NFATc4调节Sox9基因表达在腺泡的起始细胞可塑性和胰腺癌

文摘

腺泡的分化转移向duct-like表型构成腺泡细胞的定义响应外部压力信号和被认为是胰腺癌生成的初始步骤。尽管胰腺癌要求致癌喀斯特(PDAC)开发、致癌喀斯特不足以驱动胰腺癌生成超越初癌的水平。相反,次要的事件,如inflammation-induced信号激活表皮生长因子(EGFR)或诱导表达Sox9,肿瘤的形成是必需的。这里,我们旨在剖析Sox9基因表达的机制,链接表皮生长因子受体信号在胰腺组织适应和PDAC acinar-to-ductal上皮化生起始。我们表明,炎症转录因子NFATc4高度诱导和定位在细胞核inflammation-induced EGFR信号。此外,我们表明,NFATc4驱动器acinar-to-ductal转换和PDAC通过直接转录起始的感应Sox9。因此,战略旨在破坏NFATc4感应可能有益的PDAC预防或治疗的。

1。介绍

胰腺导管腺癌(PDAC)是人类恶性肿瘤中最激进的5年生存率不到7% (1]。PDAC来自定义良好的前驱病变,与胰腺上皮内瘤(PanIN)最好的描述2,3]。致癌突变的喀斯特基因代表定义分子改变在胰腺癌生成,可以在早期发现PanIN损伤和在90%以上的人类PDAC先进,导致目前的教条,这种基因事件需要PDAC起始和进展4,5]。Lineage-tracing研究已经证明,腺泡的细胞表达致癌喀斯特失去似的结构和接受de -和分化转化过程称为acinar-to-ductal化生(ADM)生成化生的duct-like病变表型(4,5]。典型,成熟的外分泌胰腺细胞的去分化涉及高度相似的基因表达谱中发现一个胚胎胰腺(6,7),包括激活Notch信号或性别决定区域的感应Y-box 9 (Sox9)转录因子6,8]。重要的是,progenitor-like化生的腺泡细胞的特点使他们更容易受到Kras-induced瘤形成(6,9]。事实上,致癌喀斯特劫持的腺泡的再分化过程,发生在再生胰腺组织和促进而不是从化生细胞过渡到PanIN前体病变,最终发展为侵袭性PDAC [10,11]。

值得注意的是,ADM形成和肿瘤进展中Kras突变发生的低外显率和延迟,除非二次事件出现哪个驱动器以外的胰腺癌生成阶段初癌(2,3,5]。炎性环境线索很欣赏促进胰腺癌生成致癌的背景Kras突变(5),从而反映出流行病学研究描述慢性胰腺炎的主要危险因素PDAC发展(12]。检查慢性胰腺炎患者样本显示表皮生长因子受体表达的upregulation化生的胰腺病变(13- - - - - -15]。有趣的是,转基因表皮生长因子受体配体超表达促进胰腺化生的形成(16,17),而表皮生长因子受体利用遗传失活或药理方法抑制acinar-to-ductal分化转移由致癌喀斯特激活和炎症(9,18]。综上所述,这些数据表明,表皮生长因子受体激活需要inflammation-driven腺泡的去分化和PDAC启动。然而,精确的分子机制,表皮生长因子受体激活链接到腺泡的分化转移仍然是难以捉摸的。

我们试图确定炎症信号通路在此桥的胰岛细胞化生的表皮生长因子受体激活转录诱导的腺泡细胞去分化的主要介质。特别是,我们试图描述的影响NFATc4(核转录因子的激活t细胞4)的转录激活导管命运行列式Sox9在acinar-ductal分化转移。我们表明,NFATc4高度诱导基因表达EGFR-stimulated acinar-to-ductal转换在腺泡的外植体,需要管的形成和表达Sox9在体外系统。此外,我们表明,NFATc4蛋白表达在化生的地区inflammation-induced胰腺癌生成使用小鼠模型和人体组织。重要的是,基因或药物失活NFATc4废除转录激活的Sox9阻碍发展化生的胰腺病变。

2。材料和方法

2.1。动物

生成和表征pdx1-Cre和LSL-Kras^G12D动物被前面描述的(2,19]。鼠标菌株杂交获得喀斯特^G12D;pdx1-Cre动物。所有菌株C57Bl / 6的背景。PCR、PCR进行消化后尾巴削减通过PCR缓冲与非离子去污剂(PBND)和蛋白激酶(Applichem,达姆施塔特,德国)。慢性胰腺炎的感应,8-week-old老鼠受到caerulein (50μ克/公斤,3次/周)或二甲亚砜(DMSO)治疗4周。动物实验都使用协议执行机构批准的动物保健和使用委员会菲利普斯大学在德国马尔堡。

2.2。腺泡细胞隔离

腺泡的细胞如前所述[执行隔离17]。简单地说,整个胰腺解剖和孵化37°C胶原酶I-containing解决方案。切碎的胰腺是经过105年μ米尼龙过滤分离腺泡的细胞。重复洗涤步骤后腺泡的细胞暴露在含30%胎牛血清培养液在短时间内。然后细胞培养在胶原蛋白补充heat-inactivated 1%胎牛血清,除非另有指示,DMSO和/或ddH对待₂O, CsA (1μ米),TGFα(50 ng / mL)或EGF (20 ng / mL)。管道被数表示时间点后使用brightfield显微镜和赫斯特33324染色显示细胞的可行性。

2.3。细胞系,转染

腺泡细胞行266 - 6获得Jemal et al。20.]。原发肿瘤细胞喀斯特^G12D;;pdx1-Cre和喀斯特^G12D;;表皮生长因子受体^−−/;pdx1-Cre老鼠一种礼物Jens Siveke你德国慕尼黑。细胞培养在杜尔贝科修改鹰介质(DMEM Gibco,达姆施塔特,德国)补充10%胎牛血清(Gibco)或在血清DMEM不必要的氨基酸补充了1%,分别。EGF和TGFβ治疗,采用无血清细胞饥饿24 h,然后刺激与EGF (20 ng / mL)或TGF(10 ng / mL)表示。

NFATc4成分交付的腺泡细胞外植体,NFATc4 shRNA (# 1 5′-CGAGGTGGAGTCTGAACTTAA-3′;# 2 5′-GCCAGACTCTAAAGTGGTGTT-3′)或控制成分(5′-CCTAAGGTTAAGTCGCCCTCG-3′)被感染使用慢病毒感染系统如前所述[21]。266 - 6的转染腺泡的细胞,NFATc4 siRNA从生活中获得了技术(5′-ccaguccaggucuacuuuutt-3′)。细胞转染与NFATc4 siRNA 48 h,使用lipofectamine 2000(表达载体)。本构活性表皮生长因子受体从马丁Privalsky。构造了reexpression本构活跃的表皮生长因子受体、细胞转染与3μ克的表皮生长因子受体或控制向量利用lipofectamine 2000(表达载体)。

2.4。RNA分离和定量实时PCR分析

对RNA隔绝腺泡的细胞,胶原蛋白凝固是我(σ)使用胶原酶溶解。从细胞系和腺泡的细胞RNA分离利用RNeasy迷你包(试剂盒、希尔登,德国)和第一链互补DNA合成的1μ总RNA的g使用随机引物和Omniscript逆转录酶工具包(试剂盒)。RPLP0被用作看家基因基因表达的规范化。鼠标使用以下序列用于表达特定的引物分析:NFATc1(转发:5′-tgggagatggaagcaaagac-3′;反向:5′-atagaaactgacttggacggg-3′), NFATc2(转发:5′-aagaggaaacgaagtcagcc-3′相反:5′-tgggtgctgtgggtaatatg-3′) NFATc3(转发:5′-gaaactgaaggtagccgagg-3′相反:5′-ctggtaaaatgcatgaggtcg-3′), NFATc4(转发:5′-tcttcaggacctctgcccta-3′;反向:5′-agcctaggagcttgaccaca-3′), Sox9(转发:5′-cgtgcagcacaagaaagacca-3′;反向:5′-gcagcgccttgaagatagcat-3′)、细胞角蛋白19(转发:5′-cctcccgcgattacaaccact-3′;反向:5′-ggcgagcattgtcaatctgt-3′)、细胞角蛋白6(转发:5′-gagcagatcaagaccctcaac-3′;反向:5′-aaacataggctccaggttctg-3′)、表皮生长因子受体(转发:5′-acactgctggtgttgctgac;反向:5′-cccaaggaccacttcacagt-3′)和RPLP0(转发:5′-tgacatcgtctttaaaccccg-3′;反向:5′-tgtctgctcccacaatgaag-3′)。

2.5。蛋白质分离和免疫印迹

整整蛋白质隔绝细胞系,细胞溶解产物是准备使用裂解缓冲(50更易/ L玫瑰,pH值7.5 - -7.9,150更易/ L氯化钠,1更易/ L glycol-bis乙烯(-aminoethylether) - N, N, N′, N′-tetraacetic酸、10%甘油、1% Triton x - 100、100 L更易与氟化钠,10更易与L Na₄P₂O₇×10 H₂O)含有蛋白酶抑制剂。免疫印迹分析20μg蛋白质的提取是通过10%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和转移到硝化纤维素膜(微孔,达姆施塔特,德国)。使用以下抗体蛋白进行检测:NFATc4 (Abcam ab62613 1: 1000)肌动蛋白(σ1:20000)。

2.6。组织学评价和免疫组织化学

人类慢性胰腺炎样本来自9不同病人和来自菲利普斯马尔堡大学的病理学研究所按照伦理规定的研究所。免疫组织化学、formalin-fixed石蜡包埋组织被切割(4μ米)。他走时染色和免疫组织化学进行了如前所述[22]。以下使用抗体:NFATc4(圣克鲁斯,sc13036)、表皮生长因子受体(Abcam ab52894) pEGFR(圣克鲁斯,sc101668)和Sox9 (Abcam ab26414)。

2.7。染色质免疫沉淀反应(芯片)

266 - 6细胞芯片分析如前所述执行(23]。简单,细胞被交联中含有1%甲醛在室温下10分钟。交联是终止利用2.5 mol / L甘氨酸。细胞被洗了,在冰冷的PBS收获。得到了核溶解产物和DNA庆兴500个碱基对的碎片,声波降解法。下面的抗体被添加到事先批准染色质在4°C:隔夜孵化NFATc4 (Abcam ab62613 4μ9727年代g), H3K4me3(细胞信号,2μg), rna聚合酶II(微孔,05 - 623,2μg)、兔免疫球蛋白(圣克鲁斯,sc - 2027, 2μg)和小鼠免疫球蛋白(圣克鲁斯,sc - 2025, 2μ克)。蛋白质或g琼脂糖添加和孵化2小时。珠子是像之前描述的那样洗23)和执行回复使用核糖核酸酶(R4642σ),蛋白激酶5 mol / L十二烷基硫酸钠在一夜之间在65°C。DNA是孤立使用phenol-chloroform协议和分析通过使用以下序列中存在利用Sox9引物:+ 370(转发:5′-cgcgtatgaatctcctggac-3′,相反:5′-ggtgttctccgtgtccg-3′)和825−(转发:5′-ccgggaaaggacttgtcag-3′,相反:5′-tctggttcaacgaagctgg-3′)。

3所示。结果

3.1。NFATc4高度诱导期间EGFR-Mediated Acinar-to-Ductal化生

除了PDAC起始的关键作用,acinar-to-ductal化生代表一个细胞腺泡细胞的适应过程在应对外部压力信号从而防止stress-mediated细胞死亡,最终会导致逐步再生项目,重建胰腺组织完整性(24- - - - - -26]。急性或慢性胰脏炎导致化生的胰腺病变的形成可以宽容redifferentiate成腺泡的细胞细胞上下文(27]。化生的病变的慢性胰腺炎患者经常表达高水平的表皮生长因子受体(EGFR)家族和他们的天然配体EGF和TGFα(12,13,16]。最近的报告表明,表皮生长因子受体激活集成外部炎症信号到细胞内的程序调解腺泡的细胞适应和去分化(9,17,18,28]。因此,在一个在体外方法利用腺泡的细胞从野生型小鼠外植体,激活与TGF表皮生长因子受体信号的刺激α强烈促进分化转化外植duct-like特色腺泡的细胞进入细胞(图1(一))。胰腺腺泡细胞的显著分化转移行为针对表皮生长因子受体信号激活基于逐步腺泡细胞的去分化过程和随后的激活导管启动程序(9,18]。这个关键的调节细胞可塑性是时空上至少部分由控制核转录因子的激活激活t细胞(NFAT)转录因子家族22]。NFAT的Ca是一个关键的中介^{2 +}/钙调磷酸酶信号。NFAT功能最初在t细胞活化,调节至关重要的细胞功能相关的适应和分化(29日]。重要的是,NFAT蛋白质的表达和功能绝不是仅限于免疫细胞。相反,在一些组织细胞适应归因于NFAT-dependent信号和转录30.,31日]。在胰腺腺泡细胞、基底四Ca的表达水平^{2 +}/ calcineurin-responsive NFAT家庭成员较低(图1 (b))。引人注目的是,TGFα刺激腺泡的细胞移植组织导致时间NFATc1和NFATc4 mRNA水平,而表达NFATc2 NFATc3并没有改变(图1 (b)),与先前的报道一致表明NFAT蛋白质没有冗余功能(32]。TGF最突出的反应α治疗观察NFATc4,表明激活这个特殊的同种型可能是必要的在表皮生长因子受体signaling-dependent acinar-to-ductal分化转移(图1 (b))。NFATc4所需检测表皮生长因子受体信号是否激活,我们利用主PDAC细胞喀斯特^G12D;;表皮生长因子受体^−−/;pdx1-Cre小鼠表皮生长因子受体的纯合缺失。如数据所示1 (c)和1 (d),NFATc4表达EGFR耗尽细胞较低但诱导响应瞬态超表达的本构活性表皮生长因子受体(数字1 (c)和1 (d))。然而,胰腺外分泌细胞的诱导细胞可塑性也被报道TGF治疗炎性细胞因子(33)和TGF治疗胰腺肿瘤细胞促进分化转移程序导致上皮间充质转变(EMT) [33]。最引人注目的是,TGF基本PDAC刺激细胞获得喀斯特^G12D;;pdx1-Cre老鼠导致几个NFAT的诱导基因,包括强大的感应NFATc4 mRNA和蛋白(数字1 (e)和1 (f))。最后,我们观察到增加NFATc4染色细胞核的细胞化生的领域内的一个组织的慢性胰腺炎患者(图1 (g))。综上所述,这些数据都一致认为NFATc4诱导过程中ADM在鼠标外植体模型和人类胰腺组织。

3.2。NFATc4参与EGFR-Mediated Acinar-to-Ductal化生

测试是否诱导NFATc4 acinar-to-ductal转换至关重要,我们cotreated腺泡的细胞与TGF外植体α和环孢菌素(CsA),临床使用钙调磷酸酶抑制剂防止NFAT激活。抑制calcineurin-NFAT信号明显减弱acinar-to-ductal转换,即使在表皮生长因子受体激活(图的存在2(一个))。因此,管道的形成是抑制和细胞角蛋白19表达减少治疗CsA(数字2 (b)和2 (c))。因为药物抑制磷酸酶专门抑制NFAT信号通路和目标个人NFAT家族的成员,我们扩展分析和基因耗尽NFATc4腺泡的细胞移植组织使用两个特定NFATc4 shrna(图2 (d))。重要的是,损耗显著降低TGF NFATc4表达式α在这个ADM试验(数字介导管形成2 (d)和2 (e))。一致的减少duct-forming能力NFATc4-depleted腺泡的外植体,我们发现减少的表达细胞角蛋白6和19日两个标记基因诱导过程中acinar-to-ductal分化(数字2 (f)- - - - - -2 (h))。综上所述,这些数据涉及NFATc4作为关键EGFR-induced转录因子参与腺泡的细胞重新编程。

3.3。NFATc4期间诱导胰腺癌起始

Acinar-to-ductal分化转移并不局限于细胞的生理机制适应,但现在升值的关键作用在PDAC启动(8]。重要的是,发展inflammation-driven ADM需要致癌突变的肿瘤病变喀斯特(喀斯特^G12D)化生的上皮细胞阻止腺泡的再分化和正常胰腺架构的调整34]。因此,inflammation-induced EGFR信号与致癌合作喀斯特突变促进胰腺癌生成(9,22]。检查是否NFATc4激活参与PDAC起始,我们利用一个在活的有机体内inflammation-driven胰腺癌生成模型。具体来说,我们使用一种转基因小鼠模型(GEMM)窝藏胰腺具体喀斯特突变(喀斯特^G12D;pdx1-Cre与caerulein老鼠)和治疗这些动物,一个完善的胰腺炎症诱导物,(22,30.,34]。四周治疗导致严重的外分泌胰腺损伤与无序的腺泡的结构和感应acinar-to-ductal化生和PanIN病变早期由于增加胰腺的腺泡细胞可塑性和启动致癌作用(图3(一个))。重要的是,EGFR表达明显诱导化生的外分泌细胞在胰腺炎症、可视化增强胞质定位的活跃的磷酸化形式caerulein-treated老鼠(图3(一个))。此前报道,化生的地区特点是强烈的核表达Sox9,感应细胞重新编程的一个关键标志(图3(一个)),而对照组只显示低胞质表达的转录因子。引人注目的是,化生的地区和PanIN病变高表皮生长因子受体,pEGFR, NFATc4表达Sox9表达式还显示大幅增加(图3(一个))。符合我们人类慢性胰腺炎样本,分析NFATc4表达应对caerulein ADM地区政府主要在细胞核中发现,因此表明转录因子的活动。

3.4。表皮生长因子受体信号包括NFATc4-Dependent Sox9的转录激活

胰腺组织转化的病变的形成和维护依赖转录因子的表达和激活驱动腺泡的分化转移duct-like表型。最近,Sox9是涉及细胞可塑性PDAC起始和进展(8,22,35]。根据这些观察,腺泡细胞外植体显示增加Sox9 mRNA表达表皮生长因子受体激活后(图3 (b)),这表明Sox9表现在腺泡的细胞转换在转录水平调节。随之而来的表达式NFATc4和Sox9化生的胰腺细胞表明机械连接的转录因子。这种假设是由这一事实进一步加强遗传损耗NFATc4表达不仅改变管形成ADM模型还废除Sox9 mRNA的表达(图3 (b))。此外,TGF调节时间诱导NFATc4原发肿瘤细胞中表达喀斯特^G12D;;pdx1-Cre老鼠与Sox9表达式(增加数据3 (c)和3 (d))。在一起,我们的数据识别Sox9作为NFATc4目标基因和暗示这两个转录因子功能驱动分化转移过程在胰腺中合作。

进一步检查机械NFATc4和Sox9表达的相关性,我们执行染色质免疫沉淀反应(芯片)分析腺泡的细胞株266 - 6在激活表皮生长因子受体信号在原发肿瘤细胞喀斯特^G12D;;pdx1-Cre老鼠在TGF治疗。在这两种电池系统,表皮生长因子受体激活以及TGF治疗导致招聘NFATc4的增加Sox9启动子(图4(一)和4 (b)),这与增强H3K4me3和rna聚合酶II的入住率Sox9子,说明其转录活动(数据4 (c)和4 (d))。增加NFATc4绑定Sox9启动子和增强子活动在细胞外刺激显示关键NFATc4参与Sox9的转录调控。来验证这个假设,我们耗尽NFATc4基因表达在266 - 6腺泡的细胞和调查对言论EGFR-mediated Sox9 NFATc4缺陷的影响。明显,NFATc4损失显著降低EGFR-dependent诱导表达Sox9 266 - 6腺泡的细胞(数字4 (e)和4 (f))。

综上所述,这些数据表明,EGFR-stimulated NFATc4基因表达的转录诱导和激活构成的先决条件Sox9和acinar-to-ductal转分化的过程。

4所示。讨论

Acinar-to-ductal分化转化代表一个细胞重编程的机制以应对外部压力信号,因此启动胰腺再生受损上皮细胞(36]。存在的致癌Kras突变,ADM的功能转变的保护者胰腺组织完整性的司机向弗兰克腺癌(肿瘤进展34]。ADM诱导和发展为肿瘤前体病变密切相关inflammation-induced激活表皮生长因子受体信号(9,17,18]。ADM的重要的是,EGFR-mediated感应涉及基因的激活,促进和维护导管表型(37]。例如,表皮生长因子受体激活响应上皮损伤已被证明诱导表达Sox9移行细胞癌(37),建议参与EGFR-Sox9轴的恶性发展和进展。Sox9的突出功能在胰腺肿瘤发生也反映,在Sox9被形容为一个中央转录因子在腺泡的细胞去分化和导管的转换(8]。Sox9损失时腺泡的细胞去分化受阻ADM的形成和肿瘤进展,异位诱导Sox9加速借胰腺癌生成(8]。尽管EGFR-Sox9通路的相关性已经证明在几个细胞环境,链接inflammation-induced表皮生长因子受体激活的机制在PDAC Sox9感应启动仍然难以捉摸。这里我们识别转录因子NFATc4作为功能链接连接inflammation-induced腺泡的上皮化生和表皮生长因子受体信号表明,诱导Sox9针对表皮生长因子受体激活需要NFATc4-dependent转录激活的Sox9启动子。

NFAT的转录因子家族已经被报道参与环境信号的集成到致癌过程调节增殖,分化,和炎症在几个细胞适应环境31日,38,39]。例如,最近的工作与表皮生长因子受体激活NFAT-mediated Cox2的表达在结直肠肿瘤发生,因此EGFR / NFAT的指向一个关键的角色在集成炎症级联信号在致癌作用和发展(40]。在胰腺,致癌活动已经证明的亚型NFATc1和NFATc2加速借胰腺癌生成和PDAC进展在老鼠和人类23,31日,41,42]。重要的是,致癌NFAT转录因子的活动不仅限于肿瘤进展,但也包括PDAC启动。我们最近表明,NFATc1变得激活响应inflammation-induced EGFR信号和复合物c-Jun促进转录诱导acinar-ductal转换的Sox9基因(22]。一致,衰减NFATc1活动使用药物或基因方法阻碍EGFR-mediated促进acinar-to-ductal分化转移(22),从而突显出NFAT转录因子在腺泡细胞的关键功能适应和致癌转换。

其近亲NFATc1和NFATc2相比,是不为人熟知的角色NFATc4胰腺组织适应和致癌作用。在这里,我们表明,NFATc4诱导慢性胰腺炎的实验设置和PDAC起始,抑制NFATc4信号保存腺泡的细胞形态和功能,表明转录因子可能配合致癌喀斯特起始信号促进胰腺癌。的第一个证据之间的功能联系NFATc4激活和肿瘤进展来自一个研究调查患者食管鳞状上皮发育异常,显示增强的表达水平的NFATc4被关联到一个更高的发展机会对食道癌(43]。进一步强调NFATc4在肿瘤发生中的作用,肺非小细胞癌样本是积极为致癌Cox2染色显示高表达水平的NFATc4和AP1蛋白质c-Fos c-Jun [44]。这是特别感兴趣的,因为随着c-Jun功能善意的合伙人NFAT转录因子在胰腺适应和肿瘤进展(22),这表明这两个转录因子配合驱动腺泡的细胞去分化。

总之,我们描述小说inflammation-induced细胞适应机制在PDAC起始和NFATc4提出一个模型链接EGFR信号激活转录诱导Sox9促进腺泡的导管去分化。我们的数据补充NFAT转录因子的功能范围胰腺适应和致癌作用,表明药理战略目标NFAT激活可能铺平了道路PDAC新的预防或治疗选项。

5。结论

胰腺导管腺癌(PDAC)代表一个毁灭性的疾病的预后,在过去的几十年里保持不变。因此,更好的理解发生和发展的分子机制,控制PDAC急需为了消除或预防胰腺癌。

在此我们报告一个新颖的分子机制将表皮生长因子受体信号与激活Sox9 acinar-ductal上皮化生中胰腺组织适应和PDAC起始。我们确定炎症转录因子NFATc4 inflammation-induced EGFR信号激活的关键中介和证明NFATc4驱动器acinar-to-ductal转换和PDAC起始转录诱导Sox9。因此,策略旨在破坏这个途径可能被视为PDAC的预防和治疗。

利益冲突

作者宣称他们没有任何利益冲突。

作者的贡献

最后作者丹尼尔·d·Billadeau和亚历山大Koenig份额。

确认

作者请谢谢克里斯蒂娜Reutlinger和莎拉Hanheide(美国胃肠病学和胃肠道肿瘤,哥廷根大学医学中心)的技术支持。作者Jens Siveke感激你慕尼黑,德国,提供原发肿瘤细胞喀斯特^G12D;;pdx1-Cre和喀斯特^G12D;;表皮生长因子受体^−−/;pdx1-Cre老鼠。这项工作是支持的德国癌症研究基金会(109423 Volker Ellenrieder和米尔德里德Scheel奖学金亚历山大Koenig),威廉•桑德基金会(Volker Ellenrieder 2013.037.1),再生医学中心的博士后奖学金在梅奥诊所,杰克逊维尔(Geou-Yarh Liou),美国国家癌症研究所(R01 CA140182彼得Storz),和一个国家癌症研究所胰腺孢子格兰特(Daniel d . Billadeau P50 CA102701)。

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