文摘

客观的。本研究分析的表达miR-34a观察牙龈沟液内细胞激素在慢性牙周炎患者(GCF)及其连接的toll样受体(TLR) /核因子kappa-B (NF -κB)信号通路。方法。我们收集了GCF两组受试者,用rt - pcr检测miR-34a和NF -的表达κB p65 mRNA和TLR4 mRNA和ELISA检测炎症因子GCF学位,并对两组进行牙周检查。结果。牙龈指数、出血指数、探测深度,和附件损失指标的牙周检查观察组明显优于对照组( )。il - 1的水平β、il - 6和TNF -αGCF的观察组高于对照组( )。信使rna miR-34a的相对表达水平,NF -κB p65, TLR4 GCF的观察组显著高于对照组( )。相关分析表明,miR-34a慢性牙周炎患者中高度表达。结论。有一个异常高表达miR-34a GCF的慢性牙周炎。其表达与牙周炎症的程度有关,牙周组织损伤,激活TLR / NF -κB信号通路,可以作为一个潜在的指数辅助诊断和疾病的严重程度。

1。介绍

慢性牙周炎是一种慢性细菌和致病物质引起的口腔疾病,特征是侵犯牙龈和牙周组织。它将严重影响患者的口腔健康疾病的发展,也是一个重要的导致牙齿脱落的患者(1]。慢性牙周炎是最常见的牙周炎,通常导致牙龈肿胀和发红。如果不治疗,它将导致软组织和骨丢失。牙齿牙龈会撤出,最终导致牙齿松动和脱落。

近年来,微rna (microRNA)发现异常表达在不同炎症和肿瘤疾病,和microRNA检测有望成为一个重要的生物标志物的检测炎性疾病(2]。研究发现,各种各样的microrna参与牙周组织内稳态的规定和病理过程和发挥协调作用,牙周组织炎症和骨重建通过不同的途径(3,4]。miR-34a是miR-34家族的成员之一,和编码基因位于1 p36.23的染色体。它可以引起肿瘤抑制基因p53和发挥抗肿瘤效应通过抑制下游各种致癌因素的表达。miR-34a也可以参与各种生物过程,如细胞周期、增殖、衰老、凋亡和血管生成5,6]。研究已经证实(7]miR-34a参与各种炎症过程。TLR / NF -κB信号通路参与多种炎症介质的调节效果,证明有多种自身免疫性疾病。进一步实现miR-34a疾病的调节功能,本研究探讨和分析miR-34a GCF的慢性牙周炎的表达及其相关性与TLR / NF -κB信号通路。报告如下。

2。材料和方法

2.1。研究对象

89年慢性牙周炎患者承认我们医院从2018年4月到2020年4月被录取为观察组,和50名健康志愿者,在我们医院接受身体检查在同一时期被选为对照组。这项研究是医院的机构审查委员会批准。从每个参与者书面知情同意了。

2.2。包含和排除标准

入选标准如下:(1)观察组所有患者被诊断出患有严重慢性牙周炎, , , ,牙齿松动,探索出血等;(2)病人被诊断为第一次没有收到自愿入学前处理;(3)患者的年龄≥35岁;(4)病人自愿签署知情同意。

排除标准如下:(1)受试者联合口服当地炎性疾病如慢性咽炎和扁桃体炎;(2)病人使用抗菌或免疫抑制药物,等在入学之前3个月;(3)妇女孕期或哺乳期;(4)恶性肿瘤患者或肝、肾功能异常;或(5)患者异常的精神状态,他们不能与本研究合作。

2.3。检测miR-34a, NF -κB p65 mRNA, TLR4在GCF mRNA的表达

我们把大斑块和大型鞑靼GCF的病人和擦牙齿表面和齿龈无菌棉球。我们没有插入的。30 moisture-absorbent纸颊牙周袋的牙齿和保留30年代的(如果被血液污染不习惯)。我们把4象限的吸水纸技巧作为一个样本到相同的EP管,与200年补充道μl PBS缓冲和冷冻在冰箱里在-20°C,供以后使用。总RNA提取试剂盒。我们检测到的浓度和纯度总与分光光度计和反向转录成RNA cDNA逆转录酶工具包。RT-qPCR检测的反应条件如下:95°C 15分钟predenaturation→95°C 15年代和60年代60°C→反应,共有40个周期。引物由上海Sangon合成生物技术工程有限公司有限公司与GAPDH基因内部参考。引物序列见表1。计算每个目标基因的相对表达 。

表1
引物序列。
2.4。炎性细胞因子的检测

GCF的取样后两组受试者根据上面的方法,一个酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(表达载体、表达载体)是用来衡量炎症细胞因子,包括interleukin-1β(il - 1β)和白细胞介素- 6 (il - 6)和肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)。炎性细胞因子的细节所示结果。

2.5。牙周检查
2.5.1。牙龈指数(GI)

炎症程度是记录在四个领域:舌边缘齿龈,中间的颊牙龈乳头,颊边齿龈和颊远端牙龈乳头。炎症被评为四范围:0点(正常齿龈),1点(轻微炎症),2分(中度炎症),3点(严重的炎症)。每个牙齿和考生的分数(分数的总和的4牙齿检查)计算。

2.5.2。出血指数(BI)

出血情况被评为六点范围(0点(健康齿龈),1点(炎性牙龈颜色的变化,但没有出血探测),2点(参差不齐的出血后探测),3点(出血发生在沿着牙龈边缘探测和传播),4分(出血满并溢出牙龈沟),5分(主体自发出血))。

2.5.3。探测深度(PD)

每个测试牙被记录在6个地点(舌中央的中心,远端和颊中央的,中心,和远端)。健康的齿龈的沟的探测深度不超过2 - 3毫米。

2.5.4。附件(AL)损失

齿龈时不退缩,附件的损失之间的区别是牙周组织的探测深度和距离cementoenamel结(CEJ)牙龈边缘,齿龈收回,附件损失是探测深度和距离的总和CEJ牙龈边缘。

2.6。统计方法

研究的统计分析是由SPSS 25.0。的测量数据进行了比较 - - - - - -测试和枚举的比较数据是由 测试和分析了相关皮尔逊相关性。 被称为统计上的显著差异。

3所示。结果

3.1。患者的临床资料

总共有89例,观察组在对照组和50。观察组的平均年龄 ,虽然它是 在对照组。观察组的收缩压 ,这是 在对照组。舒张压是 观察组 在对照组。体重指数 观察组 在对照组。没有统计上的显著差异在临床数据之间的性别、年龄、收缩压、舒张压和BMI ( )(表2)。

表2
比较两组之间的临床资料。
3.2。两组的牙周检查结果

索引的齿龈出血,穿透深度,附件丢失的牙周检查观察组明显优于对照组( )(表3)。

表3
比较两组受试者之间的牙周检查结果( )。
3.3。比较两组之间的炎症水平GCF

il - 1的水平β、il - 6和TNF -αGCF的观察组高于对照组( )(表4)。

表4
比较两组之间的GCF炎症水平( )。
3.4。比较miR-34a, NF -κB p65 mRNA, TLR4 mRNA表达GCF在两组之间

的相对表达miR-34a, NF -κB p65, TLR4 mRNA的GCF中观察组显著高于对照组( )(表5)。

表5
比较miR-34a, NF -κB p65, TLR4 mRNA表达GCF两组( )。
3.5。相关分析

相关分析的结果表明,在慢性牙周炎,miR-34a表达水平与胃肠道尤其是呈正相关,BI, PD,艾尔,il - 1β、il - 6、TNF -αNF -κB p65 mRNA, TLR4 mRNA在慢性牙周炎(GCF )(表6和图1)。

表6
相关分析。

图1
相关分析。与胃肠道miR-34a表达水平的相关性,BI, PD,艾尔,il - 1β、il - 6、TNF -αNF -κB p65 mRNA, TLR4 mRNA分析了GCF慢性牙周炎。

4所示。讨论

慢性牙周炎是松动的主要原因以及成人牙齿的损失。各种复杂因素的影响发生,发展,和牙周疾病的预后8- - - - - -10]。GCF是一个穿透的炎性渗出物从牙龈结缔组织的上皮沟到牙龈沟。GCF可以反映牙周支持组织的代谢变化及其水平是一个敏感的指标评价牙周炎症的程度(11,12]。

当前的焦点和热点研究慢性牙周炎找到因素密切相关的疾病的诊断和评价。microrna是一个高度保守的非编码RNA,与目标基因的信使RNA降解或抑制其翻译达到负调节基因表达。microrna是一个高度保守的非编码RNA,它可以降低或抑制其翻译与目标基因mRNA互补配对后达到负调节基因表达。microrna的检测已经成为一种重要的生物标记不同的诊断和监测疾病(13- - - - - -15]。miR-34a是自然和先天免疫的关键调节因素。研究发现,miR-34a表达式是增加慢性风湿性关节炎,这会削弱Th1细胞分化的抑制作用,从而维持慢性炎症反应(16- - - - - -18]。miR-34a功能的慢性牙周炎的发生和发展目前仍不清楚。本文讨论和分析了表达miR-34a GCF慢性牙周炎患者,以及它与TLR / NF -κB信号通路。研究结果显示miR-34a观察组的相对表达GCF极度高于对照组,表明miR-34a的异常表达在慢性牙周炎。

慢性牙周炎是菌斑微生物引起的炎症和破坏性的疾病。炎症细胞进入趋化因子的作用下牙周组织和协调生产各种炎症介质(19- - - - - -21]。肿瘤坏死因子-α能促进生产趋化因子、粘附分子,炎症因子等,参与慢性牙周炎的启动(22]。本研究结果表明,il - 1的水平β、il - 6和TNF -αGCF的观察组显著高于对照组,由学者[一致的结论23,24),建议观察牙龈沟慢性牙周炎的炎症内细胞激素的存在。的表达水平miR-34a呈正相关,il - 1的水平β、il - 6和TNF -αGCF和牙周临床症状指标(GI, PD,艾尔和照明灯具),确认miR-34a观察牙龈沟红肿的内细胞激素可以客观的反映程度的条件和疾病慢性牙周炎的严重程度。

TLR / NF -κB信号通路发挥重要的作用在炎症和免疫反应的过程中身体的免疫病理机制,并与多种疾病,如风湿性关节炎(25,26]。在这项研究中,我们使用rt - pcr检测NF -的表达κB p65 mRNA和TLR4 mRNA GCF慢性牙周炎和主题在正常状态下,分别。结果表明,NF -的相对表达水平κB p65 mRNA和TLR4 mRNA GCF的观察组高于对照组,与miR-34a的表达呈正相关。这是与学者的结果一致27,28),确认有一个激活TLR / NF -κB信号通路GCF慢性牙周炎,进一步证明miR-34a能客观地反映慢性牙周炎牙周组织损伤的程度。

本研究的缺点是证明miR-34a的高表达与牙周炎症和牙周组织损伤的程度,可以作为一个潜在的指数辅助诊断和疾病的严重程度。然而,也有局限性。首先,患者的数量不是太大了。其次,机制不明确,需要进一步的研究来证明这一点。

5。结论

总之,有一个异常高表达miR-34a GCF的慢性牙周炎。其表达与牙周炎症的程度,牙周组织损伤,激活TLR / NF -κB信号通路,可以作为一个潜在的指数辅助诊断和疾病的严重程度。

数据可用性

获得的数据可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

嘉鑫锅进行构思和设计,以及实验。爵刘进行数据分析。陆赵提供金融支持和手稿的最终批准。