胚状体的身体的特征——基于(EB)的心脏分化协议。描述进行人类胚胎干细胞心肌细胞(ESC-CMs)不添加苯丙酸诺龙(ActA)在分化的早期阶段(控制条件)。(a)的示意图表示EB-based心脏分化协议。多能性(b)表达谱(OCT4和NANOG)、中胚层(啊),心脏祖(NKX2.5和GATA4),晚期厘米(cMyHC,TNNT2,TNNI3,HCN4在19天的区别)标记,监测。(c)如果分析分离EBs在20天的区别,显示区域的连接CMs (cMyHC;红色)表达联接蛋白43 (CX43;绿色)。核是沾染了赫斯特(蓝色)。cMyHC (d)流式细胞术分析⁺CMs在20天的分化。代表三个独立实验的例子。(e)免疫印迹分析量化cMyHC蛋白质含量的未分化的ESCs的分化和CMs 20天后,由GAPDH规范化。(f)异丙肾上腺素肾上腺素反应的CMs (1μM;异丙肾上腺素),引发了在20天的区别。细胞内钙(g)的时间进程^{2 +}处理在20天的区别,使用Ca^{2 +}敏感的荧光指示剂Fluo-4 (2.5μ米),通过共焦显微镜监控。(h)全细胞Na⁺录音,通过应用访问500毫秒之间的电压脉冲电位−120和+ 10 mV 5 mV的增量从持有100 mV−0.5赫兹的潜力。RT-QPCR数据被表示为管家基因,规范化GAPDH,产生HPRT,RPL13a。代表三个独立的实验和数据值表示为平均值±标准平均误差(SEM)。显著性差异是与控制和显示:∗∗∗。比例尺= 100μm。