商业雷姆提取物对蚯蚓的毒性（GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba）GydF4y2Ba

抽象的GydF4y2Ba

LC.GydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba商业雷姆提取物（含Azadirachtin的Sadao Thai III; Neem）在蚯蚓中的滤纸上GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba48小时和72小时是3.79和3.33 G ， 分别。在暴露于0.39（GydF4y2Ba〜GydF4y2Ba48-H LC的10％GydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba）至3.13（GydF4y2Ba〜GydF4y2Ba48-H LC的80％GydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba）GydF4y2BaG ，表皮的径向厚度和体壁明显（GydF4y2Ba）降低，肠上皮的厚度仅增加，但仅高剂量，高于允许用作现场应用中杀虫剂的浓度约25倍（0.09 G ）。neem显着（GydF4y2Ba）在3.13时增加微核试验（检测染色体畸变）中的离子核细胞的数量 G ，比推荐剂量高约35倍，但它没有引起彗星测定中的凝集核细胞DNA单链断裂。因此，Neem是细胞毒性（通过抑制细胞因子的细胞因子增加），但不会对蚯蚓中间细胞进行遗传毒性。本研究表明，农业实践中作为杀虫剂的商业雷姆提取物的推荐剂量对于蚯蚓是安全的。GydF4y2Ba

1.介绍GydF4y2Ba

Neem提取物（Sadao Thai III; Neem）的最活跃的化学物质是Azadirachtin（AZA），属于四丙二醇萜类有机化合物。它用作蜕皮阻挡者，以及一些昆虫害虫的饲养威慑力。有一种感知，即新人是一种环保的杀虫剂，因此它通常用于高浓度，这可能导致土壤中的重载。高新的土壤浓度可导致慢性毒性与甲壳类动物如甲壳类动物（GydF4y2BaDaphnia magna.GydF4y2Ba和GydF4y2BaHyalella AztecaGydF4y2Ba）[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba]通过从土壤中浸入水道。Neem还被证明在啮齿动物中诱导遗传毒性[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba那GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba鱼[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba]。这些效果引起了对农业实践中的杀虫剂的安全使用。GydF4y2Ba

虽然蚯蚓通常用于陆地生态毒性评估[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba]，几乎没有关于Neem对蚯蚓免疫感应细胞和表皮，皮肤，体壁和肠衬里的组织学的影响。在蚯蚓中，核细胞是在植物中存在的循环白细胞，并在免疫防御中起重要作用。他们已被用于研究遗传毒剂如镍（Ni）和镉（CD）的影响[GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba]在蚯蚓上。尚未报道Neem对蚯蚓核细胞的遗传毒性。GydF4y2Ba

哺乳动物和水生物物种中诱导的DNA损伤通过化学和物理剂可以导致小鼠红细胞中微核的出现[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba]和piscines [GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba]。微核是具有微小核的细胞质染色质群，当整个染色体或龈染染色体碎片滞后时形成在后期并未在细胞划分期间掺入子细胞核[GydF4y2Ba10.GydF4y2Ba]。微核在遗传毒性裂口（引起染色体破裂）和鸟弓（影响主轴装置并且可以导致整个染色体的损失）的影响形成微核[GydF4y2Ba11.GydF4y2Ba]。可以用液体检测微核GydF4y2Ba体内GydF4y2Ba微核试验，在基因毒性测试中的良好测定和人类生物监测中，也检测其他核异常，如牛肉，膨胀，缺口和裂片核。GydF4y2Ba

细胞因子发生异常的细胞形成[GydF4y2Ba12.GydF4y2Ba[细胞增殖期间。Salehzadeh等。[GydF4y2Ba13.GydF4y2Ba据报道，AZA和秋天的相似性是植物化学物质都阻止了聚合GydF4y2Ba体外GydF4y2Ba哺乳动物小管蛋白。由于Neem的作用机制，研究了Binucleated细胞。GydF4y2Ba

彗星测定已被用于DNA单链断裂的基因毒性评估[GydF4y2Ba14.GydF4y2Ba]在单细胞中检测均匀的低水平DNA损伤[GydF4y2Ba15.GydF4y2Ba]。它基于电泳期间受损DNA的进一步迁移，DNA随后与荧光头和长尾区域类似于“彗星”，并且长尾部随着DNA损伤的严重程度而增加。它已被用于评估蚯蚓的DNA损伤，例如，GydF4y2Ba艾西哥艾特达达GydF4y2Ba暴露于ni [GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba]，GydF4y2BaAporrectodea longa.GydF4y2Ba用苯并[a]芘（b [a] p）和/或林烷掺入土壤[GydF4y2Ba16.GydF4y2Ba]， 和GydF4y2BaAmynthas diffringens，Aporrectodea Caliginosa，Dendrodrilus Rubidus，Eisenia fetidaGydF4y2Ba， 和GydF4y2Bamicrochaetus benhamiGydF4y2Ba到CD [GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba]。已经提出了微核试验和彗星测定作为DNA损伤的生物标志物。GydF4y2Ba

蚯蚓是有弹性的生物，可以生活在含有显着浓度的化学物质的土壤中，包括一些持续的杀虫剂[GydF4y2Ba17.GydF4y2Ba]。生态上，这是相关的，因为蚯蚓的几种鸟类和哺乳动物饲料，因此，任何化学积累都可能导致生物磁化。Amaral等人。[GydF4y2Ba18.GydF4y2Ba[氯仿组织和肠上皮的径向厚度是否报道，这是蚯蚓中的主要毒物存放层[GydF4y2Ba19.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba]。据我们所知，先前尚未报道NEEM对这些组织的组织学的毒性。GydF4y2Ba

本研究的目的是评估（1）Neem的急性毒性GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba（2）通过评估（i）DNA损伤的Neem的亚急性毒性，包括染色体像素（微核试验），（ii）DNA单链断裂（彗星测定），和（iii）表皮，体壁和体内壁的厚度变化肠上皮，（3）这些生物标志物的相对敏感性GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba暴露在新人。GydF4y2Ba

2。材料和方法GydF4y2Ba

2.1。蚯蚓GydF4y2Ba

蚯蚓（GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba，Lumbricidae，oligochaeta来自商业供应商。在实验室中，蠕虫保持在大型塑料盒（含有牛粪补充有牛粪的湿润土壤）GydF4y2Ba°C和65％的湿度，12小时光/暗循环，并用西瓜每周喂食并适应2周。在实验之前，使体重300-500mg的成年蠕虫（通过ClOlethum的存在鉴定），在湿滤纸上将它们的肠道内容物覆盖24小时，以避免在收获时核细胞的污染。GydF4y2Ba

2.2。试剂GydF4y2Ba

商业Neem提取物（Sadao Thai III）是从美国西格玛 - Aldrich，Neem的Thaineem Products Co.，曼谷，泰国和纯AZA获得的纯AZA，从美国西格玛 - 奥尔德里希获得。氯化镉（CDCLGydF4y2Ba_2GydF4y2Ba）（Fluka Chemical Corp.，Milwaukee，USA）被用作阳性对照。GydF4y2Ba

2.3。测试解决方案GydF4y2Ba

AZA溶液的变化浓度，即0.00005％，0.00010％，0.00020％，0.00030％，0.00040％，0.00050％，0.00060％和0.00070％和0.00070％（w / v）aza由商业0.1％（w / v）aza制备- 介绍雷姆。这些AZA检测溶液通过高效液相色谱（HPLC）测定，含有8.31,161,33.22,49.83,66.44,83.05,99.66和116.27 mg / L的浓度。将蒸馏水用作对照。GydF4y2Ba

使用追踪C18柱进行HPLC分析（5 μ.GydF4y2Ba米，GydF4y2Ba mm^2GydF4y2BaI.D.）安装在Agilent 1100系列HPLC系统配备1100个二进制泵，1100二极管阵列和UV检测器。样品（20 μ.GydF4y2Bal）自动注入HPLC。使用的流动相是乙腈 - 水（40：60; v / v），流速为1mL minGydF4y2Ba^-1GydF4y2Ba，虽然UV信号被记录在210nm [GydF4y2Ba21.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba22.GydF4y2Ba]。标准AZA在10.5分钟的保留时间洗脱。通过HP ChemStation数据系统（科学设备中心，Kasetsart Univers，泰国）获得了色谱图和数据。GydF4y2Ba

2.4。急性毒性GydF4y2Ba

24小时缩小后，将蚯蚓漂洗在蒸馏水中并在滤纸上干燥。将总共​​140个蚯蚓暴露于蒸馏水中（对照;GydF4y2Ba）或六种浓度（基于含有AZA的新人的初步研究）中的一种（GydF4y2Ba每浓度）。称重蚯蚓，每个都放在玻璃容器中（GydF4y2Ba cm) lined with a 9-cm-diameter Whatman no. 1 filter paper. Filter papers were moistened with 3 mL of one of the different concentrations of Aza: 0, 33.22, 49.83, 66.44, 83.05, 99.66, and 116.27 mg L^-1GydF4y2Ba。这些浓度等于0,1.57,2.35,3.13,3.92,4.70和5.48的AZA曝光 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba滤纸。所有实验均在室温下进行。在48和72小时内测定百分比死亡率。当他们没有回应前部区域时，蚯蚓被认为死了。使用SPSS统计软件的探测分析分析数据，以确定发生50％和10％死亡率的浓度。GydF4y2Ba

2.5。体内剂量效应关系GydF4y2Ba

这GydF4y2Ba体内GydF4y2Ba使用微核试验，在48蚯蚓的核细胞中评估剂量效应关系，从而确定微核和小核频率。每个蚯蚓暴露于含有五种AZA浓度中的Neem（GydF4y2Ba均处理），远低于LCGydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba如上所述，在亚急性研究中描述的滤纸研究中的48小时。最终的AZA浓度为0.39（48-H LC的〜10％GydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba浓度），0.78,1.57,2.35和3.13（占48-H LC的〜80％GydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba专注） μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba过滤纸。蒸馏水用作阴性对照（0;GydF4y2Ba）和一剂CDCLGydF4y2Ba_2GydF4y2Ba（0.01 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba;GydF4y2Ba）作为阳性控制。在泰国，允许在该领域使用的最高浓度为0.09 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba。因此，纯AZA浓度为0.09 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba（GydF4y2Ba）也用于该研究。GydF4y2Ba

在48小时，从滤纸中除去来自每种浓度的三个蚯蚓，包括正和阴性对照和纯AZA组，在蒸馏水中冲洗，并在纸巾上略微干燥，用于核细胞收集。每次治疗都有三个重复。对细胞活力进行枚举并检查染色体像素（微核试验）和DNA单链断裂（彗星测定）枚举。其余三个蚯蚓用于表皮，体壁和肠上皮的组织学研究。记录了所有蚯蚓的体重。GydF4y2Ba

2.5.1。鸡群细胞系列GydF4y2Ba

来自每组的三个蚯蚓暴露于挤出缓冲液[GydF4y2Ba23.GydF4y2Ba[通过背孔挤出的核细胞用于测定。GydF4y2Ba

2.5.2。统计枚举和细胞活力GydF4y2Ba

来自三蚯蚓的挤出的核细胞被转移到冰冷的CA中GydF4y2Ba^2+GydF4y2Ba自由虱子平衡盐溶液（LBSS）[GydF4y2Ba24.GydF4y2Ba]。将细胞计数在血上磁速度计，细胞浓度调节至10GydF4y2Ba^5.GydF4y2Ba cells mL^-1GydF4y2Ba。在将相同体积的锥形细胞悬浮液混合，用0.4％台盼蓝（Sigma，USA）溶液混合后，用锥虫蓝排除试验测定细胞活力。GydF4y2Ba

2.5.3。微核试验GydF4y2Ba

等分试样10 μ.GydF4y2BaL来自每个蚯蚓的一部分液体在玻璃载玻片上涂抹，每个蚯蚓的三个载玻片为每种浓度，并使其空气干燥。然后用甲醇固定溶液固定核细胞并用赖特快速染色染色。来自三个单独的载玻片的总共3,000个小少量纤维细胞（1,000个细胞载玻片GydF4y2Ba^-1GydF4y2Ba）从每浓度的每个蚯蚓以1000x放大率在复合显微镜下检查，以确定平均微核和小核心频率。剩余的细胞液用于通过彗星测定研究DNA单链断裂。GydF4y2Ba

2.5.4。彗星测定GydF4y2Ba

基于Singh等人的协议，从三蚯蚓的核细胞中制备三个微凝胶载玻片。[GydF4y2Ba25.GydF4y2Ba]由S. A. Reinecke和A. J. Reinecke修饰[GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba]。在4℃下以昏暗的光进行所有步骤，以防止额外的DNA损伤。等分试样20 μ.GydF4y2BaL小细胞细胞悬浮液与75次小心混合 μ.GydF4y2BaL 0.5％（PBS，pH 7.3）低熔点琼脂糖（LMA）在40℃下，覆盖在100的微观载玻片上 μ.GydF4y2Bal正常熔化琼脂糖，立即用盖玻片覆盖。使琼脂糖通过在冰袋上保持1分钟来固化。除去覆盖玻璃，将0.5％低熔点琼脂糖（在40mm Tris-Cl中制备）层叠在载玻片上，并用盖玻片覆盖。然后将载玻片转移到冰袋上1分钟。移除盖玻片，并将载玻片保持在裂解缓冲液中（2.5M NaCl，100mM EDTA，10mM Tris碱，1％Triton-x，pH1.1.0）GydF4y2Ba h in dark at 4°C. Slides were then transferred to a tank containing electrophoresis buffer (300 mM NaOH, 1 mM EDTA, pH > 13) for 20 min for DNA to unwind. Electrophoresis was carried out for 30 min at 12 V (~0.37 V/cm) and 300 mAmp. Next, slides were neutralized with a 0.4 M Tris buffer (pH 7.5) thrice at 5-min intervals.

幻灯片染色100 μ.GydF4y2Ba我20 μ.GydF4y2BaG ml.GydF4y2Ba^-1GydF4y2Ba溴化乙锭5分钟并用去离子水洗涤以除去过量的污渍。在尼康Eclipse 80i荧光显微镜中观察到幻灯片，过滤器块UV-2a（激发过滤器510-560nm，令人发知的镜575nm，发射590nm）。用数码相机（尼康DXM 1200C）获得彗星的图像，并用软件程序露西亚分析（实验室通用计算机图像分析）。每载滑动至少100个非捕获的彗星在400倍放大率下捕获，并为以下彗星参数进行评分：尾DNA（Td）％（表示为尾部的荧光强度的百分比），DNA尾长（TL;距离核心的距离在彗星尾部的末端）和DNA尾部（TM;包含迁移DNA的最小可检测尺寸的量度（在彗星尾长中反射）和宽松/破碎块的数量（由DNA的强度表示）尾巴））。GydF4y2Ba

2.5.5。蚯蚓横截面：组织学和形态学GydF4y2Ba

切除克拉克拉内部的1厘米厚的蚯蚓横截面（GydF4y2Ba每种Neem Aza浓度和对照的蚯蚓）并在Bouin固定剂中固定24小时，在70％醇中脱水，在甲基苯甲酸盐中清除过夜，在苯中漂洗，嵌入石蜡中，并在7-GydF4y2Baμ.GydF4y2Bam厚度。将部分用血红素和曙红染色。每个蠕虫的10个序列部分用于量化表皮，体壁（表皮和肌肉）和肠上皮的径向厚度，每个部分分为六个区域，如图所示GydF4y2Ba1GydF4y2Ba。在每个区域中，在复合显微镜（100x和400倍倍率）下测量表皮，体壁和肠上皮的径向厚度，用于形态学。使用眼部千分尺的单个观察器进行测量。计算每个部分的六个区域测量的平均值。由于时间限制，在暴露于纯AZA组的蚯蚓中不能进行形态学研究。GydF4y2Ba

2.6。统计分析GydF4y2Ba

结果结果GydF4y2Ba体内GydF4y2Ba剂量效应关系研究表达为来自三蚯蚓的平均值（SEM）的平均值和标准误差。使用SPSS软件版本11.5处理数据，并使用单向ANOVA和TUKEY的多个比较测试确定不同的治疗组之间的显着差异。当正常成力失败时，Kruskal-Wallis H或Mann-WhitneyGydF4y2Ba进行测试。对于所有统计测试，差异被认为是显着的GydF4y2Ba。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

3.1。急性毒性GydF4y2Ba

新人对GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba在过滤纸接触试验中，通过增加浓度的死亡率增加所证明。LC.GydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba和LC.GydF4y2Ba_10.GydF4y2Ba48小时的新人GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba是3.79和1.27 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba分别为72小时，分别为3.33和0.84 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba，分别（图GydF4y2Ba2GydF4y2Ba）。这些浓度远高于推荐剂量（0.09 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba） 在该领域。GydF4y2Ba

3.2。体内剂量效应关系GydF4y2Ba

3.2.1。统计枚举和细胞活力GydF4y2Ba

在对Neem的蚯蚓暴露48小时后，挤出的核细胞被计算并表达为每单位体重的细胞数。暴露于含AZA和对照浓度的蚯蚓之间的每单位体重的蚯蚓（表）没有显着差异（表GydF4y2Ba1GydF4y2Ba）。核细胞的活力从96到100％变化。GydF4y2Ba

3.2.2。微核试验GydF4y2Ba

在48小时内暴露于蒸馏水（对照），NeeM，纯AZA和Cd（阳性对照）的少量核细胞中的微核和离子键数如表所示GydF4y2Ba2GydF4y2Ba。暴露于较高浓度的Neem（AZA> 2.35的蚯蚓（AZA> 2.35）的蚯蚓中，小核肉的数量显着增加 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba滤纸）和CD（0.01 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba）。在暴露于阳性对照的蚯蚓中，微核数量显着增加，但不在暴露于Neem的人中。GydF4y2Ba

3.2.3。彗星测定GydF4y2Ba

用Cd，纯AZA和Neem处理的蚯蚓中央细胞中的Td％，T1和Tm显示在表中GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba。暴露于阳性对照CD的蚯蚓48小时，Td％和Tm显着增加（表GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba）。与对照相比，在暴露于纯AZA和NEEM的蚯蚓中发现TD％，T1和TM的显着差异。GydF4y2Ba

3.2.4。组织学和形态学GydF4y2Ba

雷姆的影响GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba组织学显示在图中GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba。Neem在2.35以上 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba滤纸上的AZA浓度显着增加了肠上皮的径向厚度（图GydF4y2Ba3（d）GydF4y2Ba），但效果小于阳性对照（CD 0.01 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba;桌子GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba）。相比之下，Neem在2.35上方和高于2.35的体壁的径向厚度下降 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba和3.13的表皮 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba浓度（表格GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba）。CD阳性对照，0.01 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba，显着增加表皮和肠上皮的径向厚度，而不是体壁。对照组横截面的组织学检查（图GydF4y2Ba3（a）GydF4y2Ba）显示正常的架构和圆形和纵向肌肉的完整性质。蚯蚓暴露于〜80％的LCGydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba48小时（AZA 3.13 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba）显示圆形和纵向肌肉中的相邻细胞是不连续的，通过狭窄到大的间隙连接（图GydF4y2Ba3（b）GydF4y2Ba）。GydF4y2Ba

4。讨论GydF4y2Ba

该研究进行了确定Neem是否是“Ecofriendly”杀虫剂，对Nontarget陆生物体，蚯蚓引起任何细胞毒性或遗传毒性作用GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba。在核细胞研究中，活力总始终超过96％。与Homa等人的研究相反。[GydF4y2Ba26.GydF4y2Ba据报道，在1.32的Cu，Pb或Cd处理后，核细胞活力显着降低 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba滤纸剂量。GydF4y2Ba

Chandra和Khuda-Bukhsh [GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba据报道，AZA诱导遗传毒性GydF4y2Baoreochromis mossambicus.GydF4y2Ba鱼。我们的结果表明，与阴性对照相比，蚯蚓与纯AZA暴露的蚯蚓之间的微核微核差异无显着差异，表明AZA没有引起核细胞DNA中的染色体畸变。但是，Neem在3.13 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2BaAZA浓度和CD阳性对照0.01 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba滤纸中浓度显着增加了离子蛋白酶细胞的数量（表GydF4y2Ba2GydF4y2Ba）。这与Anuradha等人一致。[GydF4y2Ba27.GydF4y2Ba据据据督察亚洲人类的主要褐藻素，诱导肌动蛋白的解聚导致细胞和随后以胱天冬酶的方式进行凋亡。这可能是因为AZA具有与血清曲霉相似的化学特性，一种影响纺锤体纤维的合成和解聚的抗杀剂代谢物[GydF4y2Ba28.GydF4y2Ba]。因此，可以将Binucleate外观视为较高接触Neem的效果的生物标志物（在3.13时 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba），比允许的现场允许的使用量高约35倍（0.09 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba）。GydF4y2Ba

在彗星测定中，与阴性对照相比，Neem和纯AZA没有对Td％，T1和Tm的影响（表GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba）表明这些化学物质不会导致本研究中使用的浓度的DNA损伤，其高于现场中使用的浓度。相反，在CD暴露的蚯蚓中，Td％和Tm显着高于48小时暴露的阴性对照。这与Fourie等人一致。[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba]谁发现CD受损的三种蚯蚓种类的DNA -GydF4y2BaAporrectodea caliginosa，Dendrodrilus Rubidus，GydF4y2Ba和GydF4y2Ba艾西哥艾特达达GydF4y2Ba- 在人工土壤 - 水介质暴露于Cd浓度，低至20毫克L.GydF4y2Ba^-1GydF4y2Ba。GydF4y2Ba

本研究表明，Neem显着降低了体壁和表皮的厚度，并增加了肠上皮的厚度GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba但只有高浓度。蚯蚓中报道了与肠道的类似变化GydF4y2BaLumbricus Terrestris.GydF4y2Ba用高Cu和Fe含量暴露于火山土壤[GydF4y2Ba18.GydF4y2Ba]。增加的肠上皮厚度可以被解释为蚯蚓的适应，以增加在包括纽约的毒物中的暴露，以保护肠衬。根据Morgan等。[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba]，形态改变GydF4y2Badendrodrilus rubidus.GydF4y2Ba肠上皮是一种应对高金属浓度的一种方式。统称，这种变化会影响蚯蚓的健康​​，包括吸收和消化营养，行为和运动的变化。GydF4y2Ba

很明显，Neem会损伤蚯蚓的表皮，身体壁和肠上皮。身体壁中的肌肉中的间隙可能是由于细胞凋亡导致不连续肌肉细胞。暴露于四乙基铅和氧化铅的蚯蚓中报道了类似的变化[GydF4y2Ba29.GydF4y2Ba]和有机磷农药profenofos [GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba

因此，虽然Neem和纯AZA没有蚯蚓的遗传毒性GydF4y2BaPheretima Peguana.GydF4y2Ba，Neem在2.35和3.13的滤纸上降低了AZA浓度的体壁和表皮厚度 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba分别和增加2.35以上的肠上皮增加 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba专注。此外，它在3.13时增加了叶片的核细胞 μ.GydF4y2BaG CM.GydF4y2Ba^-2GydF4y2Ba专注。看来，增加的肠壁厚度和减少的体壁厚度是更敏感的生物标志物，其暴露于肌腱的变化比表皮厚度的变化。这些结果表明，随着Binucleate频率，与体壁，肠上皮和表皮的形态学和组织学变化等相似形态生物标志物有助于评估Neem对蚯蚓的毒性。GydF4y2Ba

结论GydF4y2Ba

含有浓度AZA的Neem甚至高于推荐的土壤施用率，因为杀虫剂对蚯蚓的施用速率高出蚯蚓毒细胞，如微核试验和彗星测定所证明的。然而，高浓度的Neem可能是压力，并且蚯蚓通过改变包括表皮，身体壁和肠上皮的组织的形态学特征来适应。在研究的参数中，暴露于Neem的最敏感的生物标志物是肠壁厚度的增加和体壁厚度的降低。GydF4y2Ba

致谢GydF4y2Ba

本研究得到了泰国石膏大学的石板大学大学研发学院的支持。GydF4y2Ba

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