肯尼亚中部高地木霉对牛油果茎端腐病的抑制作用 - raybet雷竞app,雷竞技官网下载,雷电竞下载苹果

摘要

对有机鳄梨水果的需求，加上全球市场严格的食品安全标准，使得生产商使用替代的、安全的、消费者友好的策略来控制鳄梨水果的采后真菌疾病。这项研究评估了在体外的功效木霉属spp。(atroviride, T. virens, T. asperellum和t . harzianum)，以拮抗鳄梨茎端腐(SER)真菌病原(可可叶枯霉，新毛孢，假毛孢，和腐皮镰孢霉菌)使用双重文化技术。的木霉属并对采后“哈斯”鳄梨果实进行单次评价。5 × 10孢子悬浮⁴分生孢子的/毫升木霉属分别在染病前24小时(预接种)、与染病同时接种(共接种)和染病后24小时(后接种)3个时间点施用spp。在在体外研究中,t . atroviride表现出最高的菌丝生长抑制联合国以及(48%),n pseudotrichia(55%)和f .以上(32.95%),T．harzianum有最高的菌丝生长抑制作用l . theobromae．木霉属asperellum对所有病原菌菌丝生长抑制效果最差。同样的,T．液对显示的最高的菌丝生长抑制n pseudotrichia抑制45%。关于收获后的“哈斯”水果，t . atroviride表现出最高的疗效小毛线虫，假毛线虫，和f .以上在所有的应用中。木霉属液对和t . harzianum是接种后对所有病原体最有效的，而Lasiodiplodia theobromae控制最好的方法是t .液对，t . harzianum和t . asperellum在postinoculation．这两个t . atroviride和t . harzianum提出了一种潜在的合成杀菌剂对鳄梨果实采后病害的防治方法，并进行了进一步的田间试验以验证其有效性。使用的可能性木霉属此外，还应探索在商业水平上对鳄梨果实中SER的管理。

1.介绍

鳄梨(Persea美国是世界上经济上最重要的亚热带水果作物之一，也是肯尼亚主要的外汇收入来源[1，2］．2017年，肯尼亚出口了3亿吨牛油果，为GDP贡献了5050万美元[3.］．在全球范围内，鳄梨水果在广泛的农业生态区种植，用于家庭和商业目的[4］．由于单不饱和脂肪酸、几种矿物质(钾、铁、磷)、维生素(E、B、C)、脂质和植物化学物质的存在，这种水果在世界范围内具有很高的营养价值。此外，食用鳄梨水果可以改善整体饮食质量[2，5］．

茎端腐病(SER)是世界上所有牛油果种植区的主要病害。这种疾病会影响水果在销售、储存甚至运往市场的过程中[6］．葡萄球菌科的成员(Diplodia mutila，d . pseudoseriata，d . seriata；Dothiorella iberica；Lasiodiplodia theobromae；和Neofusicoccum精华，n nonquaesitum,联合国以及)主要与牛油果的SER有关。据报道导致这种疾病的其他病原体包括刺盘孢属、炭疽或C。fructicola和黄帚霉属，pseudotrichia, Dothiorella aromatica，Pestalotiopsis杂色的，根霉stolonifer，镰刀菌素sambucinum,和腐皮镰孢霉菌［6- - - - - -9］．在之前的研究中[10]，可可树属、细小N.拟丝痕N.和索拉尼F.病原菌被鉴定为肯尼亚鳄梨果实SER的主要致病原因。

多年来，合成化学品已成功地用于控制植物病害，并具有广阔的前景。然而，农产品上的化学残留物、水果和土壤上不可生物降解的毒素以及化学品的高成本仍是令人严重关切的问题[11］．此外，消费者越来越多地要求减少化学品在农产品中的使用。此外，食品安全标准和有机食品消费者组织要求农产品中最低可检测的残留物[12］．利用微生物杀菌剂、微生物拮抗剂和生物防治剂(酵母、细菌和拮抗真菌)在水果采后病害的管理中提供了一种潜在的替代合成杀菌剂的选择[13］．生物防治方法包括利用微生物减少或维持采后真菌病原体低于经济损失[14］．

目前，几种水果采后病害可以通过天然微生物拮抗剂或人工引入微生物拮抗剂进行防治[15］．微生物拮抗剂比合成杀菌剂有几个优点。它们对环境友好，使用更安全，无有毒残留，而且生产经济[16］．木霉属Spp.已广泛应用于采后贮藏，以保护具有商业重要性的水果和蔬菜，如辣椒、芒果、苹果、香蕉、草莓和番茄[17，18］．绿色木霉，哈茨木霉，和t . koningii对l . theobromae和炭疽菌musae引起香蕉采后冠腐病复合体在室温和冷藏条件下贮藏[19］．木霉属harzianum也有报道称可以控制香蕉中的炭疽病，保持采摘后的果实质量，并减少自然水果感染[20.］．

鳄梨果实采后病害的生物防治已取得重大进展[16，21］．然而，在肯尼亚还没有尝试对鳄梨果实采后病害进行生物防治。因此，本研究对其拮抗活性进行了研究木霉属在肯尼亚中部高地的牛油果果实的茎端腐烂的真菌病原体。

2.材料和方法

2．1．菌株来源

“哈斯”鳄梨的样品是从肯尼亚中部高地穆朗阿县的果园和当地市场获得的。这些果实在肯亚农业和家畜研究组织(KALRO)坎德拉的室温(22°C - 25°C)下培养7-14天，使茎末端腐病发生。对有茎端腐烂症状的水果用干净的自来水清洗，用75%乙醇浸泡3分钟进行表面消毒，然后用蒸馏水冲洗。从腐烂边缘无菌分离小块腐烂组织，接种马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)，室温(22-25℃)培养5天。通过传代培养菌丝的菌丝尖获得纯培养物。根据形态学和培养特征对分离菌株进行鉴定，并通过分子鉴定予以确认。用斜万能瓶在4°C的PDA中保存纯培养物。本研究使用了四种常见的分离病原体。

2．2.敌手的来源

两个商业种．（t . asperellum和t . harzianum)及两个本地获得的spp (t . atroviride和t .液对)木霉属在本研究中使用。木霉属harzianum从生物杀菌剂TRIANUM P (t . harzianumRifai菌株T22, 1 × 10⁹Koppert生物系统的菌落形成单位(cfu)/克干重。木霉属asperellum从生物杀菌剂MAZAO SUSTAIN (TRC900 1.7 × 10⁹cfu/克干重)。木霉属atroviride(KRI)和t .液对(BMLT54P1)来自肯雅塔大学农业科学与技术系。用无菌蒸馏水将14日龄的纯培养菌浸泡在PDA中制备孢子悬浮液。用无菌丝环刮去分生孢子并使其悬浮。悬浮液用双层平纹棉布过滤，收集的滤液连续稀释至1 × 10⁵．用血球计来调节孢子浓度。

2．3.对抗性的活动木霉属牛油果茎端腐病的防治在体外

2.3.1。双重文化分析

抑制活性四木霉属spp。atroviride, T. virens, T. asperellum和t . harzianum，以对抗四种SER真菌病原体，可可叶枯霉，新毛孢，假毛孢，和腐皮镰孢霉菌，采用双重培养技术确定[8］．将无菌PDA倒入直径9cm的培养皿中。将菌丝盘(直径5毫米)置于培养皿一侧的边缘，菌丝盘距离7日龄真菌菌落的边缘较远。直径5毫米的菌丝盘，生长活跃木霉属sp .培养物放置在培养皿的对面边缘。用直径为5毫米的菌丝盘在培养皿的一端接种真菌病原体作为对照。每个处理重复6次，培养皿25±2℃孵育。记录了试验病原菌和拮抗剂的菌丝生长情况。按照Rajendiran等人的公式计算抑制百分比[22]：其中C-菌丝生长为对照，T-菌丝生长为双培养板。

2.3.2。的影响木霉属鳄梨果实采后茎端腐病病原菌的防治

成熟的“哈斯”鳄梨果实来自慕朗阿县的一个农场。水果没有明显的迹象或症状的疾病和没有物理损害的选择。用自来水冲洗水果，然后用75%乙醇浸泡3分钟进行表面消毒。然后用蒸馏水冲洗水果，放在无菌托盘上，在室温下风干。

的能力木霉属物种抑制SER的发展“哈斯鳄梨果实测试通过添加的每一个对手在三个时间点:(i)前24小时内真菌病原体(preinoculation),(2)同时真菌病原体(并发接种),和(3)后24小时内真菌病原体(postinoculation) [8］．

以“哈斯”鳄梨果实为试材，在茎端喷洒50µL孢子悬浮液(5 × 10⁵分生孢子/ml) (可可树素，小毛霉，假毛霉，和f .以上)．同样数量的拮抗剂也被使用，每个治疗重复四次。按照上述程序，将病原菌和拮抗剂施用于果实上。仅接种每种病原菌并复制4次的果实作为对照。这个实验进行了两次。

接种后的牛油果置于25±2℃密封塑料容器中(每个单独容器)孵育。12 d后纵切进行评价。采用0 ~ 5的分类量表对鳄梨果实SER发育的严重程度进行评分;表格1．


腐烂在牛油果上	年级

没有腐烂	0
0 - 10%	1
11 - 25%	2
26 - 50%	3.
51 - 75%	4
≥76%	5

按照Lakshmi等人所描述的公式计算百分比疾病指数[23]：

2．4．数据分析

获得的数据被记录在电子表格中。然后将数据导出到Min Tab 17.0软件(Minitab, LLC)。产生描述性统计，数据以均数±均数标准误差(SEM)表示。采用单因素方差分析(ANOVA)分析治疗组间差异的统计学意义。采用Tukey后置检验进行两两分离和均数比较。显著性假设在．

3.结果

3．1.用木霉属在双重文化中

所有的木霉属物种减少了四种植物的菌丝生长(可可树素，小毛霉，假毛霉，和f .以上)牛油果SER病原体。菌丝生长抑制率最高l . theobromae是由t . harzianum(54.57%)紧随其后t . atroviride(36.28%)。木霉属asperellum和t .液对的生长抑制率最低，分别为29.88%和29.27%．theobromae(表2)．木霉属atroviride有最高的菌丝生长抑制作用联合国以及(48%),n pseudotrichia(55%)和f .以上(32.95%)。木霉属atroviride 显著抑制菌丝生长小毛线虫，假毛线虫，和f .以上与其他拮抗剂相比。木霉属asperellum对所有病原体的菌丝生长抑制效果最差(l . theobromae(29.88%),联合国以及(14.50%),n pseudotrichia(25%)和f .以上(14%)(表2))。木霉属液对抑制所有病原菌的菌丝生长;但抑制率最高的是onn pseudotrichia抑制45%。


病原体	%菌丝生长抑制
病原体	t . asperellum	t . harzianum	t . atroviride	t .液对

l . theobromae	29.88±3.94^b	54.57±1.35^一个	36.28±1.35^b	29.27±1.93^b
联合国以及	14.50±2.22^c	37.50±2.50^b	49.00±1.00^一个	35.50±1.26^b
n pseudotrichia	25.00±0.58^c	42.50±2.50^b	55.00±2.89^一个	45.00±3.79^ab
f .以上	14.00±4.76^b	15.40±1.78^b	25.00±3.00^一个	21.00±1.00^ab

每组4个重复的值表示为Mean±SEM。在一行内进行统计比较，采用单因素方差分析(one-way ANOVA)和Tukey 's post - hoc test，相同字母的值没有显著差异．

３．２．的影响木霉属研究“哈斯”鳄梨果实采后SER的严重程度

所有木霉属抑制鳄梨果实中SER的发育。水果处理t . asperellum在三次接种(接种前、同时和接种后)中均未发生SERf .以上．同样，SER的严重程度由l . theobromae显著不同的在三个测试中分别减少了10%、7.5%和5%。在三次接种中，t . asperellum减少牛油果的SER联合国以及分别达到30%，55%和40%。没有SER的发展n pseudotrichia同时接种t . asperellum；然而，在接种前和接种后，SER的严重程度分别降低到20%和7.53.)．


拮抗剂	疾病严重指数%
	病原体
	n pseudotrichia	联合国以及	l . theobromae	f .以上

Preinoculation
t . asperellum	20.00±20.0^b	30.00±10.00^b	10.00±10.0^c	0.00±0.00^b
t . atroviride	0.00±0.00^c	5.00±5.00^c	7.50±2.50^c	7.50±2.50^一个
t . harzianum	90.00±0.00^一个	30.00±15.0^b	42.50±2.50^b	0.00±0.00^b
t .液对	0.00±0.00^c	35.00±35.0^一个	70.00±0.00^一个	0.00±0.00^b

并发接种
t . asperellum	0.00±0.00^一个	55.00±0.00^一个	7.50±7.50^d	0.00±0.00^一个
t . atroviride	0.00±0.00^一个	0.00±0.00^c	100.00±0.00^一个	0.00±0.00^一个
t . harzianum	90.00±0.00^一个	17.50±2.50^b	42.50±2.50^c	0.00±0.00^一个
t .液对	7.50±7.50^b	0.00±0.00^c	70.00±0.00^b	0.00±0.00^一个

Postinoculation
t . asperellum	7.50±7.50^一个	40.00±0.00^一个	5.00±5.00^一个	0.00±0.00^一个
t . atroviride	0.00±0.00^b	0.00±0.00^b	100.00±0.00^b	0.00±0.00^一个
t . harzianum	0.00±0.00^b	0.00±0.00^b	0.00±0.00^b	0.00±0.00^一个
t .液对	0.00±0.00^b	0.00±0.00^b	0.00±0.00^b	0.00±0.00^一个
控制	90.00±0.00^一个	60.00±0.00^一个	100.00±0.00^一个	40.00±0.0^b

每组4个鳄梨果实的值表示为平均值±SEM。各列内后跟不同小写上标的平均值在．

所有的水果都没有SER，因为小毛癣菌，假毛癣菌,f .以上在同时接种和接种后t . atroviride。木霉属atroviride没有抑制果实中SER的发育l . theobromae同时接种和接种后;然而，在预接种过程中，果实未发生SER发育n pseudotrichia。同样，SER的严重程度是由于可可树素和f .以上分别为5%、7.5%和7.5%t . atroviride(表3.）．

在postinoculationt . harzianum，牛油果上没有发育出SER。此外，同时接种时t . harzianum与小毛癣菌，假毛癣菌,f .以上，水果中没有SER．木霉属harzianum没有抑制牛油果中SER的发育，原因是l . theobromae同时接种时n pseudotrichia在preinoculation(表3.）．

所有的水果都不含丝氨酸木霉属液对接种真菌病原体24小时后。同样，在预接种过程中，牛油果果实不含SERn pseudotrichia和f .以上同时接种时，果实上未发生SER联合国以及和f .以上．SER的严重程度是由于l . theobromae接种前和同时接种t .液对(表3.）．

木霉属atroviride是最有效的控制SER的发展小毛癣菌，假毛癣菌,f .以上在所有的治疗中木霉属液对和t . harzianum接种后最有效(表3.）．

4.讨论

的能力t . harzianum抑制菌丝的生长l．theobromae该研究报告与Wijeratnam等人的研究一致[24),t . harzianum是否报告有效控制l . theobromae导致了斯里兰卡的木瓜和芒果的SER。类似地，Bhadra等人[25报告了最大的抑制t . harzianum对l . theobromae在并发接种。此外,t . harzianum已被报道能显著减少红毛丹由l . theobromae［26］．

在这项研究中,t . atroviride最有效的对抗是什么f .以上相比asperellum, harzianum，和t .液对证实Kumar等人的结果[27报告了更高的疗效t . atroviride对f .以上相比t . harzianum．Rajendiran等人[22亦有较强的拮抗活性t . atroviride对镰刀菌素年代导致果实在采后腐烂的物种。木霉属atroviride抑制菌丝的生长l . theobromae虽然抑制率较低，但提高了36.28%t . harzianum(54.57%)和T．atroviride是否已报告有效控制l . theobromae导致芒果茎端腐烂[28］．木霉属液对抑制菌丝生长l . theobromaeBuensanteai和Athinuwat的确证报告[29),t .液对菌株TvSUT10抑制菌丝生长l . theobromae导致木薯丝氨酸增加53%。

木霉属asperellum抑制菌丝的生长l . theobromae上升到29.88%。木霉属asperellumNG-TI61株此前报道对其无任何拮抗活性L.可可木素的体外培养．而分生孢子和培养滤液t . asperellum控制了由l . theobromae香蕉水果[30.证实了本研究的结果。

木霉属atroviride在…的控制下突出微小N.，假毛N.和索兰尼F.，而t . harzianum在控制下表现得更好l . theobromae在在体外鳄梨果实的试验及采后处理。类似地，Borges等人进行的研究[31柚木溃疡病的生物防治l . theobromae显示出正相关在活的有机体内和在体外研究。木霉属atroviride表现出高于t . harzianum对l . theobromae，n .以及和n pseudotrichia在preinoculation。Kotze等人在评价葡萄修剪创面生物防治药剂[32)报道,t . atroviride比t . harzianum对l . theobromae和联合国以及当它在病原体证实本研究结果之前应用时。类似地，Valenzuela等人[8报道了高疗效t . atroviride对c . gleosporiodes在病原体出现前24小时接种。研究结果表明，黄芪多糖具有一定的生物活性t . atroviride抵抗真菌病原体是有保护作用的。

木霉属asperellum对l . theobromae鳄梨果实采后。出乎意料的是在体外测试中,t . asperellum抑制率为29%。然而，这可与Borges等人的报告相媲美[28在…里面体内测试的t . asperellum对l . theobromae造成柚木溃烂，哪里t . asperellum显示完全控制l . theobromae．

当真菌病原菌在拮抗剂前24小时施用于牛油果采后果实时，asperellum, harzianum，和t .液对对四种病原菌引起的丝氨酸均有较好的抑制作用。同样的,t . atroviride显示出对N.细小，N.细小，N.伪毛;和f .以上显示能力木霉属即使真菌病原体已经在果实上扎根，也能控制它们。

5.结论

这项研究的结果表明木霉属spp是一种可行的生物杀菌剂，可用于鳄梨果实丝氨酸病的防治，并有可能取代人工合成的杀菌剂。生物杀菌剂的使用将有助于牛油果生产者生产高质量的无有毒残留物的牛油果。然而，有必要进行现场试验，以验证其有效性木霉属以及将该物种用于商业规模的可能性。

数据可用性

支持这项研究结果的数据包括在文章中。

的利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

致谢

作者感谢坎德拉的肯尼亚农业和畜牧业研究组织(KALRO)的管理，该组织开展了这项工作。这项研究是由作者的个人财务资助的。

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农业的发展

牛油果茎端腐病的防治木霉属产于肯尼亚中部高地的一种植物

摘要