生物化合物对芥末蚜虫（Lipaphis Aerysimi Kalt。）和英语蚜虫（Sitobion Avenae Fab.）的疗效。在尼泊尔实验室条件下

摘要

芥末蚜虫(Lipaphis erysimi)及英国谷物蚜虫(Sitobion avenae）是尼泊尔芥末和麦田中最重要的害虫。杀生物剂牛奶（金龟子绿僵菌A.I.= 1 × 10⁹孢子/ ml)一个t 3 ml/l water, Agri Sakti (Beauveria BassianaA.I.= 1 × 10⁹孢子/ ml）在3.3ml / l水，瓦尔卡斯特拉（黄萎病lecanii孢子2%水悬液，2 × 10⁸CFU/ml)， 6 ml/l水，Mahastra (Bacillus thuringiensis var。库尔斯塔克亚种0。5% wettable powder) at 6 g/l water, Neemraj Super (Azadirachitin 0.3% w/w) at 3.3 ml/l water, Tracer (Spinosad 90% spinosyns) at 0.33 ml/l water, and control treatment (pure water) were used to test their efficacy againstl . erysimi和S. Avenae.在2018年，利用Rupandehi的实验室条件下使用叶片浸和喷雾方法。每种治疗都被复制了四次，实验在随机的完整块设计中进行。治疗申请后的24,48,72和98小时记录蚜虫的死亡率。结果显示治疗（帽子）后24小时揭示芥末蚜虫的最高死亡率。然而，发现Neemraj Super是在48,72和96帽中最有效的叶喷射方法。随着叶子浸法，Neemraj超级杀死了更多观察时间点的其他治疗芥末蚜虫。在经过测试的生物制品中，发现Agri Sakti在叶片喷雾和叶片浸渍方法中对英语谷物蚜虫最有效。在所有生物测定中，通过对照引起的生物化合物引起的死亡率非常显着。本研究表明，进一步核实领域的生物产品，并对不同物种的蚜虫进行新的管理策略的发展。

1.介绍

油菜籽芥末(芸苔属植物定l . var托里；家族：十字花科）是尼泊尔[一个重要的油料作物1］．在种植的油料作物中，油菜籽的种植面积占比最高，达到85% [2]，并提供有关的植物油需求在尼泊尔的饮食80％[3.］．160,405公顷种植芥菜159,710公吨，产量0.99公吨/公顷[4］．这一生产率低于其他国家[5］．在造成低产量的因素很多，害虫起到关键作用。油菜籽芥末由多于43种害虫[攻击6]，用芥末蚜虫，Lipaphis erysimi（卡尔特），是关键的害虫种类在尼泊尔[7，8］．l . erysimi可导致产率约35-75％的降低[9，10.“油含量减少6-87％”[11.，12.］．大量的芥菜蚜虫会使植物的嫩枝变形，叶子卷曲。受感染的部分枯萎，最后变黄[13.］．蚜虫主要发现在叶子的下侧，更喜欢年轻的叶子和花序[14.］．除了喂食造成的主要损害外，蚜虫还分泌蜜露，用作烟雾模具发育的介质，进一步阻碍光合作用[15.］．蚜虫也负责病毒的传播，如芜菁花叶病毒[16.］．

小麦(Triticum Aestivum.l .;家庭：禾本科）是尼泊尔水稻和玉米之后的第三大重要谷物。A previous study reported that 1,879,191 mt of wheat is produced on 735,850 ha of land in Nepal, with a productivity of 2.55 mton/ha [4］．小麦受到各种害虫的影响，如蚜虫、粘虫、刺虫、小麦蠓虫和黑森蝇。英国谷物蚜虫Sitobion avenae（晶圆厂。)是一种在世界各地种植的谷物中非常常见的害虫[17］．他们殖民的年轻开发植物的叶子和茎。当标题开始，他们迁移到耳朵，并在苞片和内核开发。他们吸韧皮部汁液和注入唾液有毒进入植物组织[18］．唾液导致树叶的磨损、滚动和变形。卷起来的叶子会截住植物的繁殖部分，减少授粉和受精[19］．在虫害严重时，形成的发育良好的谷物数量减少，从而降低产量[20.］．蚜虫还传递破坏性病毒，如大麦黄矮病毒[21］．由于蚜虫侵染的产量损失可能达到30-60％[22］．

化学杀虫剂的使用往往是不合理和随意的，而不考虑对人类健康和环境的损害[23］．他们反复使用已经增加害虫抗性[24，25]、虫鼠死灰复燃及次级虫鼠爆发[26]和增加的在收获的产品的农药残留水平[27］．过量使用化学杀虫剂也负责土壤和空气的污染[28]，并对非目标生物体(包括传粉昆虫)产生有害影响[29]，最终危及自然和人类健康的平衡[30.］．因此，对蚜虫的管理需要可持续的策略。

微生物是生物生物中的活性成分[31］．肺疗法真菌主要是宿主特异性的，对环境和哺乳动物的风险造成最小的风险[32］．Beauveria Bassiana（的Bals。Criv。）导致白色僵和金龟子绿僵菌（Metsch。）使绿僵病的目标昆虫[33，34］．用于黄萎病lecanii(Z.)被认为是防治蚜虫的综合病虫害管理(IPM)计划中的一种补充性生物防治策略[35］．杆的形状，形成孢子的革兰氏阳性细菌病原Bacillus thuringiensis.柏林人可以生产晶体蛋白[36］．印楝素是印楝提取物的主要杀虫成分，对蚜虫具有阻食、驱避、毒性和破坏生长的特性[37］．这些生物化学商可商购在不同的配方中，并在不同的品牌名称下进行[38］．它们是环保，安全的，没有残留效果[39］．进行了该研究，以评估生物化化合物和化学杀虫剂对尼泊尔罗普（Rupandehi的实验室条件下的芥末和英语蚜虫的疗效。

2.方法

这项研究是在尼泊尔Paklihawa校区农业和动物科学研究所(IAAS)的昆虫学实验室进行的。本试验于2018年2月10日至2018年3月8日进行，研究期间平均温度为22.5℃(18℃- 25℃)，相对湿度为80%。从IAAS农场的田地中采集健康和未受影响的芥菜和小麦植株，分别移植到两个独立的花盆中。然后用尼龙网盖住这些罐子。在芥菜田和小麦田分别采集芥菜蚜虫200只和英国谷物蚜虫200只，分别放入尼龙网覆盖的花盆中。三天后，老的成虫被移走，新出现的成虫被用于进一步的实验室研究。

2.1。材料

在研究中使用的化合物列于表1．他们准备如下：(我)Biocide躁狂，由Agricare Nepal PVT制造。有限公司以液体形式提供，以3ml / 1000ml水浓度制备。加入五克糖以提供对真菌的营养素，并加入3滴Tween-80以使悬浮液均化。（ii）Agri Sakti，由Agricare Nepal PVT制造。有限公司以液体形式提供，以3.3ml / 1000ml水浓度制备。加入20g糖作为营养素，加入3滴Tween-80作为乳化剂。（iii）Varunastra，manufactured by International Panaacea Ltd., India, available in liquid form, was prepared at a concentration of 6 ml/1000 ml water, and 3 drops of Tween-80 were added as a surfactant.(iv)Mahastra由国际Panaacea有限公司生产，可作为粉末配方，以6 g/1000 ml水的浓度制备。（v）Neemraj中超，通过Khadkeshwar油厂列兵制造。有限公司和印度楝树产品私人销售。有限公司，一个vailable in liquid form, was prepared at a concentration of 3.3 ml/l000 water.(vi)示踪剂由印度陶氏农业科学有限公司生产，以粘稠形式存在，在0.33 ml/1000 ml水的浓度下制备。（vii）用纯水作为对照处理。


贸易名称	化学/学名	剂量	制造商	公式

杀生物剂狂躁	m . anisopliae	3毫升/升水	尼泊尔农业有限公司	m . anisopliae（A.I.）= 1×10⁹ spores/ml
Agri Shakti.	单独使用	3.3毫升/ l水	尼泊尔农业有限公司	单独使用= 1 × 10⁹孢子/ ml
Varunastra	五枝菌三级	6毫升/升水	国际Panaacea有限公司	五枝菌三级孢子= 2%水悬浮液，2 × 10⁸ CFU/ml
Mahastra	b基因var。库尔斯塔克亚种	6 g / l的水	国际Panaacea有限公司	δ内毒素b基因var。库尔斯塔克亚种, 0.5%的工作压力
Neemraj超级	azadirachtin	3.3毫升/ l水	Khadkeshwar石油磨坊有限公司	azadirachtin(a.i.) (min) 0.3% w/w
示踪剂	Spinosad	0。33 ml/l water	陶氏农业科学印度列兵。有限公司	90% spinosyns
控制		纯水

2.2。生物测定

从IAAS农场收集的新鲜、未感染的油菜籽芥菜枝和小麦穗被彻底清洗，在1%的次氯酸钠(NaOCl)溶液中浸泡30秒，用蒸馏水冲洗，然后风干。无菌培养皿配有湿润的Whatman滤纸，以保持湿度并给叶子补水。每个培养皿用一根芥菜枝或小麦穗。

使用两种方法用于评估所研究的治疗的疗效。

2.2.1。叶浸法

灭菌的芥菜枝或小麦穗浸入适当的杀菌剂悬浮液中30秒，然后放入培养皿中。在将50只成年蚜虫放入每个培养皿之前，将处理过的树枝和耳朵风干。

2.2.2。叶喷射方法

经过消毒的芥菜枝或小麦穗被放入装有湿润的Whatman滤纸的培养皿中。每盘放50只成年蚜虫。然后将处理液直接喷到盘子里。

每个处理重复4次，实验单位采用完全随机区组设计。对蚜虫的死亡率评估以目测(身体部位的运动和身体颜色的变化)为基础。在治疗后24、48、72和98小时进行评估。

2.3。统计分析

实验数据使用Excel 2007进行处理，使用RStudio 3.5.0的Agricolae软件包进行分析。对蚜虫死亡率数据进行反正弦变换，采用5%水平的邓肯多程试验(DMRT)进行两两均数比较[40］．

结果

在叶片喷雾生物测定中芥末蚜虫，结果表明，Agri Sakti引起的死亡率在治疗后24小时内的所有治疗中最伟大的是最大的治疗（帽）（米= 29.17±1.59;F_3,6 = 18.25; ）。然而，Neemraj Super在48 HAT时比其他处理杀死了更多的蚜虫(米= 48.33±2.89;F_3,6 = 22.75; ），72顶帽子(米= 66.67±3.04;F_3,6= 32.71; ），及96 HAT (米 = 81.67 ± 3.19;F_3,6= 36.14; ）。用针对芥菜蚜虫的叶子浸渍法，死亡率引起Neemraj超级在蚜虫释放后24小时（HAR）（米 = 31.67 ± 2.89;F_3,6= 34.57; ），48 HAR（米 = 52.50 ± 2.50;F_3,6 = 36.95; ），72哈尔(米 = 68.33 ± 3.97;F_3,6= 24.14; ），及96 HAR (米= 78.33±3.97;F_3,6 = 23.07; )显示它是所有时间点的最有效的治疗方法。通过两种方法对芥末蚜虫的死亡率进行生物化化合物的影响在所有时间点对照有高度显着的控制（表2）。


治疗	剂量	芥菜蚜的死亡率
		叶喷生物测定				叶底生物测定
		治疗后数小时(HAT)				蚜虫的释放（HAR）小时后
		24	48	72	96	24	48	72	96

T1-m . anisopliae	3毫升/1000毫升水	25.00^ab ± 3.19 (29.87)	41.67^ab±5.18 (40.14)	52.50^b ± 4.17 (46.45)	60.84^公元前±4.59 (51.34)	25.83^{美国广播公司} ± 2.50 (30.46)	49.17^ab ± 4.38 (44.51)	62.50^ab±5.34 (52.38)	71.67^ab ± 6.16 (58.30)
T2-单独使用	3.3毫升/ 1000毫升水	29.17^一个 ± 1.59 (32.66)	47.50^一个±4.98 (43.55)	60.83^ab±6.86 (51.42)	67.50^公元前 ± 6.44 (55.52)	29.17^ab±2.10 (32.64)	48.33^ab±2.89 (44.03)	62.50^ab ± 4.38 (52.31)	70.84^ab±5.16 (57.54)
T3-五枝菌三级	6毫升/1000毫升水	21.67^b ± 2.15 (27.65)	33.34^b±1.93 (35.24)	39.17^c±2.50 (38.71)	41.67^d ± 2.15 (40.19)	21.67^c±0.96 (27.72)	36.67^c±3.04 (37.21)	50．00^b ± 4.91 (45.00)	58.33^b ± 5.18 (49.88)
T4-英国电信var。库尔斯塔克亚种	6克/1000毫升水	22.50^ab±2.50 (28.23)	39.17^ab±2.50 (38.72)	51.67^b±0.96 (45.95)	55.83^c±3.19 (48.35)	15.00^d ± 0.96 (22.75)	25.00^d±2.15 (29.93)	33.33^c±4.08 (35.14)	37.50^c±4.79 (37.65)
T5-azadirachtin	3.3 ml/1000 ml水	27.50^ab±2.50 (31.55)	48.33^一个±2.89 (44.04)	66.67^一个±3.04 (54.80)	81.67^一个±3.19 (64.93)	31.67^一个±2.89 (34.18)	52.50^一个±2.50 (46.43)	68.33^一个±3.97 (55.88)	78.33^一个 ± 3.97 (62.54)
T6-Spinosad.	0.33ml / 1000毫升水	27.50^ab ± 2.10 (31.58)	46.67^一个 ± 1.36 (43.08)	60.84^ab±3.15 (51.30)	70.00^b ± 4.91 (57.05)	24.17^公元前 ± 2.85 (29.31)	40.00^公元前±4.30 (39.16)	51.67^b ± 7.00 (46.01)	58.33^b ± 7.76 (49.99)
T7-untreated控制	水	5.00^c ± 0.96 (12.74)	8.34^c±0.96 (16.69)	8.34^d±0.96 (16.69)	33.34^e±0.96 (16.69)	3.33^e±0.00 (10.52)	5.84^e±0.83 (13.85)	6.67^d±1.36 (14.71)	6.67^d±1.36 (14.71)

扫描电镜		10.34	16.31	20.53	27.23	7.53	8.13	9.56	9.59
LSD		4.77	6．00	6.73	7.75	4.07	5.58	8.60	10.18
简历。（％）		11.59	10.81	10.38	10.93	10.24	10.31	13.45	14.51

同一下标列的平均值在DMRT的5%显著性水平下不显著。0.001，0.01,0.05value, HAT = hours after treatment, HAR = hours after release.

在用叶喷法对英国粒蚜进行的试验中，Agri Shakti在所有时间点都是最有效的(24 HAT:米= 41.67±0.96;F_3,6 = 370.19; ；48帽子：米 = 73.33 ± 1.36;F_3,6 = 169.38; ；72 HAT：米 = 91.67 ± 0.96;F_3,6 = 278.91; ；96顶帽子:米 = 99.17 ± 0.83;F_3,6= 262.31; ）。同样，使用叶片DIP方法对英语谷物蚜虫，Agri Shakti在所有时间点24 Har（41.67±0.96）中最有效的处理F_3,6 = 370.19; ），48har(66.67±1.36)(F_3,6 = 169.38; ），72哈尔(85.00 ± 0.96) (F_3,6 = 278.91; ），和96 har（98.33±0.96）（F_3,6= 262.31; )（桌子3.）。


治疗	剂量	英国谷物蚜虫死亡率百分比
		叶喷生物测定				叶底生物测定
		治疗后数小时(HAT)				蚜虫的释放（HAR）小时后
		24	48	72	96	24	48	72	96

T1-m . anisopliae	3毫升/1000毫升水	26.67^c ± 3.60 (30.95)	43.33^d±2.72 (41.15)	55.84^d ± 2.10 (48.35)	63.33^e±1.36 (52.74)	21.67^d±0.96 (27.72)	40.00^c ± 1.36 (39.22)	53.33^c ± 1.36 (46.91)	62.50^e±0.83 (52.24)
T2-单独使用	3.3毫升/ 1000毫升水	41.67^一个 ± 0.96 (40.20)	73.33^一个±1.36 (58.93)	91.67^一个 ± 0.96 (73.30)	99.17^一个±0.83 (86.94)	41.67^一个 ± 0.96 (40.20)	66.67^一个±1.36 (54.75)	85.00^一个±0.96 (67.24)	98.33^一个 ± 0.96 (84.45)
T3-五枝菌三级	6毫升/1000毫升水	24.17^c ± 2.10 (29.38)	43.33^d±1.36 (41.16)	59.17^d±0.83 (50.28)	71.67^d±0.96 (57.85)	22.50^d ± 1.60 (28.27)	42.50^c±2.85 (40.66)	58.34^c±2.89 (49.82)	69.17^d ± 0.83 (56.27)
T4-英国电信var。库尔斯塔克亚种	6克/1000毫升水	28.34^c±0.96 (32.15)	52.50^c±2.50 (46.43)	69.17^c ± 2.50 (56.32)	79.17^c ± 0.83 (62.85)	29.17^c±0.83 (32.68)	54.17^b ± 1.60 (47.39)	67.50^b±0.83 (55.25)	78.34^c±0.96 (62.27)
T5-azadirachtin	3.3 ml/1000 ml水	35.00^b ± 0.96 (36.26)	60.00^b±1.36 (50.77)	78.34^b±0.96 (62.27)	89.17^b ± 0.83 (70.82)	35.00^b ± 0.96 (36.26)	60.83^一个 ± 1.59 (51.26)	82.50^一个 ± 0.83 (65.29)	88.34^b ± 0.96 (70.07)
T6-Spinosad.	0.33ml / 1000毫升水	27.50^c±1.60 (31.59)	50.83^光盘 ± 1.59 (45.47)	70.83^c±1.59 (57.33)	80.83^c ± 0.83 (64.05)	28.34^c±0.96 (32.15)	50.83^b ± 1.59 (45.47)	69.17^b±2.10 (56.30)	83.33^c ± 1.36 (65.95)
T7-untreated控制	水	0.00^d ± 0.00 (0.39)	2.50^e±0.83 (8.02)	5.84^e±0.83 (13.85)	9.17^f ± 0.83 (17.56)	0.01^e±0.00 (0.52)	3.33^d ± 0.00 (11.63)	6.67^d±0.00 (15.82)	9.17^f ± 0.83 (17.56)

扫描电镜		4.83	8.16	4.44	4.54	1.82	4.79	4.22	6.60
LSD		3.26	4.24	3.13	3.16	2.00	3.25	3.05	3.81
简历。（％）		7.66	6.84	4.08	3.61	4.77	5.28	4.03	4.39

同一下标列的平均值在DMRT的5%显著性水平下不显著。0.001，0.0，0.05value, HAT = hours after treatment, HAR = hours after release.

4。讨论

这项研究的结果表明，这两种蚜虫的死亡率持续高于以下具有比未处理的对照组生物合理的化合物治疗。实现芥末蚜虫的死亡率最高Neemraj超在叶喷雾和浸叶测定两者的应用。由汗[观察到类似的结果41报道了印楝叶提取物处理树枝96 h后，蚜虫数量减少了50.58%。潘迪等人[42]报道，印度楝树油为1.5％有效对抗l . erysimi在实验室条件下，这与我们目前的结果一致。类似地，其他的研究已经证明印楝素对控制l . erysimi人口 [43，44］．Lowery和Isman [26]报道，楝树籽萃取物的粗制剂含有柠檬苦素，一类具有动作的驱避剂和拒食模式[tetranortriterpenes的45］．此外，印楝素对行为，胚后发育，和繁殖力很强的负面影响，促进其杀虫特性[46］．由于激素调节的不平衡和生殖器官的生长失败，蚜虫的生长和发展受到抑制[47］．此外，印花纹甲素已知可影响双翅目、膜翅目、鞘翅目、鳞翅目、直翅目、同翅目和半翅目400多种昆虫，但通常对蜜蜂、捕食者和寄生蜂、哺乳动物等有益生物和环境是安全的[48］．

除Neemraj Super外，Agri Sakti是对英国谷物蚜虫最有效的生物活性化合物，无论是喷雾还是浸渍生物测定。这一结果与Fang等人的研究结果一致[49];谁记录了使用这种真菌昆虫病原使蚜虫数量显著减少单独使用．许多研究表明单独使用控制粮食英语蚜[50- - - - - -52］．根据Fang等人[49]，单独使用由于分泌昆虫角质酶，例如蛋白酶，几丁质酶和脂肪酶，因此通过分泌特异性水解酶而导致脓毒症的疟疾死亡率较高。

结论

在所有观察到的时间点，随着对照的每种生物化合物处理后，芥末蚜虫和英语谷物蚜虫的死亡率明显更高。该研究中使用的所有生物产品可能是化学农药的良好替代品，用于管理芥末和小麦蚜虫。它们更安全，更环保，比其化学对应物更具经济可行。发现喷雾方法优于浸渍法。进一步的研究是为了评估这些生物化合物infield条件的功效，在推荐作为新型蚜虫管理技术之前。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据可在书面请求后从相应的作者获得。

利益冲突

提交人声明有关本文的出版物没有利益冲突。

致谢

作者承认农业和动物科学研究所，尼泊尔省Paklihawa校园，为这项研究提供技术和财务支持。

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农业进展

生物活性化合物对芥菜蚜(Lipaphis erysimi和英国谷物蚜虫(Sitobion avenae在尼泊尔的实验室条件下

摘要