wang麦克唐奈,d . a . Elkins et al .,“分析RNASEL基因家族和零星的前列腺癌,”美国人类遗传学杂志》上,卷71,不。1,第123 - 116页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. r . Schlaberg d . j .崔承哲,k . r .布朗,h . m . Thaker和i r·辛格“XMRV病毒存在于恶性前列腺上皮和与前列腺癌有关,尤其是高档肿瘤,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷106,不。38岁,16351 - 16356年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. r·s·阿诺德,n . v . Makarova a . o . Osunkoya et al .,“XMRV病毒感染患者的前列腺癌:小说血清学的检测和相关PCR和鱼,”泌尿外科,卷75,不。4、755 - 761年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. r . Schlaberg d . j .崔承哲,k . r .布朗,h . m . Thaker和i r·辛格“XMRV病毒存在于恶性前列腺上皮和与前列腺癌有关,尤其是高档肿瘤,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷106,不。38岁,16351 - 16356年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. b p。丹尼尔森·g·e·阿亚拉和j·t·Kimata”全称异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒检测正常和肿瘤组织的病人从美国南部与前列腺癌是依赖于特定聚合酶链反应条件下,“《传染病杂志》上,卷202,不。10日,1470 - 1477年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. b . c . Satterfield r·a·加西亚·h·贾,唐,h .郑和w·m·瑞士人”血清学和PCR检测患有慢性疲劳综合症的人在美国没有与嗜异性或多变小鼠白血病病毒相关病毒”Retrovirology第十二条,卷。8日,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. o·霍恩,k . Strohschein a .美国布兰德et al .,“没有证据表明德国的XMRV CFS和疲劳患者尽管女士的能力病毒感染人类血液细胞体外,”《公共科学图书馆•综合》,5卷,不。12篇文章ID e15632 2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. m . Cornelissen f . Zorgdrager p·布鲁姆et al .,“缺乏发现XMRV从hiv - 1感染的男性精浆在荷兰,”《公共科学图书馆•综合》,5卷,不。8篇文章ID e12040 2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. o . Erlwein s .凯·m·o·麦克卢尔et al .,“未能检测到小说逆转录病毒XMRV病毒在慢性疲劳综合症,”《公共科学图书馆•综合》,5卷,不。1,文章ID e8519, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. e·r·格雷j . a . Garson j·布鲁尔et al .,“没有证据表明XMRV或相关逆转录病毒在伦敦HIV-1-positive病人群体,“《公共科学图书馆•综合》》第六卷,没有。第三条ID e18096, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. s . c .罗n . Pripuzova b .李et al .,“检测血液MLV-related病毒基因序列的慢性疲劳综合症患者和健康献血者,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷107,不。36岁,15874 - 15879年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. m·卡尼和f . Maldarelli全称异嗜性小鼠白血病病毒相关现状逆转录病毒在慢性疲劳综合症和前列腺癌:达到计分卡,不是一个药方,“《传染病杂志》上,卷202,不。10日,1463 - 1466年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. b·奥克斯a . k .大o . Cingoz et al .,“污染人类的DNA样本用鼠标XMRV-like序列的DNA可能导致错误检测,”Retrovirology,7卷,p。109年,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. m·j·罗宾逊,o . w . Erlwein美国凯et al .,”老鼠在人体组织了XMRV检测DNA污染,”Retrovirology,7卷,p。108年,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. Kellam, p . j . a . Garson更多和g·j·塔,“分析XMRV集成来自人类前列腺癌组织的网站显示PCR污染而不是真正的人类感染,”Retrovirology第十三条,卷。8日,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 美国色调,e·r·格雷a Gall et al .,“与实验室污染疾病有关的XMRV病毒序列是一致的,”Retrovirology,7卷,p。111年,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. k·诺克斯凯利根d, g·西蒙斯et al .,“没有证据表明murine-like gammaretroviruses CFS患者之前确认为XMRV-infected,”科学,卷333,不。6038年,第97 - 94页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. t . Paprotka k . a . Delviks-Frankenberry o . Cingoz et al .,“重组逆转录病毒XMRV的起源,”科学,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. p . w . Tuke k . i Tettmar a . Tamuri j.p. Stoye,特德和r . s .,“PCR大师混合港口小鼠的DNA序列。购者自慎!”《公共科学图书馆•综合》》第六卷,没有。5,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. 帕默,a . p . Wiegand f . Maldarelli et al .,“新的实时反向transcriptase-initiated PCR试验与单份敏感人类免疫缺陷病毒1型RNA在等离子体中,“临床微生物学杂志第41卷。。10日,4531 - 4536年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. g·西蒙斯,s . a .格林j·a·霍姆博格et al .,”全称异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒血液科学研究工作小组:任务,进步,和计划,“输血,51卷,不。3、643 - 653年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. w·k·吉列d·埃斯波西托t·e·泰勒·r·f·霍普金斯,r·k·Bagni和j·l·哈特利”净化:快速表达和纯化的蛋白质从XMRV,”蛋白表达和纯化卷,76年,第247 - 238页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. j·金、f·李和w·玛瑟”病毒小鼠白血病病毒极化大会的决定因素,”病毒学杂志,卷85,不。15日,第7682 - 7672页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. e . c . Knouf m . j . Metzger p·s·米切尔et al .,“多个集成副本和高级生产人类逆转录病毒的XMRV全称异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒()从22 rv1前列腺癌的细胞,”病毒学杂志,卷83,不。14日,第7356 - 7353页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. t . Paprotka k . a . Delviks-Frankenberry o . Cingoz et al .,“重组逆转录病毒XMRV的起源,”科学,卷333,不。6038年,第101 - 97页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. b·t·胡贝尔b·奥克斯a . k . Tai et al .,“人类与老鼠的DNA样本DNA的污染会导致虚假XMRV-like序列的检测,“Retrovirology,7卷,p。109年,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. 全称异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒j . n . Baraniuk“慢性疲劳综合症、前列腺癌,”当前的过敏和哮喘的报告,10卷,不。3、210 - 214年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2011 m·f·卡尼等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。