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g . t . Kujeke t . c . Chitendera r·t·Masekesa Mazarura, e . Ngadze j . t . Rugare Matikiti, ”利文斯通马铃薯快繁技术(属esculentusN.E.Br)”,农业的发展, 卷。2020年, 文章的ID8364153, 11 页面, 2020年。 https://doi.org/10.1155/2020/8364153
利文斯通马铃薯快繁技术(属esculentusN.E.Br)
文摘
利文斯通土豆(属esculentusN.E.Br)是一个开工不足土著根公社农民种植的蔬菜在津巴布韦东部省份。超低温保存使用未被利用的保留块茎从之前的季节。疾病的风险因此结转高,导致可怜的收益率。这项研究的目的是利用组织培养技术,微体繁殖产生大量供应健康的种植材料提高生产力。进行了两个实验:首先,确定最佳外植体类型和第二,确定最佳长白猪和植物生长调节剂对植株的生长。在一起,即Ndurwe,Musande,Chibanda,Chizambezi是来自公共声明生产地区的农民。萘乙酸(NAA)和苄氨基嘌呤(BAP)使用的生长素和细胞分裂素,分别。第一个实验是提出随机完全区组设计(RCBD)两个因素:长白猪和外植体类型(拍摄技巧、节点和叶子)。后培养的外植体平原Murashige斯十周(MS)媒介,最好的外植体是节点与节点的数量,芽和根的植株显著( )。第二个实验是布局与两个因素:RCBD长白猪和植物生长调节剂组合。节点是亚文化的MS培养基补充与植物生长调节剂的16个组合(0 mg / l, 0.5 mg / l, 1 mg / l,和2 mg / l BAP浓度:0 mg / l, 0.2 mg / l, 0.5 mg / l,和乙酰天冬氨酸浓度1 mg / l),分别。Chizambezi表现最好,因此,强烈建议快速乘法的利文斯通土豆。从这个研究结果已清楚地表明,添加NAA:软面包卷在不同浓度是重要的和必不可少的优化利文斯通的增长媒体微体繁殖马铃薯在津巴布韦。商业生产的植株,因此,进行提供健康社区农民的种植材料提高了生产率,同时保留开工不足作物的种质资源在同一时间。
1。介绍
利文斯通土豆或野生马铃薯(属esculentusN.E.Br)是一种多年生草本植物,属于唇形科家族和种植可食用的块茎。农作物可以使用种子传播性,但作物的发展是缓慢的,后代是异构的1]。公共津巴布韦农民使用小块茎作物无性地保留从上赛季的作物2,3]。虽然这样可以确保线路的维护,疾病的风险结转到下赛季非常高,最终导致潜在产量的下降。使用这种方法的另一个缺点是种植材料的增殖率低(4]。利文斯通等根蔬菜作物的土豆,足够的无病的种植材料的可用性是提高生产率的约束,这样,津巴布韦的作物仍被忽视和开工不足(2]。
开工不足利文斯通马铃薯等作物的特点是低收益率(1- - - - - -3]。然而,他们仍然相关,因为他们会产生收获的产量,主要粮食作物可能会失败(5]。Tindall [6)表示,利文斯通马铃薯的产量可以低至2 - 6吨每公顷,而schipper [1)强调产量潜力高达60吨/公顷在最佳实验条件下使用组织培养植株产生在南非(7]。
生物技术已经被有效地使用的工具改进作物超低温保存的几个。组织培养技术最初被认为是最容易实现的,技术和快繁技术是有价值的,并用于许多粮食作物超低温保存的乘法像红薯、山药(薯蓣属spp)、土豆(茄属植物tuberosum),香蕉和大蕉(穆萨spp) [8]。组织培养技术的发展促进了生产,无病植株的乘法和维护这些作物(9]。快速繁殖的植物组织,然而,需要优化的植物生长调节剂(PGR)浓度Murashige和斯媒体。PGR需求往往随物种因为他们确定形态发生过程中(10]。
的微体繁殖研究属物种进行了(11- - - - - -14];然而,没有研究报道了利文斯通的微体繁殖马铃薯长白猪土著到津巴布韦。选择使用产生的快速无病的种植材料,因此,生产商目前不可用。获得的高收益(60吨/公顷)在南非在实验条件下(7]显然证明需要优化当前的传统生产方法在津巴布韦关于种植材料。本研究的目的是探索利文斯通的微体繁殖马铃薯长白猪发现在津巴布韦一步为公共的农民提供健康的种植材料,从而提高生产力开工不足的作物。现有的微体繁殖协议的利文斯通土豆被在这项研究中,使优化的土著长白猪在津巴布韦。
2。材料和方法
2.1。利文斯通土豆长白猪和准备的来源
四个利文斯通土豆长白猪,即HRCTzD0001 (Ndurwe),HRCTzS0011 (Chizambezi),HRCTzD0003 (Chibanda)和HRCTzD0007 (Musande)从农民收获Marondera区东马绍纳兰省的津巴布韦。IIb Marondera区位于自然地区农业生态区域的津巴布韦。该地区的特点是每年平均降雨量850毫米和严重的干旱在雨季。土壤是灰褐色的金沙和桑迪这种来自花岗质岩石(15]。农民生产作物山脊在湿地和肥料的应用。块茎准备收获六到九个月后(1- - - - - -3]。
对于每个长白猪,块茎获得从一个单一的植物大约1.3公斤(13]。刚收获的块茎随后被送往在哈拉雷,津巴布韦大学室温保存在那里,他们四个星期的时间在实验室,使些小的伤口和擦伤的治疗和增厚的皮肤块茎。块茎被清洗的洗涤剂的解决方案(阳光一部分液体洗涤剂九部分水)和蒸馏水的彻底冲洗。小缝被削减的块茎被浸泡在5%的赤霉酸溶液(5毫升·GB /升蒸馏水)10分钟鼓励发芽。进行了削减,使遗传算法的快速吸收(4]。块茎被风干,托盘在黑暗的橱柜,直到发生。芽的不同部分(这是留给长到5厘米的长度)被作为外植体的来源。两个实验在实验室进行了津巴布韦大学作物科学部门,平均温度25°C和相对湿度50 - 70%之间。
2.2。实验1:外植体类型对马铃薯发展的利文斯通里生根发芽
2.2.1。培养基的制备
实验的目的是确定一个合适的外植体类型(拍摄技巧、节点和叶子)微体繁殖的利文斯通土豆。标准培养基含有营养素和微量营养素的全部力量,以及维生素被Murashige和斯库(16),并用于研究。Murashige和斯库(MS)介质与30 g的蔗糖和补充维生素,和pH值调整到5.6 - -5.8使用0.5 M氢氧化钠。3克每升的Gelrite™添加固化剂,血管和消毒文化吃饱了20毫升每个女士的媒介。这些是热压处理过的15分钟在121°C和15个kPa和在室温下冷却和固化。
2.2.2。表面消毒的外植体
外植体(拍摄技巧、节点和叶子)削减从发芽块茎在疲软的肥皂水清洗解决方案消除植物碎片坚持外植体。外植体被放置在一个烧杯和两滴Tween-20激动下降低表面张力,然后离开自来水一夜之间创建一个段内等渗溶液。洗涤过程后,外植体被浸泡在10%浓度的钠hypochloride 15分钟,然后在无菌蒸馏水冲洗三次把消毒剂。这个过程在无菌条件下进行了层流气流罩。外植体的底端建议削减漂白剂受损的组织。70%的乙醇溶液制备和使用的表面灭菌设备和层流气流内阁17]。
2.2.3。捕获的外植体
外植体(叶子节点,和拍摄技巧),大约10毫米白色瓷砖使用无菌手术刀切除和放置在无菌文化血管凝固介质女士用无菌钳。培养瓶帽用封口膜密封™(13]。文化被安置在生长室顶部的聚苯乙烯表温度保持在27±2°C,和一个16小时光:8小时黑暗的光周期是维护18]。文化是三天后检查污染捕捉细菌感染和六天后捕捉真菌感染。所有被感染的材料被丢弃。
2.2.4。实验过程和数据分析
实验设计是一个4×3的阶乘了在随机完全区组设计(RCBD)。实验中有两个因素,三个街区,和十二个治疗在每个块复制三次。第一个因素是长白猪在四层(Ndurwe,Musande,Chibanda,Chizambezi),第二个因素是外植体类型在三个层次(拍摄技巧、节点和叶子)。治疗被封锁对光线和距离门口。每天的文化观察,开始生根,发芽的天数是监控和记录。经过10周的培养,在拍摄用尺子测量长度,拍摄数、叶片数、节点数量拍身体都清点和记录。收集的数据然后进行方差分析(方差分析)使用Genstat统计软件包版本18。意味着分离使用5%费舍尔最显著差异(LSD)测试。最佳外植体(节点)结果显示当时在第二个实验中使用。
2.3。实验2:长白猪和植物生长调节剂对利文斯通马铃薯植株的生长
2.3.1。实验的程序
优化媒介发展和增长的利文斯通马铃薯植株从节点,不同组合的生长素:细胞分裂素进行了测试。使用的生长素是萘乙酸(NAA),而苄氨基嘌呤(BAP)是细胞分裂素的使用。不同组合的NAA和BAP生长调节剂是添加到64 MS培养基来弥补各自的治疗,如表所示1。0 mg / l的:软面包卷是用作控制和只包含女士介质。实验设计是一个4×16阶乘了与两个因素和三个街区RCBD三个复制。第一个因素是长白猪在四层(Ndurwe,Musande,Chibanda,ChizambeziNAA),第二个因素是:BAP组合(NAA在0 mg / l, 0.2 mg / l, 0.5 mg / l, 1 mg / l浓度:软面包卷在0 mg / l, 0.5 mg / l, 1 mg / l,和2 mg / l浓度)在16个级别(表1)。
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2.3.2。中制备和接种
标准股票的解决方案(1毫克/毫升)的生长调节剂BAP和NAA由溶解50毫克每两个不同生长调节剂的烧杯和几滴酒精,然后添加蒸馏水将50毫升的体积。中描述的MS培养基准备部分2.2.1和涌入16个独立的烧杯中,不同植物生长调节剂组合(BAP: NAA),表所示1,然后补充说。pH值、蔗糖和Gelrite™是调整和补充道,分别节中描述2.2.1包括准备媒体涌入文化船只。10通过将毫米长的节点的最佳外植体的第一个实验从四个一起获得。这是减少使用无菌叶片然后亚文化到固体中不同浓度的NAA和BAP女士用无菌钳到文化的船只。这个过程在无菌条件下进行了层流气流内阁。捕获后,文化在增长孵化室,和环境条件是保持节中描述2.3。3包括污染检查。
2.3.3。数据收集和分析
数据收集是节中描述2.2.4。Ndurwe外植体培养使用乙酰天冬氨酸:BAP组合J (0.5: 0.5), L(0.5: 2),和P(1: 2)没有任何增长的迹象在10周期间的研究;因此,从分析中删除。的数据,因此,作为一个不平衡的方差分析使用GenStat统计软件包版本18。图建立了使用R统计软件包。意味着分离使用5%费舍尔最显著差异(LSD)测试。
3所示。结果
3.1。实验1:外植体类型的效果拍摄利文斯通土豆的发展
3.1.1。长白猪和外植体类型对平均数量
长白猪,外植体类型和长白猪x外植体类型交互作用显著( )意思是拍摄数量。的相互作用导致了Musande节点产生最高的意思是拍摄数量没有明显不同( )从的Musande茎尖。的Ndurwe叶外植体产生最少的芽也进行统计与其他长白猪的叶子和拍摄技巧以及节点Chibanda和Chizambezi(表2)。
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意味着紧随其后的是相同的字母在一列没有显著的不同LSD (0.05) |
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3.1.2。长白猪和外植体平均每拍摄的节点数量
外植体类型的影响不显著( ),而长白猪和长白猪x外植体类型影响显著( )平均每个拍摄的节点数。Musande最高的节点产生芽的节点数量统计的相似Ndurwe茎尖。的Ndurwe叶外植体产生最少的节点每射击,这不是明显不同其他长白猪的叶子和拍摄技巧以及节点Ndurwe和Chizambezi(表3)。
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意味着紧随其后的是一列中相同字母表示并不在LSD(0.05)明显不同。 |
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3.2。实验2:影响植物生长调节剂的利文斯通马铃薯植株的生长
3.2.1之上。长白猪和NAA的影响:BAP结合天根起始
一个重要长白猪xNAA: BAP交互( )天根起始观察。Chibanda和Chizambezi每个启动根在最短的时间内培养使用乙酰天冬氨酸:BAP结合K (0.5: 1),Musande根起始时花了最长的时间没有添加植物生长调节剂(NAA: BAP组合(0,0),如图1。Ndurwe没有根开始在10周时间内乙酰天冬氨酸:BAP的组合J (0.5: 0.5), L(0.5: 2)和P (1: 2)。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.2.2。交互长白猪和NAA:天拍摄起始BAP组合
长白猪,NAA: BAP组合,长白猪x乙酰天冬氨酸:BAP交互作用显著( )在时间开始开枪。的相互作用导致了长白猪乙酰天冬氨酸的不同回应:BAP组合,呈现在图2。Chibanda和Chizambez我都有最少的天拍摄起始作为植物生长调节剂的浓度增加。Chizambezi也有相同的结果在最高乙酰天冬氨酸:BAP组合虽然花费的时间没有明显不同( )从乙酰天冬氨酸:BAP组合D, H和L。Musande花了最长的时间开始拍摄时培养使用乙酰天冬氨酸:BAP的组合E(0.2: 0)(图2)。Ndurwe没有拍摄期间启动10周的时间相同的乙酰天冬氨酸:BAP的组合J (0.5: 0.5), L(0.5: 2),和P (1: 2)。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.2.3。长白猪和NAA的影响:BAP拍摄数量组合
长白猪和NAA: BAP组合效果显著( )在拍摄数量。一个重要的交互( )观察在长白猪和NAA: BAP组合意味着拍摄数量。Musande和Ndurwe产生最高的意思是拍摄时相同的统计的数字一起都培养使用乙酰天冬氨酸:软面包卷(0.2:1)组合。然而,芽结构明显小,短(分别为0.7厘米- 0.5厘米)。Ndurwe时不产生任何芽外植体培养使用一个(0,0),C (0: 1), J(0.5: 0.5),和L(0.5: 2)乙酰天冬氨酸:BAP组合(图3)。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.2.4。长白猪和NAA的影响:软面包卷叶数量组合
有一个重要的( )长白猪x乙酰天冬氨酸:BAP交互叶数。Ndurwe在乙酰天冬氨酸产生最高的平均叶数量:BAP结合M(1: 0)没有明显不同( )从Chizambezi在同一浓度。一个明显的趋势是,作为植物生长调节剂的浓度增加,Chizambezi产生高叶数量没有显著差异( )在5种不同乙酰天冬氨酸:BAP组合(C, E, I, J和M)(图4)。Ndurwe和Chibanda也没有显著不同的逐渐增加三乙酰天冬氨酸:BAP组合每个(B, C, D, E、L和M)。治疗J L P没有叶数字读数没有增长Ndurwe(图4)。
(一)
(b)
(c)
(d)
有一个重要的( )长白猪x乙酰天冬氨酸:BAP交互的节点数量Chizambezi有最高的意味着节点号乙酰天冬氨酸:BAP的我并没有为同一长白猪在M明显不同。这个结果在统计学上相同的Chibanda培养在乙酰天冬氨酸:BAP组合A、C、D,和我Ndurwe在E和M和Musande在乙酰天冬氨酸:BAP o .另一方面,组合Ndurwe在(图C没有节点5)。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.2.5。长白猪和NAA的影响:BAP组合拍摄长度
长白猪的x乙酰天冬氨酸:BAP交互影响拍摄长度显著( )。Musande植株产生乙酰天冬氨酸:最长的芽在BAP组合F(0.2: 0.5)并没有明显不同Musande在O(1: 1),以及Ndurwe在D (0: 2), E(0.2: 0),和M (1: 0)。没有记录拍摄长度Ndurwe乙酰天冬氨酸:BAP组合J, P L,由于缺乏增长(图6)。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.2.6。总结长白猪由于植物生长调节剂的应用性能
总结在女士一起培养的影响不同的pgr组合培养一段10周表所示4。对于每个参数,表现最好的长白猪和相应的乙酰天冬氨酸:BAP组合。乙酰天冬氨酸:BAP浓度表示的最低浓度为表现最好的长白猪最高。生长参数测量,增加PGRSs给了积极的结果,是唯一的例外Chibanda长白猪高响应在节点数量时没有PGRSs(表使用4)。尽管所有一起设法产生植株,Chizambezi被评为最好的微体繁殖长白猪,效果很好大多数的参数测量使用0 - 1 mg / l的范围:0.5 - 2 mg / l (BAP组合(表吗4)。
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4所示。讨论
快繁技术被认为是一个快速的方法用植物和开发高质量的和无病植物也有巨大的潜力。进步在这个领域的发展导致了一些技术的快速乘法和改进各种园艺作物和生产系统(19]。在这些园艺作物开工不足和被忽视的蔬菜红薯和芋头等(芋耐)[20.)的微体繁殖和种质保存成功21- - - - - -25]。在这项研究中,利文斯通土豆也受到微体繁殖技术,和这里讨论的结果。
而微体繁殖的利文斯通土豆之前已经进行了13,26),内的遗传差异属物种呼吁的优化更新协议。本研究中使用的植物材料是利文斯通土豆长白猪Chibanda,Ndurwe,Chizambezi,Musande它产于津巴布韦。外植体源已经被证明是一个重要的因素在体外植物的生长和发育,影响愈伤组织诱导和不定芽诱导以及拍摄再生(27]。生理上,年轻的植物组织通常被认为是更多的响应在体外(28),这是考虑到在这项研究中使用的豆芽结节性根源。不同外植体培养在女士中这是最广泛使用的培养基,大多数植物细胞培养积极做出反应(29日]。
Kyesmu [11]最初开发的基本协议使用的利文斯通土豆和微体繁殖芽作为外植体和节点。在先前的研究由Allemann [13),利文斯通马铃薯芽作为外植体材料的来源,腋窝芽和芽培养和植株产生的成功。在这项研究中,拍摄技巧、节点和叶子被用来确定最佳外植体上的四个一起。植物再生成功通过所有的外植体类型。这可以解释为全能性的方面,一个细胞特征的植物组织,艾滋病人保留再生潜力的成年有机体。器官形成允许根与芽诱导和分化在各自的外植体研究中使用(29日]。然而,至少芽、节点和根记录当叶外植体被使用,因为叶少腋窝味蕾可以发展成芽。此外,内生增长的水平的监管机构叶子这将促进根和射击发展也低。这项研究的结果与那些通过协议Addae-Frimpomaah et al。18]和Doliński Olek [22)在体外甘薯的传播节点外植体。
品种内的遗传差异中演示了不同反应表现出四个长白猪的利文斯通土豆使用不同类型的外植体。结果与Ogero协议(30.),表明两个甘薯品种之间差异的存在对于他们的反应微体繁殖。最佳外植体在长白猪的节点,因此同意发现Kyesmu和特31日]。类似的结果也获得了甘薯(18,22也是一个块状根利文斯通土豆。总的来说,Musande长白猪执行所有生长的最佳参数。节点的最佳外植体是用在第二个实验中确定合适的PGR组合生产的植株。
生长调节剂用于组织培养合成化学版本的天然植物生长调节剂应用于工厂,以产生预期的效果,如拍摄和根增殖(32]。最常见的植物生长调节剂应用于微体繁殖包括赤霉素、植物生长激素,细胞分裂素。之前的研究表明,植物生长调节剂的使用是没有必要在块茎作物超低温保存的微体繁殖[13]。然而,其他研究人员广泛证明使用这些化学物质是有价值的微体繁殖期间提高植物的生长和发育。在这项研究中,萘乙酸(NAA)和苄氨基嘌呤(BAP)在不同组合用于利文斯通的微体繁殖马铃薯,以确定是否需要优化培养基为当地长白猪在津巴布韦。
4.1。开始生根,发芽
Chizambezi和Chibanda发起的“根与芽”在最短的时间在高和低浓度的NAA:软面包卷,而Musande花了最长的时间启动“根与芽”当NAA和软面包卷是缺席的MS培养基。Liljana et al。33)也取得成功的开始生根,发芽土豆的相同的植物生长调节剂MS培养基。类似的结果也报道了Ezeibekwe et al。34白山药(上),对他们的工作Dioscoera rotundata L)。根据Schmulling [35植物生长激素,细胞分裂素的比例在体外决定了植物组织培养的分化芽或根。在这项研究中,NAA和软面包卷为拍摄起始产生最好的结果Chizambezi和Chibanda相比,使用MS培养基BAP单独行动的文化。软面包卷被认为是最好的植物激素拍摄启动(36,37]。这个结果支持发现Kabir [38),研究木薯。Chizambezi和Chibanda都受益的添加植物生长调节剂即使在低量,因此证伪的发现Allemann [13),在相同的工作属物种。遗传差异也占了四个长白猪性能之间的差异。
4.2。拍摄、叶和节点数量的植株
最高的拍摄数量记录在治疗结合乙酰天冬氨酸:BAP 0.2 mg / l: 1 mg / lMusande和Ndurwe。然而,芽结构小而短。Masekesa et al。39)表明,高BAP浓度会产生芽短的身材因为细胞分裂素鼓励增长主要是通过促进细胞分裂的细胞扩张。至于叶数,每个主要观察拍摄大量Chizambezi,Chibanda,Ndurwe在乙酰天冬氨酸,软面包卷,当这两种植物生长调节剂在不同浓度组合。变化意味着叶数字在三个一起可以与内源细胞分裂素的水平在芽外植体而不是添加外部的影响报道Demeke et al。40]。Musande叶最低数量,因此这可能归因于这样一个事实:叶数是基因型特异性的函数(41]。
节点的数目是微体繁殖的一个重要方面,尤其是在这项研究中,节点是外植体的选择。产生的节点数量越高,越快生产更多的植株进行接种。所有四个一起反应良好pgr的应用在不同浓度(0:0 - 1:1)mg / l通过生产高节点数字拍摄。这个结果符合发现(34在白山药虽然NAA的浓度:软面包卷(0.5:0.2)mg / l。
4.3。植株的拍摄长度
Musande和Ndurwe生产时间最长的芽相比其他两个一起使用乙酰天冬氨酸:培养BAP浓度范围的0 - 1 mg / l: 0 - 0.5 mg / l,分别。这可以归因于NAA和软面包卷的协同效应应用在低浓度(42]。这个结果也支持Demeke et al。40)取得了类似的结果在节点木薯的外植体(木薯耐)。另一方面,Ezeibekwe et al。34]发现对比结果与白色的山药,长芽了没有添加NAA和BAP的MS培养基。基因型的影响也可能影响了结果在长白猪及其应对pgr。
5。结论
结果表明,最佳外植体类型节点的位置Musande长白猪这种外植体类型有最好的结果。在所有四个长白猪能够产生植株的节点,Chizambezi是最好的长白猪,生长参数测量在不同的乙酰天冬氨酸:BAP浓度。Chizambezi强烈推荐使用组织培养快速乘法的利文斯通土豆。也从这个研究结果清楚地表明,添加pgr优化增长是至关重要的媒体在提高利文斯通的微体繁殖土豆。商业生产的植株,因此,在津巴布韦进行使用优化协议提供健康社区农民的种植材料提高生产力。此外,种植材料的生产使用组织培养可以确保种质的保存,考虑到作物的一个重要的方面是,开工不足和津巴布韦正面临灭绝。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
作者要感谢国际科学基金会(IFS格兰特没有:C / 5431 - 1),德国Akademischer交换Dienst(德意志:A / 1395622)国家奖学金,和俄文/ 2018 /博士后/ 11博士后研究拨款资助的研究。
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